人前列腺癌细胞;LNCaP贴壁培养

实验室常用细胞株简介说明：以上数据来源于ATCC，建议使用以上推荐的培养基。

如果不使用相应的培养基会产生几方面的后果：1.细胞营养不良影响细胞生长；2.细胞分化导致的基因表达变化；3.细胞休克、死亡；无菌操作基本技术1、实验进行前，无菌室及无菌操作台(laminar flow) 以紫外灯照射30-60 分钟灭菌，以70%ethanol 擦拭无菌操作抬面，并开启无菌操作台风扇运转10 分钟后，才开始实验操作。

每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。

实验完毕后，将实验物品带出工作台，以70 % ethanol 擦拭无菌操作抬面。

操作间隔应让无菌操作台运转10 分钟以上后，再进行下一个细胞株之操作。

2、无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如试管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暂时放置，其它实验用品用完即应移出，以利于气流之流通。

实验用品以70 % ethanol 擦拭后才带入无菌操作台内。

实验操作应在抬面之中央无菌区域，勿在边缘之非无菌区域操作。

3、小心取用无菌之实验物品，避免造成污染。

勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口，亦不要在打开之容器正上方操作实验。

容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约45°角取用，尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。

4、工作人员应注意自身之安全，须穿戴实验衣及手套后才进行实验。

对于来自人类或是病毒感染之细胞株应特别小心操作，并选择适当等级之无菌操作台(至少Class II)。

操作过程中，应避免引起aerosol 之产生，小心毒性药品，例如DMSO 及TPA 等，并避免尖锐针头之伤害等。

5、定期检测下列项目：5.1 CO2 钢瓶之CO2 压力5.2 CO2 培养箱之CO2 浓度、温度、及水盘是否有污染(水盘的水用无菌水，每周更换)。

5.3 无菌操作台内之airflow 压力，定期更换紫外线灯管及HEPA 过滤膜，预滤网(300小时/预滤网，3000 小时/HEPA)。

比卡鲁胺联合塞来昔布对前列腺癌细胞LNCaP增殖的影响白晓黎;王丽;谢秀娟;陈宏伟【摘要】目的观察比卡鲁胺联合塞来昔布对前列腺癌细胞LNCaP增殖的影响并探讨其可能的作用机制.方法培养前列腺癌LNCaP细胞,采用MTT法测定细胞生长的抑制情况,化学发光法检测细胞培养液中总前列腺特异抗原(PSA)的浓度,流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率,Western Blot检测各组细胞Caspase 3和Caspase 8蛋白的表达情况.结果 MTT检测结果显示,对照组在24,48和72 h的细胞生长抑制率均为0.比卡鲁胺组、塞来昔布组和联合组在24,48和72 h的生长抑制率均明显较高(P＜0.05).对组间细胞的生长抑制率联合组显著优于单一组(P＜0.05).化学发光法检测结果显示,与对照组相比,比卡鲁胺组、塞来昔布组以及联合组PSA浓度明显降低,其中联合组对PSA的抑制程度明显优于比卡鲁胺组和塞来昔布组(P＜0.05).流式细胞仪检测结果显示,对照组在24,48和72 h的细胞凋亡率均低于比卡鲁胺组、塞来昔布组和联合组在24,48和72 h的生长抑制率.组间细胞的生长抑制率联合组显著优于比卡鲁胺组和塞来昔布组(P＜0.05).Western Blot结果提示,与对照组相比,给药组Caspase 3和Caspase 8蛋白的表达水平均显著升高,且联合组明显高于比卡鲁胺组和塞来昔布组(P＜0.05).结论比卡鲁胺联合塞来昔布能有效抑制前列腺癌细胞LNCaP的增殖,其机制可能与促进相关蛋白Caspase 3和Caspase 8凋亡进而促进肿瘤细胞的凋亡有关.【期刊名称】《西北药学杂志》【年(卷),期】2019(034)003【总页数】4页(P368-371)【关键词】比卡鲁胺;塞来昔布;前列腺癌;增殖【作者】白晓黎;王丽;谢秀娟;陈宏伟【作者单位】河南科技大学第一附属医院药品调剂科,洛阳 471003;河南科技大学第一附属医院药品调剂科,洛阳 471003;河南科技大学第一附属医院药品调剂科,洛阳 471003;郑州大学附属洛阳中心医院,洛阳 471000【正文语种】中文【中图分类】R965近年来，前列腺癌在全球的发病率和死亡率逐渐增加[1-2]，其治疗面临极大的挑战[3-5]。

槐耳清膏抑制人前列腺癌PC3细胞增殖和侵袭作用及其机制研究该研究探讨槐耳清膏对人前列腺癌PC3细胞增殖和侵袭的抑制作用及其相关分子机制。

采用CCK8法检测槐耳清膏对PC3细胞的增殖抑制作用。

采用流式细胞术分析槐耳清膏给药后PC3细胞凋亡及细胞周期的变化。

采用细胞划痕实验及Transwell侵袭实验分析给药后PC3细胞侵袭与迁移能力的变化。

通过Western blot法，检测槐耳清膏给药后与侵袭迁移相关的EMT蛋白标志物表达水平的变化及MAPK信号通路中关键蛋白磷酸化水平的变化。

结果显示，槐耳清膏可以明显抑制人前列腺癌PC3细胞的增殖。

槐耳清膏8 g·L1作用于PC3细胞4.8 h后，细胞凋亡率较对照组明显升高，且细胞发生明显的S期阻滞。

槐耳清膏给药后可以明显降低PC3细胞的侵袭与迁移能力，并且能够下调Ncadherin和TCF8/ZEB1的表达水平和上调Ecadherin的蛋白表达水平，表明槐耳清膏能够促进PC3细胞MET的发生，同时还发现MAPK信号通路中的关键蛋白JNK和ERK 的磷酸化水平明显下降。

因此，槐耳清膏能够抑制人前列腺癌PC3细胞增殖和迁移侵袭能力，这可能与其调控EMT及抑制MAPK信号通路有关。

标签：槐耳清膏；前列腺癌；增殖；侵袭；MAPK信号通路前列腺癌是全球范围内男性第二位最常见的癌症，其发病率已占我国男性泌尿系统肿瘤之首[1]。

化疗药物治疗、激素治疗等成为主要的治疗手段，然而较大的细胞毒性、抗药性及高成本等缺点紧随其来，越来越多的目光转向了低毒性、多靶点、疗效良好的天然药物上来。

槐耳[2]为多孔菌科真菌槐栓菌Trametes robiniophila Murr的干燥子实体。

槐耳作为一种传统中药，在中国已有1 600余年的应用历史，其单味药物、提取物以及用于癌症辅助治疗的槐耳颗粒在近年来都受到学者们的广泛关注，基础研究以及临床应用已经证实了其具有良好的抗癌效果。

本研究采用CCK8法，流式细胞术，Western blot及细胞划痕与Transwell侵袭实验，研究槐耳清膏对人前列腺癌PC3细胞的作用及相关机制，以期对槐耳抗前列腺癌作用深入研究和临床应用提供参考。

丁酸钠对前列腺癌LNCaP细胞HER-2信号通路的影响郝通利;肖序仁;郭刚;朱捷【期刊名称】《肿瘤防治研究》【年(卷),期】2008(35)7【摘要】目的研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂丁酸钠对前列腺癌LNCaP细胞HER-2信号通路的影响,探讨其抗肿瘤作用的分子机制。

方法四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测药物对肿瘤细胞增殖的影响;ho-echst 33342染色观察细胞凋亡的形态学变化,Western blot检测凋亡标志蛋白、HER2/neu、Phos-Akt、Phos-Erk等信号蛋白的表达。

结果丁酸钠能够有效抑制LNCaP细胞的增殖并诱导细胞凋亡,半效杀伤剂量(EC50)为5.6mmol/L;药物能够抑制HER-2基因的转录和蛋白的表达,并抑制下游信号通路中MAPK和AKT的活化。

结论丁酸钠能够阻断对前列腺癌细胞生长具有重要作用的HER-2信号通路,从而对肿瘤细胞发挥抑制作用。

【总页数】3页(P476-478)【关键词】丁酸钠;组蛋白去乙酰化酶抑制剂;前列腺癌;HER-2;细胞信号通路;凋亡【作者】郝通利;肖序仁;郭刚;朱捷【作者单位】解放军总医院泌尿外科【正文语种】中文【中图分类】R737.25【相关文献】1.ERβ真核表达质粒对前列腺癌LNCaP细胞生物学行为的影响及p38信号通路的作用 [J], 王婵;董传江;毛峥;张路生;陈晓波2.组蛋白去乙酰化酶抑制剂FK228对前列腺癌LNCaP细胞抑制效应的细胞信号通路研究 [J], 孙圣坤;于晓妉;史立新;洪宝发;张旭3.番泻苷A抑制JAK2/STAT3通路的激活诱导前列腺癌细胞LNCap自噬性死亡[J], 吴文婧;申涛;赵华;孙波4.百合总皂苷经VEGF/Akt信号通路调节人前列腺癌LNCaP细胞增殖及侵袭的机制研究 [J], 林星长;刘晟;张海涛5.曲古抑菌素A对前列腺癌LNCaP细胞抑制效应的细胞信号通路研究 [J], 孙圣坤;刘兵;李秀森;侯春梅;洪宝发;于晓妉因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

细胞培养集锦（一个培养300多种细胞人的经验总结） 一、消化与吹打 版上很多朋友讨论细胞培养问题，见到很多很好的经验总结，这里 说一些我个人的经验，因为一些比较特殊的原因，我自己培养接触过近 300种细胞，常用于做实验的，累积有百余种，可以说遇到过许多各式 各样古怪的细胞。这里挑细胞消化开始做我的第一篇专题， 并不是因为 细胞消化最重要，而是近期看到大家频繁讨论这个话题， 我就抛砖引玉， 下面几点拙见，可能与其它朋友总结的一些经验有点出入，仅供大家参 考。 许多同学对细胞消化做了许多研究， 得出了很多有价值的经验，也 见到很多人的困惑。其实细胞培养，尤其是细胞系的培养，就消化而言， 不是太难，做得多了，善于总结经验，就能把细胞越养越好。一般的程 序步骤，细节操作，我这里就不讲了，只讲一些基本操作背后的知识， 如果不对之处，欢迎指正，一起讨论： 1其实绝大部分细胞消化的时候是只要用胰酶润洗一遍即可，吸 去胰酶后，残留的那些无法计算体积的附着在细胞表面的微量胰酶在 37度一般不到2min足够消化细胞（绝大部分1min不到）。对于这些 细胞原则上不要用胰酶孵育细胞，连续这样传代，对细胞伤害很大。简 单的程序是PBS润洗吸去，胰酶润洗吸去，然后 37度消化。 2,什么算是消化好了呢？不是细胞全部成间隔分布很离散的单个 圆形才算消化好了，一般你肉眼观察贴壁细胞层，只要能移动了，多半 呈沙壮移动，其实已经可以了，很多人喜欢把细胞消化或者吹打成完全 分离细胞，这是没有必要的。一般能移动了，说明细胞与培养基质材料 的附着已经消失了，细胞之间的附着也已经消失了， 细胞已经独立分布 了（虽然没有呈现很广的离散分布）。这个时候应该停止消化，不要等 到看到镜下所有细胞都分离得非常好，间隙很大，才停止。细胞就是完 全成单个细胞悬液，之后在贴壁的过程中仍然会聚集， 这个是贴壁培养 的细胞，尤其是肿瘤细胞的一个特性，无论死活的细胞都是如此，你可 以尝试，准备100%的单个细胞悬液，贴壁后观察细胞，仍然是几个几 个细 胞聚集在一起。一些悬浮培养细胞也是如此，容易聚集，不要去尝 试过几个小时就拿出来吹打成单细胞悬液（不要笑，这个是初养悬浮细 胞的人常犯的错误，以为悬浮培养就是一个一个分开）。细胞只要能从 基质上脱离下来，这个时候即使是成片的（比如 Calu-3细胞），吹打 不超过20次后（一般10次即可），成小规模聚集（10个细胞左右）， 是正常的，不要试图再去延长消化时间，或者象有的同学那样吹打 1h, 等待单细胞悬液出现。 3，另一个帖子里提到一个比较复杂的四步消化法， 这个挺有意思， 我也是第一次听说，应该是网友自己发展出来的方法，很有参考价值。 但我估计这个方法可能对付少数非常怪异的细胞才需要这么复杂的程 序。我目前养过的近300株细胞里面，还没遇到这么怪异的。比如Caco2 其实是很好消化的细胞，不需要胰酶孵育即可，只是有点成片分布。不 要以为成片分布是自己没养好， 这个视细胞而定。如果和标准形态不一 致，那可能是自己没消化好导致的，但如果消化方法正确，仍然成片分 布，甚至完全吹打成单细胞悬液，贴壁后仍然成片分布，这是细胞的特 性，是因为贴壁过程中重新聚集了。 这个时候你拼了命要去让它均匀分 布，你的细胞之后会对你越来越不好。 4，比较难消化的细胞（润洗方法 5min还不能消化），就以colon cancer为例，比如HCT15, LS411和KM12，这样的细胞一般需要用少 量胰酶孵育，但也不需要很多，一般100 mm dish, —次最多加入500ul， 就足够了，一般我加300ul。即使这样难消化的细胞，一般不超过5min， 即可见细胞成片移动，就应该停止消化。一些正常细胞也会有难消化的 时候，比如tsDC细胞，但也只要用少量胰酶孵育，3min左右即可看到 成片沙状移动。 5,常规的细胞实验（增殖，凋亡，迁移，分化之类的），受消化 影响不是很大，如果不用胰酶去孵育而使用润洗的方法消化的话 （难消 化细胞例外）。但少数实验，比如病毒包装，对细胞代数，对细胞状态 要求极高。这个时候，胰酶消化，就是润洗，都会对细胞包装病毒的能 力有影响，传代次数一多，细胞包装能力就会逐渐下降（当然也有其它 因素影响包 装效率）。这个时候都不用胰酶消化，用一些盐溶液（不是 EDTA液）即可。这些盐溶液通过影响 ECM相关酶的活性，来使得细 胞脱离基质附着表面，但不切割任何蛋白。 6，EDTA的作用。许多人不用胰酶，只用 EDTA，或者用 trypsin/EDTA联合作用。这里要明白，trypsin切割ECM的一些负责 粘连和附着的蛋白，而EDTA通过螯合Ca离子，作用于Integrin的活 性，所以EDTA的作用更加温和。有的人在trypsin里添加一些EDTA， 或者对付特别难消化的细胞，添加多一些 EDTA，就是这个道理。一般 不要试图延长消化时间（如果10min还消化不彻底的话），而应该想其 它办法。 7，PBS洗涤。消化之前用PBS洗涤，是常见的操作，因为 Serum 含有抑制trypsin的蛋白。但这里面也有学问可以讲，对于一些难消化 细胞，那么可以配制不含 Ca，Mg离子的PBS,因为这些离子也会抑制 trypsin的活性。但对于绝大部分胰酶或者 EDTA溶液润洗即可消化的 细胞，不需要配制如此溶液。 总结下来，虽然这个帖子是关于消化的，但其实消化并不是细胞培 养的关键所在（虽然很重要），关键所在是细胞来源，血清质量和水源 （自己配制溶液的话）。我看到版上许多人养细胞遇到各种各样的问题， 很多时候bottleneck没有找到，虽然通过其它方法有所改善，但仍然是 事倍功半。因为人们往往注意自己的操作，总觉得自己没有经验，而忽 视试剂，溶液尤其是细胞的质量，后者其实才是许多细胞培养实验室常 见的问题。 从最基础的地方教起，一步一步详细介绍细胞培养技术， 非常好的 开门教程 常用设备 准备室的设备：单蒸馏水蒸馏器、双蒸馏水蒸馏器、酸缸、烤箱、 高压锅、储品柜（放置未消毒物品）、储品柜（放置消毒过的物品）、包 装台。 配液室的设备：扭力天平和电子天平（称量药品）、PH计（测量培 养 用液PH值）、磁力搅拌器（配置溶液室搅拌溶液）。 培养室的设备：液氮罐、储品柜（存放杂物）、日光灯和紫外灯、 空气净化器系统、低温冰箱（-80C）、空调、二氧化碳缸瓶、边台（书 写实验记录）。 必须放在无菌间的设备：离心机（收集细胞）、超净工作台、倒置 显微镜、CO?孵箱（孵育培养物）、水浴锅、三氧消毒杀菌机、4C冰箱 （放置serum和培养用液）。 无菌操作 无菌室的灭菌： 定期打扫无菌室：每周打扫一次，先用自来水拖地、擦桌子、超净 工作台等，然后用3%。来苏尔或者新洁尔灭或者0.5%过氧乙酸擦拭。 CO2孵箱（培养箱）灭菌：先用3%。新洁尔灭擦拭，然后用75%酒 精擦拭或者0.5%过氧乙酸，再用紫外灯照射 实验前灭菌：打开紫外灯、三氧杀菌机、空气净化器系统各 20-30

人胰腺癌类器官培养方法哇塞，说到人胰腺癌类器官培养方法，这可真是个有意思的事儿呢！你想想看呀，就好像是在培育一个小小的胰腺世界。

首先呢，你得准备好各种材料和条件，就像厨师要准备好食材和厨具一样。

细胞就是我们的主角啦，得精心挑选那些有潜力的细胞。

然后呢，给它们找个舒适的“家”，这个“家”要有合适的培养基，就像是给它们准备了特别定制的营养餐。

这培养基里的成分可不能马虎，什么营养物质啦、生长因子啦，都得恰到好处，不然细胞宝宝们可不乐意生长呢。

接下来，就是要给它们营造一个合适的环境，温度啦、湿度啦，都得调节得刚刚好，就跟咱们人喜欢待在舒服的环境里一样。

这环境要是不合适，细胞们也会闹脾气，不好好生长发育哦。

在培养的过程中，你还得时刻关注着它们的变化，就像照顾小婴儿一样细心。

看看它们有没有好好地分裂、生长，有没有出现什么问题。

要是发现有不对劲的地方，得赶紧想办法解决呀。

培养人胰腺癌类器官可不是一件容易的事儿呢，这需要耐心和细心。

就好比种一盆花，你得按时浇水、施肥、晒太阳，才能让它茁壮成长，开出美丽的花朵。

这培养类器官也是一样的道理呀，你得用心去呵护它们。

你说，这是不是很神奇呀？在实验室里，通过我们的努力，就能让这些小小的细胞长成一个个类似胰腺的小组织。

这不仅能帮助我们更好地研究胰腺癌，说不定未来还能为治疗胰腺癌提供新的思路和方法呢！总之呢，人胰腺癌类器官培养是一项很有挑战性但又非常有意义的工作。

它就像是在黑暗中寻找光明的一盏灯，为我们解开胰腺癌的谜团照亮了道路。

虽然过程可能会很辛苦，但当你看到那些培养成功的类器官时，你会觉得一切都是值得的，不是吗？所以呀，让我们一起加油，为了攻克胰腺癌这个难题而努力吧！。