酪蛋白的制备
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牛奶中酪蛋白的提取及含量测定一、实验原理1、牛乳的主要成分:碳水化合物(5%)、脂类(4%)、蛋白质(3.5%)、维生素、微量元素(Ca、P等矿物质)、水(87%)牛奶中的糖主要是乳糖。
乳糖是一种二糖,它由D-半乳糖分子和D-葡萄糖分子通过β-1,4-糖苷键连接而成。
乳糖溶于水,不溶于乙醇,当乙醇混入乳糖水溶液中时,乳糖会结晶出来,从而达到分离的目的。
牛奶中的蛋白质主要是酪蛋白和乳清蛋白两种,其中酪蛋白占了牛乳蛋白质的80%。
酪蛋白是白色、无味的物质,不溶于水、乙醇等有机溶剂,但溶于碱溶液。
而乳清蛋白水合能力强,分散性强,在牛乳中呈高分子状态。
2、等电点沉淀法:在等电点时,蛋白质分子以两性离子形式存在,其分子净电荷为零(即正负电荷相等),此时蛋白质分子颗粒在溶液中因没有相同电荷的相互排斥,分子相互之间的作用力减弱,其颗粒极易碰撞、凝聚而产生沉淀,所以蛋白质在等电点时,其溶解度最小,最易形成沉淀物。
酪蛋白的等电点为4.7左右(不同结构的酪蛋白等电点有所不同),本实验中将牛乳的pH调值4.7时,酪蛋白就沉淀出来。
市售牛奶通常会添加耐酸碱稳定剂来增加粘稠度,以致即使pH调至等电点酪蛋白也沉淀的很少,故实验时可将pH稍微调过多一点再调回等电点。
同时,市售牛奶由于生产过程通常导致酪蛋白组分发生变化,因而使pI偏离了4.7,通常偏酸。
3、酪蛋白的提纯根据乳糖、乳清蛋白等和酪蛋白的溶解性质差异,可以用纯水洗涤来除去乳糖、乳清蛋白等溶于水的杂质,再用乙醇除去脂类,然后过渡到用乙醚洗涤,由于乙醚很快挥发,最终得到纯粹的酪蛋白结晶。
4、蛋白质含量的测定(考马斯亮蓝结合法)考马斯亮蓝能与蛋白质的疏水微区结合,这种结合具有高敏感性。
考马斯亮蓝G520的磷酸溶液呈棕红色,最大吸收峰在465nm。
当它与蛋白质结合形成复合物时呈蓝色,其最大吸收峰变为595nm。
在一定范围内,考马斯亮蓝G520-蛋白质复合物呈色后,在595nm下,吸光度与蛋白质含量呈线性关系,故可以测定蛋白质浓度。
牛奶中酪蛋白的提取及含量测定一、实验原理1、牛乳的主要成分:碳水化合物(5%)、脂类(4%)、蛋白质(3.5%)、维生素、微量元素(Ca、P等矿物质)、水(87%)牛奶中的糖主要是乳糖。
乳糖是一种二糖,它由D・半乳糖分子和D・葡萄糖分子通过P -1,4-糖昔键连接而成。
乳糖溶于水,不溶于乙醇,当乙醇混入乳糖水溶液中时,乳糖会结晶出来,从而达到分离的目的。
牛奶中的蛋白质主要是酪蛋白和乳清蛋白两种,其中酪蛋白占了牛乳蛋白质的80%。
酪蛋白是白色、无味的物质,不溶于水、乙醇等有机溶剂,但溶于碱溶液。
而乳清蛋白水合能力强,分散性强,在牛乳中呈高分子状态。
2、等电点沉淀法:在等电点时,蛋白质分子以两性离子形式存在,其分子净电荷为零(即正负电荷相等),此时蛋白质分子颗粒在溶液中因没有相同电荷的相互排斥,分子相互之间的作用力减弱,其颗粒极易碰撞、凝聚而产生沉淀,所以蛋白质在等电点时,其溶解度最小,最易形成沉淀物。
酪蛋白的等电点为4.7左右(不同结构的酪蛋白等电点有所不同),本实验中将牛乳的pH调值4.7时,酪蛋白就沉淀出來。
市售牛奶通常会添加耐酸碱稳定剂來增加粘稠度,以致即使pH调至等电点酪蛋白也沉淀的很少,故实验时可将pH稍微调过多一点再调回等电点。
同时,市售牛奶由于生产过程通常导致酪蛋白组分发生变化,因而使pl偏离了 4.7,通常偏酸。
3、酪蛋白的提纯根据乳糖、乳清蛋白等和酪蛋白的溶解性质差异,可以用纯水洗涤来除去乳糖、乳清蛋白等溶于水的杂质,再用乙醇除去脂类,然后过渡到用乙瞇洗涤,由于乙瞇很快挥发,最终得到纯粹的酪蛋白结晶。
4、蛋白质含量的测定(考马斯亮蓝结合法)考马斯亮蓝能与蛋白质的疏水微区结合,这种结合具有高敏感性。
考马斯亮蓝G520的磷酸溶液呈棕红色,最大吸收峰在465nm o当它与蛋白质结合形成复合物时呈蓝色,其最大吸收峰变为595nm o在一定范围内,考马斯亮蓝G520- 蛋白质复合物呈色后,在595nm下,吸光度与蛋白质含量呈线性关系,故可以测定蛋白质浓度。
实验题目:牛奶中酪蛋白的提取与分析实验材料:牛奶小组成员:实验时间:一:实验题目:牛奶中酪蛋白的提取与分析二:报告撰写者三、小组成员实验仪器 温度计、布氏漏斗(*)、pH 试纸(*)、抽滤瓶(*)水浴锅、烧杯、量筒、表面皿(*)、电子天平(*)、2个1000ml 的容量瓶(*)、2张醋酸纤维薄膜(2cm ×8cm 厚度120nm )成品(*)、培养皿9—10cm (*)、毛细管(*)、尺子、铅笔、单面刀片(*)、镊子、普通滤纸(*)、电泳槽、玻璃板8cm ×12cm (*)、752型分光光度计(*)、细布(*)0.5ml 、1.0ml 、2.0ml 、5.0ml 的移液管、试管、试管架、 四、实验材料牛奶(蒙牛特仑苏和伊利金典) 五、实验试剂 特仑苏400ml 、金典200ml 、1.66g 巴比妥(*)、12.76g 巴比妥钠(*)、0.5g 氨基黑10B (*)、50ml 甲醇AR (*)、100ml 冰醋酸AR (*) 、95%的乙醇250ml (*)、95%的乙醚100ml (*)、0.2mol/L 的乙酸100ml (*)、0.2mol/L 的乙酸钠100ml (*)、25g 氢氧化钠固体(*)标准酪蛋白、15mg 五水硫酸铜(*)、60mg 酒石酸钾钠(*) 所需试剂配制方法:乙醇乙醚混合液的配制: 10ml95%的乙醇10ml95%的乙醚乙醇钠缓冲液的配制: 0.2mol/L 的乙酸51ml0.2mol/L 的乙酸钠49ml 巴比妥钠缓冲液的配制: 巴比妥1.66g巴比妥钠12.76g染色液的配制: 0.5g 氨基黑10B 50ml 甲醇AR 10ml 冰醋酸AR 漂洗液的配制: 45ml95%乙醇AR 5ml 冰醋酸AR 蒸馏水透明液的配制: 25ml 的冰醋酸AR 75ml 的无水乙醇AR0.05mol/L 氢氧化钠溶液的配制: 16g 的氢氧化钠固体定容至1000ml 10%氢氧化钠溶液的配制: 5g 的氢氧化钠固体定容至50ml 双缩脲试剂的配制:15mg 五水硫酸铜60mg 酒石酸钾钠标准酪蛋白溶液A 的配制(10mg/ml ): 用0.05mol/L 氢氧化钠溶液配制10ml从特仑苏和金典中提取的酪蛋白样品液1、2的配制(2-9mg/ml ):配制巴比妥钠缓冲液(pH8.6,0.06mol./L ),将上述二者混合后定容于1000ml+40ml 蒸馏水,混匀既得染色液配制乙醇乙醚1:1的混合液配制pH4.6的乙酸钠缓冲液(0.2mol/l )混匀得染色液混匀得透明液溶于5ml 蒸馏水,在搅拌情况下,加入10%氢氧化钠溶液3ml ,用蒸馏水稀释到10ml ,用棕色瓶避光保存用0.05mol/L氢氧化钠溶液配制10ml标准酪蛋白溶液B的配制(1500μg/ml):用0.05mol/L氢氧化钠溶液配制从特仑苏和金典中提取的酪蛋白样品液3、4的配制(50-1500μg /ml):用0.05mol/L氢氧化钠溶液配制七、实验目的1.掌握从牛奶中提取酪蛋白的方法2.了解蛋白质分离纯化的基本办法3.学习电泳的基本原理及掌握醋酸纤维素薄膜电泳分离酪蛋白的具体操作4.掌握双缩脲法和紫外吸收法测定蛋白质含量的原理及操作方法并比较两种方法5.熟悉分光光度计的原理和操作6.比较特仑苏与金典中的酪蛋白含量八、实验原理酪蛋白在其等电点时静电荷为零,同种电荷的相互排斥作用消失,溶解度很低,利用这一性质,将牛乳调节到PH4.6,酪蛋白就可以从牛乳中分离出来。
实验二从牛奶中提取酪蛋白一、实验目的要求1.学习从牛乳中制备酪蛋白的方法。
2.了解从牛奶中制取酪蛋白的原理。
二、实验原理牛乳中的主要蛋白质是酪蛋白,含量约为3.5g/100ml。
酪蛋白是含磷蛋白质的混合物,相对密度1.25-1.31,不溶于水、醇、有机溶剂,等电点为4.7.利用等电点时溶解度最低的原理,将牛乳的pH值调至4.7时,酪蛋白就沉淀出来。
用乙醇洗涤沉淀物,除去脂质杂质后便可得到纯的酪蛋白。
三、原料与器材鲜牛奶、恒温水浴锅、台式离心机、抽滤装置。
四、试剂1.95%乙醇2.无水乙醚3.0.2mol/l的醋酸-醋酸钠缓冲液A液(0.2mol/l的醋酸-醋酸钠溶液):称取NaAc.3H2O54.44g,定容至2000ml。
B液(0.2mol/l的醋酸-醋酸钠溶液):称取优级纯醋酸(含量大于99.8%)12.0g,定容至1000ml。
取A液1770ml与B液1230ml混合即得pH4.7的醋酸-醋酸钠缓冲液3000ml。
4.乙醇-乙醚混合液乙醇:乙醚=1:1(体积比)。
五、操作步骤1.将5ml牛奶置试管或小烧杯中,在水浴中加热至40℃,在搅拌下漫漫加入预热至40℃(应注意两种液体都应先预热至40℃再用),pH4.7的醋酸-醋酸钠缓冲液5ml,用精密pH试纸或酸度计调pH至4.7(用1%NaOH或10%醋酸溶液进行调整)。
观察牛奶开始有絮状沉淀出现后,保温一定时间使沉淀完全。
将上述悬浮液冷却至室温。
离心分离8min(8000r/min)或15min(2000r/min),弃去上清液,得到酪蛋白粗制品。
2.用蒸馏水洗涤沉淀3次(洗涤时将沉淀颗粒用干净吸管吹开或用毛细管的封闭一端搅开,充分洗涤),离心5min(12000r/min)或10min(3000r/min),弃去上清液。
3.在沉淀中加入3ml95%的乙醇,搅拌片刻,将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。
用乙醇-乙醚混合液洗涤沉淀2次,最后用乙醚洗涤沉淀2次,抽干。
酪蛋白的提取实验资料搜集:文章链接1:/Article/Class185/10919.shtml所谓蛋白质变性(denaturation),就是天然蛋白质的严密结构(注1)在某些物理或化学因素作用下,其特定的空间结构被破坏,从而导致理化性质改变和生物学活性的丧失,如酶失去催化活力,激素丧失活性。
变性蛋白质和天然蛋白质最明显的区别是溶解度降低,同时蛋白质的粘度增加,结晶性破坏,生物学活性丧失,易被蛋白酶分解。
生活中最常见的例子,就是煮鸡蛋的时候,蛋清变成蛋白了。
引起蛋白质变性的原因可分为物理和化学因素两类。
物理因素可以是加热、加压、脱水、搅拌、振荡、紫外线照射、超声波的作用等;化学因素有强酸、强碱、尿素、重金属盐、十二烷基磺酸钠(SDS)等。
在临床医学上,变性因素常被应用于消毒及灭菌。
反之,注意防止蛋白质变性就能有效地保存蛋白质制剂。
变性并非是不可逆的变化,当变性程度较轻时,如去除变性因素,有的蛋白质仍能恢复或部分恢复其原来的构象及功能,变性的可逆变化称为复性。
许多蛋白质变性时被破坏严重,不能恢复,称为不可逆性变性,比如说用金属盐、辐射使蛋白质变性。
我们有时常常会看到变性的蛋白质在溶液中沉淀,蛋白质的变性的确与沉淀有密不可分的关系,但并不是所有变性的蛋白质都会在溶液中沉淀。
具体地说,变性蛋白质一般易于沉淀,但也可不变性而使蛋白质沉淀,在一定条件下,变性的蛋白质也可不发生沉淀,变性蛋白质只在等电点附近才沉淀,沉淀的变性蛋白质也不一定凝固。
例如,蛋白质被强酸、强碱变性后由于蛋白质颗粒带着大量电荷,故仍溶于强酸或强减之中。
但若将强碱和强酸溶液的pH 调节到等电点,则变性蛋白质凝集成絮状沉淀物,若将此絮状物加热,则分子间相互盘缠而变成较为坚固的凝块。
下面是蛋白质沉淀的原理:蛋白质所形成的亲水胶体颗粒具有两种稳定因素,即颗粒表面的水化层和电荷。
若无外加条件,不致互相凝集。
然而除掉这两个稳定因素(如调节溶液pH 至等电点和加入脱水剂)蛋白质便容易凝集析出。
牛奶中提取酪蛋白[目的与要求]1、了解等电点沉淀法2、学习从牛奶中制备酪蛋白的方法3、加深对蛋白质等电点性质的理解[原理]蛋白质是一种亲水胶体,在水溶液中蛋白质分子表面形成一个水化层。
另外,蛋白质又是一种两性离子,在一定pH溶液能够维持一个稳定的状态。
但是调节蛋白质溶液的pH值至等电点时,蛋白质会因失去电荷而变得不稳定,此时若再加脱水剂或加热,水化层被破坏,蛋白质分子就相互凝聚而析出。
等电点沉淀法主要利用两性电解质分子在等电点时溶解度最低的原理,而多种两性电解质具有不同等电点而进行分离的一种方法。
牛乳中主要的蛋白质是酪蛋白含量约为35g/L。
酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物,等电点为4.7。
将牛乳的pH调至4.7时,酪蛋白就沉淀出来。
用乙醇洗涤沉淀,除去脂类杂质后便可得到较纯的酪蛋白。
但单独利用等电点沉淀法来分离生化产品效果并不太理想,因为即使在等电点时,有些两性物质仍有一定的溶解度,并不是所有的蛋白质在等电点时都能沉淀下来,特别是同一类两性物质的等电点十分接近时。
生产中常与有机溶剂沉淀法、盐析法并用,这样沉淀的效果较好。
本实验目的是使学生运用等电点沉淀法制备酪蛋白,从中加深对蛋白质等电点性质的理解。
<!--[if !supportEmptyParas]--><!--[endif]-->[方法和步骤]1、取预先放冰箱中冷却的消毒牛奶6mL,3 000r/min离心10min,除去脂肪层的乳液置50毫升烧杯内,加热至40℃左右,在搅拌下慢慢加入10mL左右预热的醋酸-醋酸钠缓冲液,此时混浊液中有大量絮状物沉下。
冷至室温,3 000r/min离心10min,弃去上清液,得酪蛋白粗品。
2、用蒸馏水洗沉淀三次(每次5mL左右),3 000r/min离心10min,弃去上清液。
3、将沉淀置研钵中,研碎后,渐加5mL 95%乙醇,静置片刻,将全部悬浮液转移至布氏漏斗抽滤,抽干后的制品,用乙醇-乙醚混合液洗沉淀二次(每次5mL),最后用无水乙醚洗沉淀二次(每次5mL),抽干。
酪蛋白(Casein)的提取一、实验目的1、掌握一种提取蛋白的方法。
2、掌握一种检测牛乳质量的方法。
二、实验原理酪蛋白是乳蛋白质中最丰富的一类蛋白质,约占乳蛋白的80~82%,酪蛋白不是单一的蛋白质,是一类含磷的复合蛋白质混合物,以一磷酸酯键与苏氨酸及丝氨酸的羟基相结合。
它还含有胱氨酸和蛋氨酸这两种含硫氨基酸,但不含半胱氨酸。
它在牛乳中的含量约为35g/L,比较稳定,利用这一性质,可以检测牛乳中是否掺假。
酪蛋白在其等电点时由于静电荷为零,同种电荷间的排斥作用消失,溶解度很低,利用这一性质,经牛乳调到pH4.6,酪蛋白就从牛乳中分离出来。
酪蛋白不溶于乙醇,这个性质被利用来从酪蛋白粗制剂中将脂类杂质除去。
三、仪器和试剂仪器温度计、布氏漏斗、pH 试纸、抽滤瓶、电炉、烧杯、量筒、表面皿、天平等。
试剂1. 95%乙醇、乙醚2. pH4.6乙酸钠缓冲液0.2mol/L3. 乙醇、乙醚混合液:乙醇∶乙醚=1∶1(体积比)4. 市售牛乳四、实验步骤1.酪蛋白等电点沉淀将100mL 牛乳放到500mL 烧杯中,加热至40℃左右的乙酸钠缓冲液,直到pH 达4.6左右,用pH试纸或酸度计调试。
将上述悬浮液冷却至室温,然后放置5min,用细布过滤,收集沉淀。
2.除脂类杂质将上述沉淀用少量水洗数次,然后悬浮于30mL95%的乙醇中。
将此悬浮液倾于布氏漏斗中,抽滤除去乙醇溶液,再倒入乙醇—乙醚混合液洗涤沉淀两次,最后再用一米洗涤沉淀两次,抽干。
将沉淀从布氏漏斗中移去,在表面皿上摊开以除去乙醚,干燥后得到的是酪蛋白纯品。
准确称重后,计算出每100mL 牛乳所制备出的酪蛋白数量(g%),并与理论产量(3.5g%)相比较,求出实际获得百分率。
酪蛋白肽制备、脱苦及其功能特性的研究酪蛋白肽制备、脱苦及其功能特性的研究引言酪蛋白是一种重要的乳制品成分,其具有良好的营养价值和功能特性。
然而,乳制品中的酪蛋白常常带有苦味,影响了其口感和消费者对其的接受程度。
因此,研究酪蛋白肽的制备和脱苦技术,以及其功能特性的研究具有重要的理论和实际意义。
酪蛋白肽的制备酪蛋白肽的制备方法多样,常见的方法有酶切法、酸法和酶酸联用法等。
酶切法是将酪蛋白利用特定的酶进行酶解,产生具有丰富功能的生物活性肽段。
酸法则是通过酸性环境将酪蛋白降解为肽段,但该方法常常会导致产物含有较高的苦味,需要进一步进行脱苦工艺。
酶酸联用法则是结合了酶切法和酸法,能够在较高的蛋白质转化率的同时降低苦味的产生。
脱苦技术脱苦是指通过不同的方法去除酪蛋白中的苦味成分。
传统的脱苦方法包括物理方法、化学方法和酶法。
物理方法是通过温度、压力等条件改变酪蛋白的结构,使其苦味成分减少。
化学方法则是利用化学试剂对酪蛋白进行反应,形成化合物来降低苦味。
酶法则是通过特殊酶对酪蛋白进行降解,去除苦味成分。
随着技术的发展,新的脱苦方法也得到了应用,例如超声波处理、高压处理和微波处理等。
酪蛋白肽的功能特性酪蛋白肽具有多种功能特性,包括抗氧化、抗菌、降血压、降血糖等。
其中,抗氧化是酪蛋白肽的一项重要功能。
研究发现,酪蛋白肽具有清除自由基的能力,可以保护机体免受氧化应激的伤害。
此外,酪蛋白肽还能够抑制细菌的生长,对于预防食品中细菌的滋生和腐败有一定的作用。
一些研究还表明,酪蛋白肽具有降血压和降血糖的作用,对于心血管疾病和糖尿病的预防和治疗具有潜在的应用价值。
结论酪蛋白肽的制备、脱苦及其功能特性研究对于提高乳制品的品质和降低苦味的产生具有重要的意义。
通过选择合适的制备方法和脱苦技术,可以得到具有丰富功能特性的酪蛋白肽。
进一步研究酪蛋白肽的功能特性,有助于发现其更多的应用领域,为食品工业的发展提供新的思路和方法。
然而,目前对于酪蛋白肽的制备和脱苦技术仍存在一些问题,需要进一步的研究和探索。
酪蛋白标准曲线酪蛋白是一种重要的蛋白质,广泛存在于奶制品、肉类和豆类中。
在食品工业和生物化学领域,酪蛋白的检测和定量是非常重要的。
而酪蛋白的标准曲线则是进行定量分析的关键步骤之一。
本文将介绍酪蛋白标准曲线的制备方法、应用范围以及注意事项。
酪蛋白标准曲线的制备方法:1. 准备一定浓度的酪蛋白标准溶液,可以选择商业购买的标准品,也可以自行制备。
将标准溶液分别加入不同浓度的酪蛋白溶液中,制备一系列浓度不同的标准样品。
2. 使用适当的检测方法,如紫外-可见分光光度法(UV-Vis)或荧光法,对各个标准样品进行检测,得到吸光度或荧光强度的数据。
3. 绘制标准曲线,横坐标为酪蛋白的浓度,纵坐标为吸光度或荧光强度。
通过拟合曲线,得到标准曲线的方程。
酪蛋白标准曲线的应用范围:酪蛋白标准曲线可以用于食品中酪蛋白含量的定量分析,也可以用于生物化学实验中对酪蛋白的定量检测。
在食品工业中,酪蛋白标准曲线可以用于奶制品的质量控制,检测产品中酪蛋白的含量是否符合标准要求。
在生物化学实验中,酪蛋白标准曲线可以用于研究酪蛋白在生物体内的代谢和功能。
酪蛋白标准曲线的注意事项:1. 制备标准曲线时,应该选择适当的浓度范围,覆盖样品中可能存在的酪蛋白浓度范围。
2. 在检测过程中,要保证各个标准样品和待测样品的处理条件一致,如pH值、温度等,以确保数据的准确性。
3. 在绘制标准曲线时,要选择合适的拟合方法,如线性拟合、多项式拟合等,以得到准确的标准曲线方程。
4. 在使用标准曲线进行定量分析时,要注意样品的稀释和处理,以避免超出标准曲线的线性范围。
总结:酪蛋白标准曲线是定量分析中的重要工具,通过合理的制备方法和注意事项,可以得到准确可靠的标准曲线,为食品工业和生物化学领域的研究提供有力支持。
希望本文介绍的内容能够帮助读者更好地理解酪蛋白标准曲线的制备和应用。