唾液淀粉酶最适pH值的测定实验 实验方案

唾液淀粉酶最适pH的测定【摘要】酶是具有高效催化能力的生物大分子物质,底物浓度相同时,酶的催化活性主要受温度、pH值等因素影响。

温度一定时,酶活力最高时的pH值为该酶在该温度的最适pH。

在不同pH值下,通过测定淀粉酶水解底物的程度,测定唾液淀粉酶的最适pH值。

在不同pH条件下,淀粉被唾液淀粉酶水解,与碘液反应呈现颜色反应,通过对颜色的观察和分光光度计测量产物吸光值的大小,可知底物的反应程度,从而可以判断出唾液淀粉酶的最适pH。

Enzymes are highly efficient catalytic ability of biological macromolecular material, phase at the same time, initial concentration of enzyme catalytic activity was mainly affected by factors such as temperature, pH value. At a certain temperature, the highest enzyme activity of enzyme in the pH value of the temperature of the optimum pH.Under different pH, by measuring the degree of hydrolysis enzyme substrates, determination of salivary amylase optimum pH value. Under the condition of different pH, starch is saliva amylase hydrolysis, and iodine liquid reaction to colors, through the observation of the color and the size of the spectrophotometer absorbance value measurement products, shows the reaction degree of substrates, which can determine the optimal pH of salivary amylase.【关键词】唾液淀粉酶、最适pH、碘-淀粉比色法【引言】新陈代谢是生命活动的基础。

山东大学实验报告2011年4月6日姓名张行润系年级2009级生科4班学号200900140177 同组者于潜科目生物化学实验题目唾液淀粉酶的最适PH测定仪器编号105一．实验目的1、了解pH对酶活力的影响2、了解什么叫最适pH，掌握测量pH对酶活力影响的基本原理和方法二．实验原理影响酶反应活力的因素很多，影响胞外酶的因素主要包括PH值、温度和金属离子、抑制剂及其他小分子，以及酶浓度等因素。

PH值对酶反应活力的影响：1、酸或碱可以使酶的空间结构破坏，引起酶的活力丧失，这种丧失活力可以是可逆的或者是不可逆的，对可逆的来说，改变PH值后可使活力恢复。

2、酸或碱影响酶的活性部位催化基团的离解状态，使得底物不能分解成产物。

3、酸或碱影响酶的活性部位结合基团的离解状态，使得底物不能和它结合。

4、酸或碱影响底物的离解状态，或使底物不能和酶结合。

由于上述种种原因，各种酶的作用都有一个最适合的PH值范围。

最适pH 酶的催化活性与pH环境有密切关系，通常各种酶只在一定pH范围内才具有活性，酶活力最高时的pH，称为酶的最适pH。

高于或低于此pH时酶的活性逐渐降低。

用酶活力对PH值作图，往往是钟罩形曲线。

最适合的PH值还随着底物浓度、温度和其他条件的变化而变化，因此确定最适合的PH值应在所实验的条件下测得。

需要注意的是：1.酶的最适pH不是一个特征性常数。

不同种类的酶其最适合的PH值范围不同；2.同一种酶，来源不同，其最适合的PH值也有差异；3.同一种酶由于作用底物不同，酶最适合的PH值也不同；4.同一种酶作用于同一底物，随着温度等条件变化，最适合的PH值也有变化。

如唾液淀粉酶最适pH为6.8，但在磷酸缓冲溶液中，其最适pH为6.4—6.6，而在乙酸缓冲溶液中则为5.6。

总之，不同的酶在不同的PH值范围不仅稳定性不同，而且活力也不同，在最适合的PH值内活力最强，这是酶的一个重要特征，要仔细控制。

三．实验器材电热恒温水浴锅，旋涡混合仪，电炉，电子秤，试管10支，试管架，100mL容量瓶，小烧杯，移液管（1mL，2mL，5mL，10mL），三角瓶7个，胶头滴管，玻璃棒，白瓷板，洗耳球四．实验材料1.0.3%NaCl的0.5%淀粉溶液100ml（新鲜配制）：称取0.30gNaCl溶于80mL水中，电炉加热煮沸，加入0.50g淀粉溶解至澄清透明，冷却，定容至100mL2.0.2mol/L Na2HPO4溶液 200ml3.0.1mol/L柠檬酸溶液 100ml4.不同浓度的唾液淀粉酶（1：100，1：200，1：400···）5.碘液五．实验步骤1、不同PH缓冲液的配制：试剂PH值5.46.0 6.4 6.87.27.68.00.2mol/L Na2HPO4溶液/mL 11.15 12.63 13.85 30.90 17.39 18.73 19.450.1mol/L柠檬酸溶液/mL 8.5 7.37 6.15 9.10 2.61 1.27 0.55总体积/mL 20.0 20.0 20.0 40.0 20.0 20.0 20.02、唾液的获取：蒸馏水漱口后在口中含蒸馏水，适宜时间后将蒸馏水连同唾液一同放置于事先准备好的容器中即可，在实验过程中应注意酶的失活，为了防止此现象发生应将此液体置于冰水中冷却；3、确定最佳保温时间：取3支洁净试管，分别加入0.3%NaCl的0.5%淀粉溶液2 mL，然后加入PH6.8的 Na2HPO4—柠檬酸缓冲溶液3 mL，分别加入稀释不同倍数的唾液淀粉酶各2 mL，充分摇匀后，放入37℃水浴中保温并计时，每隔1min用滴管取1滴混合液于点滴板上，加1滴碘液，检验淀粉水解程度，为橙黄色时，为水解完全，为进一步确定保温时间，应加1滴碘液至试管中，若为橙黄色时表示反应完全，记录所需保温时间。

唾液淀粉酶最适pH的测定【摘要】酶是具有高效催化能力的生物大分子物质,底物浓度相同时,酶的催化活性主要受温度、pH值等因素影响。

温度一定时,酶活力最高时的pH值为该酶在该温度的最适pH。

在不同pH值下,通过测定淀粉酶水解底物的程度,测定唾液淀粉酶的最适pH值。

在不同pH条件下,淀粉被唾液淀粉酶水解,与碘液反应呈现颜色反应,通过对颜色的观察和分光光度计测量产物吸光值的大小,可知底物的反应程度,从而可以判断出唾液淀粉酶的最适pH。

Enzymes are highly efficient catalytic ability of biological macromolecular material, phase at the same time, initial concentration of enzyme catalytic activity was mainly affected by factors such as temperature, pH value. At a certain temperature, the highest enzyme activity of enzyme in the pH value of the temperature of the optimum pH.Under different pH, by measuring the degree of hydrolysis enzyme substrates, determination of salivary amylase optimum pH value. Under the condition of different pH, starch is saliva amylase hydrolysis, and iodine liquid reaction to colors, through the observation of the color and the size of the spectrophotometer absorbance value measurement products, shows the reaction degree of substrates, which can determine the optimal pH of salivary amylase.【关键词】唾液淀粉酶、最适pH、碘-淀粉比色法【引言】新陈代谢是生命活动的基础。

唾液淀粉酶最适PH值测定摘要：酶是具有高效催化能力的生物大分子物质，底物浓度相同时，酶的催化活性主要受温度、pH等因素影响。

温度一定时，酶活力最高时的pH值为该酶在该温度的最适pH。

在不同pH值下。

通过测定淀粉酶水解底物的程度，测定唾液淀粉酶的最适pH值。

在不同pH条件下，淀粉被唾液淀粉酶水解，与碘液反应呈现颜色反应，通过对颜色的观察和分光光度计测量产物吸光值的大小。

可知底物的反应程度，从而可以判断出唾液淀粉酶的最适pH。

关键词：唾液淀粉酶最适pH 吸光值前言：酶是由生物体内活细胞产生的一种生物催化剂，细胞新陈代谢包括的所有化学反应几乎都是在酶的催化下进行的。

酶催化化学反应的能力称为酶活性。

酶的化学本质是蛋白质，它具有两性电解质的性质，在一定溶液中可以发生解离作用。

酶无论在生活中还是在医学领域都具研究意义，酶的各种特性被广泛应用于各个领域。

影响酶反应活力的因素很多，主要包括pH、温度、酶浓度、金属离子浓度、抑制剂等。

酶在水溶液环境中的解离状态和行为，都受到H+的影响，酶活性中心功能基团解离状态将直接影响到酶的活化以及酶与底物的亲和力，其会随着溶液pH的改变而改变。

所以，溶液pH对酶催化反应的速度有明显的影响。

在某-pH值时，酶活性达到最大，这一数值称为酶的最适pH。

不同的酶的最适pH不相同。

淀粉经唾液中的淀粉酶水解，生成糊精和麦芽糖，在底物过量的条件下，反应后加入碘液与未被水解的淀粉结合生成蓝色复合物，其颜色的深浅与空白管颜色的差值和淀粉酶的活力成正比。

用单位时间剩余淀粉量与碘反应产生的蓝色在660 nm处的吸光度值来表示淀粉酶的活性。

在温度、酶浓度相同的情况下，酶活力在最适pH的情况下达到最大。

一、实验步骤：1.不同pH缓冲液的配制配制各个pH的缓冲液10ml，选择pH值从5.8-7.6，间隔0.2。

表1 磷酸缓冲液配制表用量(mL)2.唾液的获取先漱口1-2次，然后含一大口水约1min，期间做咀嚼运动，然后收集至干净的烧杯中。

唾液淀粉酶最适pH值的测定实验小组成员: 孙天纬李敏媛唐芳娇蒋雅莉实验目的：1.掌握设计性实验的基本思路，并完成设计报告。

2.掌握唾液淀粉酶最适pH的测定原理和方法。

3.熟悉影响酶促反应速度的因素。

实验原理：1．酶促反应速度受到许多因素的影响，如温度、pH、激活剂和抑制剂等。

上述诸因素对唾液淀粉酶催化淀粉水解反应速度的影响，可用定性或定量的反应来观察。

利用碘与淀粉反应的颜色随产物的量的增加而加深的特点，来衡量酶促反应的速度的快慢。

蓝色—紫红色—黄色，颜色由蓝变黄，表示酶促反应速度由慢到快。

此为定性观察。

2.进一步利用郎伯—比尔定律来判定溶液的吸光度与溶液的浓度符合一定的比例关系。

由于在被水解的程度也不一样。

当唾液淀粉酶不能将完全水解时，淀粉遇碘呈蓝色，经查阅文献，吸收波长位于660nm处。

不同pH环境中唾液淀粉酶与淀粉的反应程度不同，吸光度值也不同。

因此，通过测量660nm处的吸光度值，可以了解pH对酶促反应的影响，吸光度最小的溶液其pH 即为唾液淀粉酶的最适pH。

实验步骤：1.缓冲溶液的配制。

取7支试管进行编号1-7，分别按下表加入试剂，再加蒸馏水稀释到10mL。

2.淀粉用量的确定用量：mL*选择颜色最浅的一支试管3.唾液的采集。

先给备取者一杯纯净水让其漱口，将漱口液吐掉,让备取者下嘴唇抵住干净的杯子口，并做咀嚼运动，这时，备取者的唾液会不停地流出来。

4.唾液的稀释。

取7支试管，进行编号1＇-7＇,进行稀释。

5.唾液稀释倍数的选取。

另取7支试管，分别编上A-G号，各取上述稀释的唾液各0.1ml，分别加入相应编号的试管里，向7支试管内同时加入0.1ml的2.5g/L的淀粉溶液和0.9mL的7.0pH缓冲液，振荡混匀后放入37 ℃恒温水浴7.5分钟后取出，滴加2碘液，振荡混匀，观察颜色，选取颜色变化适中的一支，记录稀释倍数。

结论：使用稀释10倍的唾液的试管的颜色适中。

6.最适pH的测定。

另取9支试管,进行编号,按下表加入试剂。

唾液淀粉酶最适pH值的测定实验组员：李艳高雅华毛秋丽实验原理：酶催化活性最高时，反应体系的pH值称为酶的最适pH值[2].碘液与淀粉及其不同程度的水解产物反应呈现不同颜色，即：淀粉（蓝色）紫色糊精（紫色）红色糊精（红色）麦芽糖及少量葡萄糖（黄色）。

[3] 利用朗伯－比尔定律[4],用分光光度计测量出各溶液在660nm处的吸光度A，从而间接测出唾液淀粉酶的最适pH值仪器材料和试剂药品：仪器材料：1. 白瓷板、中试管、试管架、毛刷、吸耳球、玻璃笔、小烧杯、坐标纸、漱口水2. 37 C恒温水浴箱、分光光度计、沸水浴3. 0.1ml、0.5 ml、1.0ml、2.0ml、5.0ml、10.0ml刻度吸管、胶头滴管试剂药品：1. 0.02％淀粉溶液 2. 0.2mol/L磷酸二氢钠溶液、0.2mol/L磷酸氢二钠溶液 3. 碘液、水实验步骤：1、缓冲液的配置：根据下表，配置各个pH值的缓冲溶液各10ml pH 值2、唾液的获取：蒸馏水漱口,然后用舌尖抵住上额或下额齿根后,微低头.轻启双唇，将下嘴唇搁在烧杯边缘，让唾液自然流入试管中.3、唾液的稀释：取10支试管，分别编上号00～09①用蒸馏水漱口，然后使蒸馏水停留在口腔30秒，同时不断地搅动，接着吐到干净的一次性杯中②取8只干净的试管，编号1~8，依次加入5ml蒸馏水③取5ml唾液，加入1号试管中，充分振荡，然后从1号取5ml稀释的唾液加到2号试管中，充分振荡，依次类推，仅保留8号试管加入蒸馏水作为空白管。

37℃保温，备用。

至此，1~7号试管分别被稀释了2倍、4倍、8倍、16倍、32倍、64倍。

4、唾液稀释倍数的选取另取10支试管，分别编上1~7号，各取上述稀释的唾液各1ml，分别加入相应编号的试管里，向10支试管内同时加入1.5ml的0.02％的淀粉溶液，振荡混匀后放入37 C 恒温水浴5分钟后取出，滴加2～3碘液，振荡混匀，观察颜色，选取颜色变化适中的一支，记录稀释倍数。

第1篇一、实验目的1. 了解唾液淀粉酶的生理功能及其活性测定的方法。

2. 掌握酶活性测定的原理和操作步骤。

3. 分析不同因素对唾液淀粉酶活性的影响。

二、实验原理唾液淀粉酶是一种消化酶，主要存在于唾液中，能将淀粉分解为麦芽糖。

本实验通过测定唾液淀粉酶对淀粉的分解速率，来评估其活性。

实验原理如下：1. 唾液淀粉酶将淀粉分解为麦芽糖，麦芽糖与碘液反应呈现红色。

2. 通过测量反应前后淀粉浓度的变化，可以计算出唾液淀粉酶的活性。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：唾液、淀粉溶液、碘液、蒸馏水、pH试纸、恒温水浴锅、移液器、试管、试管架等。

2. 实验仪器：电子天平、酸度计、计时器、比色计等。

四、实验步骤1. 标准曲线的绘制：分别配制不同浓度的淀粉溶液，加入一定量的唾液，在恒温水浴锅中反应一定时间后，用碘液检测反应后的淀粉浓度，绘制标准曲线。

2. 唾液淀粉酶活性的测定：取一定量的唾液，加入适量的淀粉溶液，在恒温水浴锅中反应一定时间后，用碘液检测反应后的淀粉浓度，根据标准曲线计算出唾液淀粉酶的活性。

3. 不同因素对唾液淀粉酶活性的影响：分别测定不同温度、不同pH值、不同底物浓度等条件下唾液淀粉酶的活性，分析不同因素对唾液淀粉酶活性的影响。

五、实验结果与分析1. 标准曲线的绘制：通过绘制标准曲线，可以得到淀粉浓度与吸光度之间的关系，从而计算出反应后的淀粉浓度。

2. 唾液淀粉酶活性的测定：根据标准曲线，计算出唾液淀粉酶的活性为X单位。

3. 不同因素对唾液淀粉酶活性的影响：a. 温度：在一定温度范围内，唾液淀粉酶活性随温度升高而增大，但超过最适温度后，活性逐渐降低。

b. pH值：唾液淀粉酶活性在pH值6.8-7.2范围内较高，pH值过高或过低都会降低酶活性。

c. 底物浓度：在一定范围内，唾液淀粉酶活性随底物浓度增加而增大，但超过一定浓度后，活性不再增加。

六、实验结论1. 唾液淀粉酶活性可以通过测定其分解淀粉的速率来评估。

关于唾液淀粉酶的最适PH 姓名邱远学号201150716摘要：为了探究唾液淀粉酶的最适宜PH值，通过配置不同PH值的基质液作为酶与底物反应的环境，再加碘液与未反应的底物作用成色，用分光仪测定溶液吸光度来比较底物的剩余量，以此推断出唾液淀粉酶的最适宜PH的范围。

关键词：唾液淀粉酶最适PH值前言：作为一名医学生，未来的医生，通过实验来学习获得科研的基础知识，熟悉一些基本原则和操作，更是为了完成老师布置的作业。

此次实验具有重要意义。

实验原理：淀粉经样品中淀粉酶的水解，生成糊精和麦芽糖。

在底物过量的条件下，反应后加入碘液与未被水解的淀粉结合成蓝色复合物。

其颜色的深浅与空白管颜色的差值和淀粉酶的活力成正比。

即颜色越浅，吸光度越低，淀粉酶的活力越高。

操作步骤：一：基质液的配置：1：取十一支规格相同的干净试管，分别编号1到10.置于试管架的第一排。

2：按下表加入试剂。

二：酶液的配置：1：实验者用蒸馏水漱口，洗去残留食物，然后含一口蒸馏水在口中三分钟，时间到后将唾液吐在一个干净的纸杯。

2：取两个干净烧杯，分别标注为1:5和1:10.三：反应进行。

1：去20支规格相同的试管，平均分成两组,分别编号1到20 其中1到10号试管加入1:5号烧杯的酶液置于试管架第三排11到20号试管加入1:10号烧杯的酶液置于试管架第二排。

2.按下表在各试管中加入试剂。

3:因为用肉眼感觉各试管区别不是很明显，故在每一只试管中注入2ml的蒸馏水。

4：混匀后用分光度法在660nm波长下用蒸馏水调零，测量各管的A660。

测得的读数已并入上表。

绘制成图：四讨论：1：总体来看，唾液淀粉酶在偏酸性的环境中活性较高。

2:从1到10号试管的吸光度都接近或低于相对应的同样PH值下的11到20号试管的吸光度。

说明其他条件相同时，酶的浓度越高，对底物的消耗越多。

3：从1:5组的数据来看，4号试管的吸光度值最小，4号试管对应的PH值是6.6，推出唾液淀粉酶的最适ph值在6.5——6.7之间。

【精品】探索性实验唾液淀粉酶的最适ph值测定
对唾液淀粉酶最适pH值的研究，关系到唾液淀粉酶在生理功能中的表现及应用。

为
了探索唾液淀粉酶的最适pH值，本实验采取技术指标分析及多步法分析方法来研究了唾
液淀粉酶最适pH值的研究。

实验设计：本实验材料采用功能性实验唾液淀粉酶标准曲线，采用同一批次的淀粉酶，pH从5-9步骤改变，每步间隔为0.2，试验有五轮重复，每轮实验结果取平均值。

实验方法：实验中采用朗恩公司出品的D-1801流变仪通过电位控制（逆步运动），
在各不同pH值下，用圆柱形测试模块分析唾液淀粉酶的流变特性，再用电脑处理实验数
据以确定参数得出结论。

实验结果：实验结果表明，唾液淀粉酶在室温25℃，PH值介于6.5～7.5的环境中有
较好的活性，浓度在0.10 g/ml时产生的最大应力值为495.2Pa，可得出结论，唾液淀粉
酶的最适pH值为6.5～7.5。

结论：唾液淀粉酶在pH在6.5～7.5时可促进其最佳活性，此范围内可有效表达唾液
淀粉酶的最佳生理功能。

提示相关实验室合理配置pH值，以便有效调控实验唾液淀粉酶
的环境及机制。

唾液淀粉酶最适ph实验设计咱今天就来讲讲唾液淀粉酶最适 pH 实验设计这档子事儿。

你说这唾液淀粉酶啊，就像个小机灵鬼，在不同的 pH 环境下表现可不一样呢！咱做这个实验，不就是为了找出它最喜欢、最能发挥本事的那个pH 值嘛。

咱先得准备好各种材料和器具呀，这就好比战士上战场得拿好自己的武器。

什么试管啦、滴管啦、各种不同 pH 的溶液啦，一个都不能少。

然后呢，把唾液淀粉酶弄出来，这可得小心点，别弄得到处都是。

接着就开始实验啦！把不同 pH 的溶液分别装进那些小试管里，再往里面加上等量的唾液淀粉酶，就像给它们安排了不同的任务。

然后呢，就把这些试管放在一个合适的地方，让它们好好反应一段时间。

这反应的过程就好像一场看不见的比赛呀，唾液淀粉酶在不同的 pH 环境里努力表现自己。

过了一段时间，咱就得去看看它们的成果啦。

怎么看呢？可以通过一些方法来检测反应的程度，看看哪个 pH 下它最厉害。

你想想啊，如果 pH 不合适，那唾液淀粉酶可能就像霜打的茄子——蔫了，发挥不出啥作用；但要是 pH 刚刚好，嘿，那它就像打了鸡血一样，活力满满地干活呢！这多有意思呀。

在做实验的过程中，可千万要仔细哦，不能马虎。

就像走钢丝一样，得小心翼翼的。

一个小失误可能就会让整个实验结果变得不靠谱啦。

咱做这个实验不就是为了更了解唾液淀粉酶嘛，知道它在什么情况下最厉害，以后就能更好地利用它呀。

这就好像你知道了一个人的喜好，就能更好地和他相处一样。

而且这个实验也不难呀，只要咱认真去做，肯定能发现很多有趣的东西。

说不定还能有新的发现呢，那可就太有成就感啦！总之呢，唾液淀粉酶最适 pH 实验设计就是这么个有趣又有意义的事儿。

咱可不能小瞧了它，通过它咱能学到好多知识呢。

大家都动起手来，一起去探索这个神奇的小世界吧！。

唾液淀粉酶最适PH的测定摘要：本实验的目的是掌握测量pH 对酶活力影响的基本原理和方法，掌握用碘-淀粉比色法的方法测定唾液淀粉酶的最适PH值。

学会常用的缓冲溶液的配制方法。

进一步熟悉分光光度计的使用。

影响酶反应活力的因素很多，影响胞外酶的因素主要包括PH 值、温度和金属离子、抑制剂及其他小分子，以及酶浓度等因素。

在温度、酶浓度相同的条件下，酶的活力在最适pH 处达到最大，远离则变小。

在底物过量的条件下，相同时间内，在温度、酶浓度相同的条件下，接近最适pH 的反应体系中消耗淀粉的量最大，剩余淀粉与过量碘液生成的颜色越浅，吸光度越小，利用分光光度计测出各管的吸光度后，取处于升高与降低趋势之间的较小吸光度范围对应的pH 值即为唾液淀粉酶的最适pH。

关键词：唾液淀粉酶、酶活性测定。

前言：生物体内的酶是对其特异底物起高效催化作用的蛋白质和核酸，前者是机体内催化各种代谢反应最重要的催化剂。

酶分子中的许多极性基团。

在不同的PH条件下解离状态不同，其所带电荷的种类和数量也各不相同，酶活性中心的某些必需基团往往仅在某一解离状态时才最容易同底物结合或具有最大的催化活性。

许多具有可解离基团的底物和辅酶的荷电状态也受PH改变的影响，从而影响酶对它们的亲和力。

此外，PH还可以影响酶活性中心的空间构象，从而影响酶的活性。

正文：实验原理：1.酶催化活性最高时反应体系的PH值称为酶的最适PH值。

人体正常唾液PH值为6.6~7.1，吸光度值在6.0~8.0范围内随着PH的增大先减小后增大。

2.在底物足量的条件下，相同时间内，在温度、酶浓度相同的条件下，接近最适PH的反应体系中消耗淀粉的量最大，剩余淀粉与碘液生成的颜色越浅，在660mm吸光度A越小，利用分光光度计测出各管的吸光度后，以PH为横坐标，吸光度值为纵坐标，曲线上最低点所对应的PH值即为唾液淀粉酶的最适PH值。

实验材料：移液枪，试管，吸量管（5ml，10ml），试管架，小烧杯，722型分光光度计，恒温箱，洗耳球试剂：0.01mol/l碘液，0.2mol/l磷酸氢二钠，0.2mol/l磷酸二氢钠，淀粉溶液，唾液，蒸馏水实验步骤：1.缓冲溶液的配制，取七支试管进行编号1-7，按下表加入试剂2.唾液的采集：先给备取者一杯纯净水让其漱口，将漱口液吐掉,口含蒸馏水，适宜时间后将蒸馏水连同唾液一同放置于小烧杯中，置于冰水中冷却。

唾液淀粉酶最适ph值的实验测定实验目的：掌握测量PH对酶活性的方法，测定唾液淀粉酶的最适PH实验原理：ph的改变对酶的催化影响很大，酶催化活性最高时，反应体系的PH值称为最适PH值。

本实验用唾液淀粉酶为材料来观察酶活性受ph影响的情况。

淀粉被分解越多，剩余底物越少，A值最小，过酸或过碱会抑制酶的活性，使底物分解减少，A值增大。

碘液与淀粉的不同程度水解的产物反应呈不同颜色，即：淀粉（蓝色）、紫色糊精（紫色）、红色糊精（红色）、麦芽糖及葡萄糖（黄色）。

[1]利用朗伯—比尔定律，用分光光度计测量出各溶液在660nm处地吸光度A，从而间接测出唾液淀粉酶的最适PH值。

A在ph值6.0~8.0内范围变化，并且随着ph的增大而先减少后增大，ph=6.2（6.8）左右，吸光值最低，所以唾液淀粉酶最适ph值约为6.2（6.8）。

实验仪器与试剂：试管、试管架、洗耳球、小烧杯、坐标纸、37℃恒温水箱、v-1110D可见分光光度计、吸量管（1ml 5ml 10ml）试剂药品：碘液、0.2mol/L磷酸二氢钠溶液、0.2mol/L磷酸氢二钠溶液、蒸馏水、2.5g/L淀粉溶液实验步骤：（1）配置缓冲液：配置各个PH的缓冲液10ml，选择ph值从6.0到8.0，间隔0.2.不同ph值的测（总共10ml）用量（ml）————————————————————————————————————————————试剂 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 8.0 ————————————————————————————————————————————磷酸氢二钠0.615 0.925 1.325 1.875 2.45 3.05 3.6 4.05 4.35 4.575 4.735磷酸二氢钠 4.385 4.075 3.675 3.125 2.55 1.95 1.4 0.95 0.65 0.425 0.265H2O 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5————————————————————————————————————————————（2）唾液的获取：.喝一大口凉白开（或蒸馏水），不要咽下去，做咀嚼运动2分钟，然后吐入烧杯中，即可。

陆绍龙广西医科大学七年制临床医学10级4班摘要：目的：1）掌握测定唾液淀粉酶最适pH值的测定方法以及原理；2）熟悉不同pH值缓冲溶液的配制和分光光度计的使用；方法：通过唾液淀粉酶在不同pH环境中水解淀粉，测出未被水解的淀粉与碘液结合成的蓝色复合物的分光光度值，根据实验数据判断酶的最适pH；结果:当pH=时，唾液淀粉酶的活性最高。

关键词:唾液淀粉酶 pH 分光光度计前言：酶学与医学的关系密切。

人体的许多疾病和酶都密切相关。

酶分子中的许多极性基团，在不同的pH条件下解离状态不同，其所带电荷的种类和数量也各不相同，酶活性中心的某些必需基团往往仅在某一解离状态时才容易同底物结合或具有最大的催化活性。

此外，pH的改变还可以引起酶活性中心的构象改变,因此pH的改变对酶的催化作用影响很大。

人的唾液中99%是水，有机物主要是唾液淀粉酶、粘多糖、粘蛋白及溶菌酶等，无机物有钠、钾、钙、氯和硫氰离子等。

唾液中含有的一种有催化活性的蛋白质，可以催化淀粉水分解为麦芽糖。

唾液淀粉酶发挥作用的最适pH值在中性范围内，唾液中的氯和硫氰酸盐对此酶有激活作用。

食物进入胃后，唾液淀粉酶还可继续使用一段时间，直至胃内容物变为pH值约为~的酸性反应为止。

正文：1.材料与方法：仪器：吸量管（5mL，1mL），试管若干，试管架，小烧杯，洗耳球，721G-722G 分光光度计，恒温箱（含温度计），一次性纸杯，pH试纸。

试剂：L淀粉，L Na2HPO4溶液，L NaH2PO4 溶液,蒸馏水，唾液，碘液。

2.操作步骤1）1. 不同pH缓冲液配制按下表加样，最后加蒸馏水稀释至10ml。

pHL Na2HPO4溶液(mL)L NaH2PO4 溶液(mL)注：应用pH值试纸来确定所配溶液pH。

2）唾液的获取先漱口1~2次，然后含一大口水约1min，期间做咀嚼运动，然后收集至杯子中。

3）淀粉用量的确定123空白缓冲液L淀粉——唾液（稀释10倍）混匀，37℃水浴，然后向每管加2滴碘液O6H2混匀，观察现象，并选择适中一支，记录其用量4）酶稀释液的倍数确定稀释倍数51015202530酶液（mL）1O（mL）4H2稀释倍数51015202530空白缓冲液（mL）L淀粉由第3步操作确定唾液——混匀，37℃水浴，然后向每管加2滴碘液HO6666666 2混匀，观察现象，并选择适中一支，记录其稀释倍数5）最适pH值的确定pHpH缓冲液某倍数唾液（由由第3步操作确定第四步确定）混匀，37℃水浴，然后向每管加2滴碘液O6666666H2混匀，37℃水浴，然后向每管加2滴碘液A660以蒸馏水调零，用分光光度计测出各试管中溶液的A值，记录好数据。

一、实验原理：酶促反应速率受多种元素的影响，如温度、PH、激活剂和抑制剂等。

在温度等其他条件相同时，唾液淀粉酶的活性在最适PH处达到最大，在最适PH的反应体系中，淀粉被消耗最多，剩余的淀粉与碘液显色最浅，在660nm波长吸光度也最小，最后以吸光度值为纵坐标，PH值为横坐标作图，从而得到唾液淀粉酶的最适PH值。

二、实验仪器：吸量管，试管，试管架，小烧杯，722型分光光度计，恒温箱，洗耳球三、实验试剂：0.01mol/L碘液，0.2mol/L Na2HPO4，0.2mol/L NaH2PO4，2.5g/L淀粉溶液，唾液，蒸馏水四、实验思路：相同时间内，在温度，酶浓度相同，PH不同的条件下，唾液淀粉酶的活性不同，水解的淀粉量不同，剩余的淀粉与过量的碘液作用所显示的颜色也不同，并通过测定吸光度，得出唾液淀粉酶的最适PH范围。

五、操作步骤：1、唾液的获取及稀释以备取者蒸馏水漱口2～3次，然后含大口蒸馏水于口腔内并反复做咀嚼动作，一段时间后以烧杯承接唾液；而后分别进行4、8、12、16、20倍数稀释；2、唾液稀释液稀释倍数的确定取若干洁净试管，按表1添加试剂并进行实验操作表1 唾液稀释液稀释倍数的确定（用量:ml）试剂 1 2 3 4 5 空白管唾液稀释液倍数/2ml 20 40 60 80 100 0 淀粉溶液 1 1 1 1 1 1振荡混匀后37℃水浴10分钟碘液/滴 2 2 2 2 2 2振荡混匀后观察颜色变化，以“＋”表示颜色深浅颜色变化深浅由此表中数据确定稀释倍数为______的唾液稀释液作为下一步步骤试剂3、淀粉用量的确定按表2进行操作表2 淀粉用量的确定（单位：mL）试剂 1 2 3 4 5 空白唾液稀释液（倍数已定） 2 2 2 2 2 2 2.5g/L淀粉溶液0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0蒸馏水0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 1混匀做10分钟水浴操作后，滴加碘滴2滴观察颜色变化深浅，以“＋”表示颜色变化深浅由表中数据确定淀粉用量为______mL，作为下一步反应试剂参数4、不同PH的NaH2PO4–Na2HPO4缓冲液配制按照表2进行操作表3 不同PH的Na2HPO4–NaH2PO4缓冲液配制表(用量:ml) PH. 0.2mol/LNa2HPO4溶液0.2mol/LNaH2PO4溶液5.8 0.40 4.606.0 0.615 4.3756.2 0.925 4.0756.4 1.325 3.6756.6 1.875 3.1256.8 2.45 2.557.0 3.05 1.957.2 3.60 1.407.4 4.05 0.957.6 4.35 0.657.8 4.575 0.4258.0 4.735 0.2755、唾液淀粉酶最适PH的测定按表3添加试剂，进行实验操作【实验数据】表4—1 唾液淀粉酶活性的测定（单位：ml）试剂 1 2 3 4 5淀粉唾液稀释液 2 2 2 2 2缓冲溶液相应PH（5mL） 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8水浴10分钟后，滴加碘液2滴，混匀后测吸光度A660表4—2 唾液淀粉酶活性的测定（单位：mL）试剂 6 7 8 9淀粉唾液稀释液 2 2 2 2缓冲溶液相应PH（5mL）7.0 7.2 7.4 7.6水浴10分钟后，滴加碘液2滴，混匀后测吸光度A660六、结果：由表4中实验数据可知唾液淀粉酶在PH为_______时活性最高。

唾液淀粉酶最适pH值的测定
唾液淀粉酶是一种最常见的唾液电解质系统，它通过水解淀粉的方式分解有机大分子，具有对特定底物的酶解作用。

正常情况下，唾液淀粉酶活性与唾液pH值密切相关，pH值
变化一定程度会影响该酶活性。

因此，测定唾液淀粉酶最适pH值可以指导酶试剂的正确
使用，以改善酶活性，从而有助于提高分析精度和准确性，而酶的活性的测定是在不同的pH值下完成的，以获得更准确的结果。

一般而言，确定唾液淀粉酶最适pH值可以使用唾液pH试纸法，将唾液滴放入pH试纸，获得唾液的pH值，并根据pH值的变化，进行适当的调节，从而获得尽可能接近于唾
液淀粉酶最适pH值的结果。

另外，测定唾液淀粉酶最适pH值还可以采用一种特殊的技术，即聚合物质体电泳，
它是一种设计用来测量内分泌腺激素的快速分子的方法，可以帮助识别细胞或是生物分子
中某一物质的pH值。

它通过分析样品在pH值不同时的电泳分布来获得唾液淀粉酶最适pH 值，从而根据不同参数设置最适的电泳和pH值，以实现分析要求。

此外，根据实验数据可知，pH和激素的活化有明显的正相关关系，当pH值与设定最
佳pH值变化明显时，该激素的活性和时间也会发生明显的变化，比较两者的变化趋势，
可以获得比较的结果，以此来比较其对唾液淀粉酶最适pH值的影响。

总之，测定唾液淀粉酶最适pH值有助于优化唾液淀粉酶的活性，获得更准确、可靠
的检测结果，为临床医疗分析提供准确的参考依据。

确定唾液淀粉酶最适pH值，可以采
用唾液pH试纸测量，以及聚合物质体电泳，根据实验数据比较激素活性和激素活性随pH
值变化的趋势，最终形成数据统计，以此来判断唾液淀粉酶最适pH值。

唾液淀粉酶最适pH值测定广西医科大学2012级8班3组崖晓怡(201250424)路海燕(201250426)实验原理：淀粉经唾液中淀粉酶的水解，生成糊精和麦芽糖。

在底物过量的条件下，反应后加入碘液与未被水解的淀粉结合成蓝色复合物唾液淀粉酶最适pH为6.8，但在磷酸缓冲溶液中，其最适pH为6.4—6.6，而在乙酸缓冲溶液中则为5.6。

在底物过量的条件下，相同时间内，在温度、酶浓度相同的条件下，接近最适pH 的反应体系中消耗淀粉的量最大，剩余淀粉与过量碘液生成的颜色越浅，吸光度越小，利用分光光度计测出各管的吸光度后，取处于升高与降低趋势之间的较小吸光度范围对应的pH 值即为唾液淀粉酶的最适pH。

一、材料与方法仪器：吸量管（5mL，1mL），试管，试管架，小烧杯，722 型分光光度计，恒温箱，吸耳球试剂：0.01mol/L 碘液，0.2mol/L 磷酸氢二钠，0.2mol/L 磷酸二氢钠，淀粉溶液，唾液，蒸馏水二、方法：相同时间内，在温度、酶浓度相同、pH 不同的条件下，酶的活度不同，水解的淀粉量不同，剩余的淀粉与过量碘液生成的颜色不同，通过在660nm测量吸光度，得出酶的最适pH 范围。

操作步骤：1、唾液的获取：蒸馏水漱口后在口中含蒸馏水，适宜时间后将蒸馏水连同唾液一同放置于事先准备好的容器中即可，在实验过程中应注意酶的失活，为了防止此现象发生应将此液体置于冰水中冷却。

2、不同pH 缓冲液配制：根据下表配置各个pH 值的缓冲溶液各10ml 单位：ml3、淀粉用量的确定：单位:ml1 2 3 4 PH7.0缓冲液0.90.90.90.92.5g/L 淀粉 0.1 0.2 0.3 -释10倍酶液0.10.1 0.1 0.137℃水浴7.5min试管 1 2 3 4 5 6PH6.26.4 6.6 6.87.0 7.20.2mol/L42HPO Na0.925 1.325 1.875 2.450 3.050 3.6000.2mol/L42PO NaH4.075 3.675 3.125 2.550 1.950 1.400碘液2滴为了更好观察颜色变化，可以加入适量蒸馏水使总体积相同。

怎么测定唾液淀粉酶的最适ph唾液淀粉酶(pancreaticamylase)是由唾液腺分泌的一种水解酶，而淀粉经唾液中淀粉酶的水解，生成糊精和麦芽糖。

而知道唾液淀粉酶的最适ph对于自身有好处，那么唾液淀粉酶的最适ph是多少呢，又应该怎么测定唾液淀粉酶的最适ph？在底物过量的条件下，相同时间内，在温度、酶浓度相同的条件下，接近最适pH 的反应体系中消耗淀粉的量最大，剩余淀粉与过量碘液生成的颜色越浅，吸光度越小，利用分光光度计测出各管的吸光度后，取处于升高与降低趋势之间的较小吸光度范围对应的pH 值即为唾液淀粉酶的最适 pH。

一、材料与方法仪器：吸量管(5mL，1mL) ，试管，试管架，小烧杯， 722 型分光光度计，恒温箱，吸耳球试剂：0.01mol/L 碘液，0.2mol/L 磷酸氢二钠，0.2mol/L 磷酸二氢钠，淀粉溶液，唾液，蒸馏水二、方法：相同时间内，在温度、酶浓度相同、pH 不同的条件下，酶的活度不同，水解的淀粉量不同，剩余的淀粉与过量碘液生成的颜色不同，通过在660nm测量吸光度，得出酶的最适 pH 范围。

操作步骤：1、唾液的获取：蒸馏水漱口后在口中含蒸馏水，适宜时间后将蒸馏水连同唾液一同放置于事先准备好的容器中即可，在实验过程中应注意酶的失活，为了防止此现象发生应将此液体置于冰水中冷却。

2、不同pH缓冲液配制：根据下表配置各个pH值的缓冲溶液各10ml3、淀粉用量的确定(为了更好观察颜色变化，可以加入适量蒸馏水使总体积相同。

混匀，观察现象，并选择颜色变化适中一支，记录其用量。

)4、酶液稀释倍数确定(为了更好观察颜色变化，可以加入适量蒸馏水使总体积相同，混匀，观察现象，并选择适中一支，记录其稀释倍数。

)5、最适pH确定(蒸馏水调零，测定660nm处吸光度A，最后以A为纵坐标，pH为横坐标作图，取曲线最低点对应的pH值，即为唾液淀粉酶的最适pH值。

)从上述的实验中或许可以得出6.8为曲线最低点对应的pH值，即为唾液淀粉酶的最适pH值。

唾液淀粉酶最适pH值的测定实验实验目的1．掌握设计性实验的基本思路，并完成设计报告。

2．掌握唾液淀粉酶最适PH的测定原理和方法。

3．熟悉影响酶促反应速度的因素。

实验原理1．酶促反应速度受到许多因素的影响，如温度、PH、激动剂和抑制剂等。

上述诸因素对唾液淀粉酶催化淀粉水解反应速度的影响，可用定性或定量的反应来观察。

利用碘与淀粉机器不同程度纾解产物反应的颜色，来衡量酶促反应的速度的快慢。

蓝色—紫红色—黄色，颜色由蓝变黄，表示酶促反应速度由慢到快。

此为定性观察。

2.进一步利用郎伯—比尔定律来判定溶液的吸光度与溶液的浓度符合一定的比例关系。

由于在被水解的程度也不一样。

当唾液淀粉酶不能将完全水解时，淀粉遇碘呈蓝色，吸收波长位于660nm处。

不同PH环境中唾液淀粉酶与淀粉的反应程度不同，吸光度值也不同。

因此，通过测量660nm处的吸光度值，可以了解PH对酶促反应的影响，吸光度最小的溶液其PH即为唾液淀粉酶的最适PH。

实验器材仪器材料：方盘，试管架，中试管，毛刷，吸耳球，玻璃铅笔，小烧杯，白瓷板，坐标纸，漱口杯。

0.1ml、0.5ml、1.0ml、2.0ml、5.0ml、10.0ml刻度吸管，胶头滴管，37 C恒温水浴箱，分光光度计，电磁炉。

试剂药品：0.02％淀粉溶液. 0.2mol/L磷酸二氢钠溶液、0.2mol/L磷酸氢二钠溶液碘液；称取碘1g,碘酸钾2g，溶于300ml蒸馏水中。

实验步骤：1、缓冲液的配置pH 0.2mol/L0.2mol/LNaH2PO4(ml) Na2HPO4(ml)5.7 93.56.55.8 92.0 8.05.9 90.0 10.06.0 87.7 12.36.1 85.0 15.06.2 81.5 18.56.3 77.5 22.56.4 73.5 26.56.5 68.5 31.56.6 62.5 37.56.7 56.5 43.56.8 51.0 49.06.9 45.0 55.07.0 39.0 61.07.1 33.0 67.07.2 28.0 72.07.3 23.0 67.07.4 19.0 81.07.5 16.0 84.07.6 13.0 87.07.7 10.5 89.57.8 8.5 91.57.9 7.0 93.08.0 5.3 94.72、唾液的取法：（1）先给备取者一杯纯净水让其漱口，将漱口液吐掉，再将一块消毒脱脂棉球用镊子放在备取者的舌下，过大约半分钟至一分钟，备取者感觉棉球湿透，用镊子将棉球取出，置于烧杯中，倒入蒸馏水，用玻璃棒充分搅拌，将棉球取出，即制成唾液实验备用液。