基因治疗(genePPT课件

连锁分析是基于遗传标记与Gene连锁，子 代是否获得遗传标记间接地判断做出诊断。
这些遗传标记是基因组中的DAN 多态，如：
RFLP，VNTR 等。
2020-11-9
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1、Gene异常不明确的遗传病的诊断
例：成年型多囊肾病——APKD，AD ，临床表 现为腰痛，蛋白尿，血尿，高血压，肾盂性 肾炎，肾结石。最终导致肾功能衰竭和尿毒 症。
14kb 10kb
正常 缺1
缺2
2020-11-9
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缺3 缺4
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2）DMD/BMD的缺失诊断（进行性肌营养 不良或假肥大型）
DMD是一种严重致死性疾病（XR），临床症 状表现肌肉进行性萎缩和乏力。BMD临床症 状与DMD相似，但症状较轻。
Gene 定位Xp21 ， Gene 2300kb,79 个 Exon ，cDNA全长13974bp 编码3685 Aa， 分子量427kD。
例 如： 镰形细胞贫血的Gene诊断 已知突变基因编码β珠蛋白链的
第6位密码子 GAG——GTG 谷Aa——缬Aa
2020-11-9
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1）RFLP诊断
已知限制酶MstII
识别序列
MstII 1.15kb
CCTG AGG
1.35kb x
probe
CCTGTGG 突变后不能识别， 酶切位点消失，限制酶切片段长度发生变化。
2020-11-9
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一、直接诊断
直接检测致病基因本身的异常。通 常使用基因本身或邻近的DNA序列作为 探针，或通过PCR 扩增产物，以检测基 因点突变、缺失、插入等异常及性质。 它主要适用于已知基因异常疾病
的诊断。

(AAV), Herpes Simplex Virus (HSV-1), et al.
Non-virus method: Cyclodextrin Polymers, Lipids, Peptide, Antibodies, Aptamers,
and small molecules
■ Background
■ Background
Hybrid virus vector
HSV/AAV Ad/EBV HSV/EBV Ad/AAV Ad/retrovirus
Virus based transduction
■ Background
siRNA-based gene therapy
■ Background
Chemical modification
……
■ Background
Gene therapy Definition: Gene therapy is the use of DNA as a drug to treat
disease by delivering therapeutic DNA into a patient's cells.
Non-virus method
Can deliver both siRNA and plasmid DNA
■ Background
Conjugate delivery
Non-virus method
Dynamic PolyConjugates (DPC)
First reported in 2007 PEG: shielding effect GalNAc ligand was essential for both uptake by hepatocytes and in vivo silencing activity. Other targeting ligands has been explored, including peptides, antibodies, small molecules, glycans, lectins and nucleic acids.

（一）体细胞的基因治疗方法
1、治疗基因的制备 2、受体细胞的选择 3 、将治疗转移到受体细胞内 4、将带有目的基因的细胞重新输回体内
体外基因治疗时
（二）反义技术（antisense technology)
（三）RNA干扰（short interference RNA)
第五页，编辑于星期四：二十三点 五十一分。
的功能。
第十五页，编辑于星期四：二十三点 五十一分。
目的基因的制备方法
1、从基因组中分离 2、化学合成 3、用mR编辑于星期四：二十三点 五十一分。
受体细胞的选择
选择受体细胞的原则：
1、易于从人体分离又便于输回体内
2、易于接受外源的遗传物质 3、能够分裂，生命周期长
逆转录病毒感染细胞过程
第二十二页，编辑于星期四：二十三点 五十一 分。
逆转录介导基因转移的优缺点
优点：
1、能高效率的感染宿主细胞（100%） 2、其宿主范围广泛，包括来自不同种的生物和细胞类
型 3、被整合的基因在宿主基因组中稳定表达
4、用复制缺陷的重组逆转录病毒感染，毒性小
缺点：
1、只能感染分裂细胞
人类疾病治疗的重大突破!
与传统的方法相比较，从根 本上消除遗传病因。
第二页，编辑于星期四：二十三点 五十一分。
二、基因治疗类型和途径
1、类型 ➢生殖细胞基因治疗(germinal gene thrapy) ➢ 体细胞基因治疗 ( somatic gene thrapy)
➢ 体内（in vivo） 直接基因治疗 ➢体外（ex vivo） 间接基因治疗
问题： 1、 稳定性 2、安全性 3、导入基因的高效表达 4、免疫性
5、伦理问题
前景：十分有潜力的技术，有深远的意义 “基因治疗作为一项新的治疗技术，将不只限于遗传病和

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（三）靶细胞的选择
---- 分为生殖细胞和体细胞两大类,现阶段只限于应 用体细胞
靶细胞选择的原则: • 1.易操作; • 2.易培养; • 3.易接受外源基因; • 4.在体内能持久高效表达
目前常用的靶细胞包括：成纤维细胞、淋巴细胞、上皮细胞、造血 细胞、肝细胞、肌细胞等
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（四）基因转移方法
• 耐药基因治疗：在肿瘤治疗中，为提高机体耐受 肿瘤化疗药物的能力，把产生抗药物毒性的基因 导入人体细胞。如将多药耐药基因MDR-1导入骨 髓造血干细胞，减少骨髓受抑制的程度，以加大 化疗剂量，提高化疗效果。
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三 基因治疗的基本步骤
治疗性基因的获得
基因载体的选择 靶细胞的选择
病毒载体 非病毒载体
体细胞 生殖细胞
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2019/9/4
基因治疗简介
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一 基因治疗的概念
经典概念(狭义概念)：将具有正常功能的基因 置换或增补患者体内缺陷的基因，从而达到治 疗疾病的目的。 广义概念：将某些遗传物质转移至患者体内， 使其在体内表达，最终达到治疗某种疾病的方 法，均称之为基因治疗。
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基因治疗的类型
• Types of gene therapy
• Gene therapy may be classified into the two following types: • Germ line gene therapy（生殖细胞基因治疗） • In the case of germ line gene therapy, germ cells, i.e., sperm or eggs, are modified by
the introduction of functional genes, which are integrated into their genomes. Therefore, the change due to therapy would be heritable and would be passed on to later generations. This new approach, theoretically, should be highly effective in counteracting genetic disorders and hereditary diseases. However, many jurisdictions(司法部门) prohibit this for application in human beings, at least for the present, for a variety of technical and ethical reasons.[citation needed] • Somatic gene therapy（体细胞基因治疗） • In the case of somatic gene therapy, the therapeutic（治疗的） genes are transferred into the somatic cells of a patient. Any modifications and effects will be restricted to the individual patient only, and will not be inherited by the patient's offspring or later generations.