DOI :10.11895/j.issn.0253-3820.140200温控离子液体分散液液微萃取结合高效液相色谱法检测脐橙中染色剂残留张耀海1,3 张雪莲2 赵其阳1,3 陈卫军1,3 王成秋1,3陈爱华1,3 焦必宁*1,31(农业部柑桔产品质量安全风险评估实验室(重庆),西南大学柑桔研究所,重庆400712)2(襄阳市林业科学技术推广站,襄阳441021)3(农业部柑桔及苗木质量监督检验测试中心,重庆400712)摘 要 建立了QuEChERS-温控离子液体分散液液微萃取结合高效液相色谱法快速检测脐橙中5种染色剂残留的分析方法㊂QuEChERS 前处理步骤:样品用乙腈快速提取,NaCl 和无水MgSO 4除水后,经N -丙基乙二胺净化㊂温控离子液体分散液液微萃取步骤:QuEChERS 前处理的净化液(1mL)为分散剂,1-辛基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐离子液体(60μL)为萃取剂,55℃水浴12min,将目标物富集㊂用高效液相色谱-紫外检测器分析,检出样品用超高效液相色谱-串联质谱确证㊂在0.01和0.05mg /kg 的添加水平下,5种染色剂的平均回收率为70.3%~93.6%,相对标准偏差为3.5%~9.2%,定量限为1.1~2.8μg /kg㊂关键词 QuEChERS;分散液液微萃取;离子液体;高效液相色谱;染色剂2014-05-18收稿;2014-06-19接受本文系农业部现代农业(柑桔)产业技术体系建设专项(No.CARS-27)㊁重庆市自然科学基金(Nos.cstc2013jjB80009,cstc2013jcyjA0435)和中央高校基本科研业务费(No.XDJK2012C059)资助项目*E-mail:jiaobining@1 引 言柑橘红2号和苏丹红(分为1㊁2㊁3㊁4号)均属于常见的人工合成色素(分子结构见图1)㊂毒理学研究表明,柑橘红2号有潜在的致癌危险[1],而苏丹红1㊁2㊁3㊁4号均具有致突变性和致癌性,苏丹红1号还可能造成肝脏细胞的DNA 突变㊂各国对人工合成色素在食品中允许使用的品种㊁范围和添加量做了严格的规定㊂多数国家禁止将苏丹红用于食品生产;美国食品药品管理局(FDA)明确规定,柑橘红2号仅限用于鲜食早熟甜橙的果皮增色,全果中最大残留量不得超过2mg /kg;我国GB 2760-2011‘食品添加剂使用标准“明确规定,柑橘红2号和苏丹红在食品中不允许使用㊂图1 5种染色剂的分子结构式Fig.1 Structure of 5dyes2004年广东和香港等地水果市场相继发现 染色橙 ,含有柑橘红2号㊂2013年部分市场出现 染色脐橙 ,检测出苏丹红2号㊂近年,政府相关部门加大了食品中柑橘红2号和苏丹红等染色剂的监测第42卷2014年10月分析化学(FENXI HUAXUE) 研究报告Chinese Journal of Analytical Chemistry第10期1434~1440力度㊂目前,果蔬(以橙㊁辣椒和番茄为主)中柑橘红2号和苏丹红等染色剂,其检测方法主要包括高效液相色谱法(二极管阵列检测器(HPLC-DAD)[2~6]和紫外检测器(HPLC-UV)[7])和液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS /MS[8~10])等,但柑橘红2号和苏丹红同时测定的报道较少㊂而样品前处理方法多为繁琐㊁耗时㊁成本较高的液液萃取(LLE)[3,6,7]和固相萃取(SPE)技术[2,4,8~10]㊂近年来,样品前处理方法正朝着简单化㊁节约化和微型化发展㊂2003年,Anastassiades 等首次提出QuEChERS 前处理方法,与传统的SPE 相比,该方法快速㊁简单㊁廉价㊁可靠,已经广泛应用于果蔬中的农药残留分析[11~13]㊂但QuEChERS 方法存在富集效率低等缺陷㊂2006年,Rezaee 等首次提出分散液液微萃取(CDLLME)技术,该技术操作简单㊁快速㊁成本低㊁富集效率高㊁有机溶剂用量少[14]㊂传统的DLLME 使用高毒性的卤代烃作为萃取剂,存在一定的环境污染㊂同卤代烃相比,离子液体具有低蒸气压㊁良好的热稳定性㊁可调的理化性质等优点,因此基于离子液体的DLLME 技术已经被逐渐应用于污染物的分析检测[15,16]㊂但该方法仍存在净化能力差等缺陷,主要用于简单基质(以水体为主),在果蔬上的应用相对较少㊂2009年,研究者将两种前处理方法结合起来,形成了QuEChERS-DLLME 联用技术,既具有QuEChERS 的快速提取㊁净化等优点,也发挥了DLLME 的高效富集能力,并逐渐应用到果蔬中污染物的分析检测[17,18],但目前没有染色剂的研究报道㊂本研究采用QuEChERS-温控离子液体DLLME 法提取和净化样品,对离子液体的类型和用量㊁水浴时间和温度等条件进行了优化,结合HPLC-UV 技术检测脐橙中多种染色剂残留㊂本方法简便㊁快速㊁安全㊁价格低廉,重现性良好,能够满足脐橙中5种染色剂残留同时快速检测和确证的要求,并为制定染色剂在柑桔中的最大残留限量提供参考和依据㊂2 实验部分2.1 仪器、试剂与样品Agilent 1200液相色谱仪(美国Agilent 公司),配有紫外检测器;Quatrro-Premier XE 超高效液相色谱-串联质谱(美国Waters 公司),配有Acquity UPLC BEH C 18柱;Milli-Q A10超纯水器(美国Millipore 公司);CL31R 离心机(美国ThermoFisher 公司);GENIUS 3涡旋搅拌器(德国IKA 公司)㊂苏丹红1号(纯度>90.5%)㊁苏丹红2号(纯度>87%)㊁苏丹红3号(纯度>96%)和苏丹红4号(纯度>94%),均购于德国Dr.Ehrenstorfer 公司;柑橘红2号(纯度>90%)㊁1-辛基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐([C 8MIM][PF 6],纯度>98%)㊁1-丁基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐([C 4MIM][PF 6],纯度>98%)和1-己基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐([C 6MIM][PF 6],纯度>98%),均购于上海安谱科学仪器有限公司;丙酮(色谱纯,成都市科龙化工试剂厂);乙腈(色谱纯)㊁甲醇(色谱纯)和N -丙基乙二胺(PSA,40~63μm,6nm),购于德国CNW Technologies GmbH 公司;NaCl 和无水MgSO 4(分析纯,国药集团化学试剂有限公司,140℃烘烤4h)㊂脐橙样品购于当地超市㊂2.2 实验方法2.2.1 液相色谱条件 Agilent C 18液相色谱柱(150mmˑ4.6mm,5μm);流动相A 为水,B 为乙腈;梯度洗脱程序:0~6min,60%~98%B;6~15min,98%B;15~20min,98%~60%B;20~25min,60%B㊂流速为1.0mL /min;进样量为10μL;柱温为35℃㊂2.2.2 超高效液相色谱-串联质谱条件 条件参考文献[9]㊂采用电喷雾离子源,正离子(ESI+)采集模式,多反应监测模式下检测㊂毛细管电压3.0kV,离子源温度120℃,脱溶剂气温度为350℃,雾化气流速700/h,锥孔气流速50L /h㊂2.2.3 标准溶液的配制 (1)标准工作液 准确称取10.00mg(精确至0.01mg)5种染色剂标准品,分别用甲醇溶解并定容至100.00mL,配成100mg /L 标准溶液,于-50℃避光保存㊂使用时用甲醇逐级稀释至所需浓度㊂(2)基质空白标准溶液 分别准确吸取100μL 10mg /L 标准工作液,用样品空白提取液稀释,配成100μg /L 基质空白标准溶液㊂此溶液应现用现配㊂本实验采用单点定量法测定㊂2.2.4 样品前处理方法 样品的取样参考相关标准[19]㊂用干净纱布轻轻擦去柑桔样品表面附着物,5341第10期张耀海等:QuEChERS-温控离子液体分散液液微萃取结合高效液相色谱法检测脐橙中染色剂残留采用对角线分割法,取对角部分,将其切碎㊁混匀,放入食品加工器中彻底粉碎,制成待测样,放入分装容器中备用㊂QuEChERS前处理步骤:准确称取样品10.0g,置于50mL离心管中,向其加入10.00mL乙腈,振荡30min;加入4.0g无水MgSO4和1.0g NaCl,振荡1min,离心5min(4000r/min);取2.00mL,转入已加有50mg PSA和150mg无水MgSO4的4mL离心管中,振荡1min,离心5min(4000r/min);取1.00mL上清液作为DLLME步骤的分散剂㊂温控离子液体DLLME步骤:将60μL1-辛基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐和上述1.00mL分散剂混合液涡旋1min,快速注入5.00mL去离子水,于55℃水浴12min,冰水浴10min,形成乳浊液,离心5min (4000r/min),取30μL离心管底部的萃取剂于进样瓶的内插管中,用30μL甲醇稀释,待测㊂加标实验:加标水平为0.01和0.05mg/kg两个水平,分别向10.0g空白样品中加入100μL的1和5mg/L标准溶液,混匀备用㊂前处理如上㊂脐橙染色实验:常温下,空白脐橙样品分别在不同浓度染色剂(250和500mg/kg)中浸泡,每次浸果时间为1min,浸果1次,捞起自然晾干药液,置于室内常温7天,每一处理重复3次,前处理如上㊂3 结果与分析3.1 仪器条件的优化柑橘红2号和苏丹红均为中等极性化合物,在C18色谱柱有较好的保留,因此本实验选常用的C18液相色谱柱㊂由于乙腈的粘度小于甲醇,因此流动相采用乙腈-水体系,并梯度淋洗,优化后的标准色谱图见图2㊂5种物质在14min内达到基线分离㊂3.2 样品前处理的条件优化3.2.1 离子液体的类型和用量在分散液液微萃取中,萃取剂和分散剂的类型和用量是影响萃取效率的重要因素㊂而QuEChERS-DLLME联用技术中,通常采用乙腈提取液作为分散剂,因此只需考虑萃取剂的类型和用量㊂本研究选择3种离子液体:[C8MIM][PF6]㊁[C4MIM][PF6]和[C6MIM][PF6],考察它们对染色剂的萃取效果㊂结果表明,[C8MIM][PF6]的萃取效果最好,故选其为萃取剂㊂分别选取40㊁50㊁60㊁70和80μL的[C8MIM][PF6],考察其用量对染色剂回收率的影响(图3)㊂结果显示:随着萃取剂用量的增大,5种染色剂的回收率均增大,但富集倍数也随之降低;当用量为60μL时,回收率最佳;用量高于60μL时,回收率有下降的趋势㊂因此选用60μL萃取剂㊂图2 5种染色剂标准溶液的色谱图(浓度为0.5mg/L) Fig.2 HPLC of5dyes standards at0.5mg/L1.Citrus red2;2.Sudan1;3.Sudan2;4.Sudan3;5.Sudan4.图3 萃取剂用量对染色剂回收率的影响Fig.3 Effect of extraction dosage on recoveries脐橙空白添加0.05mg/kg,水浴温度为60℃,水浴时间为12min㊂Spiked navel orange at0.05mg/kg,60℃water-bath for12min.3.2.2 水浴温度温控离子液体-分散液液微萃取技术是在一定温度下将离子液体融入水体中,然后在低温条件下将离子液体冷凝析出,达到富集目标化合物的目的[15]㊂当温度较低时,离子液体不能很好地分散在水相中;当温度过高时,分析物可能部分挥发,导致萃取效率降低㊂分别选取40,45,50,55 6341分析化学第42卷和60℃的水浴温度,考察其对染色剂回收率的影响(图4)㊂结果表明,随着温度升高,5种染色剂的回收率均有提高,当温度为55℃时,回收率最佳;温度高于55℃时,回收率开始降低㊂因此水浴温度选用55℃㊂3.2.3 水浴时间 固定水浴温度为55℃,选取4,8,12,16和20min 的水浴时间,考察其对染色剂回收率的影响(图5)㊂结果表明,随着水浴时间延长,5种染色剂的回收率均有提高,当时间为12min 时,回收率最佳;时间超过12min 时,回收率明显降低㊂因此水浴时间选用12min㊂图4 水浴温度对染色剂回收率的影响Fig.4 Effect of water-bath temperature on the recoveries脐橙空白添加0.05mg /kg,萃取剂用量为60μL㊂Spiked navel orange at 0.05mg /kg,60μL of extractionsolvent.图5 水浴时间对染色剂回收率的影响Fig.5 Effect of water-bath time on the recoveries脐橙空白添加0.05mg /kg,萃取剂用量为60μL,水浴温度为55℃㊂Spiked navel orange at 0.05mg /kg,60μL of extraction solvent and 55℃of water-bath temperature.3.3 其它条件进一步考察了超声辅助㊁盐效应㊁冰浴时间和离心时间对萃取效率的影响㊂超声辅助的引入,会带来更多的基质干扰,本实验不采用超声;加入盐后会导致回收率明显降低,本实验不加入盐;冰浴时间和离心时间能影响沉淀相的体积,过短或过长的冰浴时间及离心时间都会影响萃取效率㊂本研究采用文献中较常用时间:冰浴10min,4000r /min 离心5min㊂3.3 方法评价在优化的实验条件下,对系列浓度标准溶液进行检测,结果见表1㊂柑橘红2号和苏丹红4号在图6 经QuEChERS-DLLME 方法处理后,脐橙样品的色谱图(a)0.05mg /kg 水平加标;(b)0.05mg /L 标准溶液;(c)空白基质Fig.6 Chromatograms of (a)a spiked navel orange at 0.05mg /kgafterQuEChERS-dispersiveliquid-liquidmicroextraction (DLLME ),(b )a standard mixture at0.05mg /Land (c)a blank navel orange1.Citrus red 2;2.Sudan 1;3.Sudan 2;4.Sudan 3;5.Sudan 4.10~5000μg /L 范围内呈现较好的线性关系,苏丹红1㊁2和3号在5~5000μg /L 范围内呈现较好的线性关系,相关系数均达到0.999以上㊂仪器的检出限(S /N =3)在5~10μg /L 之间,定量限(S /N =10)在10~20μg /L 之间㊂保留时间和峰面积的日内偏差分别为0.8%~1.6%和1.2%~3.2%;日间偏差分别为1.6%~2.7%和3.8%~6.6%㊂采用QuEChERS-DLLME 联用技术处理样品,富集倍数达7.1~9.4,净化效果良好,对目标物质无干扰(脐橙空白基质和0.05mg /kg 水平加标的图谱见图6)㊂用空白基质加标方法进行回收率和精密度实验㊂分别进行0.01和0.05mg /kg 水平的加标回收实验,以2.2.4节的方法对样品进行前处理,平行测定6次,计算回收率和相对标准偏差(表2)㊂结果表明:2种添加水平的回收率在70.3%~93.6%之间,相对标准偏差在3.5%~9.2%之间,本方法有较好的准确度和精密度,满足染色剂残留定量分析的要求㊂方法的检出限0.5~1.2μg /kg 之间,定量限在1.1~2.8μg /kg 之间㊂7341第10期张耀海等:QuEChERS-温控离子液体分散液液微萃取结合高效液相色谱法检测脐橙中染色剂残留表1 5种染色剂的线性范围㊁线性方程㊁检出限㊁定量限和富集倍数Table 1 Linearity range,linear equation,limit of detcetion (LOD),limit of quantification (LOQ)and enrichment factor of 5dyes染色剂Dyes 线性范围Linearity range (μg /L)线性方程Linear equation 相关系数Correlation coefficient (r 2)检出限LOD (μg /L)定量限LOQ (μg /L)富集倍数Enrichment factor 精密度Precision (%)日内偏差Intra-day(n =3)保留时间Retention time 峰面积Peak area 日间偏差Inter-day(n =3)保留时间Retention time 峰面积Peak area 柑橘红2号Citrus red 210~5000y =24.269x +0.15890.999910209.4 1.6 1.7 1.8 4.3苏丹红1号Sudan 15~5000y =31.117x +0.22740.99985108.9 1.8 1.2 2.1 5.9苏丹红2号Sudan 25~5000y =32.177x +0.06990.99995108.60.8 2.8 2.7 3.8苏丹红3号Sudan 35~5000y =50.397x +0.14410.99985107.90.9 2.1 1.6 6.6苏丹红4号Sudan 410~5000y =53.782x +0.25340.999810207.10.93.22.34.4表2 5种染色剂的平均回收率㊁相对标准偏差㊁检出限和定量限Table 2 Mean recovery,relative standard deviation (RSD),limit of detection (LOD)and limit of quantification (LOQ)of 5dyes染色剂Dyes添加水平Added (mg /kg)平均回收率Mean recovery (%)相对标准偏差RSD (%,n =6)检出限LOD (μg /kg)定量限LOQ (μg /kg)柑橘红2号Citrus red 2苏丹红1号Sudan 1苏丹红2号Sudan 2苏丹红3号Sudan 3苏丹红4号Sudan 40.0189.27.50.0593.6 4.30.0187.59.20.0589.27.00.0181.3 6.20.0585.5 3.90.0176.4 4.60.0579.1 3.50.0170.3 6.30.0571.04.71.02.10.5 1.10.6 1.20.6 1.31.22.83.4 实际样品测定市场抽取脐橙样品各20份,采用上述方法,检出1例疑似样品,并用UPLC-MS /MS 进行确证㊂图7为 图7 实际样品的色谱图Fig.7 Chromatogram of real sample检出柑橘红2号的脐橙样品色谱图(含量为0.14mg /kg),图8为该样品多反应监测模式下的色谱图㊂空白脐橙分别用250和500mg /kg 的染色剂药液浸泡后,室温下放置7天,最终残留测定结果见表3㊂在250mg /kg 下,果皮中染色剂含量范围为421.2~867.4μg /kg,果肉中为2.0~22.1μg /kg,全果中为101.6~198.8μg /kg;在500mg /kg 下,果皮中染色剂含量范围为604.4~1384μg /kg,果肉中为5.2~24.4μg /kg,全果中为156.4~370.7μg /kg㊂结果表明,浸泡后,染色剂可以通过果皮缓慢进入果肉内部,但含量较低;苏丹红3号和4号的渗透能力较强,超过10μg /kg;柑橘红2号㊁苏丹红1号和2号的渗透能力较低,低于10μg /kg;全果中柑橘红2号的最大含量低于FDA 规定的最大限量㊂8341 分析化学第42卷图8 多反应监测模式下实际样品的色谱图Fig.8 UPLC-MS /MS chromatogram of real sample using MRM modea.m /z 309.3>278.3;b.m /z 309.3>153.3.表3 脐橙染色后果皮㊁果肉和全果中染色剂残留的含量Table 3 Contents of dyes in peel,pulp and whole fruit of navel orange after dyeing treatment染色剂Dyes含量Contents (μg /kg)浸泡浓度Soaking concentration (250mg /kg)果皮Peel 果肉Pulp 全果Whole fruit浸泡浓度Soaking concentration (500mg /kg)果皮Peel 果肉Pulp 全果Whole fruit柑橘红2号Citrus red 2867.4 2.1198.81272 5.4347.7苏丹红1号Sudan 1818.0 2.2186.11384 5.2361.3苏丹红2号Sudan 2870.3 2.0195.81381 6.0370.7苏丹红3号Sudan 3421.214.0101.660417.1156.4苏丹红4号Sudan 4544.822.1134.171124.4194.6未检出(Not detected)㊂4 结 论运用改进的QuEChERS 和TA-IL-DLLME 联用前处理技术,结合高效液相色谱法,建立了脐橙中多种染色剂残留的检测方法㊂该方法操作简单㊁快速准确㊁灵敏度高㊁重现性良好,检测成本低廉;避免了有机溶剂的大量使用,减少对环境的污染,可作为一般实验室多种染色剂残留的常规检测方法㊂References1 FAO Nutrition Meetings Report Series No.46A WHO /FOODADD /70.36/World Health Organization and International Programme on Chemical Safety.[2012-03-01]. /documents /jecfa /jecmono /v46aje10.htm2 Hope C,Connors R.J.AOAC International ,1989,72(5):705-7073 CHEN Yu-Fang,LIN Hai-Dan,LI Wei-Peng,XIE Yu-Shan,ZOU Zhi-Fei.PTCA Part B :Chem.Anal.,2011,47(5):536-538陈毓芳,林海丹,李为鹏,谢玉珊,邹志飞.理化检测:化学分册,2011,47(5):536-5384 HU Li,ZHONG Ling-Li,GUO Ling-An,YANG Xiao-Feng,MAO Jian-Fei,LI Xi,FU Cheng-Ping,ZHAO Hong-Yang.J.Food Safety and Quality ,2013,4(5):1473-1477胡莉,仲伶俐,郭灵安,杨晓凤,毛建霏,李曦,付成平,赵泓洋.食品安全质量检测学报,2013,4(5):1473-14775 Sun S,Wang Y,Yu W Z,Zhao T Q,Gao S Q,Kang M Q,Zhang Y P,Zhang H Q,Yu Y.J.Sep.Sci.,2011,34(14):1730-17376 Daood H G,Biacs M A.J.Chromatogr.Sci.,2005,43(9):461-4657 Ertas E,Oezer H,Alasalvar C.Food Chem.,2007,105(2):756-7608 ZHANG Yun,LI Jin-Zhong,ZHENG Jing-Feng,LI Yao-Ping,LÜYuan-Yuan,ZHANG Xin-Ren,LI Xiao-Jie.Chinese J.b.,2012,31(12):78-81张云,李今中,郑敬峰,李耀平,吕园园,张信仁,李晓捷.分析试验室,2012,31(12):78-819341第10期张耀海等:QuEChERS-温控离子液体分散液液微萃取结合高效液相色谱法检测脐橙中染色剂残留0441分析化学第42卷9 HU Li,LEI Shao-Rong,GUO Ling-An.Chinese Journal of Chromatography,2012,30(8):832-835胡莉,雷绍荣,郭灵安.色谱,2012,30(8):832-83510 Han C,Liu B,Zhu Z O,Huang F Z,Chen X Z,Shen Yan.J.Food Sci.,2012,77(12):C1269-C127211 Anastassiades M,Lehotay S J,Stajnbaher D,Schenck F J.J.AOAC International,2003,86(2):412-43112 GUO Meng-Meng,WU Hai-Yan,LI Zhao-Xin,TAN Zhi-Jun,ZHAI Yu-Xiu.Chinese J.Anal.Chem.,2013,41(9): 1322-1327郭萌萌,吴海燕,李兆新,谭志军,翟毓秀.分析化学,2013,41(9):1322-132713 Lehotay S J,Kok A D,Hiemstra M,Bodegraven P V.J.AOAC International,2005,88(2):595-61414 Rezaee M,Assadi Y,Hosseini M R M,Aghaee E,Ahmadi F,Berijani S.J.Chromatogr.A,2006,1116(1-2):1-915 Zhou Q,Bai H,Xie G,Xiao J.J.Chromatogr.A,2008,1188(2):148-15316 Baghdadi M,Shemirani F.Anal.Chim.Acta,2008,613(1):56-6317 Zhao E,Zhao W,Han L,Jiang S,Zhou Z.J.Chromatogr.A,2007,1175(1):137-14018 Cunha S C,Fernandes J O.J.Chromatogr.A,2011,1218(43):7748-775719 GB/T8855-2008,Fresh Fruits and Vegetables-Sampling.National Standards of the People′s Republic of China新鲜水果和蔬菜-取样方法.中华人民共和国国家标准.GB/T8855-2008Analysis of5Dyes Residues in Navel Orange with Temperature-assisted Ionic Liquid Dispersive Liquid-liquid Microextractionand High Performance Liquid Chromatography DetectionZHANG Yao-Hai1,3,ZHANG Xue-Lian2,ZHAO Qi-Yang1,3,CHEN Wei-Jun1,3,WANG Cheng-Qiu1,3,CHEN Ai-Hua1,3,JIAO Bi-Ning*1,31(Citrus Research Institute,Southwest University/Laboratory of Citrus Quality and Safety Risk Assessment,Ministry of Agriculture,Chongqing400712,China)2(Extending Stations of Forestry Science and Technology,Xiangyang441021,China)3(Quality Supervision and Testing Centre for Citrus and Seedling,Ministry of Agriculture,Chongqing4007123,China) Abstract A fast method composed of the quick,easy,cheap,effective,rugged and safe(QuEChERS)and temperature-assisted ionic liquid dispersive liquid-liquid microextraction(TA-IL-DLLME)sample preparation coupled with high performance liquid chromatography(HPLC)for the analysis of5dyes residues in navel orange was developed.The QuEChERS sample preparation involved the quick extraction with acetonitrile in the presence of anhydrous MgSO4and NaCl and the purification with primary secondary amine(PSA) sorbent.The TA-IL-DLLME sample preparation was processed using1mL of the extract obtained by QuEChERS as dispersive solvent and60μL of1-octyl-3-methylimidazolium hexafluorophosphate as extractive solvent under55℃of water-bath temperature and12min of water-bath time.The ultimate solution was detected by HPLC-UV and the contaminated sample was further confirmed by UPLC-MS/MS under multiple reactions monitoring(MRM)mode.The recoveries of five dyes were in the range from70.3%to93.6%at two spike levels of0.01and0.05mg/kg,the relative standard deviations(RSDs)were between3.5%and 9.2%and the limits of quantification(LOQs)were between1.1and2.8μg/kg.Keywords Quick-easy-cheap-effective-rugged and safe method;Dispersive liquid-liquid microextraction; Ionic liquid;High performance liquid chromatography;Dyes(Received18May2014;accepted19June2014) This work was supported by the China Agriculture Research System(No.CARS-27),the Natural Science Foundation of Chongqing (Nos.cstc2013jjB80009,cstc2013jcyjA0435),and the Fundamental Research Fund for the Central Universities(No.XDJK2012C059).。
