植物组织MDA含量测定

BC0025 -- 第 1 页，共 4 页丙二醛（MDA ）含量检测试剂盒说明书微量法注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。

货号：BC0025规格：100T/96S产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称规格保存条件提取液液体110 mL×1瓶4℃保存试剂一液体42 mL×1瓶4℃保存试剂二粉剂×2瓶4℃保存试剂三液体12 mL×1瓶4℃保存溶液的配制：MDA 检测工作液的配制：临用前取1瓶试剂二加入20mL 试剂一，溶解混匀，4℃保存一个月。

MDA 检测工作液较难溶解，可以70℃加热，并剧烈振荡以促进溶解，或者通过超声处理以促进溶解。

产品说明：氧自由基作用于脂质的不饱和脂肪酸，生成过氧化脂质；后者逐渐分解为一系列复杂的化合物，其中包括丙二醛MDA 。

通过检测MDA 的水平即可检测脂质氧化的水平。

丙二醛（MDA ）在酸性和高温条件下，可以与硫代巴比妥酸（thiobarbituric acid ，TBA ）缩合，生成棕红色的三甲川（3,5,5-三甲基恶唑-2,4-二酮），其最大吸收波长在532nm 。

进行比色后可估测样本中过氧化脂质的含量。

但是测定植物组织中MDA 时受多种物质的干扰，其中最主要的是可溶性糖，糖与TBA 显色反应产物的最大吸收波长在450nm ，但532nm 处也有吸收。

所以同时测定600nm 、532nm 、450nm 下的吸光度，利用532nm 与450nm 、600nm 下的吸光度的差值计算MDA的含量。

由于植物中受蔗糖干扰较大，动物中受葡萄糖干扰较大，所以本试剂盒有针对蔗糖和葡萄糖的两个公式。

若所测样本为油脂类物质，则两个公式均可。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

植物组织中丙二醛的测定实验原理：植物器官衰老或在逆境下遭受伤害，往往发生膜脂过氧化作用，丙二醛(MDA)是膜脂过氧化作用的最终分解产物，其含量可以反映植物遭受逆境伤害的程度。

丙二醛在酸性和高温条件，可以与硫代巴比妥酸(TBA)反应生成红棕色的三甲川(3,5,5—三甲基恶唑2,4-二酮)，在532nm处有最大光吸收，在600nm处有最小光吸收，该复合物的吸光系数为155[mmol/( L.cm )] ，可按公式：A532－A600=155000×C×L算出MDA浓度C(μmol/L)，进一步算出单位重量鲜组织中 MDA 含量(μmol/g)。

式中，A532和A600分别表示532nm和600nm处的吸光度值。

L为比色杯厚度(cm )。

需要指出的是，植物组织中糖类物质对MDA-TBA反应有干扰作用。

为消除这种干扰，经试验，可用下列公式消除由蔗糖引起的误差。

C(μmol/L)=6.45(A532－A600)-0.56A450式中： A450、A532和A600分别表示450nm、532nm 和600nm处的吸光度值。

算出植物样品提取液中MDA的浓度后，可进一步算出其在植物组织中的含量。

实验材料、试剂与仪器设备（一）实验材料植物的根或叶片。

（二）试剂1、5%三氯乙酸(TCA)。

2、0.6 %硫代巴比妥酸(TBA)溶液：称取硫代巴比妥酸0.6g溶于5％TCA溶解并用其定容至l00mL 。

（三）仪器设备研钵，恒温水浴锅，分光光度计，离心机，天平，刻度试管，移液管实验步骤1.MDA的提取称取植物材料1g，剪碎，加入2mL5%TCA和少量石英砂，研磨至匀浆，再加8mLTCA进一步研磨，匀浆在4000r/min离心10min，上清液为样品提取液。

2. 显色反应和测定吸取离心的上清液2mL(对照加2mL蒸馏水)，加入2 mL0.6%TBA溶液，摇匀。

将试管放入沸水浴中煮沸10min(自试管内溶液中出现小气泡开始计时)，取出试管并冷却，3000r/min离心15 min，取上清液并量其体积。

植物体内丙二醛含量的测定一、原理丙二醛（MDA）是由于植物器官衰老或在逆境条件下受伤害，其组织或器官膜脂质发生过氧化反应而产生的。

它的含疑与植物衰老及逆境伤害有密切关系。

测定植物体内丙二醛含量，通常利用硫代巴比妥酸（TBA）在酸性条件下加热与组织中的丙二醛产生显色反应，生成红棕色的三甲川<3, 5, 5-三甲基恶哇-2, 4-二酮），三甲川最大的吸收波长在532nmo但是测左植物组织中MDA时受多种物质的干扰，其中最主要的是可溶性糖，糖与硫代巴比妥酸显色反应产物的最大吸收波长在450nm处，在532nm处也有吸收。

植物遭受干旱、髙温、低温等逆境胁迫时可溶性糖增加，因此测定植物组织中丙二醛与硫代巴比妥酸反应产物含量时一左要排除可溶性糖的干扰。

此外在532nm波长处尚有非特异的背景吸收的影响也要加以排除，532nm非特异性吸光值可以600nm波长处的吸光值代表。

低浓度的铁离子能显著增加硫代巴比妥酸与蔗糖或丙二醛显色反应物在532、450nm处的吸光度值，所以在蔗糖、丙二醛与硫代巴比妥酸显色反应中需要有一立的铁离子，通常植物组织中铁离子的含量为100 — 300 ng・g 根据植物样品量和提取液的体积，加入Fe‘‘的终浓度为0. 5nmo 1・L 在532nm、600nm和450nm波长处测從吸光度值，即可计算出丙二醛含量。

二、材料、仪器设备及试剂1.材料；植物叶片。

2.仪器设备：离心机，分光光度计：电子分析天平；恒温水浴；研钵；小烧杯（〉2）, 容量瓶（100ml〉2）；试管（>4）：移液管（2ml>3、5ml>l）、试管架；移液管架；洗耳球：剪刀。

3.试剂及其配制：10%三氯乙酸：称取10g三氯乙酸加蒸锚水溶解后泄容至100ml；0. 6%硫代巴比妥酸（TBA）溶液:称取0. 6g硫代巴比妥酸加蒸憎水溶解后定容至100ml：石英砂。

实验步L丙二醛的提取称取不同处理的植物叶片（尽量剪碎）0・2g,加入少咼石英砂和10%三氮乙酸2ml, 研磨至匀浆，再加3mll0%三氯乙酸进一步研磨，匀浆再经5ml三氯乙酸移入10ml离心管，以4000r/min离心lOmin, K上淸液为丙二醛提取液（10ml）。

植物组织中丙二醛的测定实验原理：植物器官衰老或在逆境下遭受伤害，往往发生膜脂过氧化作用，丙二醛(MDA)是膜脂过氧化作用的最终分解产物，其含量可以反映植物遭受逆境伤害的程度。

丙二醛在酸性和高温条件，可以与硫代巴比妥酸(TBA)反应生成红棕色的三甲川(3,5,5—三甲基恶唑2,4-二酮)，在532nm处有最大光吸收，在600nm处有最小光吸收，该复合物的吸光系数为155[mmol/( L.cm )] ，可按公式：A532－A600=155000×C×L算出MDA浓度C(μmol/L)，进一步算出单位重量鲜组织中 MDA 含量(μmol/g)。

式中，A532和A600分别表示532nm和600nm处的吸光度值。

L为比色杯厚度(cm )。

需要指出的是，植物组织中糖类物质对MDA-TBA反应有干扰作用。

为消除这种干扰，经试验，可用下列公式消除由蔗糖引起的误差。

C(μmol/L)=6.45(A532－A600)-0.56A450式中： A450、A532和A600分别表示450nm、532nm 和600nm处的吸光度值。

算出植物样品提取液中MDA的浓度后，可进一步算出其在植物组织中的含量。

实验材料、试剂与仪器设备（一）实验材料植物的根或叶片。

（二）试剂1、5%三氯乙酸(TCA)。

2、0.6 %硫代巴比妥酸(TBA)溶液：称取硫代巴比妥酸0.6g溶于5％TCA溶解并用其定容至l00mL 。

（三）仪器设备研钵，恒温水浴锅，分光光度计，离心机，天平，刻度试管，移液管实验步骤1.MDA的提取称取植物材料1g，剪碎，加入2mL5%TCA和少量石英砂，研磨至匀浆，再加8mLTCA进一步研磨，匀浆在4000r/min离心10min，上清液为样品提取液。

2. 显色反应和测定吸取离心的上清液2mL(对照加2mL蒸馏水)，加入2 mL0.6%TBA溶液，摇匀。

将试管放入沸水浴中煮沸10min(自试管内溶液中出现小气泡开始计时)，取出试管并冷却，3000r/min离心15 min，取上清液并量其体积。