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非洲猪瘟诊断及综合防控技术非洲猪瘟（African swine fever, ASF）是一种由非洲猪瘟病毒（ASFV）引起的高度传染性疾病，能使猪的死亡率达到90%以上，对猪产业造成极大的经济损失。
目前，亚洲地区多个国家（包括中国）都爆发了ASF疫情，所以ASF的快速诊断和高效防控显得尤为重要。
本文将介绍ASF诊断和综合防控技术。
一、ASF的诊断技术1、临床诊断ASF的临床表现主要有以下几点：发热、咳嗽、呼吸急促、猪体表出现暗红色斑块、黯呈及皮肤坏疽等，因此，一些简单的临床表现也可作为ASF的指标。
2、实验室检测（1）血清学检测：血清学检测是ASF诊断的最初的方法之一，包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、简单免疫过滤法（SIFT）、免疫电泳法等。
这些方法基于ASFV感染引起的抗体产生和抗原-抗体反应，可用于疫情监测和检测ASF的确诊和流行病学研究。
（2）分子生物学检测：PCR是ASF诊断的“金标准”，它是一种高度特异且敏感的技术，基于ASFV的核酸分子检测。
PCR方法可以用于AFPV水平的检测和定量，检测时间短、检测结果可靠，是ASF 检测的首选方法。
ASF的治疗手段非常有限，因此在发生ASF疫情时，及时采取措施进行防控才是保障养猪产业不受损失的最有效途径。
防控手段主要包括：1、加强猪场内部管理在猪场内部要加强各种管理工作，如保持良好的饮水和饲养条件，定期消毒杀菌，及时清理和处理污染的废料和粪便等等，这些都有助于阻止ASF的传播。
2、加强外部疫情监测亚洲地区多个国家已经爆发ASF疫情，因此对于那些与ASF流行区交通频繁的农业部门和企业，他们应该加强疫情监测，开展ASF病毒筛查、高危区域隔离等防控措施。
3、家禽与野生动物间的隔离家禽间、家禽与野生动物间的隔离是降低ASF传播风险的一种重要手段。
在疫情期间，为了保证野生动物与猪的安全，应加强它们之间的隔离和安全防御。
结论：ASF是一种严重的瘟疫，给养猪产业带来了沉重的打击。
非洲猪瘟检测与诊断技术要点中国农业科学院上海兽医研究所牵头编制2019年9月前言非洲猪瘟（African Swine Fever，ASF）是由非洲猪瘟病毒（African Swine Fever Virus，ASFV）引起的猪的一种急性、热性、高度接触性传染病，发病率和死亡率可达100%。
世界动物卫生组织（OIE）将其列为法定报告动物疫病，我国将其列为一类动物疫病。
1921年，ASF最初发现于肯尼亚，上世纪五、六十年代在非洲、欧洲、南美洲流行。
2018年8月初我国爆发非洲猪瘟首起疫情以来，该疫病已蔓延全国23个省，给我国生猪养殖业和国民经济带来巨大损失。
由于ASFV感染机制复杂，目前世界范围内至今尚无有效预防用非洲猪瘟疫苗，因此早期发现、精准检测是控制该病传播和发生的关键。
本文参考了OIE关于非洲猪瘟防控的文件、农业农村部发布相关文件和中国动物卫生与流行病学中心、中国动物疫病预防控制中心的相关技术手册，结合我们的研究成果，从非洲猪瘟早期发现、现场排查、精准检测三个方面的技术要点编写而成，主要面向从事非洲猪瘟现场排查和检测的一线防疫人员，提供了简明实用的相关操作技术与方法，为非洲猪瘟现场排查与检测等相关工作提供参考。
编者牵头团队：上海兽医研究所猪呼吸道传染病团队负责人：马志永参加人：魏建超等参加团队：哈尔滨兽医研究所猪烈性传染病创新团队负责人：仇华吉参加人：罗玉子等兰州兽医研究所外寄生虫与虫媒疫病团队负责人：刘志杰参加人：林密等兰牧药研究所中兽医与临床团队负责人：李建喜参加人：崔东安目录一、概述 (1)二、早期发现 (4)三、现场排查 (5)（一）准备工作 (6)1.人员准备 (6)2.车辆准备 (6)3.物品准备 (6)（二）进出养殖场要求 (7)1.抵达养殖场 (7)2.穿戴个人防护设备（在清洁区） (8)3.离场前准备 (8)4.离场后 (9)5.消毒剂的选择 (9)（三）临床诊断 (9)1.临床症状 (10)2.剖检病变 (11)3.鉴别诊断 (12)4.发现疑似病例的情况下应立即采取的行动 (13)（四）样品采集、包装与运输 (14)1.采样方法 (14)2.样品的记录、保存、包装和运送 (15)3.废弃物处理 (18)四、实验室诊断与确诊 (19)1.快速精准检测 (19)2.疫情确诊 (19)附件一：非洲猪瘟防治技术规范 (20)附件二：国家非洲猪瘟参考实验室、专业实验室和区域实验室名单 (24)一、概述非洲猪瘟病毒（ASFV）是一种有囊膜的DNA病毒，是非洲猪瘟病毒科、非洲猪瘟病毒属的唯一成员。
非洲猪瘟的监测与诊断技术非洲猪瘟（African Swine Fever, 简称ASF）是一种由非洲猪瘟病毒引起的高度传染性疾病，对猪的养殖业造成了巨大的经济损失。
为了及时监测和准确诊断非洲猪瘟，科学家们开发出了一系列的监测与诊断技术。
本文将介绍非洲猪瘟的监测与诊断技术，并探讨其在防控非洲猪瘟中的作用。
一、病毒检测技术1. PCR技术聚合酶链反应（PCR）是一种常用的病毒检测技术，它通过特异性引物和酶的催化作用，扩增样本中的病毒核酸。
PCR技术能够快速、准确地检测非洲猪瘟病毒的存在，且对病毒精确度高，检测时间短，是非洲猪瘟监测中的重要工具。
2. ELISA技术酶联免疫吸附试验（ELISA）是一种常用的病毒抗体检测技术。
ELISA技术利用酶与病毒抗原或抗体结合的特异性反应，通过比色反应或荧光反应判断样品中是否存在非洲猪瘟病毒抗体。
ELISA技术具有简单、快速、灵敏度高的特点，在非洲猪瘟的早期监测和诊断中起到了重要的作用。
二、病理学检测技术1. 组织病理学检测组织病理学检测是通过对猪体组织进行病理学检查，确定是否存在非洲猪瘟的一种技术。
该技术可通过显微镜观察病变组织的形态学改变，如出血、水肿、坏死等，进一步确定非洲猪瘟的病情。
2. 免疫组织化学检测免疫组织化学检测是利用特异性抗体与组织中的抗原结合来检测非洲猪瘟病毒的存在。
该技术具有高度特异性和灵敏度，可以帮助鉴定非洲猪瘟的病毒类型和分布范围。
三、流行病学调查技术1. 临床症状观察通过对猪群的临床症状进行观察，可以初步判断是否存在非洲猪瘟的流行。
非洲猪瘟的临床症状包括发热、食欲减退、呕吐、腹泻、呼吸急促等。
准确观察和记录症状，能够帮助科学家对非洲猪瘟进行快速且准确的流行病学调查。
2. 血清学调查血清学调查通过对猪群的血清标本进行病毒抗体或病毒核酸的检测，了解猪群中非洲猪瘟的感染率和传播情况。
血清学调查是非洲猪瘟监测的重要手段之一，可以帮助科学家及时采取控制措施，防止病毒的扩散。
1 临床症状非洲猪瘟有着短暂的2 ～ 9d 的自然感染潜伏期，最明显的临床症状时发病时体温骤高，最高可达41℃，并且持续时间较长，大约4d。
病猪在死亡前48h 会发生体温下降的症状。
其他症状表现为精神萎靡、食欲不振、不爱行动、咳嗽、耷耳，其中腹部、臀部、四肢、耳朵等多出部位出现紫红色血斑，同时伴随便血及粘液，连续呕吐等症状。
母猪还会伴随流产症状。
如果病发后2 ～ 4d 内持续高温，并食欲不振、体虚无力，呼吸脉搏等加快，伴随呼吸困难，之后发生降温，伴随粘液脓性结膜炎和呕吐等症状，则可初诊为非洲猪瘟。
取血样实验室检测，可发现白血球、淋巴球数量少50%，最低时可下降至40%，在体温高温段有明显的贫血症，之后病猪发生死亡，即可确诊为非洲猪瘟。
解剖病死猪，可见血管发生血栓或坏死症状，腹膜、胸膜、心膜等多处脏器膜发生黄色或血色充血症状，肾脏、肠胃、心脏发生水肿、包血及不同程度出血等症状。
2 诊断要点2.1 临床诊断临床诊断凭借不同类型非洲猪瘟的临床特征判断，可作为初诊的依据。
根据猪的临床表现进行分类治疗，并对病死猪进行解剖。
解剖后如果临床症状与非洲猪瘟一致，则可确诊为非洲猪瘟。
2.2 实验室诊断2.2.1 病毒分离诊断采集活体猪血及病死猪病灶器官在实验室进行病毒分离检测。
2.2.2 免疫电泳试验采集病猪的血清加入抗原中，血清出现白色线状或沉淀，则为非洲猪瘟。
2.2.3 白细胞吸附试验需要采集病猪血液或组织物置于白细胞中在37℃的环境下培养，如出现如玫瑰花状或桑椹体状则表明为非洲猪瘟。
2.2.4 酶联免疫吸附试验酶联免疫吸附的A 值大于0.3 时，则表明为非洲猪瘟。
2.2.5 间接免疫荧光试验对病猪的血浆提取物在生长有Vero 细胞的玻璃片上进行对比，出现荧光团时表明测试血浆为非洲猪瘟。
3 有效的防控措施3.1 加强养殖管理鉴于非洲猪瘟传播途径较多，因此养殖人员要加强养殖管理，切断一切可能发生的传播途径。
进出养殖场的车辆、人员及其物品要进行彻底全面的清洁及消毒管理。
非洲猪瘟诊断及综合防控技术非洲猪瘟是一种猪源性传染病，病原体为非洲猪瘟病毒。
该病在猪类中广泛散发，传播迅速，死亡率高，对养殖业造成了严重的经济损失。
为了及时发现和控制非洲猪瘟的传播，下面将介绍非洲猪瘟的诊断方法和综合防控技术。
非洲猪瘟的诊断方法主要包括临床症状观察、病理学检查、实验室检测等。
首先是临床症状观察，非洲猪瘟的患猪常表现为食欲不振、发热、咳嗽、呕吐、腹泻、四肢无力、倒地、抽搐等症状。
其次是病理学检查，通过对患猪尸体进行解剖和观察，可以发现一系列特征性的病理变化，如出血、水肿、淋巴瘤样结节等。
最后是实验室检测，目前常用的诊断方法有PCR检测、免疫荧光检测、ELISA检测等。
这些方法可以通过检测血液、组织、粪便等样本，来确定是否存在非洲猪瘟病毒的感染。
综合防控非洲猪瘟的技术主要包括灭鼠灭蚁、环境消毒、疫苗接种等。
首先是灭鼠灭蚁，因为非洲猪瘟病毒可以通过啮齿类动物和昆虫传播，所以要加强对耗子、苍蝇等害虫的防治。
其次是环境消毒，非洲猪瘟病毒可以在猪圈、运输车辆、饲料、水源等环境中存活较长时间，因此要定期对猪圈和相关设备进行彻底消毒，避免病毒传播。
最后是疫苗接种，科学、合理的疫苗接种是预防非洲猪瘟的关键措施。
目前已有多种非洲猪瘟疫苗可供选择，如灭活疫苗、减毒疫苗等，疫苗接种可以提高猪群的免疫力，减少病毒传播和致死率。
综合来说，非洲猪瘟的诊断和综合防控技术是预防和控制该病毒传播的有效手段。
通过及时诊断和科学防控，可以减少非洲猪瘟的传染风险，保护养殖业的可持续发展。
也需要养殖户加强自身的宣传教育和管理水平提升，形成合力，共同防控非洲猪瘟的蔓延。
非洲猪瘟与猪瘟的鉴别诊断1 非洲猪瘟及猪瘟的区别辨识1.1 流行特点猪瘟与非洲猪瘟的传播方式存在着较大的差异，猪瘟只有经过接触以后才可传播，同时在一定条件下才可感染，任何时间、任何大小的猪只均可被感染。
而非洲猪瘟除了依靠接触传染外，还可以通过各种昆虫以及害虫等进行传播，其中软蜱是非洲猪瘟最为常见的虫媒，非洲猪瘟病毒会在软蜱体内寄存并随着软蜱的移动而进行传播，在软蜱体内病毒的活力以及传染性可以得到保证，因而能够实现持续传播。
另外，猪瘟病毒其自身毒株差异会直接决定其病情的严重情况，在我国猪瘟疫情主要发生于各种中小型的养殖场，基本不会向外传播，如果猪只在养殖前已经注射过疫苗，极少出现发病的情况。
而非洲猪瘟因其传播介质较为广泛，因而具有极广的传播范围，同时其病毒毒力较强，导致生猪一旦患病通常会在一周内全部死亡，当前针对非洲猪瘟并不具备有效的防治疫苗。
1.2 临床症状1.2.1 非洲猪瘟一般有15d的潜伏期，如果为直接接触感染，其病猪的潜伏期通常为5～19d，如果为软蜱叮咬感染，病猪的潜伏期一般少于5d，病猪的病死率与非洲猪瘟病毒毒力高低存在着直接的关系，如果为强毒株引起的感染病猪死亡率可以达到100%，而中等毒力毒株引起的感染病猪死亡率一般为30%～70%，低毒力猪仅可导致少数猪只发病死亡[1]。
猪瘟的潜伏期通常为7～10d，其潜伏期最短为2d，最长可以达到21d。
1.2.2 非洲猪瘟病猪通常在发热4d以后才会出现临床症状，此时病猪体温开始下降，2d左右以后病猪即会死亡。
而猪瘟病猪通常体温升高以及临床症状同时出现，病猪往往会持续3d及以上的高温，其每日的温差一般在1℃以内。
1.2.3 绝大多数非洲猪瘟为最急性经过，其病程一般为4～7d。
而绝大多数猪瘟为急性型，其病程一般为10d以上。
1.2.4 非洲猪瘟病猪其少毛或者无毛地区可以看到明显的紫绀区，病猪耳部紫绀区发生肿胀，其腹壁以及四肢等皮肤存在出血块，中央位置为黑色，而四周呈干枯状；猪瘟不存在这一病变。
A PPLICATION N OTE利用Archimed定量PCR进行非洲猪瘟病毒检测鲲鹏基因（北京）科技有限责任公司阳性对照阴性样本非洲猪瘟荧光定量PCR 分析2018年8月非洲猪瘟疫情在中国爆发，爆发地区分布交广，对我国畜牧养殖造成了巨大损失。
我国将非洲猪瘟列为一类动物疫病，非洲猪瘟（ASF ）是由非洲猪瘟病毒（ASFV ）引起的猪的一种急性、烈性、高度接触性传染病，对生猪致病率高，致死率高达100%。
应用实时荧光PCR 技术可以从低微含毒量样品中扩增获得病毒特异性核酸片段，进行病毒鉴定。
通过扩增捕获ASFV 主要免疫原基因VP72，进而测定其核酸序列，可进行以毒株间核苷酸序列同源性比较为主要技术手段的非洲猪瘟分子流行病学研究。
利用Archimed 荧光定量PCR 进行非洲猪瘟检测一般流程为了帮助实验人员更便捷地进行非洲猪瘟检测，Archimed 定量PCR 在实验条件设置、孔板设置及数据分析等方面均进行了充分优化，力争以最智能化的方式帮助研究者完成该类型实验。
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创建实验•创建新的相对定量实验文件并设置实验属性设置反应条件•进行相对定量运行条件的设置设置孔板•对反应孔进行属性及分布设置运行实验•开始非洲猪瘟荧光定量PCR 运行查看及分析结果•查看非洲猪瘟荧光定量图谱实验结果并进行分析导出实验结果•将图谱及实验数据导出保存以进行后续分析2.设置反应条件：实验属性设置完成后，点击页面左侧的运行条件或者右下角的下一步，进入运行条件设置界面3.设置孔板：运行条件设置完成后，点击页面左侧孔板设置或者右下角的下一步，进入孔板设置界面。
根据实际反应管放置的相应孔位选择反应孔，对样本及检测项目进行相应属性设置，并勾选分配至对应孔位中，待测样品孔位将显示相应设置属性注：Archimed孔板设置可以在反应运行前、运行中、或运行后设置，运行中或运行后进行孔板设置可以节省时间。
