茶黄素抗肿瘤作用研究进展

基金项目：云南省科学技术厅重大科技专项（编号：２０２００２ＡＥ３２０００１）作者简介：代丽凤，女，云南大益微生物技术有限公司助理工程师，硕士。通信作者：官兴丽（１９８６—），女，云南大益微生物技术有限公司高级工程师，硕士。Ｅｍａｉｌ：ｇｕａｎｘｉｎｇｌｉ１９８６＠１２６．ｃｏｍ收稿日期：２０２２１０１３ 改回日期：２０２３０３０９犇犗犐：１０．１３６５２／犼．狊狆犼狓．１００３．５７８８．２０２２．８０９１１［文章编号］１００３５７８８（２０２３）０６０２２７０７

茶褐素理化性质及生物学活性研究进展

Ｒｅｓｅａｒｃｈｐｒｏｇｒｅｓｓｏｎｐｈｙｓｉｃｏｃｈｅｍｉｃａｌｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓａｎｄｂｉｏｌｏｇｉｃａｌａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｔｈｅａｂｒｏｗｎｉｎ

代丽凤１，２犇犃犐犔犻犳犲狀犵１，２　蒋洁琳２，３犑犐犃犖犌犑犻犲犾犻狀２，３　官兴丽１，２犌犝犃犖犡犻狀犵犾犻１，２　邹小林１，２犣犗犝犡犻犪狅犾犻狀１，２符宗林１，２犉犝犣狅狀犵犾犻狀１，２　罗　赛１，２犔犝犗犛犪犻１，２　杨　智１，２犢犃犖犌犣犺犻１，２（１．云南大益微生物技术有限公司，云南昆明　６５０２１７；２．云南省普洱茶发酵工程研究中心，云南昆明　６５０２１７；３．勐海茶业有限责任公司，云南勐海　６６６２００）（１．犢狌狀狀犪狀犜犃犈犜犈犃犕犻犮狉狅犫犻犪犾犜犲犮犺狀狅犾狅犵狔犆狅．，犔狋犱．，犓狌狀犿犻狀犵，犢狌狀狀犪狀６５０２１７，犆犺犻狀犪；２．犉犲狉犿犲狀狋犪狋犻狅狀犈狀犵犻狀犲犲狉犻狀犵犚犲狊犲犪狉犮犺犆犲狀狋犲狉犳狅狉犢狌狀狀犪狀犘狌犲狉犺犜犲犪，犓狌狀犿犻狀犵，犢狌狀狀犪狀６５０２１７，犆犺犻狀犪；３．犕犲狀犵犺犪犻犜犲犪犐狀犱狌狊狋狉狔犆狅．，犔狋犱．，犕犲狀犵犺犪犻，犢狌狀狀犪狀６６６２００，犆犺犻狀犪）

摘要：茶褐素是一类水溶性非透析性高聚合的褐色物质，主要组分为多酚类、多糖、蛋白质和核酸等，与发酵茶的色泽、功能活性密切相关。由于形成机制的复杂性，其化学结构尚不明确。文章就茶褐素结构特性、形成机制、提取及检测方法、功能活性等进行了阐述，并展望了其未来研究方向。关键词：茶褐素；功能活性；形成机制犃犫狊狋狉犪犮狋：Ｔｈｅａｂｒｏｗｎｉｎ，ａｋｉｎｄｏｆｗａｔｅｒｓｏｌｕｂｌｅ，ｎｏｎｄｉａｌｙｓａｂｌｅ，ｈｉｇｈｌｙｐｏｌｙｍｅｒｉｓｅｄｂｒｏｗｎｓｕｂｓｔａｎｃｅ，ｍａｉｎｌｙｃｏｍｐｏｓｅｄｏｆｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌ，ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ，ｐｒｏｔｅｉｎａｎｄｎｕｃｌｅｉｃａｃｉｄ，ｗｈｉｃｈｉｓｃｌｏｓｅｌｙｒｅｌａｔｅｄｔｏｔｈｅｃｏｌｏｒａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎａｌａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｆｅｒｍｅｎｔｅｄｔｅａ．Ｄｕｅｔｏｔｈｅｃｏｍｐｌｅｘｉｔｙｏｆｔｈｅｆｏｒｍａｔｉｏｎｍｅｃｈａｎｉｓｍ，ｉｔｓｃｈｅｍｉｃａｌｓｔｒｕｃｔｕｒｅｉｓｓｔｉｌｌｕｎｃｌｅａｒ．Ｉｎｔｈｉｓｒｅｖｉｅｗ，ｔｈｅｓｔｒｕｃｔｕｒａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ，ｆｏｒｍａｔｉｏｎｍｅｃｈａｎｉｓｍ，ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎａｎｄｄｅｔｅｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓ，ａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎａｌａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｔｈｅｏｐｈｙｌｃｉｎｗｅｒｅｄｉｓｃｕｓｓｅｄ，ａｎｄｔｈｅｆｕｔｕｒｅｒｅｓｅａｒｃｈｄｉｒｅｃｔｉｏｎｗａｓａｌｓｏｐｒｏｓｐｅｃｔｅｄ．犓犲狔狑狅狉犱狊：ｔｈｅａｂｒｏｗｎｉｎ；ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌａｃｔｉｖｉｔｙ；ｆｏｒｍａｔｉｏｎｍｅｃｈａｎｉｓｍ

六堡茶药理作用的研究进展

作者：莫清莲 戴铭 甘小凤

来源：《中国民族民间医药·上半月》2020年第11期

【摘 要】 六堡茶是黑茶的典型代表，具有降血脂、降血糖、抗氧化、抗肿瘤、保护肝脏和抗菌等多种药理活性，近年来其在降血脂方面显著的药理活性受到广泛的关注。文章对近年来六堡茶的药理活性研究进行综述，为其进一步研究及开发提供参考。

【关键词】 六堡茶;黑茶;药理活性;研究进展

【中图分类号】R285 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2020）21-0069-04

Abstract：As one of the typical representative of dark tea， Liupao tea have hypoglycemic

effect，antioxidant activity， antineoplastic activity， liver injury protection and antibacterial

activity et effect. Liupao tea have been received more attention due to its significant hypolipidemic

effects in recent years. In this paper， the recent study on pharmacological activities of Liupao dark

tea was summarized， so as to provide reference for its further investigation and development of

relative production.

Keywords：Liupao Tea;Dark Tea;Pharmacological Activities;Research Progress

第1篇

一、实验背景

随着生活节奏的加快和环境污染的加剧，人们的健康问题日益突出。茶叶作为一种天然饮品，富含多种营养成分和生物活性物质，被广泛认为具有多种保健作用。为了验证茶叶的保健效果，我们开展了一系列喝茶保健实验，以下是对实验的总结。

二、实验目的

1. 探讨茶叶对人体的保健作用。

2. 分析不同茶叶成分对人体健康的影响。

3. 为公众提供科学的饮茶建议。

三、实验方法

1. 实验对象：选择年龄、性别、体重、生活习惯等基本相同的志愿者50名，随机分为5组，每组10人。

2. 实验分组：

- A组：红茶组

- B组：绿茶组

- C组：乌龙茶组

- D组：普洱茶组

- E组：对照组（不饮茶）

3. 实验时间：持续6个月。

4. 实验内容：

- 每组志愿者每日饮茶量根据个人喜好和体质差异进行调整，但均保持每日3-5杯。

- 定期检测志愿者的生理指标，包括血压、血糖、血脂、肝肾功能等。

- 观察并记录志愿者的身体变化，如疲劳感、睡眠质量、皮肤状况等。

四、实验结果 1. 血压：实验结束后，A、B、C、D四组志愿者的血压均有所下降，其中红茶组和乌龙茶组下降最为明显。

2. 血糖：四组志愿者血糖水平均有所降低，尤其是绿茶组和普洱茶组。

3. 血脂：四组志愿者的血脂水平均有所改善，其中绿茶组和乌龙茶组效果最为显著。

4. 肝肾功能：四组志愿者的肝肾功能均保持正常，未出现异常情况。

5. 身体变化：四组志愿者普遍反映疲劳感减轻，睡眠质量提高，皮肤状况改善。

五、讨论与分析

1. 茶叶中的茶多酚、儿茶素、茶黄素等成分具有抗氧化、抗炎、抗菌等作用，可降低血压、血糖、血脂，改善肝肾功能。

2. 不同茶叶成分对人体健康的影响存在差异，绿茶中的茶多酚含量较高，具有抗氧化、抗肿瘤等作用；红茶中的茶黄素含量较高，具有降血压、降血脂等作用；乌龙茶和普洱茶则具有减肥、降脂、抗氧化等作用。

ChineseJournalofPracticalStomatologyOct.2013Vol.6No.10

茶叶是我国的“传统国饮”，茶多酚是茶叶中多酚类化合物的复合体，是茶叶中发挥生物活性功能的重要成分，具有抑菌、抗病毒、抗肿瘤等药理作用。研究显示，茶多酚经氧化聚合反应形成的茶色素可能具有比茶多酚更强的医药保健功能［1］。茶黄素（theaflavins，TFs）是茶色素的主要成分，在乌龙茶和黑茶干叶中的质量分数分别为0.44%［2］和2%［1］，是一种具有抗氧化、抑菌、抗炎作用的黄酮类化合物，其在口腔疾病预防及治疗方面的潜在价值逐渐引起了学者们的重视。本文对TFs在口腔疾病防治方面的相关研究进展做一综述，旨在促进含TFs的口腔保健药品的研发和应用。1TFs的化学性质TFs最早是1957年由Roberts发现的，是茶色素的主要成分。TFs是在制造乌龙茶和黑茶的半发酵或发酵过程中由简单儿茶素和没食子儿茶素氧化聚合形成［1］，是一类含有多个羟基或酚羟基的苯骈卓酚酮类化合物的总称。TFs共有12种组分，其中黑茶和乌龙茶中最主要的4种TFs分别为茶黄素（theaflavin，TF）、茶黄素-3-没食子酸酯（theaflavin-3-gallate，TF-3-G）、茶黄素-3'-没食子酸酯（theaflavin-3'-gallate，TF-3'-G）和茶黄素-3，3'-双没食子酸酯（theaflavin-3，3'-gallate，TFDG）［3］。TFs易溶于水、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、丙酮和正丁醇，难溶于乙醚，不溶于三氯甲烷和苯。其溶液呈鲜明的橙黄色，弱酸性，pH值约为5.7。对TFs稳定性的研究显示，其在pH值为6.5时非常稳定，在pH值为7.0时发生缓慢降解，在pH值为9.0时降解迅速［4］。Sirk等［5］通过体外构建基金项目：卫生部牙周病科国家临床重点建设专科基金资助项目（2010）作者单位：四川大学华西口腔医院a口腔疾病研究国家重点实验室，b牙周病科，成都610041通讯作者：赵蕾，电子信箱：jollyzldoc@综述茶黄素防治口腔疾病研究进展黄诗言a，程远a，b综述赵蕾b审校文章编号：1674-1595（2013）10-0624-05中图分类号：Ｒ78文献标志码：Ａ摘要：茶黄素（theaflavins，TFs）是一类含有多个羟基或酚羟基的苯骈卓酚酮类化合物的总称。由于TFs具有抑菌、抗病毒、良好的抗氧化性能及显著清除自由基的能力，使其在龋病、牙周炎、口腔黏膜病和口腔癌等疾病的预防和治疗中具有潜在的应用前景。本文就近年来TFs在口腔疾病防治方面的相关研究进展做一综述。关键词：茶黄素；药理作用；口腔疾病Researchprogressoftheaflavinsonpreventionandtreatmentoforaldisease.HUANGShi-yan*，CHENGYu⁃an，ZHAOLei.*StateKeyLaboratoryofOralDiseases，WestChinaHospitalofStomatology，SichuanUniversity，Chengdu610041，ChinaAbstract：Theaflavins（TFs）isagroupofpolyphenolpigmentswhichincludemultiplehydroxylorphenolichydroxyl.TFsexhibitsnumeroushealth-relatedbeneficialeffects，suchasantibacterial，antiviral，antioxidantandfreeradical-scaveng⁃ingactivity.ThusTFsmayhaveapotentialapplicationprospectinoraldiseaseincludingcaries，periodontitis，oralmuco⁃saldiseaseandoralcancer.Thisreviewdescribestherecentresearchprogressoftheaflavinsonpreventionandtreatmentoforaldisease.Keywords：theaflavins；pharmacologicalaction；oraldisease624中国实用口腔科杂志2013年10月第6卷第10期混合脂质双分子层膜来模拟TFs与细胞膜的相互作用，研究发现，TFs分子结构中的羟基可与脂质中的氧原子以氢键方式结合，使TFs对细胞膜脂质双分子层表面具有亲和力，从而发挥生物学活性。Lee等［4］测得正常健康人含漱黑茶提取液（TFs质量浓度为0.12g/L）2min后，唾液中TFs含量在1h内很高，其中TF-3-G和TFDG质量浓度分别为0.5~2.6和0.34~2.0μg/mL。含漱纯TFs溶液（0.18g/L）2min，1h内唾液中TF、TF-3-G、TF-3'-G、TFDG质量浓度分别为2.5~23.0、8.9~85.0、1.9~40.0和2.5~43.0μg/mL，是含漱黑茶提取液的10~20倍，表明纯TFs在唾液中的清除作用较弱，可能是由于黑茶提取物中其他成分干扰了唾液对TFs的溶解和口腔黏膜对TFs的吸收。Mulder等［6］发现，正常健康人经口腔吸收700mgTFs后，TFs的血浆质量浓度为1ng/mL，远低于唾液中的含量。唾液中TFDG的含量随时间延长逐步降低（60min减少约25%），但TFDG在唾液淀粉酶的水解作用下可形成TF-3-G和TF-3'-G，使局部TF-3-G和TF-3'-G的含量升高。另有研究显示，口腔环境pH值为7.0~7.4，TFs在口腔中缓慢降解，其在唾液中半衰期为49~76min［4］。因此，TFs的这种代谢特性使其更易于通过局部含漱或饮用来防治口腔疾病。2茶黄素在口腔疾病防治领域的研究2.1龋病龋病是多联因素作用下牙体硬组织进行性发生无机物脱矿、有机物分解的慢性细菌感染性疾病。变异链球菌是最主要的口腔致龋菌［7］。Linke等［8］应用黑茶提取物喂饲仓鼠动物模型发现，黑茶提取物可降低基本膳食组龋病发病率56.6%，对于致龋膳食组可降低龋病发病率63.7%。Touyz等［9］研究亦显示，用致龋膳食喂饲的Sprague-Dawley鼠饮用黑茶2周后龋病病损发生率显著低于对照组（饮用无氟水组）。以上研究均指出：即使饮食中含糖，经常摄入黑茶可显著减少龋病的发生。体外研究进一步发现，黑茶和乌龙茶可抑制变异链球菌的生长。黑茶质量浓度为50~400g/L时对变异链球菌具有显著的抑菌作用，其最小抑菌质量浓度为50g/L，最小杀菌质量浓度为200g/L，且黑茶抑制变异链球菌的活性高于绿茶［10］。研究显示，黑茶和乌龙茶抑制变异链球菌生长的主要活性成分之一为TFs［11］。进一步研究发现，TFs能通过抑制变异链球菌和远缘链球菌的产酸能力来使局部微环境pH值升高，从而抑制龋病的发生［12］。相关机制分析显示，TFs对变异链球菌的葡糖基转移酶（GTF）有很强的抑制作用，且TFs与α唾液淀粉酶的亲和力较强，在0.6~1.7μmol/L的低浓度下即可抑制50%的α-淀粉酶活性，从而干扰细菌将蔗糖和淀粉分解为葡萄糖、麦芽糖等的能力，抑制细菌产酸［13-14］。2.2牙周病牙周病指发生在牙周支持组织的炎症性、破坏性疾病。牙菌斑为牙周炎发病始动因子，而菌斑及其毒性产物引发的宿主过度炎症免疫反应是导致牙周组织水解破坏的重要原因。Wei［15］研究表明，黑茶提取物能抑制牙周可疑致病菌生长，其最低抑菌浓度范围为13~114μg/mL。进一步研究表明，黑茶提取物不仅抑制牙周重要致病菌——牙龈卟啉单胞菌的生长，还可在低于最小抑菌浓度的情况下，抑制牙龈卟啉单胞菌对口腔上皮细胞的黏附以及牙龈卟啉单胞菌胶原酶的蛋白水解活性，其作用与黑茶提取物的浓度呈正相关［16］。黑茶提取物除具有抑制牙龈卟啉单胞菌生长及毒力作用的能力外，还可调节宿主的炎症免疫反应。Zhao等［16］研究显示，黑茶提取物呈浓度依赖性地抑制宿主来源的基质金属蛋白酶-9（MMP-9）和弹性蛋白酶活性，并可抑制牙龈卟啉单胞菌感染的口腔上皮细胞分泌炎症细胞因子如白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-8（IL-8）及趋化因子（C-C基序）配体-5（CCL-5）。黑茶提取物的主要成分为TFs，深入的研究证实，TFs具有调节牙周组织炎症免疫细胞因子表达的能力。IL-6是一种介导牙槽骨吸收的促炎细胞因子，牙周炎患者局部病变牙周组织中IL-6的检出量高于健康牙周组织，肿瘤坏死因子超家族14（TNFSF14）可显著诱导人牙龈成纤维细胞（HGFs）分泌IL-6。研究发现，TFDG能够阻断TNFSF14诱导HGFs产生的胞外信号调节蛋白ERK、JNK及NF-κB的活化，从而抑制TNFSF14刺激HGFs合成IL-6的水平；TFDG还可下调TNFSF14受体在HGFs表面的表达，通过降低TNFSF14的活化水平来抑制其对HGFs合成IL-6的刺激作用［17］。趋化因子配体CXCL10属于细胞因子IL-6家族，在625ChineseJournalofPracticalStomatologyOct.2013Vol.6No.10IL-6介导的炎症反应中具有重要的调控作用［18］。抑癌蛋白M（OSM）可诱导HGFs产生CXCL10，牙周炎患者的局部病变组织及血浆中的OSM水平高于牙周健康者［19］。TFDG不仅能够抑制OSM受体β在HGFs上的表达，还通过阻断OSM刺激的HGFs氨基端激酶（JNK）和蛋白激酶（Akt）的磷酸化作用，来抑制HGF分泌CXCL10的水平，从而发挥抗炎作用［20］。IL-8是一种与炎症反应密切相关的中性粒细胞趋化因子，Aneja等［21］研究表明，TFs是一类强有力的IL-8基因表达抑制剂，质量浓度为10~30μg/mL的TFs即可显著抑制肿瘤坏死因子-α介导的宿主细胞IL-8基因的表达。其可能的分子机制为：TFs阻断IκB酶的激活，影响IκB/NF-κB信号通路活化，抑制DNA与AP-1结合，从而抑制IL-8mRNA的表达。此外，多项研究亦证实，TFs可通过降解核转录因子（IκBa），抑制ERK1/2、JNK和p38丝裂原激活蛋白激酶（p38MAPK）磷酸化作用，阻断NF-κB和MAPK信号通路等作用，来抑制细菌LPS诱导的细胞黏附因子-1、血管黏附因子-1、单核细胞趋化蛋白-1表达［22-23］。牙周病患者的临床常见症状之一为口臭。引起口臭的气体主要包括甲硫醇、氨气、硫化氢和甲苯等化合物，其中最主要的恶臭成分为甲硫醇。研究表明，TFs具有强除臭能力。龚雨顺等［24］发现，TFs有直接清除甲硫醇的作用，在pH值为10的碱性条件下，1mg纯度为40%的TFs对甲硫醇的最大清除量为0.232mg。TFs消除口臭的作用机制与TFs的分子结构有关，即TFs多酚类的酚羟基在碱性溶液中易脱去氢形成苯氧自由基，苯氧自由基具有强还原能力，可直接抑制甲硫醇的产生［25］。2.3口腔黏膜病口腔黏膜病是指发生在口腔黏膜及软组织的各种疾病的总称。包括口腔黏膜感染性疾病、溃疡性疾病、变态反应性疾病等。近年的研究显示，TFs在治疗口腔黏膜感染性疾病和溃疡性疾病中具有潜在的药用价值。口腔假丝酵母菌性损害是由假丝酵母菌感染引起的急性或慢性口腔黏膜损害的总称。假丝酵母菌是条件致病菌，其中白色假丝酵母菌（C.albicans）最常见，且毒性最强。Sitheeque等［26］通过琼脂扩散生长试验研究TFs抑制C.albicans生长的作用，其最小抑菌浓度MIC值为6.25mg/mL。抗真菌后效应（post-antifungaleffect，PAFE）是指将真菌有限暴露于药物中，随后通过稀释、药物失活或反复洗涤等方法去除药物，真菌生长仍受到持续抑制的现象。PAFE可作为检测药物对真菌复苏和生长抑制作用的有效指标。Sitheeque等［26］研究发现，TFs在抑制C.albicans生长的同时，还可导致C.albicans的复苏和生长延迟，6~8倍MIC的TFs的PAFE值具有统计学意义；进一步扫描电镜观察显示，TFs导致C.albicans表面呈现“桑葚样”改变且形成芽生孢子，细胞皱缩、变小。研究提示，TFs可引起细胞壁崩解破坏和内容物的外溢，从而抑制C.albicans的生长、复苏和发挥致病作用。口腔单纯性疱疹是由单纯疱疹病毒（HSV）所致的口腔黏膜病损。Isaacs等［27］应用TFDG作用于Ⅰ型单纯疱疹病毒（HSV-1）及Ⅱ型单纯疱疹病毒（HSV-2）发现，pH值为4.0~5.7时，TFDG可抑制103~104的HSV-1和HSV-2病毒滴度；pH值为8.0时，TFDG可抑制105病毒滴度；将HSV-1与TFDG共孵育1h后感染猴肾细胞发现，培养上清中病毒蛋白数下降28%，病毒对猴肾细胞的感染下降105病毒滴度以上。研究提示，TFs具有抑制病毒繁殖和病毒蛋白功能的作用。口腔黏膜溃疡类疾病的关键致病因素之一为病损局部氧自由基的堆积，而TFs的抗氧化性能表现为抑制自由基的产生和清除已形成的自由基两方面［28］。Yang等［29］报道，TF及TF-3-G、TF-3'-G和TFDG在H2O2所致HPF-1细胞氧化应激损伤模型中显示出自由基清除和抗氧化活性。其中TFDG对宿主细胞的促增殖作用最强，而TF和TFDG不仅能够清除已形成的自由基，并且对已造成氧化应激损伤的细胞具有保护作用。一氧化氮合酶（iNOS）是一种宿主促氧化酶类，Lin等［30］研究显示，TFDG通过减少诱导型iNOS的mRNA表达，阻断NF-кB信号通路激活来抑制iNOS的转录，从而降低宿主细胞iNOS的蛋白表达水平。研究提示，TFs可能具有通过抑制口腔黏膜细胞的氧化应激反应，来发挥防治溃疡类疾病的潜在药物作用。2.4口腔癌在我国，口腔颌面部的恶性肿瘤以癌最为常见，其中80%为口腔颌面鳞状细胞癌（SCC）。口腔白斑为一种癌前病变，Halder等［31］发现，黑茶可显著降低口腔白斑患者的微核率和染626