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一株高耐铜菌株的分离及富集特性研究

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中国分类号 ：１２ Ｘ ７
由于重 金 属离子 在 自然 环境 中不 能降 解并 能通 过食 物链 积 累 ， 终造 成 对 人 体 的 毒 害 ， 最 因此 ， 界 各 世
国都非 常重 视对 重金 属废 水 的处 理． 统 的处理 方法 主 要是 物 理 和化 学 的方 法 ， 离 子 交换 法 、 传 如 活性 炭 吸
ｌ 、 分 别为 培养 基 中起始 铜离 子质 量浓 度 （ ／ Ｄ ０ ｍｇ Ｉ ）和 ｔ 时刻 培养 基 中铜离 子质 量浓 度 （ ／ ． ０为容 量 ｍｇ Ｌ） ５
瓶容积 （ ｍＬ） １ ０ ， ０ ０为 变换 常数．
２ 结 果 与讨 论
２ １ 菌 种 的筛选 与 鉴定 ．
第 ｌ 期
王 金 ． ： 株 高耐 铜 菌 株 的 分 离 及 富 集 特 性 研 究 等 一
培养 到 一定 时间达 最大 值 而后 随培养 时 间延 长富集 量反 而下 降．
２ ４ 初 始 ｐ 对 富 集 的 影 响 ． Ｈ
在初 始铜离 子 的质 量浓 度 为 ５ ／ 富集 时间 为 ７ 、８℃ 、 ５ ／ ｎ 接 种 量 １ ， 变富 集 的 ０ｍｇ Ｌ、 ２ｈ ２ １ ０ｒｍｉ、 Ｏ 改 初 始 ｐ 值 ， 究 ｐ 与铜 富集 量之 间的关 系． Ｈ 研 Ｈ 结果 如 图 ４ 随着 ｐ 的 升高 ， ， Ｈ 菌体 的富集 量 也随 着增 大 ， 在低 ｐ 时 ， 集 量低 可能 是 由于 菌体 表 面 Ｈ 富
（） ２ 化学 试 剂 Ｃｕ ＮＯ ） ３ Ｏ Ａ 级 ， 国医药 （ 团） （ 。 。・ Ｈ。 Ｒ 中 集 上海 化学 试剂 公 司 生产 ． 成 铜离 子 质量 浓 配
度为 １０ ０ｍｇ Ｌ的贮 备液 备用 ． ０ ／ （ ） 养基ｍ］ 分 离培 养基 （ 肉膏 蛋 白胨培 养基 ） 富集 培养基 （ Ｄ 培养 基） 查 氏培养 基 ． ３培 ． 牛 ， Ｐ Ａ ，
摘 要 ： 安 徽 铜 陵 铜 尾 矿 土 壤 中筛 选 到 一 株 对铜 具有 较 强 抗 性 并 具 有 较 强 富 集 能 力 的 丝 状 真 菌 ・ 据 其 形 态 从 根 特 征 初 步 鉴 定 为 曲 霉 属 ． 铜 离 子 浓 度 与 菌体 生 长 以 及影 响 富 集 量 的 因 素 进 行 了研 究 ・ 果 表 明 ： ｐ ． ・ 对 结 在 Ｈ ４
在 Ｃ 。 质 量 浓度 为 ５ ０ｍｇ Ｌ培 养液 中筛选 到 一株霉 菌 ， ｕ ６ ／ 菌落 照 片见 图 １该 菌 株在 查 氏培养 基 中生 ． 长速度 中等 ， 菌落 初期 为淡 黄 色 ， 着生 长颜色不 断 加 深 ， 随 老后 为 深绿 色 ， 落 边缘 整 齐 ， 菌 隆起 ， 粒 状 ， 粉 菌 落反面 淡黄褐 色 ， 气生 菌丝 白色 ， 丝有 隔 ， 子囊球 形 ， 生 孢子 单 细胞 ， 形 ， 定 为 曲霉 属 （ ｐ ｒｉ 菌 孢 分 球 鉴 Ａｓ ｅｇｌ —
图 ５ ．
由图 ５ 可 知在 初 始铜离 子 质量 浓度 小 于 ５ ／ ， 培 养 ７ ． ０ｍｇ Ｉ 时 在 ２ ｈ条 件 下 富集 随着 铜 离子 质 量 浓 度 的增 大而增 大 ， 在铜 离 子质 量浓 度为 ５ ／ ５ｍｇ Ｌ时 达最 大值 ， 高于 ５ ／ 而 ５ｍｇ Ｌ时 富集量 反 而有所 下 降 ， 可 这 能是 由于铜 离 子质 量浓 度高 时使 细胞 成分 改 变 ， 造成 菌 体对 吸附 的抑制 作用 增强 ．
・
２ ・ ０
安
徽
工
程
科
技
学
院
学
报
Ｃ 。 离 子质 量浓 度 ，８℃， ５ ／ ｎ 每天 取样 一次 ， ｕ ２ １ ０ｒｍｉ ， 以不 含 铜 离 子培 养 基 作 为对 照 ， ０℃烘干 至 恒 重 ， ８ 经浓 硝酸 消化后 于 ４ ０℃灰 化 ， ５ 然后 用 原子 吸收分 光光 度计 测定 铜含 量． （ ） 含量 的 测定． 用 Ｗ Ｆ － １ ０原子 吸收 分光 光度 计测 定． ５铜 使 Ｘ－ １
第 ２ 卷第 １ ２ 期 ２０ ０ ７年 ３月
安 徽 工 程 科 技 学 院 学 报 Ｊ ｕ ｎ ｌ ｆ ｈ ｉ ｉｅｓ ｙｏ ｅ ｈ ｏｏ ｙ ａ ｄ Ｓ ｉ ｃ ｏ ｒａ ｏ Ａｎ ｕ Ｕｎｖ ｒｉ ｆ ｃ ｎ ｌｇ ｎ ｃ ｎ ｅ ｔ Ｔ ｅ
Ｖｏ ． ２ Ｎｏ １ Ｉ２ ． ．
途径 ．
１ 材 料 和 方 法
１ Ｉ 材 料 ．
（） １ 土样 ． 自安 徽某 铜尾 矿库 ， 一部 分 置于 ８ 采 取 ０℃烘 箱 中烘 干 至恒重 并 测 定其 中铜 含量 ． 测 定 其 经
中铜 含量最 大 为 １ ４ ｇ ｇ 最小 值 为 ２０ ｇｇ 说 明该 土壤 为铜 污染 严重 的 土壤． ０ｕ ／ ， ０ ８ ／ ，
导地 位． 因此 ， ｐ 在 Ｈ＜５的 范 围内 ， 高 ｐ 都 有利 于对铜 离子 的 富集． 升 Ｈ
２ ５ 铜 离子质 量 浓度对 富 集的 影响 ．
ｐ Ｈ＝４ ４ ２ ． 、 ８℃ 、 ５ ／ ｎ 培 养 时间为 ７ ｌ ０ｒｍｉ， ２ｈ条件 下 ， 究 最初 铜 离 子 质量 浓 度 与 富 集量 的关 系 ， 研 如
的 关 系 如 图 ３ ．
培 养时间， ｝ Ｉ
Ｐ Ｈ
图 ３ 培 养 时 间 与 富 集量 的关 系
图 ４ ｐ 与 富 集 量 的关 系 Ｈ
从 图 ３ 以看 出 ， 着时 间的延 长富集 量 也随着 增 大 ， 可 随 在培 养 ７ 集 量达 到 最 大值 为 １ ． ７ｍｇ ｇ ２ｈ富 ２ ８ ／ 干菌 体 ， 然后 富集 量随 着 时间 的延 长而略 有下 降． 可 能是 由于 随 着菌 体 的生 长 营 养物 质 的不 断 被 消耗 ， 这 从 而死亡 菌体 数 量不 断增 加并 发生 白溶作 用 ， 成 富集 在菌 体上 的铜 发生 解析 作 用 ， 而使 菌 体 富集量 在 造 从
Ｍ ａｒ ２ ０７ ．。 ０
文章 编 号 ： ６ ２ ４ ７ ２ ０ ） １ ０ ９ ４ １ ７ —２ ７ 【 ０ ７ ０ —０ １ —０
一
株 高 耐铜 菌株 的分 离及 富集 特 性 研 究
王 金 ， 庆 庆 ， 张 汤 斌
（ 徽 工 程 科 技 学 院 生 化 工 程 系 ． 徽 芜 湖 ２ １ ０ ） 安 安 ４０ ０
初 始 铜 离 子浓 度 ５ ／ 培 养 时 间 为 ７ ， 大 富 集 量 为 １ ． ７ｍｇ ｇ干 菌 体 ， 铜 的 最 大 去 除 率 为 ８ ． ０ｍｇ Ｌ， ２ｈ最 ２ ８ ／ 对 ４
６ ％． ５
关
键
词 ： 离 子 ； 集 ； 状 真 菌 铜 富 丝 文献标识码 ： Ａ
的官 能 团被 Ｈ 或 Ｈ Ｏ 所 占据 ， 由于斥 力 的作 用 而 阻 挡 金属 离 子 和 细 胞靠 近 ，Ｈ 越低 斥力 越大 ［ 当 ｐ １ ．
ｐ Ｈ≥ ５时 ， 溶液 会形 成 一定程 度 的沉淀且 随 ｐ 的升 高逐渐 增 大 ， Ｈ＞９时 ， 氧根 离 子 沉淀 作用 占主 铜 Ｈ ｐ 氢
ｌｓＥ ｕ ） 引．
５０ ０ ４０ ０
∞
槲 ３０ ０
Ｈ一
２０ ０
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ｌ０ ｏ
０
ｏ
２ ４
４ ７ ９ ｌ ０ ｌ４ ｌ ８ ８ ２ ６ ２ ４ ６
正面
反 面
培养 时间， ｈ
图 ｌ 菌 落 照 片
图 ２ 菌体 生 长 曲线
２ ２ 菌株 在含 铜 离子培 养 基 中生长 状况 ． 菌 株在 铜离 子 质量浓 度 分别 为 ２ｍｇ Ｌ、０ ／ １ ０ｍｇ Ｌ液体 培养 基 中生 长状 况 如 图 ２ 菌株 能够 ／ １ ｍｇ Ｌ、８ ／ ．
（） ６ 富集量 的计 算． （ ） 按 ４ 的条 件培 养 取样 后 ， 心 ， 别 测定 上 清 液 和菌 体 中 的铜 含 量．按 以下 公 式 离 分 计算 菌体 中铜 含量 Ｑ及 溶液 中铜 的去 除率 ＇ ７ ：
Ｑ 一
口
一
，
（） １
㈤
，
式 （ ） （ ） Ｑ为富集 量 （ ／ ）Ｃ为测 出的铜离 子质 量浓 度 （ ／ ） Ｎ 为稀 释倍 数 ， 为菌 体重 量 （ ） １ 、２ 中 ｍｇ ｇ ， ｍｇ Ｌ ， Ｍ ｇ，
收 稿 日期 ： ０ ６ １ 一３ ２０— Ｏ １
基金 项 目 ： 徽 省 教 育 厅 自然 科 学 基 金 资 助 项 目（０ ５ ］Ｏ ） 安 ２ ｏ ｋＩ ５ 作者 简 介 ：王 金 （９ ４ ） 男 ， 北 承 德 人 ， 士 研 究 生 ； 庆 庆 （９ ４ ） 女 ， １７一 ． 河 硕 张 １ ５ 一 ， 安徽 怀 宁 人 ・ 教授 ， 导 ． 副 硕
在含铜 的液体培 养基 中正 常 生长 ， 与对 照菌 生长速 率 相 当 ， 乎 是 同 时到 达稳 定 生 长 期 ， 明该 菌 株 对铜 几 表
具有较 强 的耐受 性．
２ ３ 培养 时 间对 富集 的影 响 ． 初 始铜 离子 质量 浓 度 为 ５ ／ ｐ ０ｍｇ Ｌ、 Ｈ一４ ４ ２ ． 、 ８℃ 、５ ／ ｎ 接 种 量 １ ， １ ０ ｒｍｉ 、 Ｏ 培养 时 间 与 富集 量 之 间
（） ２ 铜离 子对 耐铜 菌株 生 长 的影响 ． 菌株接 种 到铜 质量 浓度 为 ２ｍｇ Ｌ、０ｍｇ Ｌ、 ８ ／ 将 ／ １ ／ １ ０ｍｇ Ｌ液体 培
养基 中 ，８℃ ， ５ ／ ｎ 定 时 取样 ， ２ １ ０ｒｍｉ， 菌体 于 ８ ０℃烘干 称菌 体干 重． 以不 含铜离 子 培养 基 作为对 照 ．
附法 、 化学 沉淀 法 和电化 学 的方法 等 ， 应用 这些方 法 取得 了一 定 的效果 ， 但是 耗 资大且 易造 成 二次 污染 ． 因 此 ， 用微 生物 对重 金属 离 子的 吸 附（ 利 富集 ） 究成 为 当前 国内外 的一个 新 兴研究 领 域． 研 近年来 ， 多学 者研 究 了藻类 、 许 酵母菌 、 细菌 、 菌 对 重 金属 的吸 附 作用 ． 霉 卜 对微 生 物吸 附 重 金属 离 子 的现象 和机 理也进 行 了大 量 的研究 ￣ ， 究表 明微 生 物 吸附 重 金属 存在 静 电吸 引 、 １ 研 络合 、 积 和 主动 沉 运输 等作 用． 是这 些研 究 大多 以死 菌体 为研 究对象 ， 但 而对 于 活 菌体 的研 究 报 道 较少 ． 文从 铜 尾 矿分 离 本 出对 铜有 较强 耐性 的霉 菌 ， 并研 究 了活 的霉菌 对铜 离子 的富 集特 性 ， 以期 为含 铜废 水 的治理 开辟 一条 新 的

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《耐盐耐重金属PGPR菌株的筛选及促生作用研究》范文

《耐盐耐重金属PGPR菌株的筛选及促生作用研究》范文

《耐盐耐重金属PGPR菌株的筛选及促生作用研究》篇一一、引言近年来，随着工业化和城市化的快速发展，土壤和水体中的盐分和重金属污染问题日益严重。

这些污染物对农作物的生长和产量产生负面影响，从而对人类的食品供应和生态环境带来挑战。

耐盐耐重金属的PGPR（Plant Growth Promoting Rhizosphere Bacteria）菌株具有显著的潜力在农业和环境治理中发挥作用。

它们不仅能够促进植物生长，而且能够在盐和重金属的胁迫条件下存活和繁殖，进而有助于土壤环境的改善和植物抗逆性的提高。

因此，对耐盐耐重金属PGPR菌株的筛选及其促生作用的研究具有重要意义。

二、耐盐耐重金属PGPR菌株的筛选1. 采样与分离本研究在多个受盐碱和重金属污染的农田中采集土壤样品，通过梯度稀释法进行PGPR菌株的分离和纯化。

在分离过程中，我们特别关注那些能够在高盐和高重金属浓度条件下生长的菌株。

2. 耐盐性检测利用不同浓度的NaCl溶液进行菌株的耐盐性检测。

通过观察各菌株在不同浓度NaCl条件下的生长情况，筛选出耐盐性较强的菌株。

3. 耐重金属性检测采用不同浓度的重金属溶液（如Cu、Pb、Zn等）进行菌株的耐重金属性检测。

通过比较各菌株在不同重金属浓度下的生长情况，筛选出耐重金属性较强的菌株。

4. 鉴定与保存对筛选出的耐盐耐重金属PGPR菌株进行分子生物学鉴定，确定其种类和特征。

将筛选出的菌株在-80℃下进行保存，为后续研究提供基础材料。

三、耐盐耐重金属PGPR菌株的促生作用研究1. 生长促进作用试验在室内外条件下，将筛选出的PGPR菌株与农作物（如小麦、玉米等）进行共培养。

通过观察和测定农作物的生长情况，评估PGPR菌株对农作物生长的促进作用。

2. 生理生化机制研究通过测定农作物的光合作用、营养吸收等相关生理指标，探究PGPR菌株促进作物生长的生理生化机制。

此外，还利用基因芯片、PCR等技术，对PGPR菌株与农作物互作过程中的基因表达进行分析。

一株高效脱氮菌株的分离鉴定及应用潜力分析

一株高效脱氮菌株的分离鉴定及应用潜力分析

一株高效脱氮菌株的分离鉴定及应用潜力分析张家顺;吕娜;田长城;李贇;潘鲁青【摘要】为了获得对虾养殖池塘中高效去除亚硝态氮和氨氮的菌株,采用富集培养分离的方法,从养殖水体中筛选得到1株去除亚硝态氮和氨氮的菌株,培养24 h后的去除率分别为96.17%和88.27%,编号为O-11.基于形态学、分子生物学及生理生化鉴定结果,明确了该菌株基本生物学特征以及可能的分类地位.分离菌株在20~30℃时有利于亚硝态氮的去除,而温度为20~35℃时对氨氮的去除效果较好;分离菌株在盐度小于30的环境中对亚硝态氮的去除能力受盐度变化的影响不大;在碱性环境中分离菌株对氨氮的去除能力较高.安全性检验可知,在菌浓度为105~108 cfu/mL的菌株O-11对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)是安全的,且在菌浓度为105 cfu/mL时能显著提高对虾的存活率,促进对虾生长.这说明,分离菌株O-11在水产养殖水体中有害氮脱除方面具有潜在的应用价值.%Nitrogen accumulation is one of the major causes of water pollution and eutrophication in aquaculture. Excessive amounts of the toxic forms of nitrogen (ammonia and nitrite) have a considerable effect on the survival and growth of aquatic organisms and thus lead to huge economic loss in aquaculture. Biological nitrogen removal technology is an efficient process for nitrogen removal from water in aquatic habitats, wherein probiotic bacteria convert nitrite-N into nitrate nitrogen (nitrate-N) or nitrogen gas. Moreover, owing to lower energy consumption and operation cost, this technology is commonly used in aquaculture. Many studies have used several kinds of bacteria to reduce the toxic effects of nitrogen and demonstrated an improvement in water quality. The present study aimedto identify bacteria that efficiently removed nitrite nitrogen and ammonia nitrogen. The strain O-11 was isolated from shrimp culture water after enrichment culture and had removal efficiency for nitrite nitrogen and ammonia nitrogen of 96.17% and 88.27%, respectively, in 24 h. Molecular biological and physiological and bio-chemical identification revealed that the strain was closely related to Marinomonas communis. The isolated strain O-11removed nitrite nitrogen more efficiently when the temperature ranged from 20℃ to 30℃, while ammonia nitrogen removal was better when the temperature ranged from 20℃ to 35℃. The nitrite nitrogen removal ability of the isolated strain was stable when salinity was less than 30, while the ammonia nitrogen removal ability was considerably higher in alkaline conditions. A safety assessment revealed that the strain O-11 was safe for Litope-naeus vannamei when the initial bacterial concentration ranged from 105 to 108 cfu/mL. The survival rate and growth rate of experimental L.vannamei significantly increased when the initial bacteria concentration was 105 cfu/mL. These results demonstrated great potential value of the isolated strain O-11 as a suitable candidate for the removal of harmful forms of nitrogen from aquaculture water.【期刊名称】《中国水产科学》【年(卷),期】2017(024)004【总页数】9页(P757-765)【关键词】亚硝态氮;氨氮;分离鉴定;海单胞菌;应用潜力;对虾养殖池【作者】张家顺;吕娜;田长城;李贇;潘鲁青【作者单位】中国海洋大学教育部海水养殖重点实验室, 山东青岛 266003;中国海洋大学教育部海水养殖重点实验室, 山东青岛 266003;中国海洋大学教育部海水养殖重点实验室, 山东青岛 266003;中国海洋大学教育部海水养殖重点实验室, 山东青岛 266003;中国海洋大学教育部海水养殖重点实验室, 山东青岛 266003【正文语种】中文【中图分类】S94伴随对虾集约化养殖模式的快速发展, 高密度养殖残饵及养殖动物排泄物等成为养殖水体的主要污染源。

一株耐铜细菌的鉴定及富集特性的研究_王海鸥

一株耐铜细菌的鉴定及富集特性的研究_王海鸥


铜离子含量。
将分离纯化后的菌株进行形态观察，生化鉴定
及 16S rDNA 分子生物学的鉴定。
2 结果和讨论
将待 测 菌 株 接 种 于 液 体 培 养 基 中，30 ℃ ， 2． 1 菌株鉴定
200 r / min振荡培养 1 d。采用 Bio-red 公司生产的
董 新 娇 等［8］研 究 中 筛 选 出 的 菌 株 耐 受 铜 的 浓
驯化达到高耐受能力。本实验分离纯化出未经驯 化的天然 耐 Cu2 + 浓 度 为 560 mg / L 的 菌 株 USTBE，说明本菌株自身长期在高铜 土 壤 环 境 中 生 长， 具有 较 高 耐 受 铜 离 子 毒 性 的 能 力，而 且 具 有 一 定遗传稳定 性，可 在 后 续 的 修 复 实 验 中 利 用 此 种 特性。
（ USTB-E菌在此浓度下生长状态最好，数据未出示） 中 可 以 看 出，待 测 菌 株 USTB -E 与 Pesudomonas
液体牛肉膏蛋白胨培养基接种所筛菌株的 12 h 培 geniculata XJUHX-10、18 及 19 同源性最高，结合形
养液，30 ℃ ，200 r / min 摇床培养，根据菌株生长情 态和生化鉴定结果可确定待测菌株 USTB-E 属于假
究。E-mail： wanghaiou@ ustb． edu． cn
第 10 期
王海鸥等： 一株耐铜细菌的鉴定及富集特性的研究
2381
配制 含 铜 培 养 基，使 培 养 基 中 Cu2 + 浓 度 为 OD600 nm为纵坐标，绘制细菌生长曲线。 20 mg / L，将筛 选 出 的 菌 株 接 种 到 该 浓 度 平 板 上， 1． 2． 5 生物吸附量的测定
铜污染土壤中耐铜微生物的筛选与分离

铜污染土壤中耐铜微生物的筛选与分离

铜污染土壤中耐铜微生物的筛选与分离作者：刘婷婷滕金浩来源：《安徽农业科学》2019年第02期摘要[目的] 探索受铜污染土壤的微生物修复方法。

[方法]运用单因素分析方法对受铜浓度胁迫的微生物进行筛选分离以及驯化。

[结果]分离得到4种不同菌株，其中MD1菌株的铜耐受极限为4 000; mg/L，MD2菌株的铜耐受极限为6 000; mg/L，N1菌株的铜耐受极限为1 000 mg/L，ML菌株的铜耐受极限为8 000; mg/L。

经TAS-990F火焰原子分光光度计检测后其对铜离子吸附能力依次为10.420、16.884、9.764、23.309; mg/g。

[结论]ML菌株能较好地生成菌胶团，可作为耐铜微生物工业化生产的优良菌种。

关键词耐铜微生物;土壤修复;重金属污染;筛选中图分类号S154.3文献标识码A文章编号0517-6611（2019）02-0060-04doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2019.02.018重金属污染土壤中的的铜多以硫化物、硫酸盐的形式存在，并具有隐蔽性、长期性和滞后性的特性[1]。

其主要污染来源为污水灌溉、化工生产、矿石开采及冶炼等[2]。

植物可通过根吸收土壤中的铜，在各部分累积分布，且多数为根>茎、叶>果实。

但少数植物体内铜的分布与此相反，如丛桦叶则为果>枝>叶[3]。

调查发现，在铜污染土壤生长的植物，含铜量为正常植物的33～50倍[4]。

被植物吸附的铜可经过食物链进入人体，当人体器官中富集、残存了大量铜之后，容易对脏器产生负担，特别是对肝脏和胆囊伤害，易于产生溶血性黄疸、肾功能衰竭等症状[5]。

因此，我国于2008年修订的《土壤质量环境标准（GB 15618—2008）》规定了土壤中铜含量不超过50 mg/kg[6]。

目前铜污染土壤修复技术主要为化学试剂改良等化学方法，这些技术成本较高且易引起二次污染，故利用微生物技术治理铜污染土壤已成为研究的前沿和热点[7]。