MTT法测细胞毒性

小议在MTT法测细胞增殖抑制率中IC50的计算方法一、本文概述本文旨在探讨MTT法（四唑盐比色法）在细胞增殖抑制率测定中IC50（半数抑制浓度）的计算方法。

MTT法是一种广泛应用于生物学、医学等领域的细胞增殖与细胞毒性检测方法，其原理基于活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性的MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。

因此，通过测定甲瓒的生成量，可以间接反映活细胞数量。

而IC50作为评价药物对细胞增殖抑制效果的关键指标，其准确计算对于药物研发、药效评价以及临床用药等方面具有重要意义。

本文将首先介绍MTT法的基本原理和实验步骤，然后重点阐述IC50的计算方法，包括线性回归法、概率单位法等多种方法，并对各种方法的优缺点进行评述。

本文还将讨论影响IC50计算准确性的因素，如实验条件、细胞类型、药物浓度范围等，并提出相应的改进措施。

本文将总结MTT法测细胞增殖抑制率中IC50计算方法的实际应用和前景展望，以期为相关领域的研究提供有益的参考和借鉴。

二、MTT法测细胞增殖抑制率的实验步骤细胞准备：选择适合实验需求的细胞系，并进行传代培养至对数生长期。

确保细胞状态良好，无污染，并且有足够的数量用于实验。

药物准备：根据实验需求，选择待测试的药物，并按照预定的浓度范围进行稀释。

通常，药物浓度设置应覆盖多个数量级，以便更准确地测定IC50值。

细胞接种：将细胞以适当的密度接种到96孔板中。

确保每孔细胞数量一致，以便后续实验结果的准确性。

药物处理：向每个孔中加入不同浓度的药物，同时设置对照组（无药物处理）和空白组（无细胞，仅培养基）。

每个浓度通常设置多个复孔，以减少实验误差。

培养：将96孔板放入培养箱中，按照细胞生长所需的条件进行培养。

培养时间根据细胞类型和实验需求而定，通常为24-72小时。

MTT处理：在培养结束前4小时，向每孔中加入MTT溶液（通常为5mg/mL）。

MTT会被活细胞中的线粒体还原成紫色甲瓒晶体，从而反映细胞的存活情况。

MTT原理方法及操作步骤MTT（3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑溴化物）是一种常用的细胞增殖测定试剂，用于定量测定细胞的存活情况。

MTT的工作原理：MTT原理是基于还原型特种金属试剂Florida Cyanide。

MTT可进入细胞内部，被活细胞内的膜连蛋白酶还原为水溶性紫色化合物，甲基化噻唑胺盐（formazan）。

甲基化噻唑胺盐可溶于有机溶剂如DMSO或乙醇。

MTT的量越多，被还原为甲基化噻唑胺盐越多，即细胞活性越高。

MTT的操作步骤：1.预处理细胞将需要检测细胞的培养基倒入培养皿中，将获得的细胞悬液加入培养基中，根据实验要求进行设定浓度和培养时间。

2.处理试剂根据常规的MTT工作浓度（通常为0.5 mg/ml），将MTT试剂精确称取并溶解在无菌的溶剂（例如PBS）中。

3.细胞处理将培养中的细胞培养液抽取约100μl至新的96孔板孔中，并注意控制每个孔中细胞数相同时的培养基体积。

4.加入MTT试剂将所制备的MTT溶液以100μl的体积的溶液加入到培养细胞上，并尽量在操作中迅速搅拌均匀，以使MTT均匀分布。

5.细胞孔板孔的处理将MTT试剂添加到孔中后，覆盖板密封（如用保鲜膜密封）。

然后将培养皿放入暗处，37°C培养孔中的细胞进行inculbation与MTT碳酸酯酶的反应。

通常培养12至24小时，可以根据具体实验情况延长培养时间。

6.细胞孔中溶解甲基化噻唑胺盐将培养平皿中的培养液取出约50μl，悬浮溶解掉的甲基化噻唑胺盐，再加入200μlDMSO混合均匀。

7.测定吸光度将孔中的溶液分别转移到透明壁的96孔板，并使用微孔板阅读装置（Multiskan Spectrum）在570 nm波长下测定吸光度。

DMSO溶液作为空白参照，用作光强的基准。

8.数据分析根据检测吸光度得到的数据，计算出每个孔的平均值，并根据实验要求，进行数据图表分析。

总结：MTT法是一种可靠、灵敏、简单、可重复性好的细胞增殖测定方法。

MTT法评价4种医用材料的细胞毒性郑旭;王莉芳;陈芳;孙发展;罗晶【摘要】目的研究4种医用材料的细胞毒性.方法按照GB/T16886.5-2003/ISO10993-5:1999的体外细胞毒性评价方法要求,用MTT比色法评价4种医用材料的细胞毒性.结果 4种医用材料均表现出较高的细胞相对增殖率,其细胞毒性为1级.结论 4种医用材料对细胞形态、生长和增殖不构成损害,无明显细胞毒性,具有良好的细胞相容性.%Objective To evaluate cytotoxicity of four medical materials. Methods According to the method of GB/T16886. 5-2003/ISO10993-5:1999, MTT method was used to analyze the cytotoxicity of the four medical materials. Results The four medical materials displayed a high relative proliferation ratio and their cytotoxicity was grade 1. Conclusion The four medical materials have no obvious cytotoxicity.【期刊名称】《西北药学杂志》【年(卷),期】2011(026)005【总页数】2页(P363-364)【关键词】细胞毒性实验;MTT比色法;浸提液【作者】郑旭;王莉芳;陈芳;孙发展;罗晶【作者单位】陕西省食品药品检验所,陕西西安710061;陕西省食品药品检验所,陕西西安710061;陕西省食品药品检验所,陕西西安710061;陕西省旬邑县土桥中心卫生院,陕西旬邑711304;陕西省食品药品检验所,陕西西安710061【正文语种】中文【中图分类】R965细胞毒性实验对检测医疗用品的毒性是一种比较灵敏的方法,由于许多医疗用品经异常毒性实验、刺激实验、植入实验为阴性,而经细胞毒性实验为弱阳性。

-cho的检验方法CHO检验方法是一种常用的实验技术，在生物和医学研究中被广泛使用。

CHO是指一种来源于小鼠卵巢的细胞系，它具有易于培养和增殖的特点，因此被广泛应用于细胞生物学、分子生物学以及生物工程领域。

CHO细胞的检验方法可以用来评估不同物质对细胞生长和增殖的影响，包括细胞毒性和抗肿瘤活性等。

以下是一些常见的CHO细胞检验方法：1. MTT法：MTT法是一种常用的细胞增殖检测方法，基于细胞内的邻苯二甲酸酯酶（MTT酶）将黄色的3-(4,5-二甲基噻唑-2-yl)-2,5-二苯基三唑溶液还原为紫色的甲:露酮盐沉淀物。

该方法可以快速、准确地评估物质对CHO细胞增殖的影响。

2.絮聚试剂法：絮聚试剂法是一种常用的细胞毒性检测方法，基于CHO细胞对有毒化合物的敏感性。

在该方法中，CHO细胞被暴露在不同浓度的化合物中，并通过评估细胞的结构破损、细胞膜完整性和细胞内酶活性等指标，来判断物质的毒性。

3.焦墨法：焦墨法是一种常用的微核试验，用于评估物质对细胞染色体的影响。

该方法通过染色体核型分析和微核的形成情况来判断物质对细胞染色体的损伤程度。

该方法具有高灵敏度和特异性，并且可以用于检测物质对细胞基因组稳定性的影响。

4.干扰素产生试验法：干扰素产生试验法是一种常用的细胞免疫学技术，用于评估物质对干扰素产生的影响。

该方法通过检测CHO细胞对刺激物质的反应，来判断物质对细胞免疫功能的影响。

这可以提供有关物质对CHO细胞的免疫调节能力的信息。

综上所述，CHO细胞的检验方法是一种重要的实验技术，可以用来评估物质对细胞生长、增殖、毒性和免疫功能的影响。

这些方法可以提供有关物质对CHO细胞生理和生化特性的信息，从而为生物和医学研究提供重要的实验数据。

在未来的研究中，可以进一步开发和完善CHO细胞的检验方法，以更好地评估物质的毒性和功效，并应用于新药研发和毒理学评估等领域。

这将有助于提高药物安全性，减少药物开发失败率，并推动生物和医学科学的发展。

MTT法实验步骤MTT法是一种常用的细胞增殖试验方法，适用于评价化合物、毒性物质等对细胞增殖和生长状态的影响。

接下来介绍MTT法的实验步骤。

步骤一：细胞预处理在进行实验之前，需要对细胞进行预处理。

首先，准备好需要的细胞品种，如HUVEC、HeLa等。

将细胞分装入培养皿中，接种到适宜的培养基中进行生长，培养条件包括暗、湿润、细胞所需的适宜温度和CO2浓度等。

细胞的种植密度因品种而异，需根据实验要求确定。

步骤二：处理试样用需要测定细胞的生长状态的化合物或药物浓度制备一系列的试验处理液。

加入选定的浓度改变试验物的细胞培养基中，使培养液和细胞充分接触，最终使改变的剂量溶液和细胞达到相互作用和影响的平衡状态。

对照组应该包括无药物处理组、阳性对照组和阴性对照组。

步骤三：MTT染色生物学分析的结果主要通过着色反应证实。

选择细胞培养1天至3天后的生长期，取出细胞培养硅水形成的单层细胞，将试验处理液完全移去，倒入一定浓度的MTT染料（约为5mg/ ml）的培养皿中，混匀后放回培养箱中培养。

MTT染料在体外具有还原性，其主要成分为黄色水溶性四磺基偶氮苯（MTT）和紫色可相溶物态可由于细胞增殖产生的相应蓝色多聚物。

MTT染液不仅具有良好的穿透性和选择性，而且可定量测定，适用于不同的细胞系统和不同种类的化合物。

步骤四：形成水溶性紫色产物经过一定时间（约2-4小时）培养后，将培养皿中MTT染色液吸出，然后加入DMSO。

MTT染色液中的紫色物质由细胞代谢经水解而变成水溶性紫色产物，最后可通过龙头苏作用的吸波测定在492nm处检测吸收光强，并且不受外界因素干扰。

得到各个试验条件下的吸收值后，可通过软件计算出各个试验条件下的相应生长率，以求得影响细胞增殖状况的药物剂量，进一步评价其生物学活性。

综上所述，MTT法的实验步骤比较简单，但是实验操作需规范严格。

掌握好实验步骤，才能更好地进行生物学分析和评价药物、毒物等对细胞增殖和生长的影响。

MTT的操作‎方法一、MTT是什么‎MTT是一种‎粉末状化学试‎剂，全称为3-(4,5)-dimeth‎y lthia‎h iazo (-z-y1)-3,5-di- phenyt‎e trazo‎liumro‎m ide，汉语化学名为‎3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑‎溴盐，商品名：噻唑蓝。

是一种黄颜色‎的染料。

二、MTT法用来‎做什么简单地说：是一种检测细‎胞存活和生长‎的方法。

MTT主要有‎两个用途1．药物（也包括其他处‎理方式如放射‎线照射）对体外培养的‎细胞毒性的测‎定；2．细胞增殖及细‎胞活性测定。

三、为何MTT可‎以用来做上述‎工作检测原理为活‎细胞线粒体中‎的琥珀酸脱氢‎酶能使外源性‎M TT还原为‎水不溶性的蓝‎紫色结晶甲瓒‎（Formaz‎a n）并沉积在细胞‎中，而死细胞无此‎功能。

二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中‎的甲瓒，用酶标仪在490nm‎波长处测定其‎光吸收值，在一定细胞数‎范围内，MTT结晶形‎成的量与细胞‎数成正比。

根据测得的吸‎光度值（OD值），来判断活细胞‎数量，OD值越大，细胞活性越强‎（如果是测药物‎毒性，则表示药物毒‎性越小）。

四、实验所需材料‎1．MTT 溶液的配制通常MTT 配成的终浓度‎为5mg/ml,须用PBS或‎生理盐水做溶‎剂。

市面上一般M‎T T的包装为‎100mg,250mg或‎1g1.1对于100‎m g这样的小‎包装，厂家都是将M‎T T放入小管‎中的，个人建议不要‎再用天平称量‎分装，而应该一次性‎将其全配制成‎溶液，如100mg‎用20mlP‎B S来溶解。

具休做法：预先在50m‎l离心管（没有的话，可用培养瓶替代）加入20ml‎PBS，从中先吸取5‎00-1000u l‎PBS装入含‎M TT的小管‎中，吹打若干次后‎将其移入50‎m l离心管，然后再混匀。

可以重复几次‎，以使小管中的‎M TT不残留‎于管内。

1. 前言1.1 概述在化学实验中，比色实验是一种常见的分析方法，用于测定物质溶液中某种物质的含量或浓度。

其中，MTT比色实验是一种常用的细胞生物学实验方法，用于评估细胞的生存率和细胞增殖活性。

本文将介绍MTT比色实验的原理及其应用。

2. MTT比色实验的原理2.1 MTT试剂MTT（3-(4,5-二甲基-2-硝基苯基)-2,5-二苯基四唑）是一种黄色的溶液，在生物体内不能直接被细胞摄取。

MTT试剂通过细胞内的还原酶将其转化为紫色的可溶性甲醛盐类产物。

MTT试剂的溶液可以通过重复稀释的方式进行配制。

2.2 细胞培养在进行MTT比色实验之前，需要先培养细胞。

细胞培养通常使用含有营养物质的培养基，培养细胞时需要注意细胞密度的控制，避免细胞过于稀释或过度分裂。

2.3 实验步骤2.3.1 细胞处理将待测细胞接种于培养板中，并根据需要进行处理，例如添加药物、改变培养条件等。

2.3.2 加入MTT试剂将MTT试剂溶液稀释至适当浓度后，将其加入培养板中，培养细胞与MTT试剂进行孵育。

2.3.3 溶解MTT产物将孵育后的细胞-试剂混合物中的培养基倒掉，使用合适的溶剂（如二甲基亚砜）将紫色产物溶解。

2.3.4 测量吸光度使用酶标仪或分光光度计测量溶液的吸光度，根据吸光度值反映细胞的生存率或增殖活性。

2.4 原理解释MTT比色实验的原理基于细胞的代谢活性和酶系统的存在。

活性细胞内的还原酶能够将黄色的MTT试剂还原为紫色的形式，形成可溶性产物。

产生的紫色产物的吸光度与细胞活性或增殖活性成正相关。

3. MTT比色实验的应用3.1 细胞毒性测试MTT比色实验常用于评估化合物的细胞毒性。

通过处理细胞与待测化合物，可以了解化合物对细胞生存率的影响，从而评估其毒性。

3.2 细胞增殖测定MTT比色实验还可以用于测定细胞的增殖能力。

通过比较不同处理组中细胞的吸光度值，可以评估细胞增殖的变化。

3.3 药物筛选MTT比色实验在药物筛选领域也有广泛的应用。

产品简介：1. MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit)被广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的实验方法。

由于细胞活力与细胞数呈正相关，因此常常用来检测细胞的增殖情况。

MTT可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成结晶状的深紫色产物formazan。

在特定溶剂存在的情况下，可以被完全溶解。

然后通过酶标仪可以测定570nm波长附近的吸光度。

细胞增殖越多越快，则吸光度越高；细胞毒性越大，则吸光度越低。

2. 本试剂盒采用了独特的Formazan溶解液配方，无需去除原有的培养液，可以直接加入Formazan溶解液溶解formazan。

从而避免了由于去除培养液时formazan被部分去除而引起的误差。

3. 本试剂盒背景低，灵敏度高，线性范围宽，使用方便提高了可靠性。

4. 本产品为500 次（5个96孔细胞培养板）操作。

产品内容：MTT染色液5ml Formazan溶解液55ml 说明书1份保存条件：MTT染色液需-20℃避光保存；Formazan溶解液可以室温保存。

注意事项：1. 由于使用96孔板进行检测，如果你的细胞要养48 h或更长，建议不要吝啬96-孔板的四周边孔，这32 个边孔不能使用，建议加入灭菌PBS以饱和中间64个孔的水分。

因为细胞培养过程中，边孔的水分蒸发很快，培养液及里面的药物会出现浓缩现象，细胞的状况就复杂了2. MTT溶剂在低温情况下会凝固，使用前请室温放置或20-25℃水浴温育片刻至全部融解后使用。

3. MTT一般最好4ºC避光保存两周内有效，保存在-20度长期保存，避免反复冻融，最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解，尤其当MTT变为灰绿色时就绝对不能再用了。

4. Formazan溶解液结冻或产生沉淀时可以37℃水浴孵育以促进溶解，并且必须在全部溶解并混匀后使用。

5. 孵育时，须避光6. MTT有致癌性，用的时候小心,有条件最好带那种透明的簿膜手套.配成的MTT需要无菌，MTT对菌很敏感。