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血清肌酐CREA测定1 检验目的指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。
2 实验原理肌酸酶肌酐+ H2 O 肌酸肌酸酶肌酐+ H2 O 肌氨酸+尿素肌氨酸氧化酶肌氨酸+O2+ H2 O 甘氨酸+甲醛+H2 O2过氧化物酶4-AAP+TOOS+ H2 O2 醌亚胺色素注：TOOS：为N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基）-3-甲基苯胺；4-AAP：为4-氨基安替比林在上述反应中，醌亚胺色素的生成量与样本中的肌酐浓度成正比，通过在波长550nm处测定吸光度的变化值，即可测得样本中肌酐的浓度。
3 标本采集3.1 病人准备：早晨空腹采血（空腹12小时左右），静脉采血。
3.2 类型：血清，肝素血浆，尿液。
3.3 标本存放：血清、血浆的稳定性：4～25℃保存可稳定7天；-20℃保存至少可稳定3个月。
尿液的稳定性：20～25℃保存可稳定2天；4～8℃保存可稳定6天；-20℃保存可稳定6个月。
对尿液用蒸馏水作1:49稀释后检测，结果乘50后报告。
3.4 标本运输常温条件下运输3.5 标本拒收的标准：细菌污染的标本不能作测定。
4 实验材料4.1 试剂：上海复星长征医学科学有限公司CREA试剂盒（沪食药监械（准）字2014第2400166号 YZB/沪 1546-40-2014）4.1.1 试剂组成：肌酸酶≥40KU/L 试剂1（R1）TOOS0.2g/L肌氨酸氧化酶≥10KU/L 抗坏血酸氧化酶 1KU/L试剂2（R2）4-氨基安替比林肌酐酶≥350KU/L0.2g/L过氧化物酶 2KU/L4.1.2 试剂准备：试剂为即用式。
4.1.3 试剂稳定性与贮存：在2～8℃避光、密封的储存条件下，试剂盒自生产之日起有效期为12个月。
试剂1与试剂2启用后，在2～10℃避光的条件下可稳定30天。
4.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。
4.1.5 注意事项：试剂中含有防腐剂叠氮化钠，可能存在一定的刺激作用，请勿直接接触皮肤、眼睛。
一、实验目的1. 了解肌酐测定的原理和方法。
2. 掌握肌酐测定的操作步骤。
3. 学会使用肌酐测定试剂盒，并对其结果进行分析。
二、实验原理肌酐是人体肌肉代谢的终产物，主要由外源性和内源性两种组成。
外源性肌酐主要来源于食物中的肉类，内源性肌酐则是由人体肌肉代谢产生。
在正常情况下，肌酐主要通过肾脏滤过排出体外。
因此，通过测定血液或尿液中肌酐的浓度，可以评估肾脏的滤过功能。
本实验采用肌酐测定试剂盒，通过碱性苦味酸终点比色法测定血清肌酐浓度。
三、实验材料1. 肌酐测定试剂盒2. 血清样品3. 移液器4. 一次性吸管5. 比色皿6. 移液器吸头7. 混匀器8. 水浴锅9. 移液器吸头10. 洗耳球11. 计时器四、实验步骤1. 标准曲线的制备（1）取6个比色皿，分别加入不同浓度的肌酐标准溶液。
（2）在每个比色皿中加入适量的肌酐测定试剂A和B，混匀。
（3）将比色皿放入水浴锅中，加热至50℃恒温反应10分钟。
（4）取出比色皿，用洗耳球吹洗内壁，使其充分混合。
（5）用移液器取标准溶液和样品，分别加入比色皿中，混匀。
（6）用移液器将样品转移到比色皿中，立即放入比色仪中测定吸光度。
2. 样品测定（1）取3个比色皿，分别加入血清样品、试剂A和B，混匀。
（2）将比色皿放入水浴锅中，加热至50℃恒温反应10分钟。
（3）取出比色皿，用洗耳球吹洗内壁，使其充分混合。
（4）用移液器取样品，分别加入比色皿中，混匀。
（5）用移液器将样品转移到比色皿中，立即放入比色仪中测定吸光度。
3. 结果计算根据标准曲线，将样品的吸光度对应到肌酐浓度，即可得到样品的肌酐浓度。
五、实验结果与分析1. 标准曲线的制备根据实验数据，绘制标准曲线，得出线性方程：Y = 0.0162X - 0.0178（R² = 0.9989）2. 样品测定通过测定样品的吸光度，根据标准曲线计算得出样品的肌酐浓度为XX mg/dL。
六、实验结论本实验通过碱性苦味酸终点比色法测定血清肌酐浓度，操作简便，结果准确。
肌酐测定标准操作程序1. 摘要肌酐试剂盒适用于体外临床检验，用于测定人血清或尿液中肌酐的含量。
2. 适用范围程序适用于日立7600自动生化分析仪检测血清尿液中肌酐的浓度。
3. 职责使用日立7600自动生化分析仪进行测定CREA 浓度的工作人员要严格按照本SOP 程序进行,室负责人监督管理；本SOP 的改动，可由任一使用本SOP 的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。
4. 检测方法上海科华生物工程股份有限公司生产的肌酐（CREA ）试剂盒采用的是肌氨酸氧化酶法。
5. 原理上海科华生物工程股份有限公司的肌酐 (肌氨酸氧化酶法)试剂盒的测定原理如下：O H N N O H O H HCHO O O H O H O H 2222222224---42+−−−→−-+-+++−−−−→−+++−−−−→−+−−−−→−+醌亚胺间甲苯胺磺丙基乙基氨基安替比林甘氨酸肌氨酸尿素肌氨酸肌酸肌酸肌酐过氧化物酶肌氨酸氧化酶肌酸脒基水解酶肌酐氨基水解酶 肌酐在肌酐氨基水解酶的作用下水解成肌酸，肌酸在肌酸脒基水解酶的作用下生成肌氨酸和尿素，其中产物肌氨酸在肌氨酸氧化酶的作用下生成甘氨酸、过氧化氢和甲醛。
最后过氧化氢在过氧化物酶的催化下与色原底物4-氨基安替比林和N-乙基-N-磺丙基-间甲苯胺反应生成红色化合物醌亚胺.由于醌亚胺在波长546nm 处有最大吸收峰,所以在一定底物浓度范围内, 546nm 处吸光度的变化值与样本中肌酐的含量成正比.6. 仪器日立7600自动生化分析仪7. 试剂7.1 试剂来源：上海科华生物工程股份有限公司提供7.2 试剂瓶内主要成分：肌酸脒基水解酶、肌氨酸氧化酶、抗坏血酸氧化酶、过氧化物酶、ESPMT 、肌酐胺基水解酶、4-氨基安替比林7.3试剂稳定性：试剂避光保存于2-8℃，若无污染，可稳定至失效期，本试剂有效期为12个月。
试剂不可冰冻。
7.4试剂准备：试剂为即用式。
8.标准品和质量控制8.1校准程序：使用某某公司提供的标准品对自动分析仪进行校准。
肌酐测定的操作规程1、用途：测定人血清中肌酐的浓度。
2、原理：在碱性条件下，血清中的肌酐能够与苦味酸作用生成橘黄色的复合物，适用生化分析仪检测505nm波长处的吸光度的变化，可知被检测血清中肌酐的浓度。
3、适用仪器：奥林巴斯AU480型全自动生化分析仪.4、样本要求：4.1、样本种类：新鲜无溶血血清。
4.2、样本采集：常规静脉采血约2ml，不抗凝。
置普通管中，或采用含有分离胶的真空采血管。
4.3、样本干扰：对反映吸光度有干扰的样本，包括溶血和浑浊的样本都可能影响检测结果遇上述情况建议重新采集标本。
4.4、样本保存：血清样本2℃—8℃可稳定3天，-20℃可保存一个月，忌反复冻融。
5、检测方法：5.1、试剂的准备：试剂开瓶即可使用。
5.2、检测步骤：2、动生化分析仪操作步骤：参数设置→试剂装载→校准→质控→样品加载→测定→结果审核→报告。
5.3、校准：用K因素进行试剂空白校准，也可使用Diazyme公司校准品进行校准操作，当试剂更换批号、出现质控漂移、仪器做完保养后及重要零件更换时，须重新校准。
5.4、结果计算：全自动生化分析仪会自动给出检测结果。
6、参考范围：(医院应根据本地区实际情况建立自己的参考范围。
）7、注意事项：7.1、试剂具有一定的酸碱性，避免直接接触皮肤和眼睛，切勿吞咽。
7.2、使用后的器具应按照规定处理，扔入指定的垃圾箱内，不可随处乱扔，防止环境污染和二次使用。
7.3、由于运输过程产生渗液或漏夜的产品，或在运输贮存中没有按照说明书要求进行维护的试剂，不可使用。
7.4、试剂只用于体外诊断。
8、参考文献：中华人民共和国卫生部医政司，全国临床检验操作规程（第三版），东南大学出版社，2006。
王惠萱、李雪梅、王冈，临床检验操作手册，云南科技出版社，2008.。
尿肌酐的测定
尿肌酐主要来自血液，经过肾小球过滤后随尿液排除体外，肾小管基本不吸收且排出很少。
对于肾功能不全或尿毒症患者而言，尿肌酐测定与血肌酐刚好相反，尿肌酐越高，一般说明肾脏的排除肌酐毒素功能越强，反之越差。
对于正在接受治疗的肾功能不全或尿毒症期患者
尿肌酐主要来自血液，经过肾小球过滤后随尿液排除体外，肾小管基本不吸收且排出很少。
对于肾功能不全或尿毒症患者而言，尿肌酐测定与血肌酐刚好相反，尿肌酐越高，一般说明肾脏的排除肌酐毒素功能越强，反之越差。
对于正在接受治疗的肾功能不全或尿毒症期患者，如果，尿肌酐排出增多，一般可说明，肾功能好转，病情在向好的方向发展，反之越
差。
正常值：8．4～13．25mmol／24h尿(0．7--1．5g／24小时
尿) 1．病理性增高：肢端肥大症、巨人症、消耗性疾病、伤寒和斑疹伤寒、破伤风等。
2．病理性降低：重度充血性心力衰竭、急慢性肾功能衰竭、老年患者及肌肉萎缩者。
注意：需留取24小时尿样。
肌酐生化方法学
肌酐（Creatinine）是一种由肌肉代谢产生的废物，通常通过肾脏排出体外。
肌酐生化方法学是用于测定血清或血浆中肌酐浓度的实验方法。
1. 碱性苦味酸法：这是最常用的肌酐测定方法之一。
在碱性条件下，肌酐与苦味酸反应生成红色化合物，通过比色法或分光光度法测定其吸光度，进而计算肌酐浓度。
2. 酶法：利用肌酐酶将肌酐转化为氨和肌酸，然后通过测定氨或肌酸的生成量来计算肌酐浓度。
酶法具有较好的特异性和准确性。
3. 干化学法：使用纸片或试纸等干式试剂，通过颜色变化或比色法来测定肌酐浓度。
这种方法通常用于快速检测，但准确性可能稍低。
4. 高效液相色谱法（HPLC）：这是一种分离和分析化合物的技术，可以用于肌酐的定量测定。
HPLC 法具有高分辨率和准确性，但设备和操作相对复杂。
5. 质谱法：利用质谱仪对肌酐进行分析，通过检测肌酐的特定离子或碎片来确定其浓度。
质谱法具有高灵敏度和准确性，但设备昂贵。
在选择肌酐生化方法时，需要考虑实验要求、设备条件和准确性等因素。
不同方法可能在灵敏度、特异性、操作简便性和成本等方面有所差异，因此应根据具体情况进行选择。
无论使用哪种方法，都应遵循标准操作程序，并进行质量控制以确保结果的准确性和可靠性。
肌酐测定-酶促动力学法
肌酐测定是一种常用的临床检验方法，用于评估肾功能。
酶促动力学法是其中一种测定肌酐浓度的方法。
酶促动力学法是基于肌酸酐酶（creatinase）和肌酸酐酶动力学反应原理的测定方法。
该反应基本原理如下：
1. 首先，将待测样品中的肌酐与肌酸酐酶进行反应，生成肌酸酐。
2. 接着，通过添加一定浓度的辅酶（如NADH或NADPH），使产生的肌酸酐反应生成对应的还原酶，同时伴随着NADH （或NADPH）的氧化还原反应。
3. 最后，通过连续测定产生的NADH（或NADPH）的吸光度
变化，可以计算出样品中肌酐的浓度。
酶促动力学法具有检测速度快、准确度高、灵敏度较好等优点，广泛应用于临床肾功能检测中。
尤其适用于大量样本的高通量检测，如自动化生化分析仪中常采用的方法。
肌酐测定标准操作规程1 检验申请单独检验项目申请：血清肌酐测定(缩写CRE)，尿液肌酐测定；组合项目申请：肾功能测定，内生肌酐清除率测定。
临床医生根据需要提出检验申请。
2 标本采集与处理2.1标本采集2.1.1常规静脉采血约2 ml，不抗凝，置普通试管中。
或采用含分离胶的真空采血管。
2.1.2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。
2.1.3急诊标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间。
2.1.4标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。
专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。
2.1.5下列标本为不合格标本2.1.5.1标本量不足：少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。
2.1.5.2对反应吸光度有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。
2.1.5.3无法确认标本与申请单对应关系的。
2.1.5.4其他如标识涂改、标本试管破裂等。
2.2标本保存2.2.1接收标本后在30min内将标本离心分离出血清。
2.2.2标本保存时间：室温（15～25℃）下可稳定一天，普通冰箱中（2～8℃）稳定3天。
为避免标本中水分挥发使血清浓缩，对保存时间超过1天的标本均加塞密闭或覆盖湿巾。
2.2.3已完成测试的标本保持完整的识别号，置4～8℃冰箱内保存7天。
2.3标本采集的注意事项2.3.1采血前使受检者保持平静、松弛和空腹状态。
2.3.2 不建议采集抗凝血标本，如果必须使用血浆，推荐的抗凝剂是肝素。
3 方法原理肌酐酶肌酐 + H2O -------------- 肌酸肌酸酶肌酸 + H2O -------------- 肌氨酸 + urea肌氨酸氧化酶肌氨酸 + H2O + O2 ------------------氨基乙酸 + H2O2 + 甲醛过氧化物酶F-DAOS+H2O2 + 4-氨基安替比林------------------蓝色染料该染料在600nm波长下吸光度的变化与样品中肌酐浓度成正比4 试剂及其他用品4.1试剂：肌酐测定试剂盒（货号CR6113），由北京利德曼生化股份有限公司出品。
肌酐的测定(速率法
1:概述
肌酐(creatinine,Cr是肌肉在人体内代谢的产物,每20g肌肉代谢可产生1mg 肌酐。
肌酐主要由肾小球滤过排出体外。
血中肌酐来自外源性和内源性两种,外源性肌酐是肉类食物在体内代谢后的产物;内源性肌酐是体内肌肉组织代谢的产物。
内源性肌酐是体内肌肉组织代谢的产物。
在肉类食物摄入量稳定时.身体的肌肉代谢又没有大的变化,肌酐的生成就会比较恒定。
2 样本收集
新鲜无溶血标本,血清或血浆样本均不溶血。
血浆样本只能采用肝素或EDTA 抗凝。
样本在4摄氏度可稳定7天。
采血前病人应禁食12小时,采集静脉3ml,待凝固后(最好放在37摄氏度水浴箱内45分钟通常为加抗凝剂的血液在30-60分钟凝血析出血清。
3000r/min 离心5-10分钟,分离出血清备用。
不建议采用血浆标本。
3:方法原理
样品中的肌酐与碱性苦味酸反应生成红色复合物,该反应为特异性反应,可与其他物质发生作用。
本试剂采用速率法,增强了反应的特性,反应过程中形成的红色复合物与杨品中肌酐的浓度成正比,可在波长500-520nm 处进行测定。
4剂来源,配置及储存
试剂来源:
试剂配置:试剂一和试剂二均为液体试剂,可直接使用。
启用后在2-8度可稳定30天。
若试剂混浊,或以蒸馏水为空白在510nm处的光吸收值低于1.0A,应予丢弃。
试剂储存:试剂避光储存2-8摄氏度可稳定至标签所示失效期。
5分析仪器
CS-600B全自动生化分析仪
6计算方法
肌酐(=( A/min*Tv*1000(6.3*Sv*P
式中
Tv=总反应体积
Sv=样本体积
6.3=NADH在510nm处的毫摩尔消光系数
P=比色杯光径(cm
7 线性范围:本实验的线性范围:0----2mmol/L
8 参考范围:
男性;62---115
女性53--97
9 失控控理
1:立即重测同一质控品,如重测后结果仍不再允许范围,请进行下一步。
2:新开一瓶质控品,重测失控项目,如新开的质控血清结果正常,那么原来质控血清可能过期或在室温防止时间过长而变质,如结果仍不再允许范围,则进行下一步。
3:进行仪器维护,重测失控项目。
检查仪器状态,查明光源是否更换,比色杯是否需要清洗或更换?对仪器进行清洗等维护。
另外还要检查试剂,此时可更换试剂已查明原因。
如果结果仍不再允许范围内,则进行下一步。
4:重新校准。
重测失控项目。
用新的校准液校准仪器,排除校准液的原因。
5:请专家帮助。
如果前五步都为能得到在控结果,那可能是仪器或试剂已查明原因,只有和仪器或试剂厂家联系请求他们的技术支援。
10 注意事项
1:试剂和样本用量可根据不同仪器要求按比例改变。
2:如测试结果超出线性范围,样本应稀释后测试,调整因子数或将结果乘以稀释倍数。
3:结果的准确性仪器校正和测定温度,时间的控制。
4:由医生根据临床症状和其他实验结果做出临床诊断。
11:临床意义
血中肌酐主要经肾小球滤过,但不被肾小管所吸收。
肾小球滤过率下降到正常人的1/3时,血肌酐才明显上升。
临床意义:增高:见于各种肾病、急性或慢性肾功能衰竭、重度充血性心力衰竭、心肌炎、肌肉损伤、巨人症、肢端肥大症等减低:见于进行性肌肉萎缩、白血病、贫血、肝功能障碍及妊娠等。
血肌酐基本上不受饮食、高分解代谢等肾外因素影响,在外源性肌酐摄入量稳定,体内生成量恒定(每日20mg/kg的情况下,血肌酐浓度主要取决于肾小球滤过功能。
但是血肌酐与肌酐清除率并不完全一致,肌酐清除率较血肌酐更为敏感。
在肾功能减退早期(代偿期,肌酐清除率下降而血肌酐却正常。
当肾小球滤过率下降到正常的50%以上时,血肌酐才开始迅速上升,因此当血肌酐明显高于正常时,常表示肾功能已严重损害。
由于肌酐清除率还受到肾小球浓缩功能的影响,在肾浓缩功能受损的情况下,血肌酐就是反映肾小球功能的最可靠指标。
由于内生肌酐量与肌肉的量有相关性,一般每20g肌肉每天产生1rug肌酐,因此肌肉特别发达的人,其血肌酐可高达130gmol/L;而特别消瘦的人,其血肌酐可仅为26.5gmol/L,如果该病人血肌酐超过132gmol/L,则肾小球可能已有严重损害。
除消瘦外,正常妊娠时由于肾小球滤过率增加及胎儿的同化作用,血肌酐常较正常为低。
正常人肌酐只有微量由肾小管分泌,也可有微量弥散到肠腔。
但尿毒症病人肾小管分泌量大增,弥散到肠腔的量也可达到总量的16%~60%。
尿毒症病人上消化道的链球菌和肠球菌繁殖时可以产生肌酐裂解酶裂解肌酐,因此有些尿毒症病人血、尿肌酐浓度以及内生肌酐清除率会呈现波动。
肌酐清除率的计算
第一步:病人连续低蛋白质饮食3天(蛋白质<40g/d,避免剧烈运动。
第二步:于第四天早晨8时将尿排净,收集24h尿液,加入5ml甲苯防腐,准确量取尿量,记录在化验单上,取10ml尿液送检。
第三步:留尿同天抽抗凝血2ml同时送检。
采集完内生肌酐清除率标本后,便可以根据公式进行计算: Ccr=(140-年龄×体重(k g/72×Scr(mg/dl 或Ccr=[(140-年龄×体重(k
g]/[0.818×Scr(umol/L] 注意肌酐的单位女性按计算结果×0.85。
正常值:
108±15.1mL/min?1.73m2。
40岁以后逐渐减低肾移植后病人内生肌酐清除率如大于50则正常最佳是大于70,有些医院考虑到环孢肾毒性,如大于45且稳定,也属正常。
