冬虫夏草菌丝体发酵液中多糖的分离纯化与含量测定_徐增龙

虫草多糖的纯化技术分析
虫草多糖的纯化技术分析
作者：乔巍
作者机构：黑龙江省东方学院
来源：科技研究
年：2014
卷：000
期：005
页码：417-417
页数：1
正文语种：chi
关键词：虫草多糖;纯化;技术
摘要：冬虫夏草首载于本草从新，味甘，性温，归肺、肾经，具补肺益肾，止血化痰之功效。

冬虫虫草中含量最高的活性物质是虫草多糖，因其可以抗氧化、抗肿瘤和增强免疫力等功效而受广大人群青睐，由于天然的活性成分来源有限，现多采用人工发酵法生产制备。

作者用苯酚-硫酸法测定虫草多糖含量。

虫草多糖的分离、纯化和初步药效活性研究范卫强;尹鸿萍;周长林【期刊名称】《生物加工过程》【年(卷),期】2008(6)1【摘要】以虫草发酵菌丝体为原料提取虫草多糖并对多糖进行结构鉴定和初步药效活性研究.采用水提醇沉和离子交换纤维素进行分离得到两种虫草多糖,HPLC测定相对分子质量,紫外光谱、红外光谱、部分酸水解、甲基化分析和高效液相色谱等方法研究单糖组成及连接方式,四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)检测虫草多糖的活性.经分离得到中性(CPS1)、酸性(CPS2)两种成分, 相对分子质量分别为2.56×10 4,9.91×10 4;单糖组成:CPS1n(葡萄糖):n(甘露糖):n(半乳糖):n(阿拉伯糖)=46:36:18:1;CPS2n(葡萄糖):n(甘露糖):n(半乳糖): n(半乳糖酸):n(木糖):n(阿拉伯糖):n(鼠李糖)=30:25:14:4:3:3:1.红外谱揭示均含-α-键.CPS1主链含(1→6)糖苷键的高度分支的葡甘露半乳聚糖,另有少量葡萄糖分支点在2,3,4位.CPS2主链含葡萄糖(Glc)、甘露糖(Man)、半乳糖(Gal),分支点主要在3位,侧链含多种单糖.CPS1和CPS2都对顺铂(CDDP)损伤的vero细胞有一定保护作用.【总页数】5页(P69-73)【作者】范卫强;尹鸿萍;周长林【作者单位】中国药科大学,生命科学与技术学院,南京,210009;中国药科大学,生命科学与技术学院,南京,210009;中国药科大学,生命科学与技术学院,南京,210009【正文语种】中文【中图分类】TQ464.1【相关文献】1.银杏叶水溶性多糖的分离、纯化、初步鉴定及活性研究 [J], 杨静峰;张旭;梁忠岩;张丽霞2.人工培养蛹虫草多糖的分离纯化及其结构的初步研究 [J], 王蕾;于荣敏;张辉;宾文;汪宇;李春燕;吴海燕3.蛹虫草虫草多糖的分离纯化、分子构象分析及抗氧化活性研究 [J], 江琦;娄在祥;王正齐;王洪新;陈孝云4.家蚕蛹巴西虫草多糖的分离纯化及其组成的初步分析 [J], 施英;吴娱明;刘学铭;廖森泰;邹宇晓;陈卫东;陈智毅5.人工培养蛹虫草多糖的分离纯化及基结构的初步研究 [J],因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

摘要目的：建立用HPLC 法测定冬虫夏草及含片中腺苷的含量。

方法：C18(4.6mm× 250mm,5um)色谱柱，0.05mol L·-1磷酸二氢钾+甲醇(90+10)为流动相，流速为 1.0ml·min-1 检测波长260nm，柱温为35℃。

结果：腺苷含量在0.005～0.2ug(r=0.9998)范围内呈良好的线性关系。

平均回收率为99.49%，RSD=1.47%。

结论：方法准确可靠、、结果稳定、重现性好，分析速度快，可有效控制制剂的质量。

关键字：HPLC；冬虫夏草菌粉；含片；腺苷；DADAbstractObjective: to determine the content of adenosine Cordyceps powder andtablets by HPLC method. Methods: kromasil--C18 ( 4.6mm × 250mm ,5um) column, using methanol two hydrogen 0.5mol ? L-1 phosphoric acid (90:10) as mobile phase, thef low rate was 1.0ml ? min-1, the detection wavelength was 260nm, the column temperature was 35℃. Results: adenosine in 0.005 ~ 0.2ug (r=09998) showed a good linear relationship in the range of. The average recovery was 101.16%, RSD=1.47%. Conclusion: the method isConclusion: the method is accurate and reliable, strong specificity, results stability, good reproducibility, which can effectively control the quality of the preparation. Keywords: Cordyceps sinensis powder; tablet; adenosine; HPLC目录摘要 (I)Abstract ................................................................. I.I. ..1. 前言 (2)1.1仪器与试药..............................................2...2. 实验条件 (2)2.1供试品提取溶剂的选择.................................... 2...2.2检测波长的选择.......................................... 2...2.3流动相的选择............................................3...3. 试验方法与结果.............................................. 3...3.1分析溶液 (3)3.1.1 ..................................................................................................... 对照品溶液制备 ............................................ 3...3.1.2 ..................................................................................................... 供试品溶液制备 ............................................ 3...3.2色谱条件 (3)3.3分析方法学考察.......................................... 3...3.3.1 ..................................................................................................... 系统适应性试验 ............................................ 3...3.3.2 ..................................................................................................... 标准曲线绘制及线型范围考察 ................................. 4..3.3.3 ..................................................................................................... 精密度试验 ................................................ 4...3.3.4 ..................................................................................................... 重复性试验 ................................................ 4...3.3.5 ..................................................................................................... 稳定性试验 ................................................ 4...3.3.6 ..................................................................................................... 加样回收率试验 ............................................ 4...3.3.7 ..................................................................................................... 样品测定 .................................................. 5...4. 讨论 (5)4.1 (5)4.2 (5)4.3 (5)参考文献： (6)致谢 (7)1. 前言冬虫夏草，仅仅是我国190 多种虫草中的一种，也是中药传统的滋补药材。

灵芝菌丝体多糖的分离纯化及其单糖组成分析与分子量测定王海燕;戴军;陈尚卫【摘要】前期杂交优化后赤芝菌种经液体深层发酵后,提取灵芝菌丝体多糖,并过DEAE-Sepharose Fast Flow柱分离纯化,利用高效体积排阻色谱(HPSEC)检测多糖级分的纯度,采用完全酸水解PMP柱前衍生化RP HPLC测定多糖级分的单糖组成,多角度光散射仪联用装置(SEC MALLS)测定其绝对重均分子量(Mw),并且根据分子旋转半径与分子摩尔数的关系曲线斜率初步推断其空间构象.结果显示:分离纯化得到3个多糖级分GLMP1、GLMP2和GLMP3,HPSEC检测其峰面积百分比分别为93.58％,97.64％,99.19％,单糖组成分析结果表明GLMP1、GLMP2和GLMP3均含有甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖和岩藻糖,但单糖摩尔比各异.SEC-MALLS测试GLMP1、GLMP2和GLMP3的Mw分别为4.526×105,4.603×104,3.760×103 g/mol,3个多糖级分构象可能均为高度紧缩且具有分支结构的聚合物.【期刊名称】《食品与机械》【年(卷),期】2015(031)005【总页数】5页(P201-205)【关键词】灵芝;菌丝体;多糖;级分;分离纯化;分子量【作者】王海燕;戴军;陈尚卫【作者单位】江南大学食品学院,江苏无锡214022;江南大学食品学院,江苏无锡214022;江南大学食品科学与技术国家重点实验室,江苏无锡214022【正文语种】中文灵芝（G.lucidum）属担子菌纲、多孔菌目、灵芝科、灵芝属［1］，按其生长过程可分为菌丝体、子实体和孢子粉3个阶段。

中国灵芝属真菌有75种，常见的有赤芝、紫芝、黑芝、松杉灵芝等。

近年来，研究发现灵芝具有降血糖［2，3］、降血脂［4］、免疫调节［5］、抗肿瘤［6］、抗氧化［7］等保健功能，其主要功效成分为多糖和三萜［8］。

国家食品药品监督管理局 发布 浙江省药品检验所 复核 国家药典委员会 审定 杭州中美华东制药有限公司 提出 国家食品药品监督管理局国家药品标准WS 3-181(Z-60)-2006(Z)-2010发酵冬虫夏草菌粉Fajiao Dongchongxiacao Junfen本品为从青海新鲜冬虫夏草中分离得到的麦角菌科真菌冬虫夏草[Cordyceps sinensis(Berk.)Sacc.]的无性世代――中国被毛孢［Hirsutella sinensis Liu ，Guo ，Yu ，et Zeng （1989）］菌种经液体发酵培养所得菌丝体的干燥粉末。

【性状】本品为灰色至灰黄色粉末；气微腥，味微咸。

【鉴别】 （1）取本品1g ，加乙醇15ml ，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml 使溶解，作为供试品溶液。

另取发酵冬虫夏草菌粉（C S -C-Q80）对照药材1g ，同法制成对照药材溶液。

照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录Ⅵ B ）试验，吸取上述两种溶液各5µl ，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以石油醚（60～90℃）－甲酸乙酯－甲酸（15:5:1）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm ）下检视。

供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

(2) 本品【含量测定】总氨基酸项下所得供试品色谱应呈现与酪氨酸、赖氨酸、组氨酸和精氨酸对照品保留时间相同的色谱峰。

(3)取发酵冬虫夏草菌粉对照药材（C S -C-Q80）0.5g ，照【含量测定】腺苷项下供试品溶液的制备方法，制成对照药材溶液。

另取尿苷对照品，加10%甲醇溶液制成每1ml 含 5µg 的溶液，作为对照品溶液。

照高效液相色谱法（中国药典2005年版一部附录Ⅵ D ）试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A ，以0.04mol/L 磷酸二氢钾溶液为流动相B ，流速为每分钟0.8ml ，按下表进行梯度洗脱：时间（分钟） 流动相A （％） 流动相B(％)0～15 0 100 15～45 0→15 100→85检测波长为260nm ，理论板数按腺苷峰计算应不低于3000，分别吸取腺苷【含量测定】项下供试品溶液和腺苷对照品溶液、以及上述对照药材溶液和尿苷对照品溶液各20µl ，注入液相色谱仪，记录色谱图。

HPLC法测定冬虫夏草菌丝体口服液中腺苷的含量
邓芳
【期刊名称】《求医问药（学术版）》
【年(卷),期】2013(011)001
【摘要】目的:建立HPLC法测定冬虫夏革菌丝体口服液中腺苷的含量.方法:C18柱;流动相为乙腈-永(6:94);流速:1.0ml/min:检测波长260nm.结果:腺苷在浓度为0.4 ～80ug/mL范围内线性关系良好,r=1;供试品溶液在24h内稳定,RSD=0.38％;平均回收率为95.5％,(n=9).结论:所建立的方法专属性强,精密度好,结果准确.【总页数】2页(P575-576)
【作者】邓芳
【作者单位】湖南省衡阳市食品药品检验检测中心湖南衡阳421001
【正文语种】中文
【中图分类】R284.2
【相关文献】
1.HPLC法测定西藏主产区冬虫夏草中尿苷和腺苷的含量 [J], 周伟平;高晓霞;代安国;熊卫萍;谢荣;钟兆健;章卫民
2.RP-HPLC法测定虫草菌丝体益气血口服液中腺苷 [J], 万春花;倪永年;龙洲雄;胡海山
3.HPLC法测定冬虫夏草发酵菌丝粉中腺苷的含量 [J], 范志华;汤卫华;林霖
4.HPLC法测定冬虫夏草中腺苷含量 [J], 吴春敏;叶榕平
5.RP-HPLC法测定冬虫夏草发酵液冻干粉中虫草素和腺苷含量 [J], 王海霞;胡高升;蒙娅;贾景明
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昆明營紇營裉2016, 38(6)：63 -65 ISSN 1674 -5639 CN53 - 1211/G4 Journal of Kunming University虫草菌丝中3种有效成分含量测定研究邓亮，母多，徐兴梦，白祥祥，施建莲，郭如芳，吕昭文，佘文怡，郭亚东*(昆明医科大学药学院暨云南省天然药物药理重点实验室，云南昆明650500)摘要:探讨了虫草菌丝中甘露醇、多糖和腺苷的含量测定.采用剩余滴定法测定甘露醇含量,硫代硫酸钠滴定液滴定;比色法测定多糖含量，以无水葡萄糖作对照;高效液相色谱法测定腺苷含量，采用Shim-pack-C18色谱柱，以甲醇-水为流动相，流速1.0 mL/m in,柱温30丈，检测波长260 nm.结果表明:生产条件不同所得到的虫草菌丝中甘露醇、多糖和腺苷的含量没有相关性.以单一成分作为虫草菌丝质量控制指标不能全面反映其质量，选择多指标成分进行含量测定，能够更好地控制虫草菌丝质量.关键词:虫草菌丝;甘露醇;多糖;腺苷;测定中图分类号：R284. 2文献标识码:A文章编号：1674 -5639(2016)06 -0063 -03D O I：10.14091/ki.kmxyxb.2016. 06. 014Study on the Determination of Three Efficient Components in Cordyceps MyceliumDENG Liang,MU Duo,XU Xingmeng,BAI Xiangxiang,SHI Jianlian,GUO Rufang,LV Zhaowen,YU Wenyi,GU0Yadong* (College of Pharmaceutical Science &Yunnan Key Laboratory of Pharmacology for NaturalProducts,Kunming Medical University,Kunming,Yunnan,China 650500)Abstract ：In order to explore the content determination of Mannitol, Polysaccharides and Adenosine in Cordyceps mycelia, we used the residual titration and Sodium thiosulfate solution as titrant to determine the mannitol content；the colorimetric method and compared with the dextrose anhydrous as control to determine the polysaccharide content and a HPLC method to determine the adenosine content by adopting the Shim-pack-C18 chromatographic column (150 mm x4. 6 mm,5 jjim) with the mobile phase of methanol-water, and the flow rate of 1.0 mL/min, column temperature of 30 Xl , detection wavelength of 260 nm. The result showed that the content of mannitol, polysaccharides and adenosine in Cordyceps mycelium obtained by different production conditions has no correlation. With single compo­nent as the Cordyceps mycelium quality control indexes can not fully reflect the quality of Cordyceps mycelium, while with content deter­mination of multi-index constituents can better control the quality of Cordyceps mycelium.Key words ：Cordyceps mycelium；mannitol ；polysaccharides ；adenosine ；determination虫夏冬草[(Berk. )Sace，又 名虫草]是我国特产的一种传统名贵中药材，主 要产于西藏、青海、云南和四川等地的高寒山区. 目前，由于功能食品的大量开发和应用，使得供 需矛盾日益突出.近年来，人们通过以冬虫夏草菌发酵，从而得到虫草菌丝体，其药理研究表明[1]，虫草菌丝具有与天然虫草相似的功效，用 虫夏草菌丝体生产各种功能食品，可以大大降低成本，并满足市场需要.冬虫夏草富含大量对人体有益的有机物质及多种微量元素.虽然在不同人工培养条件下，得到的虫草菌丝和不同产地生长的天然冬虫夏草含有的各成分含量有差别，但是这些成分种类 总体上保持基本不变，其主要含有以下几类物质：核苷类[2_4]、多糖类[5]、氨基酸类[6]、甘露 醇[7]等.而现行《中华人民共和国药典》[8]只收收稿日期=2016 -09 -07基金项目：国家自然科学基金资助项目（31400303);昆明医科大学大学生创新基金资助项目（2016060);云南省教育厅科学研究基金资助项目（2015C016Y).作者简介:邓亮（1979—），女，湖北恩施人，讲师，主要从事药物分析研究.通讯作者:郭亚东（1960—)，男，山西晋城人，教授，主要药物分析研究，E-mail:yadongkmmc@163. com .64昆明学院学报2016年12月载了冬虫夏草，且质量标准中只测定腺苷含量. 此外，中药的特点是多组分共同发挥药理作用.所以本文对不同发酵条件生产的虫草菌丝测定了腺苷、甘露醇和多糖含量，以了解在不同条件生产的产品中，这3种有效成分的含量是否具有相关性，为更好地开发虫草菌丝产品提供依据.1材料与方法1.1仪器和试剂Agilgentl200高效液相色谱仪；超声提取器(HS- 10260D, 250 W, 50 KHz);电子天平（梅 特勒-托利多AI204).腺苷对照品购自中国药品生物制品研究院；甲醇为色谱纯（美国Merk公司）；水为超纯水;无水葡 萄糖购自药店;其他试剂均为分析纯.虫草菌丝样品由云南大学云南省微生物研究所 张烁教授提供.1.2色谱条件色谱柱：Shim-pack-C18 (150 m m X 4.6 mm, 5@);流动相：7(甲醇）：7(水）=10:90，流速 1.0 mL/min,柱温 30 °C，检测波长 260 nm.1.3 对照品溶液的配制精称腺苷对照品5 mg，置于10 mL容量瓶，用蒸 馏水溶解后定容到刻度，从中取2.0 m L置于10 mL 容量瓶，用蒸馏水稀释到刻度，得到质量浓度为0.1m g/mL的对照品溶液.1.4样品测定方法1.4.1甘露醇含量测定参照《中华人民共和国药典》[8]中百令胶囊的 方法测定甘露醇的含量.取本品约1g，精称后放入 150 m L圆底烧瓶中，精加乙醇100 mL，称定质量，加 热回流2 h，放冷.用乙醇补足减失的质量，滤过，精 密量取续滤液5 mL，置碘瓶中，精密加入高碘酸钠 溶液50 mL，置水浴上加热15 min，放冷，加碘化钾试 液10 mL，密塞，放置5 min，用硫代硫酸钠滴定液 (0. 05 md/L)滴定，快到终点时，加入淀粉指示液 1mL，再滴定至蓝色消失，空白校正.硫代硫酸钠滴 定液(0.05 md/L )对甘露醇（C6H1406)的滴定度为0.910 9 m g .1.4.2多糖含量测定参照《中华人民共和国药典》[8]中枸杞子的方 法测定多糖含量.取无水葡萄糖对照品25 mg，精称后放入250 m L量瓶中，加水溶解并稀释到刻度，摇 匀，即得(每1m L中含无水葡萄糖0. 1mg).精密量取对照品溶液5份，体积为0.2，0.4，0.6,0. 8，1.0〇^，分别置具塞试管中，并加水补至2.0 mL，各精密加入5%苯酚溶液1mL，摇匀，迅速 精密加入硫酸5 mL，再摇匀，放置10 min，然后置 40 °C水浴中保温15 min，取出后迅速冷却至室温，以相应的试剂为空白，于490 nm测定波长处，测定 其吸光度，并以c为横坐标，^为纵坐标，绘制标准 曲线并计算回归方程为;T=4. 78* +0. 021.取本品约〇.5 g，精称，加乙醚100 mL，加热回流 1h，静置，放冷，小心弃去乙醚液，残渣置水浴上挥 尽乙醚.加人80%(体积分数，下同）乙醇100 mL，加 热回流1h，趁热滤过，滤渣与滤器用热80%乙醇 30 mL分次洗涤，滤渣连同滤纸置烧瓶中，加水 150 mL，加热回流2 h.趁热滤过，用少量热水洗涤滤 器，合并滤液与洗液，放冷，移至250 m L量瓶中，用 水稀释至刻度，摇匀，准确量取1mL，置具塞试管 中，加水1.0 mL，依据标准曲线制备项下的办法，从 “各精密加入5%苯酚溶液1mL”起，然后测定吸光 度，按回归方程计算供试品溶液中所含葡萄糖的质 量（mg)，即得.1.4.3腺苷测定参照《中华人民共和国药典》[8]中虫夏冬草的 方法测定腺苷含量.采用高效液相色谱法，取本品粉 末约1.0 g，精称后放入150 mL带塞锥形瓶中，准确 加入蒸馏水50 mL，密塞，摇匀，称定质量，超声提取 30 min，放冷，再称定质量，用蒸馏水补足减失的质 量，摇勻，滤过，取续滤液，进样10 pL,按外标法计 算即得.2结果与讨论在1.2项下设定的色谱条件下，对样品和对照 品进行测定，其色谱图见图1.2.1腺苷测定工作曲线取1. 3项下的对照品溶液，稀释成系列对照 液：0. 01，0. 02，0. 03，0. 04，0. 05，0. 10 mg/mL 各进样10 p L，记录色谱图，以峰面积为纵坐标，进样量（pg)为横坐标，绘制工作曲线并按最小二乘法，得回归方程为F= 727 568Z- 38 345,相 关系数「= 0.995 8.2.2腺苷测定的精密度和重复性取质量浓度为〇.〇3 m g/m L的对照品溶液，重$6寒邓亮，母多,徐兴梦，等:虫草菌丝中3种有效成分含量测定研究65复进样6次，进样惫10卟，记录峰面积，计算为0..精密称取腾一样品6份，按1.43方法处理样品，各进样1〇 pX,记录峰面积，计箕K劝为0. 66%.'O500: 2400300:200：100:〇：...—-...___________'I、'.......1 2 3 4 '5^' 6 7 8 9"m in(a)对照品2.3 回收率试验精密称取0. 5 g已经测定含:量伯样品6份，各加人质量浓度为0.5 m g/m L的对照品溶液1mL,按1. 4. 3进行样品前处理，进样g10 jjl L,记录峰面积，计算其乎均回收率为97.8%，/?&D 为4. 4%2.4样品测定按设计的方法分别测定了 7个样品中甘露醇、多糖和腺香的含驚，测定结果见表1.表1样品测定结果mg/g 样品序号甘露醇多糖腺苷151.0035.20 1.322123. 7034. 100.74398.2032.600.79421.8041.20 1.30537.9016.400.68680.0025. 80 2.917141. 9031.500.643结论在腺苷测定中，药典方法采用磷酸盐缓冲液做流动相，而本实验中不用磷酸盐，只用甲醇和水作为 流动相，对色谱柱具有较好的保护作用，峰型很好, 且精密度和重复性都能满足实验要求•从7个样品的3种有效成分含量测定的结果分 析，多糖的舍量很稳定，多数含暈在30 mg/g左右，含量最高的与含量最低的仅相差2.5倍;而甘露醇 和腺苷的最高含量与最低含量分别相差6.5倍和4.5倍.说明虫草菌丝的生产条件不同，所得产品对 多糖舎量泰响较小，而对甘露醇和腺昔的含麄则影响较大.7个样品中含量最高的分别是|甘露醇7号样 品，多糖4号样品，腺苷6号样品;含量暈低的则分别是:甘露醇4号样品，多糖5号样品，腺普7号样 品.由此可见，这3种有效成分的含量多少在7个样 品中并没有相关性，多种因素都会影响其有效成分的含量，并且虫草菌丝发挥作用是多种成分协同作用的结果，仅以单一成分作为质量控制指标不能全面反映它的质量因此，目前大都选择多指标成分进 行含量测定，才能够更好地控制其風量[参考文献]m卢i当,翁开敏.冬虫夏草的药理作用研究t j I.中a药 师，2003,6..(.6):37_1 -371[_i]郭_並东萍，李潘，等.高效液相色.谱法测定冬虫夏萆 及其代用品中腺苷贪量:p1.天然产物研究与开发, 2008,20(5) ：89 -91.[幻范志华s t e a华，林霖._L e怯测宠冬虫.夏草发酵曹象 粉中腺苷的含章[以.现代食品科技,2007,23 (7) :94-97.[4]常正娇，韩萍，刘利娥，等.杂粮蛹虫草龠丝共生体中虫章素的优化提取及测定l；3l.食品工业科技,2016,37(7) ；237 - 242.[S]府云娥■毅，刘许媛.冬虫夏草、亚香棒虫草中多糖的 含量中■簡寒药擎寒霜，2001,21 (1) - 21. 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第3卷 第5期 食品安全质量检测学报 Vol. 3No. 52012年10月Journal of Food Safety and QualityOct. , 2012*通讯作者: 姜福佳, 硕士, 助教, 生物技术及应用专业带头人, 研究领域: 微生物与生化药学。

E-mail: ai82180076@近红外光谱在虫草菌丝体腺苷和多糖含量检测中的应用姜福佳*(长春职业技术学院, 长春 130033)摘 要: 目的 利用近红外光谱技术建立蝙蝠拟青霉菌丝体中腺苷和多糖含量的定量分析模型。

方法 采用常规方法对蝙蝠蛾拟青霉菌丝体中腺苷和多糖含量进行测定, 利用近红外光谱技术建立测定菌丝体中腺苷和多糖含量的相关模型, 并通过蒙特卡罗偏最小二乘法(Monte Carlo Partial Least Square, MCPLS)和可移动窗口偏最小二乘法(Moving Window Partial Least Square, MWPLS)对模型进行优化。

结果 该模型校正集预测值和真实值间的相关系数(Rc )分别为0.9400和0.8781, 预测均方根误差(Root Mean Square Error of Prediction Set , RMSEP )分别为0.5949和1.6617, 校正均方根误差(Root Mean Square Error of Calibration Set, RMSEC )分别为0.5844和1.5572。

结论 该模型的稳健性、拟合度和预测能力均能达到令人满意的程度, 该方法可以推广应用到其他发酵产品的检测。

关键词: 近红外光谱; 蝙蝠蛾拟青霉; 蒙特卡罗偏最小二乘法; 定量分析The application of near-infrared spectroscopy in detection of adenosine andpolysaccharide of cordyceps myceliumJIANG Fu-Jia *(Changchun Vocational Institute of Technology , Changchun 130033, China )ABSTRACT: Objective Near-infrared spectroscopy was used to quantify the adenosine and polysaccharidecontent in Paecilamyes hepiali mycelia. Methods Quantification of adenosine and polysaccharide content were achieved by the conventional method. Models were established by near-infrared spectroscopy for detec-tion of the contents of adenosine and polysaccharide. Monte carlo partial least square (MCPLS) and moving window partial least square (MWPLS) were applied to optimize the models. Results The related coefficient between actual and predictive values of calibration samples (Rc ) were 0.9400 and 0.8781, the root mean square error of prediction set (RMSEP ) were 0.5949 and 1.6617, and the root mean square error of calibration set (RMSEC) were 0.5844 and 1.5572, respectively. Conclusion The robustness, fitness and predictive capability of these models were satisfied, and it can be applied to other fermentation processes.KEY WORDS: Near-infrared spectroscopy; Paecilamyes hepiali mycelia; moving window partial least square;quantitative analysis蝙蝠蛾拟青霉(Paecilamyes hepiali )是天然冬虫夏草中普遍存在的一种无性型虫草[1,2]。

侯芳菲（天津生物工程职业技术学院 天津 300400）冬虫夏草中各种化学成分的检测方法冬虫夏草具有抗炎、抗肿瘤、降血糖、免疫调节、保护受损肝肾、镇静和抗疲劳等作用，冬虫夏草的化学成分复杂,近五年有关冬虫夏草化学成分测定方法的研究对象主要为核苷类、甘露醇、多种氨基酸、甾醇类及无机元素等。

1 核苷类物质的测定核苷类物质为冬虫夏草的主要活性成分之一,具有广泛的生理功能,其中以虫草素、腺苷等具有明显的药理作用。

近五年的测定方法主要为高效液相色谱法和毛细管电泳法。

1.1 HPLC方法测定中药成分非常复杂,H P L C因其具有各种分析柱、高选择性和高灵敏度的检测器，所以具备分离效能高、分析速度快、灵敏度高和适用范围广等优点，所以成为中药研究的最重要的分析方法。

郑永彪[1]等建立了冷冻保鲜冬虫夏草中尿苷和腺苷的HPLC测定方法。

采用Waters sunfire色谱柱(4.6mm×250mm，4.6μm),流动相系统为乙腈和水的比例和体积流量的梯度洗脱程序,柱温35℃,检测波长260nm。

结果尿苷和腺苷的线性范围分别为0.0340～0.340μg,0.00494～0.0494μg,平均加样回收率分别为98.70%(RSD为0.48%)、97.39%(RSD为1.6%)。

该方法简便快捷、准确精密、重复性好，能用于冷冻保鲜冬虫夏草中腺苷和尿苷的同时测定。

周伟平[2]等建立了采用Agilent EclipseXDB-C18(250mm×4.6mm，5μm)色谱柱摘　要：阐述近五年来冬虫夏草中核苷类、甘露醇、多种氨基酸等成分的检测方法，其中包括高效液相色谱法、毛细管电泳法、分光光度法等方法。

关键词：冬虫夏草 化学成分 检测同时测定西藏产冬虫夏草中尿苷及腺苷的含量的方法，检测波长为260nm，以甲醇-水为流动相梯度洗脱，流速1.0mL/min，柱温33℃。

尿苷及腺苷的线性范围为32.95～439.3μg/mL(r=0.9999)和3.486～46.48μg/mL(r=0.9999)，平均回收率分别为98.5%、95.6%，RSD值分别为1.8%和2.4%(n=6)。