新乡医学院分析化学实验课教案首页
授课教师姓名及职称：
新乡医学院化学教研室年月日
实验分光光度法测定芦丁的含量
一、实验目的
1．掌握比色分析的一般操作方法；
2．学习分光光度计的使用方法。
二、实验原理
分光光度法定量分析分为单组分定量分析，多组分定量分析，本实验是单组分定量分析，单组分定量分析方法包括吸光系数法、校正曲线法、对照法等，分析中最常用的是校正曲线法。校正曲线法：先配制一系列不同浓度的标准溶液，然后在选定的分析条件下测定吸光度，然后以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标作图，得到一条通过原点的直线，这条直线称为校正曲线，在相同的测定条件下，测得样品溶液的吸光度，通过校正曲线就可以求出样品的浓度了。
本实验通过校正曲线法测定芦丁的含量，芦丁溶液的颜色较浅。不能直接用分光光度法进行测定，那么，需要用显色剂将其变为有颜色的溶液，芦丁与Al3+在亚硝酸钠碱性溶液中生成红色配合物，该红色配合物最大吸收波长在510nm，所以可以在510nm测定吸光度。
三、仪器与试剂
721型分光光度计，容量瓶；芦丁标准品，60%乙醇，亚硝酸钠溶液（1:20），硝酸铝溶液（1:10），
1 mol∙L-1氢氧化钠。
四、实验步骤
1．标准溶液的制备
取120℃真空干燥至恒重的芦丁标准品约50mg精密称定，置于50mL容量瓶中，加60%乙醇适量，水浴上微热，使溶解，放冷后用60%乙醇稀释至刻度，摇匀。
2．绘制标准曲线
精密吸取标准溶液0.00，1.00，2.00，3.00，4.00及5.00mL，分别置于50mL容量瓶中，各加60%乙醇使成5.0mL，各精密加入亚硝酸钠溶液（1:20）0.5mL，摇匀，放置6分钟后，加硝酸铝溶（1:10)1.5mL，摇匀，放置6分钟，加1 mol∙L-1氢氧化钠试液4mL，蒸馏水稀释至刻度，摇匀，放置15分钟。在510nm 波长下测定各溶液的吸光度。以浓度为横坐标，吸收度为纵坐标，绘制标准曲线。
3．样品测定
精密称取芦丁约50mg，置于50mL容量瓶中，加60%乙醇适量。水浴微热使其溶解，冷后加60%乙醇至刻度，摇匀。精密吸取3mL，置于50mL容量瓶中，按照标准曲线的绘制项下的方法，自“加60%乙醇使成5.0mL”起操作，测定吸收度，从标准曲线中读出试样中无水芦丁的含量，并计算样品中的含量。
五、注意事项
1．实验过程中应使用同一比色皿(吸收池)，以减小由于光程的不一致所带来的测定误差。
2．测定标准系列各溶液的吸收度时，一定要遵循先稀后浓的原则，尽可能的消除测定误差。
六、思考题
1．相同厚度的各比色皿透光性不一致时，为什么要经过多次洗涤后各比色皿透光率差异无改变的情况下才使用校正值?
2．工作曲线法和标准对比法分析适用何种情况?从本实验的结果看，能否用标准对比法?
