AD转基因模型研究进展 ppt课件
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基因工程与转基因生物37页PPT
拉
60、生活的道路一旦选定，就要勇敢地 走到底 ，决不 回头。 ——左
基因工程与转基因生物
•Hale Waihona Puke 46、寓形宇内复几时，曷不委心任去 留。
•
47、采菊东篱下，悠然见南山。
•
48、啸傲东轩下，聊复得此生。
•
49、勤学如春起之苗，不见其增，日 有所长 。
•
50、环堵萧然，不蔽风日；短褐穿结 ，箪瓢 屡空， 晏如也 。
56、书不仅是生活，而且是现在、过 去和未 来文化 生活的 源泉。 ——库 法耶夫 57、生命不可能有两次，但许多人连一 次也不 善于度 过。— —吕凯 特 58、问渠哪得清如许，为有源头活水来 。—— 朱熹 59、我的努力求学没有得到别的好处， 只不过 是愈来 愈发觉 自己的 无知。 ——笛 卡儿
60、生活的道路一旦选定，就要勇敢地 走到底 ，决不 回头。 ——左
基因工程与转基因生物
•Hale Waihona Puke 46、寓形宇内复几时，曷不委心任去 留。
•
47、采菊东篱下，悠然见南山。
•
48、啸傲东轩下，聊复得此生。
•
49、勤学如春起之苗，不见其增，日 有所长 。
•
50、环堵萧然，不蔽风日；短褐穿结 ，箪瓢 屡空， 晏如也 。
56、书不仅是生活，而且是现在、过 去和未 来文化 生活的 源泉。 ——库 法耶夫 57、生命不可能有两次，但许多人连一 次也不 善于度 过。— —吕凯 特 58、问渠哪得清如许，为有源头活水来 。—— 朱熹 59、我的努力求学没有得到别的好处， 只不过 是愈来 愈发觉 自己的 无知。 ——笛 卡儿
转基因研究报告
转基因研究报告1. 引言转基因技术是一种现代生物技术的重要分支，它可以通过人为介入改变生物体的遗传特征。
转基因研究在农业、医学和环境等领域具有重大的潜力和应用前景。
本报告旨在介绍转基因研究的定义、研究方法和应用，并对其带来的争议进行探讨。
2. 转基因技术的定义转基因技术又称基因工程技术，是通过改变生物体的遗传物质，将外源基因导入目标生物体中，从而使其具备新的特征或功能。
这种方法可以突破物种间传统繁殖的限制，为改良和创造新品种提供了一种高效、精确的手段。
3. 转基因研究的方法转基因研究主要涉及以下几个步骤：3.1 基因定位与克隆转基因研究首先需要确定所需基因的序列，并利用克隆技术将其从源生物体中提取。
常用的基因定位与克隆方法包括PCR、DNA测序和限制性酶切等。
3.2 基因组编辑与改造将目标基因导入适合的载体，然后通过转染、电穿孔等方法将载体导入目标生物体的细胞中。
利用基因编辑技术，可以删除、插入或修改目标基因，实现所需特征的改造。
3.3 基因表达与分析通过转录和翻译过程，将导入的外源基因在目标生物体中进行表达，从而获得所需产物。
基因表达水平的分析可以通过PCR、Northern blotting、Western blotting等方法来实现。
4. 转基因研究的应用转基因技术在农业、医学和环境等领域拥有广泛的应用。
4.1 农业应用转基因作物在抗虫、抗病、耐逆等方面表现出了明显优势。
例如，转基因水稻可以抵抗虫害和病害，提高产量和品质。
转基因玉米可抗除草剂，减少农药使用量。
这些转基因作物为农业生产提供了新的选择，有助于解决粮食安全和环境保护等问题。
4.2 医学应用转基因技术在医学领域有着广泛的应用前景。
通过基因治疗技术，可以修复或替换人体遗传疾病相关基因的缺陷。
转基因动物模型可以用于研究人类疾病的发病机制和药物研发。
此外，转基因技术还可以用于生产重要的医药蛋白，如胰岛素和重组血因子等。
4.3 环境应用转基因技术可以用于改善环境的污染问题。
转基因动物与动物生物反应器ppt课件
5
Gordon等首次成功地将含有HSV和SV40 DNA 片段的重组质粒DNA以显微注射法导入小鼠受精 卵的雄原核内，得到了带有这种外源DNA顺序小 鼠。
1982年，Palmiter等运用此法得到的所谓“超 级巨鼠”,曾引起整个生物学界的轰动。
到目前为止，人类已获得转基因鱼、鼠、羊、猪、 兔、牛等等大小动物。
4
动物所有细胞均整合有外源基因，则具有将外源 基因遗传给子代的能力，通常被称为转基因动物。
一般用胚胎干细胞法或逆转录病毒载体法制备的 第一代转基因动物均为嵌合体动物，而显微注射 法得到的第一代转基因动物中，也有20％为嵌合 体动物。
当外源基因在转基因动物体内表达，并培育出其 表型与人类疾病症状相似的动物模型，则称其为 转基因动物模型。
目前, 已经培育出了动脉粥样硬化、镰刀形红细胞 贫血症、痴呆症、自身免疫病、淋巴系统病、真 皮炎及前列腺癌等多种疾病的模型动物,为这类疾 病的研究提供了方便。
35
（3）动物品种改良
通过外源基因的导入，改造动物的基因组,可 达到使家畜、家禽的生长速度加快，肉、蛋或奶 产量及品质提高，饲料利用率提高、抗病力加强 的目的。 目前应用最广的是，通过此技术改变牛奶的品质 和成份。在我国已获得转人乳清白蛋白、人乳铁 蛋白等转基因牛奶，为我国的“人源化牛奶”产 业化定了重要的基础。
2
转基因动物（transgenic animal）的概念
指借助基因工程技术将外源基因导入受体动物染 色体内，外源基因与动物基因整合后，随细胞的 分裂而扩增，在体内表达，并能稳定的遗传给后 代的动物。
即指基因组中整合有外源基因的一类动物。 整入动物基因组的外源基因被称为转基因
(transgene)。
类具有较多的相似性。 因而猪在提供人类移植所用的器官方面成为
Gordon等首次成功地将含有HSV和SV40 DNA 片段的重组质粒DNA以显微注射法导入小鼠受精 卵的雄原核内，得到了带有这种外源DNA顺序小 鼠。
1982年，Palmiter等运用此法得到的所谓“超 级巨鼠”,曾引起整个生物学界的轰动。
到目前为止，人类已获得转基因鱼、鼠、羊、猪、 兔、牛等等大小动物。
4
动物所有细胞均整合有外源基因，则具有将外源 基因遗传给子代的能力，通常被称为转基因动物。
一般用胚胎干细胞法或逆转录病毒载体法制备的 第一代转基因动物均为嵌合体动物，而显微注射 法得到的第一代转基因动物中，也有20％为嵌合 体动物。
当外源基因在转基因动物体内表达，并培育出其 表型与人类疾病症状相似的动物模型，则称其为 转基因动物模型。
目前, 已经培育出了动脉粥样硬化、镰刀形红细胞 贫血症、痴呆症、自身免疫病、淋巴系统病、真 皮炎及前列腺癌等多种疾病的模型动物,为这类疾 病的研究提供了方便。
35
（3）动物品种改良
通过外源基因的导入，改造动物的基因组,可 达到使家畜、家禽的生长速度加快，肉、蛋或奶 产量及品质提高，饲料利用率提高、抗病力加强 的目的。 目前应用最广的是，通过此技术改变牛奶的品质 和成份。在我国已获得转人乳清白蛋白、人乳铁 蛋白等转基因牛奶，为我国的“人源化牛奶”产 业化定了重要的基础。
2
转基因动物（transgenic animal）的概念
指借助基因工程技术将外源基因导入受体动物染 色体内，外源基因与动物基因整合后，随细胞的 分裂而扩增，在体内表达，并能稳定的遗传给后 代的动物。
即指基因组中整合有外源基因的一类动物。 整入动物基因组的外源基因被称为转基因
(transgene)。
类具有较多的相似性。 因而猪在提供人类移植所用的器官方面成为
《转基因动物》课件2
转基因动物在农业领域的应用
01
提高生产效率、增加农产品安全性、降低生产成本。
转基因动物在医学领域的应用
02
用于药物研发、疾病治疗和预防、生物材料。
转基因动物对环境的影响
03
可能破坏生态平衡、影响生物多样性。
转基因动物的伦理问题
人道对待
尊重动物福利，避免不必要的痛苦和牺牲。
安全性问题
确保转基因动物及其产品的安全性，避免潜在的 健康和环境风险。
基因打靶技术的应用范围较广，可用于研究特定基因 的功能、动物模型的构建以及新品种的培育等。
基因转移技术
基因转移技术是一种将外源 基因导入动物细胞中的技术 ，它可以通过多种方法实现 ，如病毒载体、质粒DNA等
。
基因转移技术可用于生产转 基因动物、研究特定基因的 表达和功能以及治疗动物疾
病等。
基因转移技术的发展为转基 因动物的研究和应用提供了 重要的技术支持。
转基因动物技术是基因工程领域的一 个重要分支，旨在通过改变动物的遗 传物质来赋予其某些特定的性状或功 能。
转基因动物的发展历程
1
1980年代初，科学家开始尝试将外源基因导入动 物受精卵，成功培育出第一批转基因动物。
2
1990年代，随着基因打靶技术的发展，科学家能 够精确地定向改造动物的基因组，进一步推动了 转基因动物的研究和应用。
01
03
此外，转基因动物在环保、生物能源等领域也有广阔 的应用前景，有望为人类社会的可持续发展做出重要
贡献。
04
在生物医学领域，转基因动物可用于研究人类生理和 病理过程、药物代谢和药效评价等方面，为生物医学 研究提供有力支持。
02
转基因动物技术
基因克隆技术
阿尔兹海默症动物模型概述
造模方法：大多数是通过注射Aβ到实验动物海马区来实现，剂量范围在 5~10μg 之间，体积多为5μL。方法有单侧海马内注射、双侧海马内注射 等，注射后应留针 10 min，以保证溶液充分弥散。 优点： 出现Aβ 沉积、tau 蛋白异常磷酸化、胆碱能的缺失灯明显病理特 征 缺点：不符合 AD 慢性起病特点，且造模的注射位点对脑组织造成不同程 度的损伤。
动物模型
01
以衰老为基础 的AD模型
自然衰老的动物模型 快速老化小鼠模型
02
各种因素诱发 的AD模型
化学损伤
物理损伤
饮食诱导
03
转基因AD模型
APP 转基因模型 PS1 转基因模型 tau 相关模型 多重转基因模型
以衰老为基础的AD模型
AD 多发于老年人，衰老型 AD 动物模型是根据年龄老化为 AD 的重要危险因素之一而建立，主要 为自然衰老、快速性衰老模型 。
缺点：可以模拟AD的临床症状，但缺乏AD特异性胆碱神经损伤以及Aβ 沉积。且由于创伤较大，不相关的干扰因素过多，易引起脑内其他部位的 损伤及造模动物的死亡。因此，该模型成功率低，现在已很少使用。
饮食诱导AD 模型
高脂饮食诱导模型
有报道指出动物给予高脂饲料饲养可降低大脑对葡萄糖的摄取，诱导动物模型产生糖耐量降低及胰岛素抵 抗，亦可损伤神经元胰岛素受体功能，引起tau 蛋白过度磷酸化，从而导致 NFT。
神经细胞- AD 谷氨酸
Bcl-2 Bax
caspase
神经细胞凋亡
Ca+内流-----细胞内钙离子超载 -----细胞超微结构破坏 膜电位改变
以化学为基础的AD模型
秋水仙碱诱导模型
秋水仙碱可选择性破坏海马神经元，降低乙酰胆碱酯酶 （AChE）活性，破坏胆碱能神经通路，使动物出现短期学 习记忆障碍。秋水仙碱诱导的AD大鼠海马中发现了染色体 溶解和淀粉样蛋白斑块以及高水平的 ROS、亚硝酸盐、 TNF-α.
动物模型
01
以衰老为基础 的AD模型
自然衰老的动物模型 快速老化小鼠模型
02
各种因素诱发 的AD模型
化学损伤
物理损伤
饮食诱导
03
转基因AD模型
APP 转基因模型 PS1 转基因模型 tau 相关模型 多重转基因模型
以衰老为基础的AD模型
AD 多发于老年人，衰老型 AD 动物模型是根据年龄老化为 AD 的重要危险因素之一而建立，主要 为自然衰老、快速性衰老模型 。
缺点：可以模拟AD的临床症状，但缺乏AD特异性胆碱神经损伤以及Aβ 沉积。且由于创伤较大，不相关的干扰因素过多，易引起脑内其他部位的 损伤及造模动物的死亡。因此，该模型成功率低，现在已很少使用。
饮食诱导AD 模型
高脂饮食诱导模型
有报道指出动物给予高脂饲料饲养可降低大脑对葡萄糖的摄取，诱导动物模型产生糖耐量降低及胰岛素抵 抗，亦可损伤神经元胰岛素受体功能，引起tau 蛋白过度磷酸化，从而导致 NFT。
神经细胞- AD 谷氨酸
Bcl-2 Bax
caspase
神经细胞凋亡
Ca+内流-----细胞内钙离子超载 -----细胞超微结构破坏 膜电位改变
以化学为基础的AD模型
秋水仙碱诱导模型
秋水仙碱可选择性破坏海马神经元，降低乙酰胆碱酯酶 （AChE）活性，破坏胆碱能神经通路，使动物出现短期学 习记忆障碍。秋水仙碱诱导的AD大鼠海马中发现了染色体 溶解和淀粉样蛋白斑块以及高水平的 ROS、亚硝酸盐、 TNF-α.
老年性痴呆的细胞模型
Aβ25~35和Aβ1~42 诱导培养的海马神 经细胞建立AD细胞 模型, 引起海马神经 细胞退变是通过凋 亡途径。
低浓度Aβ(<40nmol/L)对 海马神经元是营养作用; 高浓度Aβ(>100nmol/L) 对成熟的神经元是毒性作 用,对于分化早期的神经 元,Aβ表现为神经营养作 用。
不同结构片段的Aβ产生不同 的神经生物效应： ① Aβ1~38的活性与Aβ1~40 及Aβ25~35一致; ② Aβ1~28的毒性作用小于 Aβ1~40; ③ Aβ1~16和Aβ17~28无神 经营养和神经毒性作用。
(3)P19细胞
神经源性的小鼠胚胎癌细胞株
视黄酸（RA） 诱导 P19向神经 元分化
选择性的APP695表 达增加，并伴随有神 经细胞样的形态分化
将RA和抑制非神经元生长的阿糖胞苷类药物同时 加入培养的P19细胞 选择性的诱导其向单纯的神经元分化
P19细胞作为研究神经分化机制的模型
3.神经胶质细胞
4.非神经细胞-淋巴细胞、成纤维细胞
AD患者中枢神经系统以外的许多组织也出 现异常。因此AD是多系统受损的疾病。所 以非神经元的外周细胞，如淋巴细胞、成 纤维细胞等也被广泛用来研究观察AD有关 的信号转导和胞膜流动性等。这一细胞模 型最大优点是易获取、分离建立。
5.杂交组织细胞
(1)畸胎瘤AD杂交细胞NT2 AD 患者线粒体 DNA 突变导致细胞色素 C 氧化酶（COX） 功能障碍，引起生物能量降低和活性氧产物增加，最终导 致细胞凋亡。采用 DNA 结合诱变剂溴化乙锭，选择性的 耗尽人畸胎瘤细胞株内源性线粒体 DNA，然后与 AD 患者 血小板内的线粒体 DNA 杂交获取畸胎瘤 AD 杂交细胞 NT2，作为AD细胞模型。此杂交的细胞株可用于研究 AD 线粒体的电子转移链酶COX活性、静态或动态下钙平衡、 自由基、Aβ 产生、 沉积等变化。NT2 畸胎瘤 AD 杂交细 胞株，在细胞和亚细胞水平概括了 AD发病机制及病理组 织学方面的特异性改变，为进一步研究 AD 的病理学及治 疗学提供了一个较好的体外模型。
转基因生物的安全性课件
转基因生物的优点和缺点 ● (1)优点 ● ①解决粮食短缺问题； ● ②减少农药使用，从而减轻环境污染； ● ③节省生产成本，降低粮食售价； ● ④增加食物营养，提高附加价值； ● ⑤增加食物种类，提升食物品质； ● ⑥促进生产效率，带动相关产业发展。
● (2)缺点 ● ①可能产生新病毒和新的过敏原； ● ②可能产生抗除草剂的杂草； ● ③可能使疾病的传播跨越物种障碍； ● ④可能会损害农田生态系统的生物多样性； ● ⑤可能破坏生态系统的稳定性。
●2．转基因生物引发人们在____食_物__安_全_、 生物安全 _________和__环_境__安_全___三个方面发生了激烈的争 论。
要点三 理性看待转基因技术
●1．正确的做法应该是_趋__利_避__害___，而不能因噎废食。
●2．建立相应的法规，如1993年制定的 《_基__因_工__程__安__全_管__理__办_法_____》和2002年颁布的 《 _ _ _农_业__转__基_因__生__物_标__识__管_理_ _办__法__ ___ __ __ 》 。
● 3．外来物种入侵易造成严重危害的原因 ● (1)外来物种进入新的生态系统之后，由于没有天敌，极易造成生长失控，破坏生态系统的结构。 ● (2)外来物种在新的生态系统中，通过与当地物种竞争营养或食物、分泌释放化学物质、形成大面积
优势群落等方式，直接影响当地物种的生存，加速生活力较弱的物种的消失。
●1．转基因生物存在安全性的原因 ●(1)目前对______基_因__的__结_构_、______基_因__间__的_相__互__作_用及
_基__因_的__调__控_机__制______等了解有限。 ●(2)目的基因往往是_____异__种_生_的物基因。 ●(3)外源基因往往是随机插入宿主细胞基因组的。
阿尔茨海默病实验性动物模型的研究进展
多态 性 学说 、Ａ 级 联反 应学 说 、ｔｕ蛋 白学说 、胆 ３ １ ａ
碱能学说、 自身免疫学 说 以及能量代谢 障碍学 说
等 － 。依据 Ａ ６ Ｄ发病学说 ，国内外学者 已建立了
多种 ＡＤ样 动 物模 型 ，但 每种模 型 均有 一定 的局 限 性 ，不 能全 面模拟 出 Ａ Ｄ的特 征 。本文 概 述近 年来
要 成分 是 高度磷 酸化 的 ｔ ａ 白。ｓ ｕ蛋 Ｐ的主要 成分是
Ｂ 淀粉样蛋 白 （ ｙ ｉ ｂｔ，Ａ ） ｍ ｏ ａ １ 。异常过度磷酸 ａ ｌｄ ｅ ３ 化 ｔ 蛋 白和 Ａ 是 Ａ ａ ｕ ３ １ Ｄ发病的重要效应分子。 目
前关 于 ＡＤ的发 病机 制有 多种 假 说 ，如基 因突变 和
（ ａ ｅ ｅ ｃｌｆａ ｎ ，Ｐ ） 所 组 成 ，Ｐ Ｆ的主 ｐｉ ｄ ｈｌ ａ ｉ ｍｅ ｔ ＨＦ ｒ ｉ ｌ Ｈ
定位 于 ２ ｌ号染 色 体 上 的淀 粉 样 前 体 蛋 白
（ ｙｏ ｒｃｒ ｒｐｏ ｉ，Ａ Ｐ） 基 因 突 变 与 Ａ ｍ ｉ ａ ｌｄｐｅｕｓ ｒｔｎ Ｐ ｏ ｅ Ｄ
Ａ Ｄ样动物模型的研究进展 ，并初步分 析其特点 以
及 可能 的应用 。
教育部 留学归 国人员启动基金资助项 目 福建省 自然科学基金 资助项 目 （ ０ １０ ３ Ｃ００１）
维普资讯
一
９８ 一
国外医学 ・ 老年 医学分册
２０ ０ ８年 ５月
分泌酶 发生 改变 ，进 而影 响 Ａ Ｐ的正 常 处理 过 程 ， Ｐ 最终导 致 Ａ１的产 生 、 ｓ ３ Ｐ的 形 成 和 神 经 元 的 退 行 性变 。Ｂｒｈｌｌ 建 立 了 表 达 人 类 野 生 型 和 ｏｃｅ ＿ ｔ８ Ａ ４ Ｅ突变型 Ｐ ２６ Ｓ一１的转 基 因 小 鼠模 型 ，发 现 野 生型 和 突 变 型 的 Ｐ Ｓ一１均 被 蛋 白水 解 酶 切 割 成 ２ Ｋ Ｎ末端 和 １Ｋ ７ Ｄ— ７ Ｄ—Ｃ末 端 ２个 片 断 ；为 了观 察突 变型 Ｐ １对 淀粉 样 蛋 白形 成 的影 响 ，Ｂ ｒｈ Ｓ一 ｏｃ— ｅ ｈ让带 野生型 和 突 变 型 Ｐ Ｓ一１基 因 的小 鼠分别 和 带 Ａ Ｐｗ 基 因 的小 鼠杂 交 ，结果 发现 突变 型 Ｐ Ｐ ｓｅ Ｓ一 １和 Ａ Ｐｗ 共表 达 的转基 因小 鼠脑 内的 Ａ １—４／ Ｐｓｅ ３ １ ０ ４ ／３的生成 率较 野 生 型 Ｐ ２４ Ｓ一１和 Ａ Ｐｗ 共 表 达 Ｐｓｅ 的小 鼠或单 独 表达 Ａ Ｐｗ Ｐ ｓｅ的小 鼠高 ５ ％ ，提 示 突 ０ 变型 Ｐ １ Ｓ 可增 加 ＡＢ形 成 的危 险性 。Ｊｎｓ等 ¨ ａｕ 建
碱能学说、 自身免疫学 说 以及能量代谢 障碍学 说
等 － 。依据 Ａ ６ Ｄ发病学说 ，国内外学者 已建立了
多种 ＡＤ样 动 物模 型 ，但 每种模 型 均有 一定 的局 限 性 ，不 能全 面模拟 出 Ａ Ｄ的特 征 。本文 概 述近 年来
要 成分 是 高度磷 酸化 的 ｔ ａ 白。ｓ ｕ蛋 Ｐ的主要 成分是
Ｂ 淀粉样蛋 白 （ ｙ ｉ ｂｔ，Ａ ） ｍ ｏ ａ １ 。异常过度磷酸 ａ ｌｄ ｅ ３ 化 ｔ 蛋 白和 Ａ 是 Ａ ａ ｕ ３ １ Ｄ发病的重要效应分子。 目
前关 于 ＡＤ的发 病机 制有 多种 假 说 ，如基 因突变 和
（ ａ ｅ ｅ ｃｌｆａ ｎ ，Ｐ ） 所 组 成 ，Ｐ Ｆ的主 ｐｉ ｄ ｈｌ ａ ｉ ｍｅ ｔ ＨＦ ｒ ｉ ｌ Ｈ
定位 于 ２ ｌ号染 色 体 上 的淀 粉 样 前 体 蛋 白
（ ｙｏ ｒｃｒ ｒｐｏ ｉ，Ａ Ｐ） 基 因 突 变 与 Ａ ｍ ｉ ａ ｌｄｐｅｕｓ ｒｔｎ Ｐ ｏ ｅ Ｄ
Ａ Ｄ样动物模型的研究进展 ，并初步分 析其特点 以
及 可能 的应用 。
教育部 留学归 国人员启动基金资助项 目 福建省 自然科学基金 资助项 目 （ ０ １０ ３ Ｃ００１）
维普资讯
一
９８ 一
国外医学 ・ 老年 医学分册
２０ ０ ８年 ５月
分泌酶 发生 改变 ，进 而影 响 Ａ Ｐ的正 常 处理 过 程 ， Ｐ 最终导 致 Ａ１的产 生 、 ｓ ３ Ｐ的 形 成 和 神 经 元 的 退 行 性变 。Ｂｒｈｌｌ 建 立 了 表 达 人 类 野 生 型 和 ｏｃｅ ＿ ｔ８ Ａ ４ Ｅ突变型 Ｐ ２６ Ｓ一１的转 基 因 小 鼠模 型 ，发 现 野 生型 和 突 变 型 的 Ｐ Ｓ一１均 被 蛋 白水 解 酶 切 割 成 ２ Ｋ Ｎ末端 和 １Ｋ ７ Ｄ— ７ Ｄ—Ｃ末 端 ２个 片 断 ；为 了观 察突 变型 Ｐ １对 淀粉 样 蛋 白形 成 的影 响 ，Ｂ ｒｈ Ｓ一 ｏｃ— ｅ ｈ让带 野生型 和 突 变 型 Ｐ Ｓ一１基 因 的小 鼠分别 和 带 Ａ Ｐｗ 基 因 的小 鼠杂 交 ，结果 发现 突变 型 Ｐ Ｐ ｓｅ Ｓ一 １和 Ａ Ｐｗ 共表 达 的转基 因小 鼠脑 内的 Ａ １—４／ Ｐｓｅ ３ １ ０ ４ ／３的生成 率较 野 生 型 Ｐ ２４ Ｓ一１和 Ａ Ｐｗ 共 表 达 Ｐｓｅ 的小 鼠或单 独 表达 Ａ Ｐｗ Ｐ ｓｅ的小 鼠高 ５ ％ ，提 示 突 ０ 变型 Ｐ １ Ｓ 可增 加 ＡＢ形 成 的危 险性 。Ｊｎｓ等 ¨ ａｕ 建
AD
Folded Functional Protein
Misfolding
Disease-associated abnormal conformer
Conformational changes
Unfunctional Protein
Improper Trafficking Toxic Conformer
（二）值得关注的AD相关神经通路
1.内嗅皮层 2.海马 3.基底核 海马 基底核 皮层
（三）. AD的分子病理学
AD病因很复杂，目前肯定的因素 只有两个，即增龄与遗传。 1.-淀粉样蛋白和老年斑 2.神经原纤维缠结和tau及其病理 机制
一) 淀粉样蛋白
老年斑的主要成分是淀粉样物质。它由 一种被称为淀粉样蛋白(-amyloid
Pathological A conformer
1. 2. 3. 4. Highly amyloidogenic Deposited in Alzheimer’s disease brain Highly neurotoxic Partially resistant to proteolysis
A聚集
APP的翻译后加工
产生A途径: -分泌酶（-secreatase)和-分泌酶(-secreatase)将APP从 A序列的两侧切开，产生的A分泌到细胞外。 不产生A途径: -分泌酶(-secretase)的内肽酶将APP从A序列的中间切 开，形成约100kD的长的N-端片断，分泌到细胞外，称为分泌性APP, 发挥一定的生理作用.
7) regulation of intracellular vesicle transport
磷酸化与去磷酸化的失平衡
不同的taupathy 形态学表现不同，机理也存在差异
转基因动物
二、向受精卵雄性原核注入DNA溶液
受精卵中，有分别来自卵子和精子的两个原核，通常来自精子的雄性原核较大，能容纳更多的外源DNA，因 此一般都是向雄性原核注入DNA溶液；另外，要导入的基因DNA还必须先用琼脂糖凝胶电泳法测定其纯度。
胚胎干细胞（ES细胞）是指从囊胚期的内细胞团中分离出来的尚未分化的胚胎细胞，具有发育全能性，能进 行体外培养<；扩增、转化和制作遗传突变型等遗传操作。本法以整合有外源基因的ES细胞作为供体细胞，大致 过程如下：
（5）将注射过的胚胎，经培养后筛选无发育缺损的囊胚，移植到交配第3天的假孕受体动物子宫内，培育出 转基因动物。本法外源基因整合率高，植入囊胚前筛选合适的转化的ES细胞，克服了以前只能在子代选择的缺点， 并能充分利用分子生物学发展起来的各种先进方法，是很有前途的技术。缺点是不易建立ES细胞系。并且由于通 过嵌合体途径，所以实验周期长。
（2）乙型肝炎病毒携带者模型：乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）携带者的肝癌发生率为正常人 的100~200倍，但尚缺乏有效的治疗方法。HBV只感染人或大猩猩，尚未研究出其他适宜的动物模型。通常认为， 对HBV的免疫应答是受基因支配的，其免疫应答不充分者则成为慢性肝炎；肝癌的发生机制并不是单一的，由慢 性肝炎的存在引起的肝细胞坏死和再生之问存在种种的遗传变异并出现癌变。HBV基因组是含有部分单链区的环 状双链DNA分子，两条单链长度不一，长链为负链（3.2kb），短链为正链，约为负链的50%～80%。因此，如果使 l．2HB-BS的DNA成为两端重复的线状DNA用于转导，可实现全基因组的表达。另一方面，当仅要求HBS抗原表达时， 仅需要导入1.2HB-BS基因即可。将添加了l.2HB-BS的HBV DNA导人C57BL/6J小鼠，在肝复制HBV，在血中释放病 毒粒子。基因的表达在胚胎期发生，但对这些病毒抗原表现免疫宽容（钝化状态），不表现任何病理学变化，因 此可作为人HBV携带者的模型。导人基因的小鼠与人一样，临床表现没有任何异常。
受精卵中，有分别来自卵子和精子的两个原核，通常来自精子的雄性原核较大，能容纳更多的外源DNA，因 此一般都是向雄性原核注入DNA溶液；另外，要导入的基因DNA还必须先用琼脂糖凝胶电泳法测定其纯度。
胚胎干细胞（ES细胞）是指从囊胚期的内细胞团中分离出来的尚未分化的胚胎细胞，具有发育全能性，能进 行体外培养<；扩增、转化和制作遗传突变型等遗传操作。本法以整合有外源基因的ES细胞作为供体细胞，大致 过程如下：
（5）将注射过的胚胎，经培养后筛选无发育缺损的囊胚，移植到交配第3天的假孕受体动物子宫内，培育出 转基因动物。本法外源基因整合率高，植入囊胚前筛选合适的转化的ES细胞，克服了以前只能在子代选择的缺点， 并能充分利用分子生物学发展起来的各种先进方法，是很有前途的技术。缺点是不易建立ES细胞系。并且由于通 过嵌合体途径，所以实验周期长。
（2）乙型肝炎病毒携带者模型：乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）携带者的肝癌发生率为正常人 的100~200倍，但尚缺乏有效的治疗方法。HBV只感染人或大猩猩，尚未研究出其他适宜的动物模型。通常认为， 对HBV的免疫应答是受基因支配的，其免疫应答不充分者则成为慢性肝炎；肝癌的发生机制并不是单一的，由慢 性肝炎的存在引起的肝细胞坏死和再生之问存在种种的遗传变异并出现癌变。HBV基因组是含有部分单链区的环 状双链DNA分子，两条单链长度不一，长链为负链（3.2kb），短链为正链，约为负链的50%～80%。因此，如果使 l．2HB-BS的DNA成为两端重复的线状DNA用于转导，可实现全基因组的表达。另一方面，当仅要求HBS抗原表达时， 仅需要导入1.2HB-BS基因即可。将添加了l.2HB-BS的HBV DNA导人C57BL/6J小鼠，在肝复制HBV，在血中释放病 毒粒子。基因的表达在胚胎期发生，但对这些病毒抗原表现免疫宽容（钝化状态），不表现任何病理学变化，因 此可作为人HBV携带者的模型。导人基因的小鼠与人一样，临床表现没有任何异常。