耐药细胞株构建 档

论著转染肿瘤坏死因子及反向多药耐药基因对乳腺癌细胞耐药基因表达的影响陈亦欣,文飞球,申维玺,叶建增 基金项目深圳市科技局课题(5563)作者单位5广东省深圳市,暨南大学第二临床医学院深圳市人民医院肿瘤研究所 【摘要】　目的　构建反向pEG FP -MDR1重组表达载体和pD s Red2-T NF -α重组表达载体,在乳腺癌耐药细胞株MCF -7/ADR 中进行表达,并观察它们对多药耐药(MDR )基因的影响。

方法　应用RT -PCR 和D NA 重组技术构建反向绿色荧光蛋白pEGFP -MDR1融合蛋白表达载体和红色荧光蛋白p D s Red2-T NF -α融合蛋白表达载体,分别和同时导入乳腺癌耐药细胞株MCF -7/ADR 中进行表达,应用荧光显微镜直接观察融合蛋白的表达情况,RT -PCR 和免疫细胞化学染色法分别检测转染前后MDR1-mRNA 和P 糖蛋白表达情况。

结果　转染了反向pEGFP -MDR1载体的细胞可见到绿色荧光,转染了pDs R ed2-T NF -α载体的细胞可见到红色荧光,而同时转染了反向pEGFP -MDR1载体和p D s Red2-T NF -α载体的细胞可见到红色及绿色荧光。

转染后的细胞在mRNA 水平及蛋白水平明显降低了耐药细胞MCF -7/ADR 的MDR1基因的表达。

结论　反向pEGFP -MDR1融合蛋白和pD s Red2-T NF -α融合蛋白能在乳腺癌耐药细胞MCF -7/ADR 中分别及同时获得表达,并能抑制MDR1基因在MCF -7/ADR 细胞中的表达,为进一步研究基因治疗联同免疫治疗逆转乳腺癌耐药建立了很好的基础。

【关键词】　多药耐药基因;肿瘤坏死因子α;乳腺肿瘤 【中图分类号】R 73719　【文献标识码】A 【文章编号】1007-9572(2008)12-2128-04Effects of TNF -αand Rever s e M DR1Gene Tran sfect i on o n the Expr essio n of MD R1Gene i n Br ea st C ancer C ellL i ne CH EN Yi -xin,W EN Fei -qiu,SH EN Wei -xi,et a l .Ca ncer Institute,the Second C linica l Hospita l of J i ′nan U niversity ,Shenzhen 518020,China 【Ab stra c t 】　O bjective T o ex press the recombinant vec t ors of reve rs e enhanced green flu orescent protein (EGFP )with reverse multidrug re sist ance 1(pEGFP -MDR1)and red fl uorescent protein (D s Red2)wit h T NF -αgene (p D s Red2-T NF -α)in multidrug re sist ant breast cancer cell line MCF -7/ADR ,and t o obs e rve the ir effects on the expressi on of MDR1g ene .M e thod s T o construct the recombinant vec t or of pEGFP -MDR1gene,as we ll as reco m binant vec t or of pDs R ed2-T NF -αg ene by R T -PCR and DNA reco mbinant techniques .The reco m binant vect ors were i ntroduced int o multidrug resistant brea st cance r cell line MCF -7/ADR and the ex pressi on of the fusi on p rot e inswas direc tly obse rved by fluorescentm ic r oscope.The ex 2pre ssions ofMDR1-mRNA and P -glycoprotein (P -g p )before and after the transfection were obs e rved by R T -PCR and i m 2mun ohist oche m istry .Results I n cells trans fected with reve rs e p EGFP -MDR1v ec t or green fluore s cence could be s een;in cells transfec ted with pDsRed2-T NF -αvec t or red fluore scence could be s een;and ce lls transfec t ed with bot h reve rs e p EGFP -MDR1and pDsRed2-T NF -αvect ors b oth green and red fl uorescence could be seen .Ce lls after transfec ti on had much l owe r MDR1ex p re ssi on a t mRN A and P -gp l eve l compa red w ith the n ontransfected ce ll .C onclusio n T he reverse pEGFP -MDR1and pD s Red2-T NF -αcan res pectively and si m ultaneously ex p ress in multidrug resistant breast cance r cell lineMCF -7/ADR ,and can inhibit the expre ssi on of MDR1gene inMCF -7/ADR cells .T his provides a good ba sis for furthe r resea rch on reversal ofmultidrug resistance i n brea st cancer by gene t herapy together with i mmun othe rapy . 【Key wor d 】　MDR1gene;Tu mor necrosis fact or -alpha;B reast neop las m s 乳腺癌是威胁我国女性健康的最常见的一种恶性肿瘤,近年来发病率呈直线上升趋势。

依西美坦与低剂量甲氨蝶呤对依西美坦耐药人乳腺癌细胞的协同效应及逆转耐药机制居伶俐;袁媛;潘跃银【摘要】Objective To investigate the combined effect of exemestane and low-dose methotrexate on exemestane-resistant MCF-7 human breast cancer cells( MCF-7/EXE). Methods Antiproliferative effects of exemestane and low-dose of methotrexate, alone and in combination on growth of MCF-7/EXE cells were assessed by using the MTT assay. Synergistic interaction between the two drugs was evaluated in vitro by using the combination index ( CI) method. The cell cycle distribution was analyzed by flow cytometry in a half inhibitory concentration of exemestane and low-dose of methotrexate . The changes of apoptosis on MCF-7/EXE cells exposed to two drugs alone or in com-bination were observed by fluorescence microscope. The expression of Bcl-2,AKT,P-AKT and cyclooxygenase-2 was investigated by Western blot. Results MTT assays indicated that the combination treatment apparently decreased the viability of MCF-7/EXE cells compared to single drug treatment (CI<0. 9). In addition, the combination of exemestane and low-dose methotrexate exhibited a synergistic inhibition of cell proliferation, arrested the cell cycle in the S phase significantly and produced a stronger inhibitory effects onP-AKT, Bcl-2 and cyclooxygenase-2 ex-pression than control or individual drug treatment. Conclusion The combination of the two inhibitors significantly increases the response as compared to single agent treatment,suggesting that combination treatment which can re-verse the resistance of exemestane could be a more effective approach to breast cancer.%目的研究依西美坦( EXE )与低剂量甲氨蝶呤( MTX)对依西美坦耐药人乳腺癌 MCF-7细胞( MCF-7/EXE)的增殖抑制作用及意义。

RRM2基因过表达卵巢癌细胞株SKOV3的构建及对顺铂敏感性观察王中山;张梦;张冬梅;杨新慧【摘要】目的构建核糖核苷酸还原酶亚基M2(RRM2)基因过表达的卵巢癌细胞株SKOV3,并观察RRM2基因过表达的SKOV3细胞对顺铂的敏感性.方法提取SKOV3细胞总RNA,反转录得到cDNA,以其为模版进行PCR反应,获得RRM2基因.通过酶切(XhoⅠ、BamHⅠ)连接的方法,将RRM2基因插入慢病毒表达载体pLVX-IRES-ZsGreen1中,得到重组质粒pLVX-IRES-RRM2.利用脂质体将重组质粒转染293FT细胞,包埋病毒.将SKOV3细胞分为实验组和对照组,实验组转染pLVX-IRES-RRM2慢病毒,96 h后测算慢病毒感染效率.对照组不进行转染.采用Western blotting法检测两组细胞中的RRM2蛋白;流式细胞仪检测两组凋亡细胞与死亡细胞,反映细胞对顺铂的敏感性.结果重组质粒pLVX-IRES-RRM2经限制性内切酶XhoⅠ和BamHⅠ双酶切验证,各片段大小符合预期,测序结果显示RRM2基因序列正确.实验组、对照组细胞中RRM2 mRNA相对表达量分别为0.280±0.055、0.102±0.022,RRM2蛋白相对表达量分别为0.582±0.049、0.228±0.032,实验组高于对照组,说明RRM2基因过表达的SKOV3细胞构建成功.实验组、对照组凋亡细胞比例分别为0.39%±0.08%、9.60%±1.20%,死亡细胞比例分别为26.65%±2.20%、44.96%±2.80%,实验组凋亡细胞比例和死亡细胞比例均低于对照组(P均<0.01).结论成功构建了RRM2基因过表达的SKOV3细胞,RRM2基因过表达的SKOV3细胞对顺铂的敏感性降低.【期刊名称】《山东医药》【年(卷),期】2017(057)039【总页数】4页(P30-33)【关键词】卵巢癌;卵巢癌细胞株;核糖核苷酸还原酶家族成员2;顺铂;药物耐受性;药物敏感性【作者】王中山;张梦;张冬梅;杨新慧【作者单位】徐州医科大学,江苏徐州221004;徐州市中心医院;徐州市中心医院;徐州市中心医院【正文语种】中文【中图分类】R737.31卵巢癌是常见的妇科肿瘤，病死率位居妇科恶性肿瘤之首[1]，多数(85%)为上皮性卵巢癌(EOC)[2]。

稳定表达 Notch1胞内结构域肺腺癌细胞株的构建及鉴定邹斌;吴霞;周学亮;詹宇亮;赖松青;刘季春【摘要】Objective To construct a lung adenocarcinoma cell line A 549 with stable expression of Notch1 intracellu-lar domain (N1ICD).Methods TheN1ICD fragment was amplified by PCR, which was used to construct pHBLV-N1ICD-ZsGreen-Puro plasmid (LV-N1ICD).The recombinant plasmid was identified by PCR and gene sequencing .LV-N1ICD was packaged by transfection of 293T cells with recombinant plasmid and auxiliary plasmids which were purified without endotoxinextraction .Lentivirus empty plasmid ( LV-ZsGreen-Puro ) was also constructed .Drug screening method was used to determine the titer of LV-N1ICD and LV-ZsGreen-Puro.A549 cells were divided into A549-N1ICD group and A549-ZsGreen-Puro group.Puromycin was used to screen stable transfection cell line after infection of A 549 cell with LV-N1ICD or LV-ZsGreen-Puro.Transfection efficiency was observed by fluorescence microscope and cells with green fluores -cent were preliminarily identified as stable transfection cell lines .Taking A549 cells as the control group , and N1ICD mR-NA and protein expression was further detected by qPCR and Western blotting , respectively .Results PCR and gene se-quencing showed that pHBLV-N1ICD-ZsGreen-Puro plasmid was successfully constructed .The titer of LV-N1ICD was 1 × 108 TU/mL and the LV-ZsGreen-Puro was 1 ×108 TU/mL.Cells shape had no obvious changes and green fluorescence was detected in about 70%-80%cells of the A549-ZsGreen-Puro and A549-N1ICD group by fluorescence microscope after Pu-romycin screening .The N1ICD mRNA expression of the control group , A549-ZsGreen-Puro group and A549-N1ICD group was 1.59 ±0.11, 1.09±0.10 and 70.81 ±6.39, respectively and the N1ICD mRNA expression of the A549-N1ICD group was significant higher than that of the other two groups (all P<0.01).The N1ICD protein expression of thethree&nbsp;groups was 1.99 ±0.13, 1.73 ±0.08 and 6.58 ±0.43, respectively and the N1ICD protein expression of the A549-N1ICD group was significant higher than that of the other two groups (allP<0.01).Conclusions A lung adenocarcinoma cell line A549 with stable expression of N1ICD was successfully constructed .%目的：构建Notch1胞内结构域（ N1ICD）稳定表达的肺腺癌A549细胞株。

苦参碱对胰腺癌吉西他滨耐药细胞化疗敏感性的影响郭晨博;毛玉宁;张贺;张彩勤;张延英;汪永锋;师长宏【期刊名称】《中国实验动物学报》【年(卷),期】2022(30)8【摘要】目的探索苦参碱在胰腺癌吉西他滨(GEM)耐药中的作用,以期为恢复胰腺癌化疗敏感性提供新的治疗手段。

方法选择胰腺癌细胞系AsPC-1,使用吉西他滨诱导构建胰腺癌吉西他滨耐药细胞株AsPC-1-GEM,通过CCK-8实验测试其耐药性,检测细胞活力分析苦参碱对胰腺癌吉西他滨耐药细胞株的作用;进一步通过RT-PCR和Western Blot检测耐药前后多药耐药蛋白2(ABCG2)的表达变化以及苦参碱对ABCG2的影响;利用裸鼠建立胰腺癌吉西他滨耐药细胞系异种移植模型,观察使用苦参碱治疗后肿瘤体积的变化;通过免疫组化检测苦参碱对ABCG2表达的影响。

结果耐药细胞AsPC-1-GEM中ABCG2表达增高(P<0.01),苦参碱可有效降低耐药细胞ABCG2的表达(P<0.01),提高胰腺癌吉西他滨耐药细胞的敏感性(P<0.01)。

体内实验进一步验证了苦参碱治疗可降低ABCG2的表达(P<0.01),并减缓肿瘤生长(P<0.01)。

结论苦参碱通过降低ABCG2的表达,提高胰腺癌吉西他滨耐药细胞株的敏感性。

【总页数】8页(P1042-1049)【作者】郭晨博;毛玉宁;张贺;张彩勤;张延英;汪永锋;师长宏【作者单位】甘肃中医药大学;空军军医大学实验动物中心【正文语种】中文【中图分类】Q95-33【相关文献】1.TLR-9在胰腺癌细胞化疗中对吉西他滨耐药性的影响2.苦参碱对胰腺癌吉西他滨耐药及Aurora-A表达的影响3.苦参碱对结肠癌耐药细胞化疗药物敏感性及自噬水平的影响4.下调AFAP-1L2表达对人胰腺癌细胞吉西他滨化疗敏感性的影响5.长链非编码RNA MALAT1对耐吉西他滨胰腺癌细胞化疗敏感性的影响因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

重组腺病毒介导MRP反义RNA对人肝癌耐药细胞株MDR表型逆转的实验研究陈琳;苟兴华;严律南;李德华;韩蕾;赵兰英;胡海洋【期刊名称】《实用肿瘤杂志》【年(卷),期】2005(20)6【摘要】目的探讨重组腺病毒载体介导的多药耐药相关蛋白(M RP)反义RNA对多柔比星(阿霉素)诱导的人肝癌耐药细胞株SMM C-7721/ADM多药耐药表型的逆转作用。

方法将M RP基因5′端转录起始位点附近长约500 bp的基因片段反向克隆到腺病毒A dE asy系统的穿梭质粒A dT rack-CM V上,通过在细菌内同源重组、并在293细胞中包装、扩增,构建出携带反义M RP的重组腺病毒A dE asy-GFP-A sm rp(简称A d-A sm rp),测定其滴度及对肝癌细胞SMM C-7721/ADM 的转染效率;在体外用M O I为100的该重组腺病毒转染肝癌细胞SMM C-7721/ADM,测定转染后细胞对阿霉素(ADM)及柔红霉素(DNR)的半数致死量(IC50)并计算耐药倍数(RF值);在转染后不同时间点(24、48、72、96、120小时)用流式细胞仪动态测定细胞对DNR摄取的变化及细胞膜表面P190表达、并用RT-PCR 反映细胞M RP之mRNA水平的变化(以βactin mRNA水平为内对照)。

结果重组腺病毒A d-A Sm rp滴度可达2.5×109efu/m l,M O I为100时,即可致90%以上的肝癌细胞SMM C-7721/ADM被感染。

体外实验中,该重组腺病毒(M OI=100)转染后的人肝癌耐药细胞SMM C-7721/ADM对ADM、DNR的IC50分别为0.487μg/m l、0.328μg/m l,RF分别为97.4倍、109.3倍,RF分别下降36.8倍和35.4倍。

在转染后24小时,M RP之mRNA水平开始下降并呈持续下降趋势(P<0.05),48小时后伴有P190蛋白表达的持续下降(P<0.05),二者趋势一致。

自噬在人肝癌细胞Huh 7对仑伐替尼耐药中的调节作用Δ陈大红＊，吴亚菲，刁文婧，杨蕙华，毛鹏娟，李琴 #（上海交通大学医学院附属第一人民医院临床药学科，上海　200080）中图分类号 R 965；R 735.7 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2024）08-0961-06DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2024.08.11摘要 目的 研究自噬在人肝癌细胞Huh 7对仑伐替尼耐药中的调节作用。

方法 以人肝癌细胞Huh 7为对象，采用低浓度逐渐递增联合长期给药的方式构建仑伐替尼耐药细胞模型Huh 7-LR ，以CCK-8实验和流式细胞术检测亲本细胞Huh 7及耐药细胞Huh 7-LR 对仑伐替尼的敏感性，以Western blot 实验和GFP-mCherry-LC 3质粒转染实验分别检测细胞中自噬效应蛋白Beclin-1、自噬接头蛋白sequestosome 1（又名p 62）、微管相关蛋白1轻链3（LC 3）的表达水平和细胞自噬水平。

通过饥饿诱导构建自噬激活细胞模型，以Western blot 实验和GFP-mCherry-LC 3质粒转染实验分别检测细胞中p 62蛋白表达水平和细胞自噬水平，以流式细胞术检测自噬激活对仑伐替尼敏感性的影响。

结果 与亲本细胞相比，Huh 7-LR 细胞的耐药指数为6.2，其p 62蛋白的表达水平显著升高，凋亡率、Beclin-1蛋白的表达水平和LC 3Ⅱ/LC 3Ⅰ比值均显著降低（P ＜0.05或P ＜0.01），自噬水平有所下降。

自噬激活可显著升高Huh 7-LR 细胞中p 62蛋白的表达水平（P ＜0.05）和自噬水平，并显著升高其凋亡率（P ＜0.05）。

结论 自噬参与了仑伐替尼耐药，激活自噬可一定程度逆转肝癌细胞对仑伐替尼耐药。

关键词 自噬；仑伐替尼；肝癌细胞；耐药Regulatory effect of autophagy on the resistance of human liver cancer cell Huh 7 to lenvatinibCHEN Dahong ，WU Yafei ，DIAO Wenjing ，YANG Huihua ，MAO Pengjuan ，LI Qin （Dept. of Clinical Pharmacy ， Shanghai General Hospital ， Shanghai Jiao Tong University School of Medicine ， Shanghai 200080， China ）ABSTRACTOBJECTIVE To investigate the regulatory effect of autophagy on the resistance of human liver cancer cell Huh 7 tolenvatinib. METHODS Using human liver cancer cell Huh 7 as subject ， the lenvatinib-resist cell model （Huh 7-LR ） was generated by the low-dose gradient method combined with long-term administration. The sensitivity of parental cell Huh 7 and drug-resistant cell Huh 7-LR to lenvatinib was detected by using CCK-8 assay and flow cytometry. Western blot assay and GFP-mCherry-LC 3 plasmid transfection were performed to detect the expression levels of autophagic protein Beclin-1， autophagic adapter protein sequestosome 1 （p 62）， microtubule-associated protein 1 light chain 3 （LC 3） and autophagic level. Furthermore ， an autophagy activation model was constructed by cell starvation ， the protein expression of p 62 and autophagy level were detected by using Western blot assay and GFP-mCherry-LC 3 plasmid transfection ， and the effect of autophagy activation on the sensitivity of Huh 7-LR cells to lenvatinib was detected by flow cytometry. RESULTS Compared with parental cells ， the drug resistance index of Huh 7-LR cells was 6.2； protein expression of p 62 was increased significantly ， while apoptotic rate ， protein expression of Beclin-1 and LC 3Ⅱ/ LC 3Ⅰ ratio were all reduced significantly （P ＜0.05 or P ＜0.01）； the level of autophagy was decreased to some extent. Autophagy activation could significantly increase the protein expression of p 62 in Huh 7-LR cells （P ＜0.05） and autophagy level ， and significantly increase its apoptotic rate （P ＜0.05）. CONCLUSIONS Autophagy is involved in lenvatinib resistance ， and activating autophagy can reverse the resistance of liver cancer cells to lenvatinib to some extent.KEYWORDSautophagy ； lenvatinib ； liver cancer cell ； drug resistance2020年全球肝癌确诊病例超90万，死亡病例达83万，是全球范围内第六大常见癌症和第三大常见癌症死亡原因[1]。

.论著.文章编号：1007 -8738(2020)10 -0924 -06组织蛋白酶S(C T SS)在替莫唑胺耐药胶质母细胞瘤T98G细胞高表达并 与预后差相关吕伟峰，贾博，刘伟，郭庆东*(空军军医大学西京医院神经外科，陕西西安710032)[摘要]目的探讨组织蛋白酶S(CTSS)在替莫唑胺（TMZ)耐受的胶质母细胞瘤T98G(T98G-R)细胞中的表达情况。

方法 从美国国立生物技术信息中心（NCBI)数据库获取参与TMZ耐药的显著差异基因，在基因表达谱交互分析（GEPIA2)、中国胶 质瘤基因组图谱（CGGA)数据库中分析CTSS在胶质母细胞瘤（GBM)中的表达情况；实时定量PCR及W estern blot法检测CTSS 在T98G细胞及T98G-R细胞中的表达情况；肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库分析CTSS的表达水平与患者预后的相关性。

结果 在NCBI的基因表达芯片GE0数据GSE2221中，通过比较TMZ耐药胶质瘤细胞差异表达的基因，筛选出一个显著高表达差异 基因CTSS。

GEPIA2数据库分析显示CTSS在胶质母细胞瘤组织中的表达高于正常组织；与T98G细胞相比，T98G-R细胞中 CTSS的mRNA及蛋白水平明显增高；同时，TCGA数据结果显示高表达CTSS的GBM患者预后较差。

结论CTSS在TMZ耐药 的GBM细胞高表达且与患者较差的预后相关。

[关键词]组织蛋白酶S (CTSS);胶质母细胞瘤；替莫唑胺耐受[中图分类号]R379.41，R392-22, Q811.4 [文献标志码]A胶质瘤是一种最常见的原发性中枢神经系统肿 瘤，约占所有颅内原发性肿瘤的50% ~60%[|]。

多形性胶质母细胞瘤（glioblastoma m u h i f o r m e，G B M)是 恶性程度及致死率最高的IV级(世界卫生组织，W H O 分级）胶质瘤，具有增殖迅速、浸润性强及高度异质 性的特点。

Vol.41No.4Apr.2021上海交通大学学报（医学版）JOURNAL OF SHANGHAI JIAO TONG UNIVERSITY (MEDICAL SCIENCE)USP47通过促进抗凋亡蛋白表达介导头颈鳞癌细胞顺铂耐药童桐，秦星，谢非，蒋英英，石剑波，张建军上海交通大学医学院附属第九人民医院·口腔医学院口腔颌面头颈-肿瘤科，国家口腔疾病临床医学研究中心，上海市口腔医学重点实验室，上海市口腔医学研究所，上海200011［摘要］目的·探讨去泛素化酶47（ubiquitin carboxyl-terminal hydrolase 47，USP47）对头颈鳞癌细胞顺铂耐药的影响及潜在机制。

方法·通过梯度增加顺铂浓度，构建头颈鳞癌顺铂耐药细胞株；通过实时定量PCR 和蛋白免疫印迹实验检测耐药株中USP47的表达情况；利用慢病毒载体构建USP47基因过表达或敲除的稳转细胞株，MTT 法检测USP47表达升高或降低对头颈鳞癌细胞顺铂耐药性的影响；并检测USP47对癌细胞增殖、克隆形成和凋亡等生物学行为的影响；通过免疫印迹实验检测USP47对抗凋亡蛋白X-连锁凋亡抑制蛋白（X-linked inhibitor of apoptosis protein ，XIAP ）和重组人B 细胞淋巴瘤因子2xL （recombinant human B-cell leukemia/lymphoma 2xL ，Bcl-xL ）的表达及泛素化水平的影响。

结果·USP47在头颈鳞癌顺铂耐药细胞株中显著高表达；过表达USP47后，顺铂对头颈鳞癌细胞的半数抑制浓度（half maximal inhibitory concentration ，IC 50）明显升高，而敲除USP47可以降低头颈鳞癌顺铂耐药细胞株的IC 50；过表达USP47的头颈鳞癌细胞，其增殖和克隆形成能力均被抑制，而抗凋亡能力明显增强。

硫氧还蛋白还原酶1（TrxR1）属于吡啶核苷酸二硫化物氧化还原酶家族，作为目前已知的唯一能够还原硫氧还蛋白（Trx ）的酶，TrxR1可以将氧化型的Trx 还原成还原型Trx ［1］。

还原型的Trx 能够还原多种蛋白的二硫键，进而调控细胞的多种生物进程，如细胞增殖、分化以及凋亡等等［2］。

肿瘤细胞的代谢水平远高于正常细胞，因而在细胞内会产生大量活性氧［3］。

因此，肿瘤细胞往往会通过诱导抗氧化酶的表达来维持自身的氧化还原稳态，而TrxR1是其中一种被诱导的抗氧化酶。

近年来研究发现，TrxR1在多种肿瘤组织和细胞中高表达，如乳腺癌［4］、胃癌［5］、肺癌［6］和肠癌［7］等，并通过蛋白激酶B （PKB,又名AKT ）、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK ）及信号传导及转录激活蛋白3（Stat3）等信号通路促进肿瘤细胞增殖、抑制凋亡及诱导耐药，是一个理想的抗肿瘤药物开发靶点［3,8］。

目前靶向TrxR1的药物具有丰富的骨架结构，但尚无进入临床使用的TrxR1靶向药物，其中一大制约因素就是Construction and identification of a HEK293cell line with stable TrxR1overexpressionLÜXiaomei 1,ZHOU Zhiyin 1,ZHU Li 1,ZHOU Ji 2,HUANG Huidan 1,ZHANG Chao 1,LIU Xiaoping 11Center of Drug Screening and Evaluation,Wannan Medical College,Wuhu 241000,China;2Center for Reproductive Medicine,First Affiliated Hospital of Wannan Medical College,Wuhu 241000,China摘要：目的构建稳定过表达硫氧还蛋白还原酶1（TrxR1）的HEK293细胞株，为TrxR1的功能研究以及靶向TrxR1药物筛选提供细胞模型。

PKCa/JNK信号通路在乳腺癌多药耐药中的作用机
制研究的开题报告
研究题目：PKCa/JNK信号通路在乳腺癌多药耐药中的作用机制研究
研究目的：乳腺癌是世界上女性发病高居不下的恶性肿瘤，化疗是目前治疗乳腺癌的有效手段之一，但乳腺癌存在着化疗药物多药耐药的问题，严重影响了治疗效果和生存质量。

因此，本研究旨在探讨
PKCa/JNK信号通路在乳腺癌多药耐药中的作用机制，为临床治疗提供新的理论依据和方法。

研究内容：
1. 利用体外细胞实验及体内小鼠移植瘤模型，分别构建药物敏感细胞株和药物耐药细胞株，检测PKCa/JNK信号通路在两种细胞株中的表达差异。

2. 利用Western blotting和荧光定量PCR等技术，分析PKCa/JNK 信号通路对化疗敏感性和耐药性的影响机制。

3. 对PKCa/JNK信号通路的激活剂和抑制剂进行体内和体外实验，评估PKCa/JNK信号通路在乳腺癌化疗多药耐药中的治疗作用。

研究意义：本研究将有助于解析PKCa/JNK信号通路在乳腺癌多药耐药中的作用机制，为临床治疗提供新的理论依据和方法，为乳腺癌化疗多药耐药的解决提供新的思路和方法。