【免疫学检验】知识点整理(第一部分)
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概论+抗原抗体反应1 免疫学基本概念及其生物学功能;免疫:机体识别和排斥抗原性异物的一种生理功能免疫三大功能:免疫防御、免疫自稳、免疫监视中枢免疫器官(骨髓和胸腺)外周免疫器官(淋巴结、脾脏、扁桃体)免疫细胞:淋巴细胞(T,B,NK)、单核巨噬细胞、其他免疫应答细胞(中性粒、嗜酸性、嗜碱性和肥大细胞)免疫分子:免疫球蛋白(IgM,IgG,IgA,IgE,IgD),补体,细胞因子,细胞黏附分子,人类白细胞分化抗原免疫应答:机体免疫系统接受抗原刺激发生的一系列反应,并以排出或分解该抗原为目的的反应过程。
过程:抗原的识别、处理、信息传递(识别阶段),免疫细胞的激活、增殖、分化(活化阶段)以及产生一系列的免疫效应因子(效应阶段)。
临床免疫学检验:研究免疫学检测理论、技术、应用,免疫疾病发病机制、免疫诊断、及防治的一门医学领域的应用学科。
免疫学检测技术的基础是抗原抗体反应,免疫学技术有凝集反应、沉淀反应、补体参与的反应、中和反应和标记免疫反应五种类型。
免疫检验:1)利用免疫检测原理和技术检测免疫活性细胞、抗原、抗体、补体、细胞因子、细胞黏附分子等免疫相关物质;2)体液中的微量物质如激素、酶、血浆微量蛋白、血液药物浓度、微量元素。
临床免疫学:利用免疫学理论和技术研究疾病的免疫病理机制、诊断和鉴别诊断、疗效评价、预后判断和预防的多个分支学科的总称。
免疫性疾病:各种原因引起的机体免疫应答异常所致的疾病,包括超敏反应性疾病、自身免疫病、免疫缺陷病和免疫增生病。
感染免疫学:研究病原微生物与宿主相互关系从而控制感染的学科,传统免疫学核心。
肿瘤免疫学:研究肿瘤免疫原性、机体抗肿瘤的免疫效应及机体的免疫功能与肿瘤发生、发展的相互关系以及肿瘤免疫诊断与防治的学科。
移植免疫学:研究移植物与宿主相互关系从而选择移植物和延长移植物存活的学科。
2 血清学反应的概念;抗体主要存在于血清中,体外的抗原抗体反应称为血清学反应。
抗原抗体反应:抗原与相应抗体在体内或体外发生的特异性结合反应,特异性取决于抗原表位和抗体超变区分子间的结构互补性与亲和性,并通过静电引力、范德华引力、氢键结合力和疏水作用力等非共价键结合在一起。
免疫学检验的这些基础知识你都了解吗免疫学检验是一种重要的医学检验方法,通过检测人体的免疫反应来了解疾病的发生和发展情况。
在现代医学中,免疫学检验已经广泛应用于各个领域,包括诊断疾病、评估治疗效果、筛查潜在疾病等。
了解免疫学检验的基础知识对于我们理解和应用这项技术具有重要意义。
一、免疫学检验是什么?免疫学检验是一种利用免疫反应原理进行检测和测量的技术。
免疫学检验基于免疫系统的特异性和记忆性,通过检测免疫系统产生的抗体或抗原结合来确定目标物质的存在、浓度或活性。
免疫学检验可以分为两种类型:抗体检验和抗原检验。
在抗体检验中,通过检测患者体内产生的抗体水平,来确定是否感染病原体或是否存在特定疾病。
常见的抗体检验方法包括酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫荧光法、免疫电泳等。
在抗原检验中,通过检测目标物质本身,来确定其存在和浓度。
这种方法常用于检测病原体或其他特定物质。
常见的抗原检验方法包括放射免疫测定法(RIA)、免疫荧光法、免疫沉淀法等。
二、免疫反应的基本原理免疫反应是人体免疫系统对抗外来病原体或其他异物的一种防御机制。
它主要由细胞免疫和体液免疫两个方面组成。
1、细胞免疫细胞免疫是由T细胞介导的免疫反应。
当外来抗原进入人体后,它会被特定的抗原呈递细胞(抗原递呈细胞)捕获并进行处理。
这些抗原递呈细胞会将抗原分解成小片段,并将其展示在细胞表面的主要组织相容性复合体(MHC)分子上。
T细胞通过识别这些抗原-MHC复合物来激活免疫反应。
激活的T细胞会分化成不同类型的效应细胞,包括细胞毒性T细胞(CTL)和辅助T细胞。
CTL主要通过释放细胞毒素杀死感染细胞,而辅助T细胞则通过分泌细胞因子来协助其他免疫细胞的活化和功能发挥。
2、体液免疫体液免疫是通过抗体介导的免疫反应。
当外来抗原进入人体后,B细胞会识别并结合特定的抗原。
这会激活B细胞,使其分化成浆细胞,产生大量的抗体。
抗体是一种特异性的免疫蛋白,可以结合并中和病原体或其他异物,从而阻止它们侵入和繁殖。
免疫学一、名词解释:免疫:识别自己和非己,排除非己,维持机体平衡免疫应答(immune response):免疫系统识别和清除抗原的过程。
淋巴细胞归巢(homing):成熟淋巴细胞离开中枢免疫器官后,经血液趋向性定居于外周免疫器官或者组织的特定区域淋巴细胞再循环:淋巴细胞在血液、淋巴液和淋巴器官之间反复循环抗原:能与T细胞的TCR及B细胞的BCR结合,促使其增殖、分化,产生抗体或致敏淋巴细胞,与之结合,进而发挥免疫效应的物质抗原特性:免疫原性:刺激机体产生免疫应答,诱导产生抗体或致敏淋巴细胞的能力。
抗原性(antigenicity):抗原与其诱导产生的抗体或致敏淋巴细胞特异性结合的能力。
抗原表位:抗原分子中决定抗原特异性的特殊化学基团,又称抗原决定簇(抗原表位的性质、数目、位置和空间构象可影响其特异性)B细胞表位:位于抗原分子的表面,可直接刺激B细胞。
T细胞表位:位于抗原分子的任何部位,必须由抗原提呈细胞将抗原加工处理为小分子多肽并与MHC分子结合,才能被TCR识别。
交叉反应:一种抗体能够结合具有相同或相似抗原表位的不同抗原分子,产生的免疫反应称为交叉反应共同抗原表位:不同抗原之间含有的相同或相似的抗原表位。
共同抗原:具有相同或相似抗原表位的两种不同抗原分子抗原的特异性:抗原刺激机体产生免疫应答及其应答产物发生反应所显示的专一性。
抗原结合价:能与抗体分子结合的抗原表位的总数。
抗原表位类型分为:顺序表位(线性)、构象表位(非线性)胸腺依赖性抗原(TD-Ag):需要T细胞辅助才能刺激B细胞产生抗体,如病原微生物、血细胞、血清蛋白等。
胸腺非依赖性抗原(TI-Ag):抗原刺激机体产生抗体时无需T细胞的辅助,如细菌脂多糖等。
{了解}异嗜性抗原:与种属无关,存在于人、动物及微生物之间的共同抗原、超抗原:极低浓度,激活2%~20%T细胞克隆,极强的免疫应答关于佐剂:属于非特异性免疫增强剂,当其预先或与抗原同时注入体内,可增强机体对该抗原的免疫应答或改变免疫应答类型(我们熟悉的卡介苗(BCG)、脂多糖(LPS)属于有机佐剂)抗体(Ab):是介导体液免疫应答的重要效应分子,是B淋巴细胞在有效抗原刺激下分化为浆细胞,产生具有与相应抗原特异性结合的免疫球蛋白。
免疫检验知识点总结一、免疫检验的基本原理① 抗体与抗原的相互作用免疫检验的基本原理是利用抗体与抗原的特异性相互作用。
抗体是一种由机体产生的特异性蛋白质,可以识别并结合与之对应的抗原,形成抗原-抗体复合物。
这种特异性相互作用是免疫检验能够有效识别某些疾病的基础。
② 免疫检验的灵敏度和特异性免疫检验的灵敏度是指测试方法能够准确检测到低浓度抗原或抗体的能力,而特异性是指方法能够区分目标抗原或抗体与其他非特异性成分的能力。
通常情况下,免疫检验需要具有较高的灵敏度和特异性,才能准确诊断疾病。
二、常见的免疫检验方法1. ELISA(酶联免疫吸附实验)ELISA是一种广泛应用于医学诊断的免疫检验方法。
它利用酶标记的抗体或抗原与待检测的抗原或抗体结合,通过酶底物的显色反应来检测特定物质的存在和浓度。
ELISA方法可以用于检测各种疾病的标志物,包括感染病原体、肿瘤标志物、药物残留等。
2. 免疫荧光分析免疫荧光分析是利用荧光标记的抗体识别和检测待检测的抗原或抗体。
通过荧光显微镜或荧光光度计来观察或定量分析荧光信号,以确定特定物质的存在和浓度。
免疫荧光分析广泛用于细胞学、免疫学、微生物学等领域的研究和诊断。
3. 免疫固定电泳免疫固定电泳是通过将抗体和待检测的抗原在电泳条件下结合,然后通过免疫印迹方法检测特定蛋白质或其他生物分子的存在和浓度。
免疫固定电泳在临床诊断和科研领域有广泛的应用。
4. 放射免疫测定放射免疫测定是利用放射性同位素标记的抗体或抗原与待检测的抗原或抗体结合,通过放射性测量仪器来检测特定物质的存在和浓度。
放射免疫测定通常具有较高的灵敏度和特异性,可用于检测一些低浓度的生物分子。
5. 流式细胞术流式细胞术是利用激光技术和荧光标记的抗体来检测和分析细胞表面或内部标志物的存在和表达水平。
流式细胞术可以快速高效地分析大量细胞样本,广泛用于免疫学、细胞生物学、肿瘤学等领域的研究和诊断。
三、免疫检验在疾病诊断中的应用1. 传染病的诊断免疫检验方法可以用于感染病原体的检测,例如HIV、乙肝病毒、丙肝病毒等。
免疫学检验的这些基础知识你都了解吗免疫学检验是指应用免疫学原理进行检测,以发现人体内某些物质(例如抗体、抗原、病原体等)的检验方法。
它已经成为临床医学中不可缺少的检测手段之一,广泛应用于医疗、科研、食品卫生等领域。
本文将从免疫学检验的基础知识、分类、原理和应用方面进行介绍。
一、免疫学检验的基础知识1.抗原和抗体抗原是指能够诱导机体产生免疫应答的物质,包括细菌、病毒、细胞、蛋白质、多糖等。
抗体是由机体的B淋巴细胞分泌的一种特异性免疫球蛋白,能够与特定的抗原结合,从而参与机体的免疫反应。
2.特异性和敏感性免疫学检验是一种特异性和敏感性较高的检验方法。
特异性是指检验结果仅针对特定的抗原或抗体,不会与其他物质产生反应。
敏感性是指检验方法能够检测到极小浓度的抗原或抗体。
3.免疫反应的基本原理免疫学检验基于机体的免疫反应原理。
当机体感染病原体或接种疫苗后,免疫系统会产生相应的抗体。
免疫学检验通过检测血清中特定抗体或抗原的存在与否,来判断患者是否感染了某种病原体或是否存在某种疾病。
二、免疫学检验的分类免疫学检验根据检测原理和方法的不同,可以分为多种类型,包括:1.直接检测法直接检测法是指通过检测病原体本身或其组成成分来判断是否感染某种病原体。
例如,检测病毒核酸或细菌的荚膜多糖等。
2.间接检测法间接检测法是指通过检测体内特定抗体的存在与否,来判断患者是否感染某种病原体。
例如,乙肝表面抗原(HBsAg)的检测就是一种间接检测法。
3.荧光素检测法荧光素检测法是一种常用的免疫学检测方法,可以通过荧光素染色或荧光素标记来检测抗原或抗体的存在。
荧光素检测法有许多不同的形式,包括免疫荧光检测、酶联免疫吸附测定法(ELISA)等。
免疫荧光检测法是利用荧光素标记的抗体与待检测标本中的抗原结合,在荧光显微镜下观察荧光信号的强度和分布情况,来判断是否存在特定抗原或抗体。
该方法具有高度的灵敏度和特异性,且结果可视化,适用于许多病原体的检测,如流感病毒、HIV、病毒性肝炎等。
免疫学知识点梳理第一章绪论1.免疫的概念2.固有免疫和适应性免疫的特点比较。
3.免疫的三大功能防御、自稳、监视,相应的病理反应为超敏及免疫缺陷、自身免疫病、恶性肿瘤。
4.免疫系统的组成5.简述中枢免疫器官和外周免疫器官的组成6.淋巴细胞再循环的意义。
7.主要的免疫细胞及免疫分子有哪些。
8.克隆选择学说第二章抗原1.抗原的定义2.完全抗原与半抗原的定义及特点3.抗原表位的分类(线性表位-T细胞和构象表位-B细胞)、抗原结合价4.共同抗原与交叉反应,交叉抗原的生物学意义。
5.决定抗原免疫原性的因素。
(理化因素、宿主因素、免疫途径及方法)6.抗原的种类:1)抗体产生是否对T细胞依赖:TD抗原、TI抗原2)抗原与机体的亲缘关系:异嗜性抗原、异种抗原、同种异型抗原、自身抗原3)抗原提呈细胞内抗原的来源:内源性抗原、外源性抗原7.非特异性免疫刺激剂:免疫佐剂、超抗原、丝裂原第三章抗体1.抗体和免疫球蛋白的定义。
2.抗体的基本结构:重链(H链)和轻链(L链);可变区(V区):超变区(CD1-3)和骨架区(FR1-4)恒定区(C区):C H1-4;C L铰链区:CH1与CH2之间。
结构域和功能区:VH和VL抗原结合位点;CH1和CL为Ig同种异型遗传标志所在;CH2和CH3为补体C1q结合位点;CH3和CH4能与多种细胞表面的Fc 受体结合,产生免疫效应。
3.免疫球蛋白的水解片段:木瓜蛋白酶水解片段:2个Fab(抗原结合片段),1个Fc(可结晶片段)胃蛋白酶水解片段:1个Fab’ 2段,多个pFc’段4.抗体的类型:根据重链C区氨基酸组成的差别分为,IgG、IgA、IgM、IgD、IgE。
型:根据轻链C区氨基酸组成的差别分为,λ和Κ5.抗体三类不同的抗原决定基:同种型:同一种属所有个体Ig分子共有的抗原特异性标志。
同种异型:同一种属不同个体间Ig分子具有的不同抗原特异性标志。
存在于Ig C区和V区。
独特型:同一个针对不同抗原所产生的Ig分子V区所特有的抗原表位。
免疫学检验1.T细胞:T细胞是在胸腺中发育成熟的淋巴细胞。
2.B淋巴细胞:B淋巴细胞是在骨髓内发育成熟的细胞。
3.辅佐细胞:在特异性免疫应答过程中,参与辅助淋巴细胞活化的细胞统称为辅佐细胞。
4.单核吞噬细胞系统包括外周血中的单核细胞和组织器官中的巨噬细胞。
5.抗原:是指能与T细胞抗原受体(TCR)以及B细胞抗原受体(BCR)结合,促使T细胞/B细胞增殖,分化,产生抗体或致敏淋巴细胞,并与之结合,进而发挥免疫效应的物质。
抗原具有两种基本性能:(1)免疫原性:指抗原能够刺激机体产生特异性免疫应答(产生特异性抗体或致敏淋巴细胞)的性质。
(2)免疫反应性:指抗原能与相应免疫应答产物(抗体或致敏淋巴细胞)在体内、体外发生特异性结合的性质。
6.影响抗原免疫性的因素(1)抗原因素:1.异质性指抗原与机体成分结构的差异程度,是作为抗原的必要条件。
2,抗原分子的理化性质,如分子量大小,化学组成和结构,通常环状分子蛋白质较直链分子蛋白质免疫原性强,还有分子构像与易接近性,以及物理状态。
(2)抗体因素:(宿主因素)1.遗传因素2.年龄、性别与健康状态3.抗原剂量及进入机体的途径,进入机体途径以皮内注射免疫原性最佳,皮下注射次之,肌肉注射、腹腔注射、静脉注射再次,口服免疫原性最差。
7.抗原表位:又称抗原决定簇,指存在于抗原分子表面的,能与TCR/BCR或抗体特异性结合,决定抗原特异性的特殊化学基团。
8.不完全抗原:仅有免疫反应性而无免疫原性的物质,又称半抗原,多为一些简单的小分子物质、药物等。
9.完全抗原:同时具有免疫原性和免疫反应性的物质成为完全抗原,大多数蛋白质类抗原属于此类。
10.11.超抗原:是指能直接非特异性激活某些T细胞亚型或B细胞亚型的物质。
12.免疫球蛋白的生物学功能(1)免疫球蛋白V区的功能:识别并特异性结合抗原,在体内可直接发挥中和作用,但不能直接溶解或杀伤带有特异抗原的靶细胞。
(2)免疫球蛋白C区的功能:1.激活补体2.与细胞Fc受体结合发挥多种生物学作用:①调理作用②ADCC③介导Ⅰ型超敏反应3.穿过胎盘和粘膜13.IgG为单体分子,是血清和细胞外液中含量最高的Ig,约占血清总Ig的75%-80%血清,IgM为五聚体,是血清中分子量最大的Ig,也是个体发育过程中最早合成和分泌的Ig,不能通过胎盘,若脐带血或新生儿血清中其水平升高提示有胎儿有宫内感染,体液免疫应答中,其水平升高提示有近期感染。
【免疫学检验】知识点整理(第一部分)概论+抗原抗体反应1免疫学基本概念及其生物学功能;免疫:机体识别和排斥抗原性异物的一种生理功能免疫三大功能:免疫防御、免疫自稳、免疫监视中枢免疫器官(骨髓和胸腺)外周免疫器官(淋巴结、脾脏、扁桃体)免疫细胞:淋巴细胞(T,B,NK)、单核巨噬细胞、其他免疫应答细胞(中性粒、嗜酸性、嗜碱性和肥大细胞)免疫分子:免疫球蛋白(IgM ,IgG ,IgA ,IgE ,IgD ),补体,细胞因子,细胞黏附分子,人类白细胞分化抗原免疫应答:机体免疫系统接受抗原刺激发生的一系列反应,并以排出或分解该抗原为目的的反应过程。
过程:抗原的识别、处理、信息传递(识别阶段),免疫细胞的激活、增殖、分化(活化阶段)以及产生一系列的免疫效应因子(效应阶段)。
临床免疫学检验:研究免疫学检测理论、技术、应用,免疫疾病发病机制、免疫诊断、及防治的一门医学领域的应用学科。
免疫学检测技术的基础是抗原抗体反应,免疫学技术有凝集反应、沉淀反应、补体参与的反应、中和反应和标记免疫反应五种类型。
免疫检验:1 )利用免疫检测原理和技术检测免疫活性细胞、抗原、抗体、补体、细胞因子、细胞黏附分子等免疫相关物质;2)体液中的微量物质如激素、酶、血浆微量蛋白、血液药物浓度、微量元素。
临床免疫学:利用免疫学理论和技术研究疾病的免疫病理机制、诊断和鉴别诊断、疗效评价、预后判断和预防的多个分支学科的总称。
包括超敏反应性疾免疫性疾病:各种原因引起的机体免疫应答异常所致的疾病,病、自身免疫病、免疫缺陷病和免疫增生病。
感染免疫学:研究病原微生物与宿主相互关系从而控制感染的学科,传统免疫学核心。
肿瘤免疫学:研究肿瘤免疫原性、机体抗肿瘤的免疫效应及机体的免疫功能与肿瘤发生、发展的相互关系以及肿瘤免疫诊断与防治的学科。
移植免疫学:研究移植物与宿主相互关系从而选择移植物和延长移植物存活的学科。
2血清学反应的概念;抗体主要存在于血清中,体外的抗原抗体反应称为血清学反应。
第一部分免疫学基础绪论一、名词解释1、免疫2、免疫防御3、免疫监视4、适应性免疫二、单项选择题1、免疫是指( )A、机体抗感染的过程B、机体免疫系统识别和排除抗原性异物的过程C、机体对病原微生物的防御过程D、机体清除自身衰老、死亡细胞的过程E、机体清除自身突变细胞的能力2、牛痘苗的发明者是( )A、德国BehringB、法国PasteurC、德国KochD、澳大利亚BurnetE、英国Jenner3、免疫对机体是( )A、有利的B、有害的C、有利也有害D、有利无害E、正常条件下有利,异常条件下有害4、免疫监视功能低下时易发生( )A、自身免疫病B、超敏反应C、肿瘤D、免疫缺陷病E、移植排斥反应5、最早接种人痘苗预防天花的国家是( )A、中国B、美国C、日本D、俄罗斯E、英国6、参与非特异性免疫的细胞是( )A、B细胞B、T细胞C、树突状细胞D、红细胞E、自然杀伤细胞三、问答题1、简述免疫的基本概念和功能。
2、简述免疫功能失调时的表现。
第一章抗原一、名词解释1、抗原2、完全抗原(免疫原)3、免疫原性4、免疫反应性5、抗原决定基(表位)6、半抗原7、抗原结合价8、异物性9、交叉反应10、共同抗原11、异种抗原12、同种异体抗原13、异嗜性抗原14、类毒素15、胸腺非依赖性抗原16、胸腺依赖性抗原17、超抗原18、免疫佐剂二、单项选择题1、半抗原的特点是( ):A、只能与载体结合后才能和相应抗体结合B、是大分子物质C、通常是多肽D、本身无免疫原性E、仅能刺激B细胞活化2、TD-Ag( ):A、在胸腺中形成B、可刺激胸腺产生抗体C、不能引起体液免疫应答D、仅存在于T细胞表面E、只有在T细胞辅助下才能激活B细胞3、能诱导免疫应答的物质是( ):A、半抗原B、药物C、免疫原D、抗原E、变应原4、下列哪种物质免疫原性最强( ):A、多糖B、多肽C、蛋白质D、核酸E、类脂5、下列哪种自身物质注入自身体内后可引起免疫应答( ):A、红细胞B、血浆C、淋巴细胞D、精液E、血小板6、兄弟姐妹间进行器官移植引起排斥反应的物质是( ):A、异种抗原B、同种异体抗原C、自身抗原D、异嗜性抗原E、超抗原7、TI-Ag( ):A、大多数是蛋白质B、引起强的IgG 应答C、不能产生记忆和再次应答D、能被T细胞抗原受体识别E、需经抗原提呈细胞处理后才能激活B细胞8、抗原表面与抗体结合的特殊化学基团称为( ):A、抗原识别受体B、独特型决定基C、抗原结合价D、抗原决定基E、以上均不对9、将外毒素转变为类毒素( ):A、可增强毒素的免疫原性B、可降低毒素的免疫原性C、可增强毒素的毒性D、可减弱毒素的毒性E、可增强吞噬细胞的吞噬活性10、抗原决定基是指( ):A、能与所有T细胞抗原受体结合B、仅能被B细胞识别C、与抗原特异性无关D、一个抗原分子上仅有一个抗原决定簇E、并非所有的抗原决定基都能激发免疫应答11、仅与载体结合在一起才有免疫原性的物质称为( ):A、亲和素B、半抗原C、佐剂D、变应原E、TI-Ag12、甲、乙两种物质都能与某一抗体发生结合反应,这两种物质相互称为( ):A、半抗原B、完全抗原C、共同抗原D、TD-AgE、TI-Ag13、一种蛋白质分子上能与某一抗体发生结合反应的化学基团是( ):A、载体B、异物C、抗原决定基D、单价抗原E、完全抗原14、决定一种物质只能与某一抗体起反应而不能与其它抗体起反应的物质基础是( ):A、载体B、佐剂C、抗原决定基D、TI-AgE、抗原15、20世纪初,Forssman用豚鼠肝、脾、肾上腺等脏器制备的生理盐水悬液免疫家兔获得的抗体,除能与原来的相应的脏器抗原反应外,还可使绵羊红细胞发生凝集,出现这一现象是因为( )A.可能绵羊红细胞发生了自身凝集B.脉鼠某些组织与绵羊红细胞之间存在共同抗原决定簇C.脉鼠与绵羊之间有完全相同的血型抗原D.脉鼠脏器在制备悬液过程中其抗原结构发生了改变E.体外实验中,绵羊红细胞的抗原发生了改变16、抗原特异性取决于( ):A、分子量大小B、物质表面特殊化学基团C、该抗原的来源D、物质内部特殊化学基团E、以上都不是17、下列物质中不属于抗原的是( ):A、毒素B、微生物C、植物花粉D、生理盐水E、类毒素18、动物免疫血清对人而言是( ):A、既是抗原又抗体B、抗体C、抗原D、既不是抗原又不是抗体E、以上都不是19、佐剂的作用( ):A、具有增强免疫应答的作用B、具有抑制免疫应答的作用C、具有诱导免疫应答的作用D、具有启动免疫应答的作用E、以上都是二、多项选择题1、异物是指( ):A、异种物质B、同种异体物质C、结构发生改变的自身物质D、胚胎时期机体免疫细胞未曾接触过的物质E、自身物质2、抗原物质的免疫原性取决于( ):A、高分子量B、异物性程度C、特异性D、注入机体后的稳定性E、化学结构的复杂性3、异嗜性抗原是指( ):A、不是种属特异性的抗原B、可引起交叉反应的发生C、溶血性链球菌感染后的肾小球肾炎与此抗原相关D、是同一种属之间的共同抗原E、是不同一种属之间的共同抗原4、佐剂的作用是( ):A、可改变抗原分子表面的化学基团B、可增加抗原分子表面的化学基团C、可增强抗原的免疫原性D、可延长抗原在体内的存留时间E、可促进T H细胞的活化,增强体液或细胞免疫功能5、下列说法哪些是正确的( ):A、所谓异物即指异种物质B、抗原不一定是异种物质C、半抗原虽无免疫原性但可与相应抗体结合D、抗原就是免疫原E、大分子抗原常为多价抗原6、下列哪些物质可成为免疫原( ):A、与蛋白质结合的半抗原B、与红细胞结合的青霉素C、氢氧化铝D、类毒素E、马血清蛋白7、与抗原特异性有关的是( ):A、抗原决定基的数目B、抗原决定基的种类C、抗原决定基的性质D、抗原决定基簇的立体构型E、抗原决定基的空间构象8、同种异型抗原的临床意义是( ):A、抗感染免疫B、自身免疫病C、输血反应D、移植排斥反应E、抗肿瘤免疫9、与免疫原性有关的因素是( ):A、分子量大小B、化学成分C、化学结构D、种属亲缘关系D、抗原的特异性10、异嗜性抗原的特点是( ):A、为一种共同抗原B、可致交叉免疫反应C、存在异种生物间D、能引起变态反应E、以上都不是三、问答题1、决定抗原免疫原性的因素有哪些?2、抗原决定基的概念,T细胞表位和B细胞表位的特性有什么区别?3、哪些自身物质可作为抗原引起免疫应答?4、简述TD-Ag和TI-Ag的区别。
第一章概论1. 免疫学(Immuno logy)是研究免疫系统的结构与功能,并通过对其在免疫应答过程中所产生的免疫保护与免疫损伤机制的研究,探讨有效的免疫措施,实现以防病、治病为目的的一门现代医学学科。
免疫学技术对推动免疫学的发展及基础与临床免疫学的结合起了重要作用。
学习免疫学的基本概念,了解临床免疫学的理论基础,掌握免疫技术的检测原理是学习和研究临床免疫学与免疫技术的重要保障。
第一节免疫学简介1. 免疫(immuni ty)是机体识别和排斥抗原性异物的一种生理功能。
免疫系统与机体的其他系统相互配合,相互制约,共同维持机体在生命过程中的生理平衡。
一、免疫学概念与免疫应答1. 宿主体内的免疫系统能识别并清除从外环境中侵入的病原生物及其产生的毒素、内环境中因基因突变产生的肿瘤细胞、自身衰老残损的组织细胞或自身变性抗原,实现免疫防御、免疫自稳、免疫监视。
免疫防御——指机体排斥外源性异物的能力。
免疫自稳——指机体识别和清除自身衰变残损的组织细胞的能力,以维持正常内环境稳定。
免疫监视——指机体杀伤和清除异常突变细胞的能力,以监视和抑制恶性肿瘤在体内生长。
2. 免疫应答反应(immune respon se):是指机体免疫系统接受抗原刺激发生一系列反应,并以排出或分解该抗原为目的的反应过程。
免疫应答的过程主要分为:识别阶段(recogn ition phase)——抗原识别处理传递信息活化阶段(activa tionphase)——免疫细胞活化增殖产生效应细胞、分子效应阶段(respon se phase)——执行效应功能3. 免疫应答效应大多为生理性,是机体对外来抗原或自身变性抗原的清除效应。
免疫应答反应过强时,可致机体组织或器官发生病理损伤,出现临床疾病。
[键入公司名称]免疫学检验整理[键入文档副标题]Administrator[选取日期]免疫学检验第一章绪论免疫学检验(immunoassay):免疫学检验是研究免疫学技术及其在医学、生命科学等领域中的一门应用学科:免疫学技术的发展历史:1、经验免疫学发展阶段(16~18世纪)接种人痘(中国)/牛痘(英国)预防天花2、经典免疫学发展阶段(19世纪后期)凝集反应、沉淀反应、补体结合反应等免疫学方法被大量运用于临床肥达反应:1896年Widal用伤寒患者血清与伤寒杆菌发生特异性凝集反应来诊断伤寒3、近现代免疫学发展阶段(20世纪初)- Landsteiner的血型研究,开拓了免疫化学领域Karl Landsteiner(1868-1943)——发现ABO血型Burner的克隆选择学说(clone selection theory)预见了一个细胞克隆产生一种特异性抗体- Kohler和Milstein于1975年创立单克隆抗体技术20世纪60~70年代,诸多免疫标记技术被广泛应用:放射标记免疫、酶标记免疫、荧光标记免疫、金(银)标记免疫、免疫印迹- 免疫学检测的水平从mg提高到pg,检测范围从病原微生物扩大到多种物质免疫学检验的特点:特异性强、灵敏度高、稳定、简便、快速免疫学检验细胞免疫检验:免疫活性细胞及其功能的检测体液免疫检验:抗原、抗体、补体等的检测免疫学检验的应用范围:➢传染病:血清学检测病原微生物及其代谢产物➢免疫性疾病:青霉素注射前的皮试➢肿瘤抗原、抗肿瘤抗体、肿瘤标志物➢组织器官移植:肝脏移植前的HLA配型➢血型和血液病:输血前的ABO及Rh配型➢其他:样品中微量的酶、激素、蛋白质、药物等免疫学检验的基本原理A与B相互识别构象,产生应答抗原↔抗体细胞因子↔受体补体↔抗原抗体复合物通过某种方法检测到A与B的识别反应直接观察:沉淀、凝集通过标记:荧光、放射线、吸光值免疫学检验的一般思路1、选择合适的检验方法➢ 检验的灵敏度 ➢ 检验的特异度 ➢ 方法的可行性 2、对检验结果进行评价 ➢ 阳性结果说明什么?阴性结果说明什么?➢ 检验的重复性➢ 是否设立对照?➢ 检验过程的质量控制很重要! 目前常用的免疫学检验技术● 凝集反应 ● 沉淀反应● 补体测定和补体结合试验 ● 荧光免疫技术 ● 酶免疫技术● 放射免疫技术 ● 化学发光免疫技术 ● 金(银)免疫技术 ●免疫细胞检测各种免疫学检验技术的比较免疫系统 是脊椎动物和人类的防御系统。
第一章免疫学概论一、免疫系统的基本功能免疫(immunity):是免疫系统抵御抗原异物的侵入,识别“自己”和“非己”的抗原,对“自己”的抗原形成天然免疫耐受,对“非己”抗原进行排除,维持机体内环境平衡和稳定的生理功能。
抗原的概念稍后会介绍,这里通俗的说,就是机体认为不是自己的,外界来的大分子物质。
比如输血,如果输的血型与自身的血型不同,机体就认为这种血是外来的“抗原”免疫系统包括:免疫器官、免疫细胞、免疫分子机体的免疫功能概括为:①免疫防御②免疫监视③免疫自身稳定二、免疫应答的种类及其特点免疫应答(immune response):是指免疫系统识别和清除抗原的整个过程。
分为固有免疫和适应性免疫⒈固有免疫(innate immunity):也称先天性免疫或非特异性免疫,是生物长期进化中逐步形成的,是机体抵御病原体入侵的第一道防线特点:先天具有,无免疫记忆,无特异性。
⒉适应性免疫(adaptive immunity):亦称获得性免疫或特异性免疫。
由T、B淋巴细胞介导,通过其表面的抗原受体特异性识别抗原后,T、B淋巴细胞活化、增殖并发挥免疫效应、清除抗原;须经历克隆增殖;分为三个阶段:①识别阶段②活化增殖阶段③效应阶段三个主要特点①特异性②耐受性③记忆性因需要细胞的活化、增殖等较复杂过程,故所需时间较长第二章免疫组织与器官免疫系统(Immune System):由免疫器官、免疫细胞和免疫分子构成。
第一节中枢免疫器官和组织中枢免疫器官,是免疫细胞发生、分化、发育和成熟的场所一、骨髓是各种血细胞和免疫细胞发生及成熟的场所㈠骨髓的功能⒈各类血细胞和免疫细胞发生的场所⒉B细胞分化成熟的场所⒊体液免疫应答发生的场所再次体液免疫应答的主要部位二、胸腺是T细胞分化、发育、成熟的场所㈠胸腺的结构胸腺分为皮质和髓质。
皮质又分为浅皮质区和深皮质区;㈡胸腺微环境:由胸腺基质细胞、细胞外基质及局部活性物质(如激素、细胞因子等)组成,其在胸腺细胞分化发育过程的不同环节均发挥作用。
第一章免疫学概论和发展史一、免疫系统的基本功能①免疫防御:机体防御外界病原体入侵和清除已进入的病原体及其有害产物。
②免疫监视:机体能监察出体内突变或早期肿瘤细胞并予以清除的功能。
③免疫耐受:机体对某种抗原刺激表现出低应答或无应答状态。
④免疫调节:机体的免疫系统参与整体的调节,与神经系统和内分泌系统构成网络调节系统,既调节免疫系统本身,又调节机体整体功能。
二、固有免疫与适应性免疫的比较:第二章免疫系统一、免疫系统的组成:免疫器官免疫细胞免疫分子中枢外周膜型分子分泌型分子胸腺脾脏干细胞系TCR 免疫球蛋白骨髓淋巴结淋巴细胞BCR 补体分子法氏囊(禽类)粘膜相关淋巴组织单核吞噬细胞CD 细胞因子粘附分子皮肤相关淋巴组织其他APC(树突状细胞、内皮细胞等)MHC其他免疫细胞(粒细胞、肥大细胞、血小板、红细胞等)其他中枢免疫器官(初级淋巴器官)外周免疫器官(次级淋巴器官)发生较早相对较晚组成骨髓、胸腺淋巴结、脾及粘膜相关淋巴组织功能免疫细胞发生、分化、发育和成熟的场所成熟免疫细胞定居的场所;免疫应答发生的部位二、黏膜相关淋巴组织(mucosal-associated lymphoid tissue,MALT):是无被膜的淋巴组织,主要指呼吸道、肠道及泌尿生殖道黏膜上皮下方散在的淋巴组织,如扁桃体、小肠派尔集合淋巴结(Peyer patches,PP)及阑尾等,是发生黏膜免疫应答的主要部位。
MALT组成:①肠相关淋巴组织(GALT):派尔集合淋巴结(PP)、上皮内淋巴细胞(IEL)等。
②鼻相关淋巴组织(NALT):淋巴小结及弥散淋巴组织组成。
③支气管相关淋巴组织(BALT)MALT的功能及其特点:1.行使黏膜局部免疫应答2.产生分泌型IgA三、淋巴细胞归巢:概念:成熟的免疫细胞离开中枢后,经血液循环迁移并定居于外周免疫器官的特定部位,而在淋巴细胞再循环过程中也存在着免疫细胞在不同组织之中的特定分布,这种现象称之为淋巴细胞归巢。
免疫学检验考试重点免疫学检验老师给的重点,自己总结的,当复习资料看看吧。
第一章绪论1、临床免疫学检验是研究免疫学检验的理论、技术、应用,以及临床免疫学性疾病发病机制、免疫诊断与防治的一门医学应用性学科。
2、临床免疫学(clinical immunology)是利用免疫学的基础理论和技术来研究临床疾病的免疫病理机制、诊断和鉴别诊断、治疗效果和预后判断以及疾病预防等多个分支学科的总称。
3、免疫学检验建立的基础第二章抗原抗体反应1、抗原抗体反应(antigen-antibody)是指抗原与相应抗体在体内或体外发生的特异性结合反应。
可发生于体内,也可发生于体外。
2、抗原抗体防御的原理是什么?具有哪些特点?原理:基于抗原表位与抗体超变区分子间的结构互补性与亲和性,抗原与抗体间的结合是非共价键结合,通过静电场力、范德华引力(作用最小)、氢键结合力(最具特异性)、疏水作用力(作用最大)等分子间的引力结合在一起,在特异性的基础上形成非共价键由亲水胶体转化为疏水胶体。
特点:特异性、比例性、可逆性。
3、影响抗原抗体反应的因素有哪些?①反应物自身因素抗原(理化性状、分子量、表位的种类和数目)、抗体(来源、浓度、特异性与亲和力)。
②环境因素电解质、酸碱度(一般在6-8之间为宜)、温度(一般为15-40,常用抗原抗体反应为37)。
③对照的设置阴性对照、阳性对照、空白对照、标准品对照4、亲合力(avidity):抗体结合部位与抗原表位之间结合的强度,与抗体结合价直接相关即所谓多价优势。
5、亲和力(affinity):是指抗体分子单一抗原结合部位与抗原分子表面一个相应抗原决定簇(表位)之间的结合强度,它是抗原抗体之间固有的结合力。
第三章免疫原和抗体的制备1、抗体制备类型:单克隆抗体、多克隆抗体、基因工程技术。
2、各类抗体的制备原理和应用?单克隆抗体,原理:将抗原免疫的小鼠脾细胞与具有体外长期繁殖能力的小鼠骨髓瘤细胞通过融合剂(聚乙二醇,PEG)融为一体,在HAT选择性培养基的作用下,只让融合成功的杂交瘤细胞生长,经过反复的免疫学检测、筛选和单个细胞培养(克隆化),最终获得既能产生所需单克隆抗体,又能体外长期繁殖的杂交瘤细胞系,将这种杂交瘤细胞扩大培养,接种于小鼠腹腔,从小鼠腹腔积液中获取高效价的单克隆抗体。
......第一章免疫学概论免疫术语免疫( immunity):机体免疫系统辨别“自己”和“非己”,对自己成分产生天然免疫耐受,对非己异物产生清除作用的一种生理反响。
免疫系统的构成免疫器官免疫分子免疫细胞白细胞中枢外周膜型分子分泌型分子胸腺脾脏固有免疫构成细胞TCR免疫球蛋白骨髓淋奉承吞噬细胞BCR补体法氏囊(禽类)黏膜有关淋巴组织树突状细胞CD 分子细胞因子皮肤有关淋巴组织NK 细胞黏附分子NKT 细胞MHC 分子其余(嗜酸性粒细胞细胞因子受体和嗜碱性粒细胞等)适应性免疫应答细胞T 细胞B 细胞免疫的主要功能免疫防守:防备外界病原体的入侵及消除已入侵病原体及其余有害物质。
免疫监督:随时发现和消除体内出现的“非己”成分,如肿瘤细胞、衰老凋亡细胞和病毒感染细胞。
免疫自己稳固:经过自己免疫耐受和免疫调理两种主要的体制来达到免疫系统内环境的稳固。
免疫应答的种类及其特色固有免疫(先本性免疫 / 非特异性免疫)分类......适应性免疫(获取性免疫 / 特异性免疫)固有免疫( innate immunity):观点:固有免疫是生物在长久进化中渐渐形成的,是机体抵抗病原体入侵的第一道防线物质基础:组织屏障:皮肤粘膜屏障、血脑屏障、血胎屏障固有免疫细胞:吞噬细胞、DC、NK细胞、NKT细胞、B1细胞、T 细胞固有免疫效应分子:补系统统、细胞因子、溶菌酶、抗菌肽、乙型溶素作用特色:先本性(无需抗原激发)作用在先( 0~ 96 小时)非特异性(模式辨别受体)无记忆性适应性免疫( acquired immunity):观点:适应性免疫应答是指体内T、 B 淋巴细胞接受“非己”的物质(主要指抗原)刺激后,自己活化、增殖、分化为效应细胞,产生一系列生物学效应(包含消除抗原等)的全过程。
物质基础: T 淋巴细胞、 B 淋巴细胞、抗原提呈细胞( APC)作用特色:获取性(需抗原激发)作用在后( 96 小时后启动)特异性( TCR/BCR)记忆性耐受性第二章免疫器官和组织免疫术语黏膜有关淋巴组织( MALT , mucosal-associated lymphoid tissue):观点:亦称黏膜免疫系统,主要指呼吸道、胃肠道及泌尿生殖道黏膜固有层和上皮细胞下散在的淋巴组织,以及含有生发中心的淋巴组织,如扁桃体、小肠派尔会合淋巴结及阑尾等,是发生黏膜免疫应答的主要部位。
第一章免疫学绪论掌握:1、免疫和免疫学概念。
2、免疫应答的类型和特点。
3、免疫系统的组成和功能。
熟悉:1、免疫细胞的分类和种类。
免疫系统的组成和功能。
:一.免疫系统的功能:答:1.免疫防御(Immunological defence):是机体排斥外来抗原性异物的一种免疫保护功能。
正常:可产生抗感染的作用(清除病原微生物及其他抗原);异常:应答过强或持续时间过长——超敏反应;应答过弱——免疫缺陷疾病。
2.免疫监视(Immunological surveillance):指免疫系统及时识别、清除体内突变、畸变和病毒感染细胞的一种生理保护作用。
丧失——肿瘤发生;病毒持续感染3.免疫自稳(Immunological homeostasis):指免疫系统通过调节网络实现免疫系统功能相对稳定(清除损伤的细胞或衰老的细胞)。
自稳机制发生异常——自身免疫病免疫应答的类型和特点:二.免疫应答的特点1.非特异性免疫应答(固有免疫应答细胞)【单核-巨噬细胞、NK、多形核中性粒细胞等】特点:通过细胞表面表达的受体,识别表达于多种病原体表面(非特异性免疫)的分子。
如:Toll-like receptor 4 (TLR4) 识别多糖(表达于多种G-肠道杆菌表面)固有细胞活化→免疫效应→释放CKs(IFN)→防御作用2.特异性免疫应答(适应性免疫应答细胞)【淋巴细胞】特点:细胞克隆分布,表达一种抗原识别受体,特异性识别天然大分子中具有特殊结构的小分子(蛋白质中的多肽、糖中的寡糖、脂酸、核苷酸片断)这些小分子称为抗原(Ag)。
三、免疫的类型1、非特异性免疫:个体在长期进化过程中逐渐形成的防御功能,乃经遗传而获得,而并非针对特定抗原,属天然免疫。
【先天具有;无特异性;无记忆性;作用快而弱。
】2、特异性免疫:个体发育过程中接触特定抗原而产生的仅针对该特定抗原发生的反应。
【后天获得;有特异性;有记忆性;有耐受性;作用慢而强。
】免疫和免疫学概念:免疫(immunity):是机体识别“自己”, 排除“异己(非己)”过程中所产生的生物学效应的总和,正常情况下是维持内环境稳定的一种生理性防御功能。
【免疫学检验】知识点整理(第一部分)概论+抗原抗体反应1 免疫学基本概念及其生物学功能;免疫:机体识别和排斥抗原性异物的一种生理功能免疫三大功能:免疫防御、免疫自稳、免疫监视中枢免疫器官(骨髓和胸腺)外周免疫器官(淋巴结、脾脏、扁桃体)免疫细胞:淋巴细胞(T,B,NK)、单核巨噬细胞、其他免疫应答细胞(中性粒、嗜酸性、嗜碱性和肥大细胞)免疫分子:免疫球蛋白(IgM,IgG,IgA,IgE,IgD),补体,细胞因子,细胞黏附分子,人类白细胞分化抗原免疫应答:机体免疫系统接受抗原刺激发生的一系列反应,并以排出或分解该抗原为目的的反应过程。
过程:抗原的识别、处理、信息传递(识别阶段),免疫细胞的激活、增殖、分化(活化阶段)以及产生一系列的免疫效应因子(效应阶段)。
临床免疫学检验:研究免疫学检测理论、技术、应用,免疫疾病发病机制、免疫诊断、及防治的一门医学领域的应用学科。
免疫学检测技术的基础是抗原抗体反应,免疫学技术有凝集反应、沉淀反应、补体参与的反应、中和反应和标记免疫反应五种类型。
免疫检验:1)利用免疫检测原理和技术检测免疫活性细胞、抗原、抗体、补体、细胞因子、细胞黏附分子等免疫相关物质;2)体液中的微量物质如激素、酶、血浆微量蛋白、血液药物浓度、微量元素。
临床免疫学:利用免疫学理论和技术研究疾病的免疫病理机制、诊断和鉴别诊断、疗效评价、预后判断和预防的多个分支学科的总称。
免疫性疾病:各种原因引起的机体免疫应答异常所致的疾病,包括超敏反应性疾病、自身免疫病、免疫缺陷病和免疫增生病。
感染免疫学:研究病原微生物与宿主相互关系从而控制感染的学科,传统免疫学核心。
肿瘤免疫学:研究肿瘤免疫原性、机体抗肿瘤的免疫效应及机体的免疫功能与肿瘤发生、发展的相互关系以及肿瘤免疫诊断与防治的学科。
移植免疫学:研究移植物与宿主相互关系从而选择移植物和延长移植物存活的学科。
2 血清学反应的概念;抗体主要存在于血清中,体外的抗原抗体反应称为血清学反应。
抗原抗体反应:抗原与相应抗体在体内或体外发生的特异性结合反应,特异性取决于抗原表位和抗体超变区分子间的结构互补性与亲和性,并通过静电引力、范德华引力、氢键结合力和疏水作用力等非共价键结合在一起。
3 抗原抗体的反应原理Ag决定簇和Ab分子超变区分子间的结构互补性;分子表面特异的可逆的弱结合力;亲水胶体转化为疏水胶体* 亲和力(affinity)是抗体分子上一个抗原结合点与对应抗原表位之间相互适应而存在的引力。
这是抗原与抗体之间固有的结合力。
* 亲合力(avidity) 是指反应系统中整个抗原分子与相应抗体之间的结合能力。
亲和力与亲和性、抗体的结合价和抗原的抗原决定簇数目相关。
亲和力越大,抗原抗体结合越牢固。
K=抗原抗体复合物浓度/(游离抗原浓度*游离抗体浓度)K值大的抗体与抗原牢固结合,不易解离,说明该抗体有高亲和力。
亲水胶体转化为疏水胶体:血清学反应条件下,抗原抗体均带负电荷,使极化的水分子在其周围形成水化层,成为亲水胶体。
当抗原与抗体结合后,表面电荷减少,水化层变薄,失去亲水性能,抗原抗体复合物成为疏水胶体。
电解质作用下,中和胶体表面电荷,使疏水胶体靠拢,形成可见的抗原抗体复合物。
4 抗原抗体反应的特点。
特异性:抗原与抗体结合反应的专一性。
分子基础:抗原表位与抗体分子高变区之间空间构型的互补性交叉反应:两种不同的抗原分子具有部分相同或类似结构的抗原表位,可与彼此相应的抗血清发生反应可逆性:解离后抗原抗体仍保持原有理化性质和生物活性。
影响因素:抗体与抗原间的亲合力,亲合力越高,结合越牢固,越不易解离;环境因素-pH、离子强度比例性:抗原与抗体发生可见反应需遵循一定的量比关系。
前带(prezone):抗体过量。
后带(postzone):抗原过量。
等价带(equivalence zone):抗原抗体比例合适阶段性:亲水胶体转疏水胶体的化学和物理变化过程:抗原抗体特异性结合(几秒至几分钟,不出现可见反应),非特异性促凝集(抗原-抗体复合物在适合温度pH电解质等环境因素影响下,进一步交联和聚集,出现肉眼可见沉淀、凝集、细胞溶解等反应,数分钟至数小时)【熟悉免疫学发展简史;抗原及免疫球蛋白的定义及功能5 抗原抗体的反应影响因素。
反应物自身因素: *抗原:1.理化特性2.Ag决定簇数量3.Ag决定簇种类 *抗体:1.来源2.特异性与亲和力3.浓度环境条件:*电解质:0.85%NaCl*使[ Ag-Ab ]表面的电势下降,失去电荷,破坏水化层,形成凝集或沉淀。
浓度过高出现盐析。
酸碱度:pH6~9*酸凝集:当pH为3左右时,接近细菌Ag的等电点,可出现非特异性凝集。
蛋白质具有两性电离性质,每种都有固定的等电点。
反应液中pH过高或过低都可影响抗原或抗体的理化性质。
温度:15~40℃,冷凝集为4℃。
在一定范围内,温度增高,分子运动加快,反应速度加快,但结合不牢固,易解离;温度低,反应速度慢,但结合牢固。
6 抗原抗体反应的类型。
沉淀反应;凝集反应;补体参与的反应;中和反应;免疫标记2 免疫原和抗体的制备(免疫原和抗血清的制备;单克隆抗体与基因工程)1 免疫原是诱导机体产生抗体并能与抗体发生反应的物质。
半抗原是指仅有抗原性而无免疫原性的物质,与载体结合后可具有免疫原性。
2 特异性IgG抗体的纯化方法有盐析法、凝胶过滤法、离子交换层析法、亲和层析法等;制备单价特异性抗血清可采用亲和层析法和吸附剂方法。
1 可溶性免疫原制备:粗提——组织匀浆制备,细胞的破碎2 可溶性免疫原提纯:超速离心法,选择性沉淀法,凝胶层析法,离子交换层析法,亲和层析法,电泳法1 多克隆抗体的概念由多种抗原决定簇刺激多株B细胞增殖分化所产生的抗体,是多种抗体的混合物。
抗血清是经过抗原免疫的动物血清。
在含有多种抗原表位的抗原刺激下,体内多个B细胞克隆被激活并产生针对多种不同表位的抗体,其混合物为多克隆抗体。
2 多克隆抗体的制备流程;免疫原(及佐剂)的制备;免疫动物(动物选择和动物免疫);试血;采血收集血清;抗血清的鉴定;抗血清的纯化;抗血清的保存3 免疫佐剂的概念、常见种类及作用机制。
免疫佐剂是先于抗原或与抗原一起注入机体,可增强机体对该抗原的特异性免疫应答或改变免疫应答类型的物质。
氢氧化铝,明矾,弗氏佐剂(Freund adjuvant),脂质体,细胞因子(乳化方式:研磨法:易乳化,但抗原或佐剂用量大。
搅拌混合法:无菌操作,节省抗原或佐剂,但不易乳化完全)作用机制:1.改变抗原的物理性状,使抗原在体内滞留或延缓释放,延长抗原与免疫细胞作用的时间,从而增强抗原免疫原性。
2.抗原在佐剂的辅助作用下,更易被巨噬细胞有效吞噬和有效的加工处理和呈递。
3.刺激单核-巨噬细胞活化,释放细胞因子调节和增强淋巴细胞的应答能力。
4.刺激淋巴细胞增生分化,从而增强和扩大免疫应答能力。
应用佐剂的缺点:佐剂常混有微量其它物质,这些物质进入体内后也可引起抗体的产主,影响抗血清的特异性;注射佐剂可引起局部形成肉芽肿和无菌性脓肿;反复注射,易发生超敏反应,使局部组织坏死,甚至引起动物死亡。
4 免疫血清制备动物的选择 1.抗原与免疫动物种属差异越远越好; 2.动物个体选择: 适龄、健壮、无感染正常动物、体重合乎要求;3.抗原性质:酶类—豚鼠;甾体激素—家兔 4.血清用途: R型:等价带宽,适于诊断试剂.用家兔免疫产生. H型:等价带窄,适于免疫治疗.用马免疫产生.5.抗血清需要量选择免疫方法1.免疫剂量:1)不能过大或过小,否则产生免疫耐受;2)首次免疫剂量不宜过大3)大:0.5-1mg/只小:0.1-0.6mg/只免疫途径:1)皮内或皮下注射: a.采用多点注射(8-10点); b.半抗原宜皮内多点注射; c.皮内注射易引起细胞反应,对提高抗体效价有利,但皮内注射较困难(因佐剂加入后粘度大)。
2)腹腔和静脉注射:多用于颗粒性抗原和加强免疫。
3)淋巴结内注射:适宜于微量抗原(先用完全佐剂在足掌作基础免疫)。
免疫时间:1)间隔约10-20 天(宜长、否则导致免疫耐受);2)二次以后每次间隔7~10天(过长→刺激变弱→ 抗体效价不高。
)3)一般接种5-8次,不超过2个月;4)半抗原的免疫间隔要求较长(30~40天)。
如 8次免疫后仍不产生抗体,则应更换动物。
采血及试血颈动脉采血法:家兔、绵羊、山羊;心脏采血法:家兔、豚鼠、大鼠、鸡;静脉采血法:家兔、山羊、绵羊免疫血清的纯化:免疫血清是成分复杂的混合物,除有特异性和非特异性抗体,还有各种蛋白成分抗血清——硫酸铵盐析多次(粗提)——亲和层析,离子交换层析,凝胶过滤——IgG 类抗体(不纯)——亲和层析,吸附法——特异性IgG抗体抗体的鉴定:1.效价的鉴定:抗体含量测定。
根据抗原性质不同,颗粒性抗原可采用凝集试验。
可溶性抗原常用免疫双扩散法 2 抗体的纯度鉴定:SDS-PAGE。
若只出现一条蛋白电泳区带说明抗体纯化已达到要求,而出现多条蛋白区带则表明抗血清中混有杂蛋白,必须进一步纯化。
3.特异性鉴定:抗体对相应或相似抗原识别能力一般用特异性抗原及其相似的抗原与待鉴定抗体进行免疫双扩散试验。
如果出现交叉反应,说明有杂抗体存在。
可应用相应抗原吸收杂抗体,即可得到单价特异性抗体。
4 抗体亲和力鉴定:亲和力高则灵敏度好:亲和力测定主要有平衡透析法、酶联免疫法和放射分析法。
亲和力的高低是由抗原分子和抗体分子的结合位点、抗原决定簇之间立体构型的合适度决定的。
免疫血清的保存:1.4℃保存:可保存3~6个月 2.低温保存:-20~-40℃,可保存2~3年。
抗体的保存浓度为20~30mg/ml为宜,加入1/10000的硫柳汞或1/1000的叠氮钠防腐,并加入等体积的中性甘油,分装小瓶,置-20℃以下低温保存。
3.冰冻干燥保存:可保存5~10年4 单克隆抗体的概念每一克隆B细胞所产生的理化性状高度均一、组成均一、只与同一种抗原决定族反应的抗体。
5 淋巴杂交瘤技术的基本原理杂交瘤技术:在细胞融合技术的基础上,将具有分泌特异性抗体能力的致敏B细胞和具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞融合为B细胞杂交瘤。
6 单克隆抗体的制备流程1、亲本细胞的选择(骨髓瘤细胞:BALB/C小鼠骨髓瘤NS-1细胞株和SP2/0细胞株,致敏B细胞:免疫脾细胞,每次抗原用量100μg)2、细胞融合(细胞融合剂——PEG种类:分子量1000、1500、4000的PEG是最常用的细胞融合剂;作用机理:诱导细胞膜上脂类物质结构重排,使细胞膜易打开而有助于细胞融合;作用特点:随机发生的,不同厂商、批号、分子量的PEG,其纯度与毒性有所不同。
)3、杂交瘤细胞的选择性培养基,筛选与克隆化3凝集反应1凝集反应的原理及特点;定义:细菌和红细胞等颗粒性抗原或表面包被抗原的颗粒性载体与相应抗体结合后,可出现肉眼可见的凝集现象。