氨基柱使用注意事项

Kromasil是瑞典AKZO NOBEL公司生产的高性能硅胶基质液相色谱柱填料品牌。

Kromasil是一种高纯度球形硅胶填料，金属杂质含量极低，降低了有些金属螯合物在硅胶基质上的络合效应。

Kromasil硅胶的表面由独特的硅羟基基团组成，硅烷的覆盖率高，在较高或较低的pH条件下不易水解和分解，可在pH=1.5～9.5条件下稳定使用。

瑞典原装进口Kromasil液相色谱柱是目前国际市场上广受欢迎的色谱柱品牌，具有重现行性好，适用性广泛，使用寿命更长的特点，更好的满足制药企业和药物研发对液相色谱柱的严格要求。

Kromasil是一种高纯度、大比表面积、高机械强度、较高的碳链覆盖率的新一代球形硅胶填料。

金属不纯物含量极低，减少了有些螯合物在硅胶基质柱上的络合作用。

Kromasil的表面有独特的硅羟基基团组成，硅烷的覆盖率高，在高或低的pH条件下不易水解和分解。

它允许流动相pH为1.5-9.5。

Kromasil含碳量高，表面极性小，分离效能高。

把几乎所有的羟基钝化，并大大降低了胺性或碱性物质在硅胶基质上的严重拖尾现象。

Kromasil能在6000psi（400bar）的高压下正常运行，具有稳定的柱效及长久的寿命。

Kromasil所有尺寸的柱子，特别是制备柱，都同样具有很高的柱效。

色谱柱品种包括：Kromasil C4液相色谱柱，Kromasil C8液相色谱柱，Kromasil C18液相色谱柱，Kromasil NH2液相色谱柱，Kromasil CN液相色谱柱,Kromasil 300Å大孔填料分析柱，Kromasil AmyCoat手性分析柱, Kromasil CelluCoat手性分析柱,Kromasil DMB 手性分析柱, Kromasil TBB 手性分析柱；Kromasil半制备柱, Kromasil制备柱。

●氨基柱测酸性样品，应该是用氨基柱的HILIC模式。

酸的存在可能会使略带负电荷的氨基官能团质子化，导致使用一段时间后对于某些类的分析物保留性质有所改变或表现在柱效下降。

建议：用5-10倍的柱体积的含0.5-1.0％NH3的乙腈-水(50:50)溶液冲洗该柱（冲洗后当然要再用不含碱的流动相洗去多余氨），之后再进行分析这类酸性分析物时建议在流动相中略微添加少许氨如0.1％。

●氨基柱不能在低PH值下使用，会水解的，这样柱子就报废了●关于反冲的问题，只要是柱子端头和端尾筛板直径一致，完全可以反冲，并且反冲对柱子是很有必要的，因为流动相长时间往一个方向流动会造成C18官能团朝一个方向“倒伏”，这样对分析造成影响，反冲可以使官能团“竖立”，对分析有利。

●如果用一个质量好的又和分析柱匹配保护柱，应该不会影响分析。

匹配指的选用柱芯填料和分析柱填料在粒径和固定相类型上一致，质量好，首先要求柱芯装填质量一定要好，不能因为是柱芯，就随便把填料用干法往里面一放就完事了；另外柱芯卡套接入系统的产生的死体积要小。

一个质量好的保护柱，有时还能增加分离柱效。

●用的是四元梯度泵 A50%甲醇B50% 水经常出现停或进气泡这是什么原因：这个比例下因为使得流动相黏度最大，所以最容易产生气泡了，一般我们设计洗脱程序都避开这个比例。

●水/甲醇比例在55：45时，黏度和柱压有个极大值。

50：50接近了这个极值，柱压是比较高的，但影响柱压最大的还是填料粒径和色谱柱内径，你这个实例中不知用的什么规格的色谱柱？系统压力高，可能会因溶剂泵中的过滤头供液速度跟不上而导致气泡进入系统，停机也应该是因为气泡进入压力下降的原因，可考虑更换液体通量更大的过滤头。

●色谱柱被强保留物质污染后，保留时间提前和滞后的情况都有，具体要看污染物的性质，还要看分析物、固定相和污染物三者共同作用的情况，情况比较复杂，有时候比较难预测是提前还是滞后。

不过你平时维护的时候，注意在测定后将污染物用有机溶剂反冲清洗，就可以减轻或避免这种情况的出现。

****有限公司1.目的：建立色谱柱使用管理规程。

2.范围：适用于仪器分析（HPLC GC前对检测条件适用性的确认和HPLC分析结束后对色谱柱的清洗。

3.责任：中心化验室负责人、检验员对本规程负责。

4.内容：4.1色谱柱使用注意事项新购进的色谱柱分类存放，硅胶柱、化学键合硅胶柱、氟基或氨基柱、离子交换树脂柱、凝胶柱各用一个色谱柱盒，盒上贴上标签，注明类别。

随柱说明书装入密实袋放入色谱柱盒中。

每启用一根色谱柱，在色谱柱上贴上标签，注明启用日期。

并做好色谱柱使用与维护记录，内容包括：色谱柱型号、编号、开始使用时间、最大流速、温度范围、最大压力、冲洗方法等。

见附件（1）,每根柱子每两个月保养一次，特别是对于一些使用频率少的柱子，因为放置时间长，容易干柱的要特别关注做好保养。

对于确已失效的柱子，做好停用记录，不能随意丢弃，专门存放。

对于使用时间较长柱效降低的柱子，可把它用于检测产品的中间体。

色谱柱使用一段时间后，常遇到柱子被污染，柱效会有一定程度的下降，采用适当的方法对色谱柱进行保护，可以延长色谱柱的使用寿命。

样品和流动相的处理：溶解的样品进样前用滤膜过滤，以除去不溶物。

如果必要, 需进行样品的预处理。

流动相中如有不纯物质将影响柱效，所以溶剂尽量使用色谱级别的，至少是分析纯级别，流动相使用前用微孔薄膜过滤。

在流动相的输液管前安装过滤器。

4.2测试完毕后处理测试完毕后，清洗约30分钟，一般流速为正常流速的1至1.5倍，然后冲洗保存约40分钟。

4.3色谱柱的贮存尽可能将色谱柱贮存于100%T机溶剂中（如：最好用乙月青，其次甲醇），避免在缓冲溶液液中保存。

使用缓冲溶液后的色谱柱，应用15-20倍体积的纯化水-有机溶剂的流动相冲洗色谱柱（5%P醇和95%屯化水），后换成有机溶剂贮存（95%P醇和5%屯化水）。

清洗管路一个月一次，已避免色谱柱堵塞。

5.文件变更历史;6.附件：附件1:《色谱柱使用与维护记录》附件1: 色谱柱使用与维护记录ZL-JL-051-00开始使用时间： 尺 寸： 温度范围： 最大压力：柱子型号： ______________________ 柱子编号： ______________________ 最大流速： ml/min典型压力： ______________________ 冲洗方法：。

色谱柱使用常识1.色谱柱的安装⑴、用过滤和脱气的流动相（不含缓冲盐）彻底冲洗色谱仪的泵和管路，务必使系统中不含气泡。

⑵、根据色谱柱上所标示的流动相流向，将色谱柱入口与泵端管路相连，柱出口不连。

⑶、将泵的流速设为0.1mL/min或更低，流速缓慢地上升到正常流速（t>5min）。

⑷、当溶剂从色谱柱出口端自由流出时，将流速设为0，把柱出口与检测器端的管路相连。

⑸、用10－30倍柱体积的流动相、正常流速平衡色谱柱。

⑹、氨基柱、氰基柱既可在正相环境下使用，也可在反相环境下工作。

当需要从反相变为正相或正相变为反相时，需要用20－30倍柱体积的THF作为过渡溶剂冲洗系统，否则易使泵的单向阀堵塞，出现压力异常的现象。

2.色谱柱使用注意事项①、流动相：a、溶剂必须是HPLC级的，试剂则尽可能使用高纯度的；b、不与固定相发生化学反应，粘度小，且对样品有适宜的溶解度，要求k在1～10范围内（可用范围）或2～5（最佳范围），k值太小，不利于分离；k值太大，可能使样品在流动相中沉淀；c、流动相使用之前必须过滤和脱气；d、确保溶剂间是相互混溶的；e、流动相必须与检测器相匹配，如用紫外检测器时，不能选用截止波长大于检测波长的溶剂。

痕量的杂质会极大地降低色谱柱的性能，当需要更换流动相时，确保溶剂（缓冲液）之间是相互混溶的。

若使用的溶剂与色谱柱中的溶剂不能混溶，则需使用过渡溶剂，否则会对色谱柱产生永久性的伤害。

盐或缓冲液从流动相中析出也会对色谱柱产生永久性的伤害。

每次进样前应该检查样品在流动相中的溶解性，如果可能尽量使用流动相溶解样品。

②、固定相：a、流动相的pH值应保持在2.0－8.0之间（除非有特殊说明）；b、如果有必要可使用预饱和柱和保护柱；c、使用氨基柱时，流动相和样品中尽量避免含醛类和酮类物质。

当前的反相色谱柱填料可分为以下三种：⒈硅胶柱：柱效高，机械强度大，但对pH敏感，低pH值(<2.0)会使键合相水解（除去键合的功能集团）；高pH值（>8.0），硅胶溶解。

CAPCELL PAK NH2 UG色谱柱使用说明书在此，非常感谢您选购我公司的聚合物包被型CAPCELL PAK NH2色谱柱。

CAPCELL PAK NH2是在聚合物包被后的硅胶上导入多元胺，进一步形成含有一级氨基的构造。

常用于糖类、脂溶性维生素等物质的正相或HILIC分离。

另外，作为弱阴离子交换色谱柱，在酸性流动相条件下填料表面带正电荷，适用于水溶性维生素或核苷酸类的分析。

官能团孔径粒径比表面积2C% 密度2pH范围耐压USP为了能够长期且稳定地使用色谱柱，请在熟读该使用说明书后进行正确使用。

1.色谱柱的启用每一根色谱柱在出厂前，都经过了严格的出厂测试，只有满足出厂标准方可出售。

每一根CAPCELL PAK NH2系列色谱柱的柱盒内均含有色谱柱的性能测试报告。

性能测试报告包含了色谱柱柱号，色谱柱规格，填料批次号，理论塔板数和所用的测试条件。

为了保证色谱柱的正常使用，建议在使用前检查以下事项：1.检查色谱柱包装盒是否完整，有无拆封和碰撞痕迹。

2.色谱柱标签是否与包装上的柱号、柱型相符，色谱柱两端堵头是否完整。

3.色谱柱包装盒内是否有色谱柱性能测试报告。

2.色谱柱的安装2.1安装色谱柱之前，请使用不含有缓冲盐、强酸或强碱的流动相对液相色谱系统进行冲洗置换。

2.2为尽量减少死体积，色谱柱的接头使用了外径1/16英寸配管的螺头(MALE NUT)。

请确保装置的配管接头正确连接，并且锥箍的顶端已插入接头内侧(参照图1)。

若配管不匹配，特别是直接使用其他类型色谱柱所用配管时，锥箍前端的配管长度（图1中的V）与色谱柱尾端接头的长度（图1中的L）经常会不同，因而引发故障。

若L＞V，会产生死体积，甚至出现色谱峰展宽或拖尾现象，并且分离变差。

若L＜V，由于锥箍无法密封，所以会导致漏液。

※频繁更换色谱柱，可能会导致螺头的锥箍损坏而发生漏液现象。

这种情况下若进一步拧紧，螺母的头部可能会发生断裂。

图1 色谱柱安装示意图2.3新色谱柱的保存液请参看色谱柱的性能测试报告，NH2色谱柱为纯乙腈。

氨基柱是同时可以用于正相条件和反相条件的这一点很多用户都已经知道；但是要注意到的是：正相溶剂和反相溶剂往往是不互溶的，对这一点的忽略可能会带给使用者一些麻烦。

对于新购买到的柱子，首先请注意打开分析测试说明书，了解柱子的保存溶剂。

如果保存溶剂与你将要使用的流动相极性不同不会互溶，请先用异丙醇过渡。

过渡过程中注意因异丙醇粘度较大，会导致柱压很高，适当调低流速即可。

如果要使用的流动相中还含有缓冲盐类，建议在用分析流动相之前，先用不含缓冲盐的同比例流动相过渡，这样可避免缓冲盐在分析柱内的析出。

柱效检测：我用于判断一个用户是否有经验的指标之一，是用户是否习惯配制一些柱效检测标准溶液。

说到柱效检测，我可以向大家提供一个方法，而且很通用，你也可以用同样的标准溶液和流动相来检测硅胶柱和氰基柱。

流动相：10％乙酸乙酯＋90％正己烷流速1.0标准溶液：乙苯（如乙苯找不动就用甲苯代替呗）＋苯甲酸甲酯检测波长254nm这个方法特别适用于新购柱子（新购柱子往往保存在正相溶剂中）时即进行检测，如有问题，可及时与供应商沟通。

也适合在柱子在准备放置相当长一段时间之前进行充分清洗后进行检测作为记录留档。

在平常的使用过程中，如果分析物是固定重复的，我们当然可以从对分析物的分离分析情况来作出判断；但如果分析物和分析条件不同时，定期检测柱效可以避免柱效下降导致分离不佳再分析查找原因这样浪费人力物力的过程。

不过特别要注意的是，当氨基柱（或氰基柱）在反相条件中使用时，如用该条件检测，请注意流动相的换相过渡问题。

氨基柱的使用：需要注意的是，氨基柱的键合官能团氨丙基要比C18,C8柱的键合官能团C18,C8要容易水解，所以首先要做好其使用寿命稍逊的心理准备，特别是当你的使用条件是反相条件下时。

反相条件下使用时，要特别注意控制PH值范围，PH值越低越有发生水解的危险，流动相中水的比例越高当然也越有发生水解的危险。

所以，在使用后以及准备长时间放置该柱时，必要的清洗和将氨基柱保存于纯的有机溶剂中是很好的保养措施。

目的：规范液相色谱柱的使用与管理；液相色谱柱标准化老化与再生；剖析液相色谱柱常见问题与解决办法。

延长色谱柱使用寿命，降低色谱柱使用成本。

提高分析人员液相色谱柱使用与维护水平。

范围：适用于使用高效液相色谱仪的仪器分析操作人员及相关管理人员。

责任：设备员、液相操作人员、质控主管、质量管理部经理、质量受权人。

内容：1.定义1.1 液相色谱柱：指用于液相色谱分离的柱形固定相，由柱管、压帽/卡套、筛板（滤片）、填料、接头等组合而成，可用于液相色谱分析与制备。

1.2 色谱柱再生：指色谱柱在非正常情况下，针对异常现象及原因采取的一系列修复补救措施，以提高色谱柱柱效和延长其使用寿命的处理过程。

1.3 运载溶剂：指色谱柱生产厂商在柱出厂测试合格后饱和于色谱柱内的合适溶剂，以利于运输保存，多与保存溶剂相同。

1.4 保存条件：指色谱柱生产厂商根据不同柱类型及其色谱柱填料的制备、键合、装填、高压定型、净化干燥等工艺条件的不同要求而特别制定的色谱柱保存前净化饱和的处理程序与储存条件，包括净化程序、净化溶剂和保存溶剂、保存条件。

1.5 保存溶剂：用于保存色谱柱并指定了溶剂组成与比例的溶液。

1.6 反相色谱柱：以键合非极性基团的载体为填充剂填充而成的色谱柱。

常见的载体有硅胶、聚合物复合硅胶和聚合物等。

常用的填充剂有十八烷基硅烷键合硅胶、辛基硅烷键合硅胶和苯基键合硅胶等。

1.7正相色谱柱：用硅胶填充剂，或键合极性基团的硅胶填充而成的色谱柱，常见的填充剂有硅胶、氨基键合硅胶和氰基键合硅胶等。

1.8氨基柱（-NH2）：可以同时用于正相条件和反相条件，但多用于正相色谱条件。

使用时需注意，正相反相交替使用时必需用异丙醇过度，保证柱保存溶剂与流动相互溶。

[氨基柱出厂保存溶剂多用正相溶剂，例如：正己烷-乙腈（99：1）]。

2.液相色谱柱的使用及保养2.1普通C8及C8反相色谱柱的老化处理与使用保养程序新购色谱柱出厂前均采用适合的运载溶剂饱和，密封，由于运输过程周期较长，柱床容易干涸，所以新柱使用前需重新饱和与老化。

氨基色谱柱怎么活化
氨基色谱柱是一种常用的分离柱，通常用于对带有酸性官能团的化合物进行分析和纯化。

活化氨基色谱柱可以提高其对目标化合物的吸附能力和分离效果。

下面是一种常见的氨基色谱柱活化方法：
1. 硅胶活化法：
a. 将氨基色谱柱置于干燥的玻璃管中。

b. 用干燥剂如硅胶填充玻璃管，使柱内外保持干燥。

c. 在玻璃管中加入少量的二氯甲烷或二氯乙烷，并封闭玻璃管。

d. 将玻璃管放入恒温槽中，在室温下静置12-24小时。

e. 取出玻璃管，将其中的溶剂蒸发至干燥，这样就完成了氨基色谱柱的活化。

2. 1,2-二氯乙烷活化法：
a. 将氨基色谱柱置于干燥的容器中。

b. 在容器中加入适量的1,2-二氯乙烷，使得柱子完全浸泡在溶剂中。

c. 盖上容器盖，让柱子在室温下静置12-24小时。

d. 取出柱子，用氮气吹干表面的残余溶剂。

需要注意的是，活化后的氨基色谱柱应尽快进行使用，避免柱子再次暴露在湿气中。

此外，不同型号和厂家的氨基
色谱柱可能有不同的活化方法，请参考柱子的技术说明书或咨询相关厂家获取更准确的活化方法。

安捷伦Zorbax氨基柱数据表（Agilent Zorbax NH2 datasheet）一般描述（General Description）Zorbax NH2is a polar bonded-phase packing used for normal-phase,reversed-phase,or anion-exchange high performance liquid chromatography.This packing is produced by reacting 3-aminopropyltriethoxysilane with Zorbax SIL particles.If not strictly controlled,the use of a polyfunctional reagent can yield uneven surface coverage,difficult to reproduce from column to column.The reaction conditions used to produce Zorbax NH2were specifically developed to minimize reagent polymerization and to maximize surface coverage with a monolayer bonded phase.The uniform,spherical,Zorbax NH2 particles in 4.6 and 9.4 mm ID columns are about 5 μm in diameter,and have a controlled pore size to give optimum column efficiency.The 21.2 mm ID column contains particles of about 7 μm diameter.Columns are packed to a uniform bed density using a proprietary,high-pressure,slurry-loading technique.Zorbax NH2氨基柱是一种极性键合相填料，该填料用于正相、反相、阴离子交换高效液相色谱。