LUNA氨基柱的使用方法

h t t p ://X B Y Z .c b pt .c n k i .n e t ㊃药物分析㊃盐酸氨基葡萄糖颗粒的含量测定方法研究但晓梦,谢育媛,郭江红*,姜 红*湖北省药品监督检验研究院,国家药品监督管理局血液制品质量控制重点实验室,武汉 430073摘要:目的 分析盐酸氨基葡萄糖颗粒剂中辅料蔗糖㊁乳糖等对主药氨基葡萄糖质量控制的影响,建立测定盐酸氨基葡萄糖颗粒剂含量的高效液相色谱法(h i g h p e r f o r m a n c e l i q u i d c h r o m a t o g r a p h y,H P L C ),并提高其质量标准㊂方法 采用H P L C -紫外检测法㊂色谱柱为C A P C E L L P A K N H 2柱(150mmˑ4.6mm ,3μm );以磷酸盐缓溶液(取磷酸氢二钾3.5g ,加水1000m L 使溶解,加入0.25m L 氨水,用磷酸调节p H 值至7.5)-乙腈(25ʒ75)为流动相;流速为1.5m L ㊃m i n -1;检测波长为195n m ;进样量为20μL ㊂结果 采用优化后的质量控制方法,能有效分离盐酸氨基葡萄糖颗粒中主药氨基葡萄糖与其辅料(蔗糖㊁乳糖㊁聚维酮K 30),盐酸氨基葡萄糖质量浓度在1.46~10.99m g㊃m L -1范围内与峰面积呈良好的线性关系(r =0.9991),平均回收率为100.6%,R S D 值为0.5%,检测下限和定量限为0.4和1.0μg㊂结论 该方法能准确测定盐酸氨基葡萄糖颗粒含量,方法简便㊁准确㊁专属性强㊂关键词:盐酸氨基葡萄糖颗粒;质量控制;含量测定;高效液相色谱法D O I :10.3969/j.i s s n .1004-2407.2022.02.006中图分类号:R 927.2 文献标志码:A 文章编号:1004-2407(2022)02-0027-04S t u d y o f t h e c o n t e n t d e t e r m i n a t i o n m e t h o d o f G l u c o s a m i n e H yd r o c h l o r i de G r a n u l e s D A N X i a o m e n g ,X I E Y u y u a n ,G U O J i a n g h o n g *,J I A N G H o n g*H u b e i I n s t i t u t e f o r D r u g C o n t r o l ,NM P A K e y L a b o r a t o r y f o r Q u a l i t y Co n t r o l o f B l o o d P r o d u c t s ,W u h a n 430073,C h i n a A b s t r a c t :O b j e c t i v e T o a n a l y z e t h e e f f e c t s o f s u c r o s e a n d l a c t o s e e x c i p i e n t s o n t h e q u a l i t y c o n t r o l o f G l u c o s a m i n e H yd r o c h l o r i de G r a n u l e s ,e s t a b l i s h a h i g h p e rf o r m a n c e l i q u i d c h r o m a t og r a ph y (H P L C )m e t h o d f o r d e t e r mi n i n g th e c o n t e n t o f G l u c o s a m i n e H y d r o c h l o r i d e G r a n u l e s ,a n d t o i m p r o v e i t s s t a n d a r d .M e t h o d s H P L C c o u p l e d w i t h u l t r a -v i o l e t s p e c t r o m e t r y w a s u s e d b y u s i n gL u n a N H 2c o l u m n (150mmˑ4.6mm ,3μm ),a n d t h e m o b i l e p h a s e w a s a mm o n i u m p h o s p h a t e b u f f e r (d i s s o l v i n g d i po t a s s i u m p h o s p h a t e 3.5g a n d a mm o n i u m h y d r o x i d e 0.25m L i n t o 1000m L w a t e r ,a d j u s t i n g t h e p H t o 7.5w i t h p h o s ph o r i c a c i d )-a c e t o n i t r i l e (25ʒ75).T h e f l o w r a t e w a s 1.5m L ㊃m i n -1a n d t h e d e t e c t i o n w a v e l e n g t h w a s s e t a t 195n m.T h e i n je c t i o n v o l u m e w a s 20μL .R e s u l t s T h e o p t i m i z e d q u a l i t y c o n t r o l m e t h o d w a s a d o p t e d ,w h i c h c o u l d ef f e c t i v e l y s e p a r a t e t h e m a i n c o m po n e n t s o f G l u c o s a m i n e H y d r o c h l o r i d e G r a n u l e s a n d i t s e x c i p i e n t s ,s u c r o s e ,l a c t o s e a n d K 30.T h e l i n e a r r a n g e o f g l u c o s a m i n e h yd r o c h l o r i de w a s 1.46-10.99m g ㊃m L -1(r =0.9991),a n d t h e a v e r a g e r e c o v e r y wa s 100.6%(R S D=0.5%).T h e d e t e c t i o n l i m i t a n d q u a n t i t a t i v e l i m i t w e r e 0.4a n d 1.0μg ,r e s p e c t i v e l y .C o n c l u s i o n T h e m e t h o d c a n e f f e c t i v e l y de t e r m i n e t h e c o n t e n t of G l u c o s a m i n e H y d r o c h l o r i d e G r a n u l e s ,w h i c h i s s i m pl e ,a c c u r a t e a n d r e l i a b l e .K e y wo r d s :G l u c o s a m i n e H y d r o c h l o r i d e G r a n u l e s ;q u a l i t y c o n t r o l ;c o n t e n t d e t e r m i n a t i o n ;h i g h p e r f o r m a n c e l i q u i d c h r o m a t o g r a -p h y (H P L C )基金项目:国家药典委员会标准提高项目(编号:国药典综发 2016 183号);湖北省药品监督管理局科研项目(编号:20200117)作者简介:但晓梦,女,主管药师*共同通信作者:郭江红,女,副主任药师;姜红,女,主任药师盐酸氨基葡萄糖是人体关节软骨基质合成蛋白聚糖必需的重要成分,主要用于预防和治疗各种类型的骨性关节炎,如膝关节㊁髋关节㊁脊柱㊁肩㊁手腕和踝关节等部位以及全身性的骨性关节炎[1-3]㊂氨基葡萄糖是软骨基质和滑液中合成氨基葡聚糖和蛋白聚糖的组分和首选底物㊂氨基葡萄糖可刺激软骨细胞产生具有正常多聚体结构的糖蛋白,抑制损害关节软骨的酶(如胶原酶和磷脂酶A 2等)的活性,抑制损伤细胞的超氧化物自由基的产生,从而减少损伤细胞内毒素因子的释放㊂又因其属于生物提取物质,故安全性较高,不良反应极少,因而被广泛用于医药及保健食品领域,用于治疗全身各种骨性关节炎[4-6]㊂随着人们对身体健康重视程度的逐年提高,盐酸氨基葡萄糖类药物应用于治疗骨性关节炎的使用量也随之显著增长㊂近年来,盐酸氨基葡萄糖类药物上市剂型由经典的胶囊剂㊁普通片剂衍生出了更多的剂型,如颗粒剂㊁散剂㊁泡腾片剂,提示该类药物的市场需求量较大[7-8]㊂通过检索国家食品药品监督管理局网站上的基础数据库可知,盐酸氨基葡萄糖颗粒在国内有2家生产企业,分别为企业A (企业注册标准Y B H 02202009)和企业B (企业注册标准Y B H 00352014)㊂企业A 生产的盐酸氨基葡萄糖颗粒的辅料为蔗糖㊁聚维酮K 30,企业B 的辅料为蔗糖㊁聚维酮K 30㊁乳糖等㊂现阶段氨基葡萄糖类药物国家质量标准尚未统一[9-13],相关生72西北药学杂志 2022年3月 第37卷 第2期产企业仅凭各自的企业注册标准对氨基葡萄糖类药物进行检测,而其中含量测定等关键项目质量控制方法差异较大且并不适用于盐酸氨基葡萄糖颗粒剂的检测,主要原因在于盐酸氨基葡萄糖颗粒剂的辅料中包含蔗糖㊁乳糖等物质,均为小分子糖类,在企业注册标准中含量测定色谱条件下较难分离,故不能有效控制产品含量[14-16]㊂因此,亟待对盐酸氨基葡萄糖颗粒标准进行深入研究㊂1仪器与试药1.1仪器W a t e r s e2695A l l i a n c e高效液相色谱仪,包括柱温箱㊁在线真空脱气机㊁2489紫外检测器以及E m p o w e r色谱工作站(美国W a t e r s公司);X P205电子天平(梅特勒-托利多公司)㊂1.2试药盐酸氨基葡萄糖颗粒(企业A,批号12A170303㊁12A170304;企业B,批号190202㊁190204㊁190205)㊂盐酸氨基葡萄糖对照品(批号140649-201606,质量分数100%,中国食品药品检定研究院);盐酸氨基葡萄糖原料药(批号1803-2018-H020,浙江诚意药业有限公司);蔗糖(批号20190409,嘉兴市白浪淀粉制品有限公司);聚维酮K30(批号200816,安徽山河药用辅料有限公司);乳糖(批号200801,企业A);氯化钠㊁磷酸氢二钾㊁氨水㊁磷酸(分析纯,国药集团化学试剂有限公司);乙腈(色谱纯,美国T e d i a天地试剂公司);水为超纯水㊂2方法与结果2.1色谱条件色谱柱:C A P C E L L P A K N H2柱(150mmˑ4.6mm,5μm);流动相:磷酸盐溶液(取磷酸氢二钾3.5g,加水1000m L使溶解,加入0.25氨水,用磷酸调p H值至7.5)-乙腈(25ʒ75);流速:1.5m L㊃m i n-1;进样量:20μL;柱温:30ħ;检测波长:195n m㊂2.2溶液的制备2.2.1空白辅料定位溶液蔗糖溶液:精密称取蔗糖213.0m g,置于10m L量瓶中,加水使其溶解并稀释至刻度,摇匀,过滤,取续滤液稀释至质量浓度为10m g㊃m L-1,即得㊂聚维酮K30溶液:精密称取聚维酮K30205.1m g,置于10m L量瓶中,加水使其溶解并稀释至刻度,摇匀,过滤,即得㊂乳糖溶液:精密称取乳糖112.5m g,置于10m L量瓶中,加水使其溶解并稀释至刻度,摇匀,过滤,即得㊂2.2.2氯离子(C l-)溶液精密称取12.8m g氯化钠置于10m L量瓶中,加水使其溶解并稀释至刻度,摇匀,作为C l-定位溶液㊂2.2.3供试品溶液精密称取盐酸氨基葡萄糖颗粒粉末(相当于氨基葡萄糖约200m g),置于50m L量瓶中,加水使其溶解并稀释至刻度,摇匀,过滤,取续滤液作为供试品溶液㊂2.2.4对照品溶液精密称取盐酸氨基葡萄糖对照品,加水使其溶解并定量稀释制成每1m L中约含盐酸氨基葡萄糖4.0m g的溶液㊂2.3专属性实验精密量取2.2.1~2.2.4项下的溶液各20μL,按照2.1项下色谱条件测定,记录色谱图㊂在上述色谱条件下,盐酸氨基葡萄糖颗粒剂中成盐离子氯离子(R t=2.30m i n)㊁辅料蔗糖(R t=11.14m i n)㊁乳糖(R t=15.96m i n,倒峰)及聚维酮K30(R t=1.26m i n)对氨基葡萄糖(R t=13.05m i n)的测定均无干扰㊂结果见图1㊂注:A.溶剂空白;B.盐酸氨基葡萄糖颗粒供试品溶液;C.C l-;D.蔗糖;E.乳糖;F.聚维酮K30;1.氨基葡萄糖;2.C l-;3.蔗糖;4.乳糖;5.聚维酮K30㊂图1盐酸氨基葡萄糖颗粒含量测定系统适用性H P L C图F i g.1H P L C c h r o m a t o g r a m s o f s y s t e m s u i t a b i l i t y t e s t o f t h e c o n t e n t d e t e r m i n a t i o n m e t h o d o fG l u c o s a m i n eH y d r o c h l o r i d e G r a n u l e s 82西北药学杂志2022年3月第37卷第2期h t t p://X B Y Z.c b p t.c n k i.n e t2.4线性关系考察精密称取盐酸氨基葡萄糖对照品146.64m g,置于10m L量瓶中,加水使其溶解并稀释至刻度,摇匀,配制成含盐酸氨基葡萄糖质量浓度为14.6m g㊃m L-1的溶液,作为储备液㊂分别量取储备液适量,用水稀释制成1m L含盐酸氨基葡萄糖1.46㊁3.66㊁5.86㊁7.33㊁8.79㊁10.99m g的溶液,分别吸取上述溶液各20μL 注入液相色谱仪,记录色谱图㊂以峰面积为纵坐标(y)㊁质量浓度为横坐标(x)进行线性回归㊂结果表明,盐酸氨基葡萄糖质量浓度在1.46~10.99m g㊃m L-1范围内时,与峰面积呈良好的线性关系㊂回归方程为y=277074x-12990,R=0.9991㊂2.5检测限与定量限实验精密称取盐酸氨基葡萄糖对照品17.63m g,置于5m L量瓶中,加水使其溶解并稀释至刻度,摇匀;再精密量取上述溶液1m L,置于25m L量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,在H P L C色谱仪检测器稳定操作的条件下进样8μL,所得信噪比(S/N)为13.2,即定量限为1.1 g㊂在高效液相色谱仪检测器稳定操作的条件下进样上述溶液3 L,所得信噪比(S/N)为3.1,即定量限为0.4 g㊂2.6精密度实验取盐酸氨基葡萄糖颗粒适量,用水配制成质量浓度约为4m g㊃m L-1的盐酸氨基葡萄糖溶液,重复进样测定6次,记录其峰面积㊂计算得R S D值为0.2%,表明该方法的精密度良好㊂2.7加样回收率实验取盐酸氨基葡萄糖颗粒(企业B,批号190205) 2.6356g,加水300m L使其溶解并稀释至刻度(盐酸氨基葡萄糖的质量浓度为2.0m g㊃m L-1),摇匀,作为盐酸氨基葡萄糖颗粒回收率本底溶液㊂用于精密配制含盐酸氨基葡萄糖对照品(质量浓度4m g㊃m L-1) 80%㊁100%㊁120%3种不同的9份模拟样品,扣除回收率本底溶液后已知药物的质量浓度分别约为3.2㊁4.0㊁4.8m g㊃m L-1,作为加样回收率供试品溶液㊂按照拟定的含量测定方法测定;另取盐酸氨基葡萄糖对照品104.2m g,置于25m L量瓶中,加水使其溶解并稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液㊂根据盐酸氨基葡萄糖加入量与测得量计算回收率,计算得平均回收率为100.6%,R S D值为0.5%㊂结果见表1㊂2.8重复性实验按照2.2.3项下方法,称取盐酸氨基葡萄糖颗粒样品(企业B,批号190205)适量,制备6份供试品溶液,精密量取20 L注入液相色谱仪,记录色谱图㊂计算得6份供试品溶液的平均含量为99.6%,R S D 值为0.6%,说明该方法的重复性良好㊂表1盐酸氨基葡萄糖颗粒的回收率实验结果T a b.1R e s u l t s o f r e c o v e r y t e s t o f G l u c o s a m i n e H y d r o c h l o r i d eG r a n u l e s编号加入量/m g测得量/m g回收率/%平均回收率/%R S D/% 80%188.889.40100.68284.084.49100.59380.280.68100.60100%1102.4103.99101.552103.5104.14100.623103.3104.30100.97120%1132.9133.06100.122121.9121.6799.813130.3130.87100.44100.60.52.9稳定性实验称取盐酸氨基葡萄糖颗粒适量,用水配制成氨基葡萄糖质量浓度约为4m g㊃m L-1的溶液,分别于0㊁2㊁16㊁37h测定峰面积,考察供试品溶液的稳定性㊂结果表明,供试品溶液在37h内稳定㊂2.10样品测定本实验共收集到5批盐酸氨基葡萄糖颗粒样品,精密称取各批装量差异项下样品(约相当于氨基葡萄糖200m g),按照2.2.3项下供试品溶液配制方法进行配制,以盐酸氨基葡萄糖对照品为外标,结果见表2㊂结果显示,5批样品均符合规定[本品含盐酸氨基葡萄糖(C6H13N O5㊃H C l)应为标示量的90.0% ~110.0%]㊂表25批样品的测定结果T a b.2D e t e r m i n a t i o n r e s u l t s o f5s a m p l e s药物名称生产厂家批号含量/%盐酸氨基葡萄糖颗粒企业A12A17030393.0盐酸氨基葡萄糖颗粒企业A12A17030494.3盐酸氨基葡萄糖颗粒企业B19020299.9盐酸氨基葡萄糖颗粒企业B190204100.8盐酸氨基葡萄糖颗粒企业B19020599.6 3讨论3.1现行标准含量测定方法存在的问题现行质量标准均采用高效液相色谱-紫外检测法(H P L C-U V)测定含量,企业注册标准Y B H02202009采用的流动相体系为p H2.5磷酸二氢钾溶液-乙腈(30ʒ70),企业注册标准Y B H00352014采用的流动相体系为p H7.0的磷酸氢二钾溶液-乙腈(33ʒ67)㊂2种流动相体系p H值差异较大,p H2.5磷酸二氢钾溶液-乙腈体系的p H值较低,会引发氨基柱填料水92西北药学杂志2022年3月第37卷第2期h t t p://X B Y Z.c b p t.c n k i.n e t解;p H7.0的磷酸氢二钾溶液-乙腈体系无法分离氨基葡萄糖峰与其辅料蔗糖峰㊂本文拟采用氨基柱-H P L C-U V法,该方法适用性较强,与柱前衍生等方法相比,操作简单且专属性较强㊂考虑到各企业生产的氨基柱差异较大,拟对氨基柱进行严格的筛选,最终确定以大曹三耀公司生产的氨基柱(C A P C E L L P A K N H2,150m mˑ4.6m m,5μm)为分离色谱柱,以磷酸盐缓溶液(取磷酸氢二钾3.5g,加水1000m L 使溶解,加入0.25m L氨水,用磷酸调节p H值至7.5)-乙腈(25ʒ75)为流动相体系,在该色谱条件下,既能实现氨基葡萄糖与其成盐离子氯离子的较好分离,又能实现盐酸氨基葡萄糖颗粒剂中氨基葡萄糖与其辅料蔗糖㊁乳糖和聚维酮K30的良好分离,从而有效㊁准确地测定其主药成分氨基葡萄糖的含量㊂3.2色谱柱的选择考虑到盐酸氨基葡萄糖颗粒中辅料蔗糖㊁乳糖和聚维酮K30对主药氨基葡萄糖的影响,在拟定的流动相体系下对4个品牌的色谱柱进行了筛选和考察㊂结果显示:①美国P h e n o m e n e x公司生产的氨基柱(L u n a N H2150mmˑ4.6mm,5μm)虽能较好地分离氨基葡萄糖峰与其成盐离子峰,峰形较好,但无法分离辅料蔗糖峰和氨基葡萄糖峰,调整流动相比例后仍无法分离;②纳谱分析氨基柱(250mmˑ4.6mm, 5μm)分离蔗糖峰和氨基葡萄糖峰的能力较弱,且氨基葡萄糖峰与乳糖峰的保留时间相对较近,调整流动相比例后会出现氨基葡萄糖峰与乳糖峰部分重叠的情况;③W a t e r s氨基柱(150mmˑ4.6mm,5μm)能较好地分离氨基葡萄糖峰与其成盐离子峰和辅料乳糖峰㊁聚维酮K30峰,但无法完全分离氨基葡萄糖峰和辅料蔗糖峰;④大曹氨基柱(C A P C E L L P A K N H2, 150m mˑ4.6m m,5μm)能较好地分离主峰氨基葡萄糖与其成盐离子氯离子峰,亦能较好地分离氨基葡萄糖峰与其辅料蔗糖峰㊁乳糖峰㊂在确定选用大曹三耀公司生产的氨基柱后,为了进一步提高氨基葡萄糖与蔗糖的分离度,对色谱柱的使用温度进行了筛选,在柱温30㊁35ħ下分别进样盐酸氨基葡萄糖颗粒供试品溶液,发现在柱温为30ħ时,氨基葡萄糖峰与蔗糖峰能较好分离㊂经实验最终确定将大曹三耀公司的氨基柱(C A P C E L L P A K N H2,150mmˑ4.6mm, 5μm)作为本研究的方法学色谱柱㊂4小结盐酸氨基葡萄糖颗粒现行各质量标准收载的含量测定方法均不一致,流动相体系差异较大,且均无法分离主药氨基葡萄糖与其辅料蔗糖㊁乳糖等,不能有效控制药物含量㊂在本研究建立的含量测定条件下,盐酸氨基葡萄糖颗粒剂中的主药氨基葡萄糖与其成盐离子(C l-)能被较好地分离,同时氨基葡萄糖与其辅料蔗糖㊁乳糖也能被较好地分离㊂结果表明,该方法专属性强㊁重复性好,能较好地满足相关药物生产企业的检测条件,故该含量测定方法能满足准确测定盐酸氨基葡萄糖颗粒含量的要求㊂该研究可为盐酸氨基葡萄糖颗粒剂或其他剂型的后续研究提供参考,为氨基葡萄糖类药物质量标准的提高提供技术支持㊂参考文献:[1] Z HA N G H K,L U Y T,WA N G Y H,e t a l.D-g l u-c o s a m i n e p r od u c t i o n f r o m c h i t o s a n h y d r o l y z a t i o n o ve r ag l u c o s e-d e r i v e d s o l i d a c i d c a t a l y s t[J].R S C A d v a n c e s,2018,8(10):5608-5613.[2] M I T C H E L L A,T H I E R MA N N C.S e l e c t i v i t y o f n o n s t e-r o i d a l a n t i i n f l a m m a t o r a r y d r u g s a s i n h i b i t o r s o f c o n s t i t u t i v ea n d i n d u c ib l ec y c l o x y g e n a s e[J].P r o c N a t l A c ad S c i U S A,1993,90(24):11693-11697.[3]张丽.硫酸氨基葡萄糖治疗膝骨关节炎的临床疗效分析[J].世界最新医学信息文摘,2017,17(11):101-102. [4]姜红,但晓梦,胡远华,等.H P L C-R I D法测定氨基葡萄糖的含量[J].中国药品标准,2013,14(4):259-263.[5] R E G I N S T E R J Y,D E R O I S Y R,R O V A T I L C,e t a l.L o n g-t e r m e f f e c t s o f g l u c o s a m i n e s u l p h a t e o n o s t e o a r-t h r i t i s p r o g r e s s i o n:A r a n d o m i s e d,p l a c e b o-c o n t r o l l e dc l i n i c a l t r i a l[J].L a n c e t,2001,357(9252):251-256.[6] N O Y S Z E W S K I E A,W R O B L E W S K I K,D O D G E G R,e ta l.P r e f e r e n t i a l i n c o r p o r a t i o n o f g l u c o s a m i n e i n t o t h e g a l a c-t o s a m i n e m o i e t i e s o f c h o n d r o i t i n s u l f a t e s i n a r t i c u l a r c a r t i l a g ee x p l a n t s[J].A r t h R h e u m,2001,44(5):1089-1095.[7] S A N D Y J,G A M E T T D,T H O M P S O N V,e t a l.C h o n d r o-c y t e-m ed i a te d c a t a b o l i s m of ag g r e c a n:A g g r e c a n a s e-d e p e n d e n tc l e a v a g e i nd u ce d b y i n t e r l e u k i n-1o r r e t i n o i c a c i d c a n b e i n h i b-i t e d b y g l u c o s a m i n e[J].B i o c h e m J,1998,335(1):59-66.[8]吴文坚,曾炳芳.硫酸氨基葡萄糖治疗骨关节炎新进展[J].国外医学骨科学分册,2005,26(1):22-24. [9] Y B H02202009,国家食品药品监督管理局标准(试行)[S].[10]Y B H00352014,国家食品药品监督管理局标准(试行)[S].[11]T h e U n i t e d S t a t e s P h a r m a c o p i e i a l C o n v e n t i o n.T h e U n i t e dS t a t e s P h a r m a c o p e i a[S].N o r d l i n g e n:D r u c k e r e i C.H.B e c k,2017.[12]E u r o p e a n D i e c t o r a t e f o r t h e Q u a l i t y o f M e d i c i n e s&H e a l t h C a r e.E u r o p e a n P h a r m a c o p o e i a[S].B a l t i m o r e:U n i t e d B o o k P r e s s,I n c,2017.[13]李霞,杨海霞,赵国敏,等.盐酸氨基葡萄糖含量测定研究进展[J].食品与药品,2020,22(5):18-21. [14]但晓梦,郭江红,姜红.H P L C法测定氨基葡萄糖类药物的有关物质[J].中国药师,2019,22(7):1370-1374.[15]张德柱,宋愿智,沈登林.盐酸氨基葡萄糖胶囊有关物质测定方法研究[J].西北药学杂志,2014,29(3):252-255. [16]沈丹丹,曾杰,王玥,等.H P L C测定盐酸氨基葡萄糖有关物质与含量[J].中国药学杂志,2017,52(4):315-317.(收稿日期:2021-10-14)03西北药学杂志2022年3月第37卷第2期h t t p://X B Y Z.c b p t.c n k i.n e t。

常用液相色谱柱的规范化使用与保养标准操作规程完整.目的：规范液相色谱柱的使用与管理；液相色谱柱标准化老化与再生；剖析液相色谱柱常见问题与解决办法。

延长色谱柱使用寿命，降低色谱柱使用成本。

提高分析人员液相色谱柱使用与维护水平。

范围：适用于使用高效液相色谱仪的仪器分析操作人员及相关管理人员。

责任：设备员、液相操作人员、质控主管、质量管理部经理、质量受权人。

内容：1.定义1.1 液相色谱柱：指用于液相色谱分离的柱形固定相，由柱管、压帽/卡套、筛板（滤片）、填料、接头等组合而成，可用于液相色谱分析与制备。

1.2 色谱柱再生：指色谱柱在非正常情况下，针对异常现象及原因采取的一系列修复补救措施，以提高色谱柱柱效和延长其使用寿命的处理过程。

1.3 运载溶剂：指色谱柱生产厂商在柱出厂测试合格后饱和于色谱柱内的合适溶剂，以利于运输保存，多与保存溶剂相同。

1.4 保存条件：指色谱柱生产厂商根据不同柱类型及其色谱柱填料的制备、键合、装填、高压定型、净化干燥等工艺条件的不同要求而特别制定的色谱柱保存前净化饱和的处理程序与储存条件，包括净化程序、净化溶剂和保存溶剂、保存条件。

1.5 保存溶剂：用于保存色谱柱并指定了溶剂组成与比例的溶液。

1.6 反相色谱柱：以键合非极性基团的载体为填充剂填充而成的色谱柱。

常见的载体有硅胶、聚合物复合硅胶和聚合物等。

常用的填充剂有十八烷基硅烷键合硅胶、辛基硅烷键合硅胶和苯基键合硅胶等。

1.7正相色谱柱：用硅胶填充剂，或键合极性基团的硅胶填充而成的色谱柱，常见的填充剂有硅胶、氨基键合硅胶和氰基键合硅胶等。

1.8氨基柱（-NH2）：可以同时用于正相条件和反相条件，但多用于正相色谱条件。

使用时需注意，正相反相交替使用时必需用异丙醇过度，保证柱保存溶剂与流动相互溶。

[氨基柱出厂保存溶剂多用正相溶剂，例如：正己烷-乙腈（99：1）]。

2.液相色谱柱的使用及保养.2.1普通C8及C8反相色谱柱的老化处理与使用保养程序新购色谱柱出厂前均采用适合的运载溶剂饱和，密封，由于运输过程周期较长，柱床容易干涸，所以新柱使用前需重新饱和与老化。

正相、反相和极性胶联柱使用手册分类:质量检验 2007.3.22 22:20 作者：LAI | 评论：0 | 阅读：146正相、反相和极性胶联柱使用手册Chrompack HPLC Normal-,Reversed phase and Polar bonded columns 注意:此色谱柱填充的是改性硅胶材料。

向柱内导入碱性溶剂（pH>7.0）或酸性溶剂（pH<2.0）会导致柱子损坏。

在使用这个柱子之前，你要充分地熟悉这本手册讲述的内容。

未正确地使用不能享受保修待遇。

1．简介此柱填充的是反相或者极性胶联型态的硅胶基质材料的硅胶。

硅胶形态的柱子用于正相（非水）条件。

反相（C8，C18，ODS，RP-8和RP-18）通常用于反相条件（水相）。

极性胶联型（APS，diol，CN和NH2）依照应用目的，可以用于正相和反相条件。

建议不要将一个相同的柱子用于差别非常大的条件下，这是因为柱子在特定的条件下，固定相的性质会发生变化，所以在其他的条件下，会影响柱效。

也不建议将硅胶柱用在反相条件下或者将方向柱用在正相条件下，这是因为这种过程会发生重复性差的问题（每一次注射之间和柱与柱之间的比较）。

2．色谱柱老化在开始分析工作以前，柱子必须经过正确的老化。

一个没有正确老化的柱子可能会带来问题，诸如很差的柱效或者分离情况发生变化等等。

A．在反相条件下老化要老化这类柱子，首先要使用乙腈或者甲醇淋洗，然后你选用的洗脱液进行平衡。

在发货以前，每根柱子都已经测试过并进行了老化。

因此没有必要在第一次使用时用水冲洗）。

如果流动相中使用了添加物（例如缓冲液或离子对试剂），建议使用正确比例的但不含此添加物的流动相进行缓冲冲洗。

缓冲冲洗应当首先以低流速进行，最后再使用正常流速。

B．在正相条件下老化柱效可能会受水与固定相的键合的严重影响。

柱子的干燥（激活）或润湿（失活）可能是需要的。

使用的溶剂可能是水饱和的或者是无水的。

干燥柱子可以使用无水的二氯甲烷。

最全的色谱柱使用手册！色谱又称色层法或层析法，是一种物理化学分析方法，它利用不同溶质(样品)与固定相和流淌相之间的作用力(安排、吸附、离子交换等)的差别，当两相做相对移动时，各溶质在两相间进行多次平衡，使各溶质达到相互分别。

01柱色谱为向玻璃管中填入固定相，以流淌相溶剂浸润后在上方倒入待分别的溶液，再滴加流淌相，由于待分别物质对固定相的吸附力不同，吸附力大的固着不动或移动缓慢，吸附力小的被流淌相溶剂洗下来随流淌相向下流淌，从而实现分别。

02纸色谱以滤纸条为固定相，在纸条上点上待分别的混合溶液的样点，将纸条下端浸入流淌相溶剂中悬挂，溶剂由于毛细作用沿滤纸条上升，样点中的溶质从而被分别。

03薄层色谱是在玻璃板上涂以固定相涂层，然后点样，下端浸入溶剂，同样自下而上分别。

常用于探究柱色谱试验条件，溶剂和固定相的选择等。

常用固定相有石膏、氧化铝、蔗糖、淀粉等，常用流淌相为水、苯等各种有机溶剂。

影响色谱柱使用寿命的主要因素流淌相因素1.流淌相pH不同基质的填料具有不同的pH适用范围。

常温下无定形硅胶在纯水中的溶解度约为100mgL-1，且在pH1～9的范围内溶解的硅胶量几乎是常量，考虑到溶解速度的影响,对于硅胶基质的填料,其所能承受的流淌相pH范围约为1～8。

键合相硅胶填料则由于键合层的屏蔽作用,使填料对流淌相的适应范围大大增加，如现在广泛使用的反相色谱填料C18(十八烷基硅烷键合硅胶)，其pH适用范围可达2～10。

当流淌相pH值超出酸性范围时，键合相易发生水解而流失；当流淌相pH超出碱性范围时，会加速硅胶的溶解而释放出絮状物堵塞柱子，这两种反应均是不行逆反应，特殊是在温度较高（40℃）的环境下，会使柱效快速降低而报废。

2.流淌相变质当前使用最为广泛的是硅基键合相填料，当以水溶液作为流淌相或流淌相中含有肯定浓度的磷酸盐缓冲液时，水溶液中或缓冲盐溶液中会滋生出一些细菌或霉菌，从而堵塞固定相颗粒间的空隙。

特殊是对于多元自动比例混合的高效液相色谱仪来说,水相或缓冲盐相单独存贮，因存放时间较长而简单发生此类问题。

目的：规液相色谱柱的使用与管理；液相色谱柱标准化老化与再生；剖析液相色谱柱常见问题与解决办法。

延长色谱柱使用寿命，降低色谱柱使用成本。

提高分析人员液相色谱柱使用与维护水平。

围：适用于使用高效液相色谱仪的仪器分析操作人员及相关管理人员。

责任：设备员、液相操作人员、质控主管、质量管理部经理、质量受权人。

容：1.定义1.1 液相色谱柱：指用于液相色谱分离的柱形固定相，由柱管、压帽/卡套、筛板（滤片）、填料、接头等组合而成，可用于液相色谱分析与制备。

1.2 色谱柱再生：指色谱柱在非正常情况下，针对异常现象及原因采取的一系列修复补救措施，以提高色谱柱柱效和延长其使用寿命的处理过程。

1.3 运载溶剂：指色谱柱生产厂商在柱出厂测试合格后饱和于色谱柱的合适溶剂，以利于运输保存，多与保存溶剂相同。

1.4 保存条件：指色谱柱生产厂商根据不同柱类型及其色谱柱填料的制备、键合、装填、高压定型、净化干燥等工艺条件的不同要求而特别制定的色谱柱保存前净化饱和的处理程序与储存条件，包括净化程序、净化溶剂和保存溶剂、保存条件。

1.5 保存溶剂：用于保存色谱柱并指定了溶剂组成与比例的溶液。

1.6 反相色谱柱：以键合非极性基团的载体为填充剂填充而成的色谱柱。

常见的载体有硅胶、聚合物复合硅胶和聚合物等。

常用的填充剂有十八烷基硅烷键合硅胶、辛基硅烷键合硅胶和苯基键合硅胶等。

1.7正相色谱柱：用硅胶填充剂，或键合极性基团的硅胶填充而成的色谱柱，常见的填充剂有硅胶、氨基键合硅胶和氰基键合硅胶等。

1.8氨基柱（-NH2）：可以同时用于正相条件和反相条件，但多用于正相色谱条件。

使用时需注意，正相反相交替使用时必需用异丙醇过度，保证柱保存溶剂与流动相互溶。

[氨基柱出厂保存溶剂多用正相溶剂，例如：正己烷-乙腈（99：1）]。

2.液相色谱柱的使用及保养2.1普通C8及C8反相色谱柱的老化处理与使用保养程序新购色谱柱出厂前均采用适合的运载溶剂饱和，密封，由于运输过程周期较长，柱床容易干涸，所以新柱使用前需重新饱和与老化。

氨基柱保存方法
氨基柱是一种用于色谱分离的柱子，通常用于分离和纯化蛋白
质和肽段。

为了保持其性能和延长使用寿命，正确的保存方法至关
重要。

首先，对于氨基柱的保存，应该避免暴露在极端温度下，最好
存放在常温下，远离阳光直射和高温环境。

此外，氨基柱应该放置
在干燥的环境中，避免受潮或受到水分影响，因为水分可能会影响
柱子的性能。

其次，当氨基柱不在使用时，需要用适当的缓冲液或溶剂进行
储存。

通常情况下，可以使用一些常见的缓冲液比如PBS（磷酸盐
缓冲液）或者甲醇等。

在存放之前，应该用缓冲液进行充分的洗脱，然后用同样的缓冲液进行封存。

这可以防止柱子中的样品残留物变干，影响下一次的使用。

另外，为了保护氨基柱，建议在柱子两端安装保护柱（guard column），这样可以延长氨基柱的使用寿命。

同时，定期对氨基柱
进行保养和清洗也是非常重要的。

在使用完毕后，用适当的缓冲液
进行冲洗，并用推荐的储存溶剂进行封存。

总的来说，正确的保存方法对于延长氨基柱的使用寿命和保持其分离性能非常重要。

避免极端温度、湿度和阳光直射，使用适当的缓冲液进行储存，并定期进行保养和清洗，这些都是保护氨基柱的关键步骤。

希望这些信息能够帮助你更好地保存和保护氨基柱。

默克色谱柱的使用方法默克色谱柱没有特别说明，它是评估报告中显示的流淌相，使用前，请务必留意液相色谱柱的存储溶液是否与要分析的样品的流淌相混溶。

在反相色谱中，假如使用高浓度盐或缓冲液作为洗脱液，则应使用约10％的低浓度有机相洗脱液进行过渡，否则缓冲液中的盐将处于高浓度有机相。

简单沉淀和堵塞色谱柱。

假如要选择合适的列，则需要了解它的分类和内在属性，那么默克色谱柱的使用方法是什么呢1、获得默克色谱柱后，请先阅读说明以了解该柱的详细性能：温度耐受性，pH耐受性等。

以及色谱柱的洗涤和储存条件。

色谱柱校准测试确认色谱柱本身没有问题后，即可正常使用。

2、对样品进行充分的预处理，以确保样品的清洁度；使用爱护柱或在线过滤器，并依据实际状况更换爱护柱或过滤器。

3、避开突然的压力和温度变化以及任何机械振动。

4、溶剂的组成应渐渐转变，尤其是在反相色谱中在流淌相中使用缓冲盐时，应避开盐析。

5、选择合适的流淌相（尤其是PH），以避开损坏固定相，在低pH 下共价键断裂以及键和相水解；高pH下的硅胶溶解。

6、在使用默克色谱柱的过程中，假如压力上升或发生污染，请选择适当的冲洗或反冲洗条件。

适用于氨基色谱柱和氰基色谱柱常规清洁：乙腈：水=60:40，以冲洗色谱柱。

不建议在清洁过程中水相比率超过40％。

水相的过量使用将简单导致键和相的水解。

色谱柱再生：长时间使用色谱柱并且降低了色谱柱校准量后，可以再生色谱柱。

乙腈：水（水中0.05％氨水）=60:40的条件，并冲洗30倍柱体积。

默克色谱耗材将液相色谱、离子色谱和气相色谱的创新成果带入您的试验室工作。

从样品制备、色谱分别和质谱分析到试验室数据管理和分析的无缝集成，专注于开发先进的工作流程解决方案，以满意当今试验室对分析性能、生产力量和易用性日益增长的需求。

色谱柱可分为填充柱和开管柱，由多金属玻璃制成或制成。

有直管形、盘管形、U形管等外形。

填充柱通常用于液相色谱，色谱柱的分别效果取决于所选择的固定相，以及色谱柱的制备和操作条件。

色谱柱的使用说明液相色谱柱是昂贵的色谱耗材，是液相色谱仪的心脏，有着严格的生产标准和测试程序，为了充分发挥色谱柱的性能，最大程度延长色谱柱的使用寿命，请仔细阅读此部分。

色谱柱的身份确认：为了保证每一支色谱柱的质量，月旭公司出品的每一支色谱柱都有唯一的身份编码，根据此编码，我公司可以将质量问题确定到个人，为了保障你的利益，收到色谱柱时，请完成以下程序：1、仔细查看包装盒是否完好，与自己请购的色谱柱是否一致；2、盒内是否有质量检验报告及检验人员签名；3、色谱柱表面有无碰撞伤痕，柱两端保护色谱柱的塑料堵头是否完整；4、色谱柱柱体是否贴有月旭公司色谱柱的身份标牌，并仔细对照包装盒与色谱柱标签上的型号和编号是否一致。

结构和安装：结构：月旭公司出品的高效液相色谱柱柱管材质均为316L不锈钢，两端结构完全一致，其结构如图一：图一 Ultimate○系列液相色谱柱结构安装：为了保证色谱柱使用时有最高柱效，连接管路尽量使用适合的细径管路，色谱柱进出口的连接必须非常适配，连接管端口部分必须平整，不能有毛刺和切口斜面等现象，各种连接管路请使用专业工具切割修整；1、取出色谱柱，仔细查看柱身洗脱液流向箭头标识，用手旋下柱两端的塑料堵头，放好色谱柱，使洗脱液流向和柱身所示流向一致，如图二所示：图二色谱柱的正确连接2、用手将“连接管路的不锈钢或者其它材质的接头”旋入色谱柱两端，管路接头要和色谱柱接口连接紧密，确保零死体积连接，在色谱仪正常运行时没有漏液。

色谱柱的正确使用：色谱柱是昂贵的色谱耗材，正确的使用和维护对保证色谱柱的正常使用和延长寿命至关重要。

1、色谱柱使用前注意事项：1）、色谱柱内的存储液：月旭公司色谱柱的存储液，如没有特殊说明均为质检报告中所述流动相，氨基（NH2）、氰基（CN）、硅胶柱（SiO2）均为正相条件–正己烷/异丙醇体系，反相柱（C1、C4、C8、C18、苯基Phenyl）均为甲醇/水体系，检测前，请用相互溶的试剂将其替换；2）、新色谱柱的平衡：新反相色谱柱：用纯甲醇冲洗色谱柱30个柱体积，再更换成能与检测流动相互溶的流动相冲洗30个柱体积，最后用流动相稳定系统至基线平稳；新的正相色谱柱：用异丙醇0.5ml/min冲洗30个柱体积，再更换成检测流动相稳定系统至基线平稳；2、色谱柱的使用方向：月旭公司出品的高效液相色谱柱标签上的箭头方向为流动相流向，使用过程时也按此方向，避免双向混用，导致两端填料同时污染，不利于色谱柱的再生和维护；3、流动相和样品保持洁净：由于悬浮在样品或流动相中的细小颗粒会堵塞色谱柱两端的筛板，各种试剂尽量使用色谱纯级的，用量少的试剂纯度至少是分析纯，水最好是超纯水和全玻璃器皿双蒸水，使用前建议用0.45μm的滤膜过滤；样品溶液使用针筒过滤；样品中的杂质是造成色谱柱污染、柱效下降的最主要原因之一，复杂样品可选样品预处理柱（SPE柱）进行样品处理，如果不方便处理，最好使用相匹配的保护柱，样品溶剂与流动相要相匹配，不能出现样品不互溶，极性相差太大等想象，否则会造成色谱峰形变差，鬼峰等现象，使用流动相溶解样品能有效的避免上述情况发生；4、色谱柱允许使用的pH范围：每款色谱柱都有自己特定允许使用的pH范围，请仔细对照你的色谱柱的使用pH范围（表一），在pH范围以外使用，会使硅胶基质溶解或键合相水解，对色谱柱造成不可恢复的损伤，如果在临界pH处使用，分析结束后立即用适合于色谱柱保存并与当前使用的流动相互溶的淋洗液置换掉。

luna scx色谱柱再生流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。

文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢!并且，本店铺为大家提供各种各样类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，如想了解不同资料格式和写法，敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by theeditor.I hope that after you download them,they can help yousolve practical problems. The document can be customized andmodified after downloading,please adjust and use it according toactual needs, thank you!In addition, our shop provides you with various types ofpractical materials,such as educational essays, diaryappreciation,sentence excerpts,ancient poems,classic articles,topic composition,work summary,word parsing,copy excerpts,other materials and so on,want to know different data formats andwriting methods,please pay attention!Luna SCX色谱柱是一种强阳离子交换色谱柱，主要用于分析分离带正电荷的分子，例如蛋白质、肽段、核酸等。

正相柱类型：按基质分为硅胶柱、Al2O3柱和聚合物柱，按填料分为氨基、氰基、二醇基柱（Diol，不能沾水）。

氨基、氰基柱正反向可用，反相用时-NH2与-CN会水解，pH应在1.5-7.0。

CHIRALPAK AD-H的硅胶表面涂敷的是直链淀粉－三(3,5－二甲苯基氨基甲酸酯)；CHIRALPAK AS-H硅胶表面涂敷有直链淀粉-三[(S)-α-甲基苄基氨基甲酸酯；CHIRALCEL OD-H硅胶表面涂敷有纤维素-三[3,5-二甲苯基氨基甲酸酯]; CHIRALCEL OJ-H硅胶表面涂敷有纤维素-三[4-甲基苯甲酸酯]。

新柱活化：一般正相新柱出厂是用95%的正己烷：5%乙醇或纯异丙醇或正己烷保存，如AD-H、AS-H、OD-H、OJ-H的保存液是正己烷/异丙醇=90/10(v/v)。

可用异丙醇过渡（0.2mL·min-1），先流路后过柱，约0.5h后换上流动相，若有缓冲盐，则应先用不含盐的同比例的流动相过柱）；若新柱保存在正己烷-乙腈（99：1）中，则先用正己烷-乙腈（99：1）以0.5ml/min的流速冲10倍柱体积，再根据流动相选用极性相近的氯仿或二氯甲烷以相同的流速冲10倍柱体积，最后换成流动相。

测柱效（硅胶柱、氨基柱、氰基柱）：流动相：10％乙酸乙酯＋90％正己烷；1.0mL·min-1；标准溶液：乙苯（或甲苯）＋苯甲酸甲酯；254nm。

氨基柱反相使用：先用正己烷-乙腈（99：1）以0.5ml/min的流速冲10倍柱体积，再依次以相同的流速相同的用量用氯仿、异丙醇、甲醇、甲醇-水（50：50）冲柱子。

pH 11.0的氢氧化钠水溶液冲柱子（LUNA牌柱子，0.5ml/min，30倍柱体积），立即用水（0.5ml/min，30倍柱体积）冲洗，再换成流动相。

氨基柱正相使用：不宜分析含醛基、羰基的化合物和还原糖，流动相不得含有羰基化合物和过氧化物（质量不好的乙醚、四氢呋喃含有少量）。