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总糖和还原糖的测定－高效液相色谱法葡萄酒、果酒－总糖和还原糖的测定－高效液相色谱法(Ⅱ法)1 范围本方法适用于葡萄酒、果酒及其相关产品中总糖和还原糖含量的测定。
2 原理利用样品中各种组分在液固两相分配系数的不同，令样品通过液相色谱柱，而将样品中的果糖、葡萄糖、蔗糖与其他组分分离。
然后再利用示差折光检测器进行鉴定，用外标法定量。
3 试剂与溶液3.1 乙腈：色谱纯；3.2 超纯水；3.3 乙腈-水（75＋25）：将乙腈和水按（75＋25）的比例混合（或根据仪器情况调整该比例至分离效果最佳），用脱气装置充分脱气后，再用0.45μm的油系过滤膜过滤。
该溶液用做流动相；3.4 糖标准溶液（含总糖45.000g/L）：分别称取干燥的葡萄糖、果糖、蔗糖各1.500g（精确至0.001g），移入100mL容量瓶中，用超纯水定容至刻度。
该溶液含葡萄糖、果糖、蔗糖分别为15.000g/L。
4 仪器设备4.1 高效液相色谱仪：（配有记录系统或数据处理装置）；4.2 示差折光检测器；4.3 色谱柱：150 min×5.0mm（内径），Shim－pack CLCNH2 柱；4.4 微过滤膜：0.45μm，油系；4.5 脱气装置（或超声波装置）。
5 试样的制备将样品用超纯水稀释至含总糖量为45g/L 左右，并用0.45μm油系微过滤膜过滤。
6 分析步骤6.1 色谱条件a.柱温：室温；b.流动相：乙腈＋水；c.流速： 2mL/min；d.进样量：20μL。
6.2 测量：在同样的色谱条件下，将糖标准溶液和处理好的试样分别注入色谱仪。
开启记录系统后，扳动进样阀。
高效液相色谱法检测桔梗中的皂苷D张娜;程满环;杨芬;王婉莹【摘要】建立了桔梗中皂苷D的HPLC快速测定方法.以甲醇为提取剂,超声波处理法提取皂苷D,以乙腈—水(体积比25∶75)为流动相,以C18为色谱柱,保留时间定性,峰面积定量.在该实验条件下皂苷D质量浓度在4.62～85.20 μg/mL范围内呈线性相关,R2=0.999 6,回归方程y=2.871 7x+0.343 2,检出限为2.31 μg/mL,样品的加标回收率为92.86％～95.12％,RSD为1.2％.该法样品处理简单、快速,检测灵敏度高,重现性好,适合测定桔梗中皂苷D的质量分数.【期刊名称】《淮海工学院学报（自然科学版）》【年(卷),期】2015(024)003【总页数】4页(P47-50)【关键词】桔梗;皂苷D;高效液相色谱【作者】张娜;程满环;杨芬;王婉莹【作者单位】黄山学院化学化工学院,安徽黄山 245041;黄山学院分析测试中心,安徽黄山 245041;黄山学院化学化工学院,安徽黄山 245041;黄山学院化学化工学院,安徽黄山 245041【正文语种】中文【中图分类】R2840 引言桔梗为桔梗科桔梗属植物桔梗（Platycodon grandiflorum）的干燥根，是我国传统的中药材.现代药理学研究表明，桔梗具有镇咳、降低胆固醇［1］、抗菌及抗癌［2－3］等作用.其主要化学成分有皂苷类、多糖类等［4］.近几年来，从桔梗中又先后获得10余种新化合物［5－8］.桔梗的主要活性成分为桔梗皂苷，其中桔梗皂苷D一直被作为桔梗质量控制的指标性化合物［9］.皂苷的提取方法主要有回流提取法、水提醇沉法、超声波提取法等，通常依靠盐沉淀分离、吸附分离、色谱分离以及膜分离技术进行纯化［10］.其定量分析方法有比色法、UV－Vis法、HPLC法等.本实验利用超声波法提取桔梗皂苷，湿法过柱对桔梗皂苷提取液进行纯化，HPLC 法对其进行定量检测分析.其中超声波的空化作用可以加速植物有效成分的浸出，缩短提取时间，提高产品产率［11］.桔梗中皂苷类成分种类多、含量少，其提取物中还含有大量的多糖类化合物，故其提取液还需用内径2 cm的硅胶柱进行纯化.而HPLC法具有分离效率高、检测灵敏度高等优点，因而大多数皂苷类检测通常采用此法.作为大宗药材品种，桔梗形似人参，药食两用，素有“南方人参”的美誉.桔梗产地较多，不同产地药材的质量品质不同.本文对其中桔梗皂苷D的提取及定性、定量方法进行探讨，以期为桔梗的研究与质量控制提供参考.1 实验部分1.1 实验仪器与试剂Agilent 1260型高效液相色谱仪（安捷伦），AUY220电子分析天平（岛津），JK－2200DVE超声波清洗仪（合肥金尼克）.对照品溶液：将桔梗皂苷D标准品（分析纯，北京裕策达科贸有限责任公司）配制成质量浓度为0.426 0mg／mL的甲醇溶液.供试品溶液［12］：取桔梗药材粉末4.000 0g，精密称定，加入体积分数为50%的甲醇50mL，超声处理30min，放冷，过滤，滤液置水浴上蒸干.残渣加水20mL，微热使其溶解，加入水饱和的正丁醇，振摇并提取3次，20mL／次，合并正丁醇液，用氨试液50mL洗涤，弃去氨液，再用正丁醇饱和的水50 mL洗涤，弃去水溶液，将正丁醇溶液蒸干.残渣加甲醇3mL使溶解，加硅胶1.0g搅拌均匀，置水浴上蒸干，加于硅胶柱上［100～120目，20g，内径为2 cm，用三氯甲烷—甲醇（体积比9∶1）混合溶液湿法装柱］，以三氯甲烷—甲醇（体积比9∶1）混合溶液50mL洗脱，弃去洗脱液，再用三氯甲烷—甲醇—水（体积比60∶20∶3）混合溶液100mL洗脱，弃去洗脱液，继续用三氯甲烷—甲醇—水（体积比60∶29∶6）混合溶液100mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至5mL容量瓶中，加甲醇定容，摇匀，过0.45μm的微孔滤膜备用.桔梗饮片（亳州沪谯药业有限公司），使用前于烘箱70℃干燥处理后打碎，使之呈细粉状，备用.甲醇、正丁醇、三氯甲烷（均为色谱纯，国药集团化学试剂有限公司）；其余试剂为市售分析纯，实验用水为超纯水.1.2 色谱检测条件色谱柱为 Agilent Eclipse XDB－C18，5μm，4.6 mm×250mm；流动相为乙腈—水（体积比25∶75），流速1.0mL／min；柱温为室温；紫外检测器，检测波长210nm；进样量20μL.1.3 定性与定量分析分别取供试品溶液和对照品溶液进行液相分析，比较其在规定检测波长下色谱峰的保留时间，进行定性.标准曲线的绘制：将对照品溶液分别稀释5，10，25，100倍，标点质量浓度分别为85.20，42.60，17.04，4.26μg／mL.分别取上述稀释后的对照品溶液20μL 进样，测量保留时间和峰面积，用峰面积对皂苷D的质量浓度作图，绘制标准曲线.样品中皂苷D的质量分数测定：取20μL供试品溶液进样，根据保留时间定性，峰面积代入标准曲线定量.2 结果与讨论2.1 流动相的选择采用流动相乙腈与水的体积比分别为20∶80，25∶75进行试验［12］，考察流动相比例对样品分离效果的影响.试验结果表明，当乙腈与水的体积比为20∶80时，流动相对样品分离效果虽好，但干扰峰的峰面积较大；当乙腈与水的体积比为25∶75时，不仅分离效果好，而且干扰峰的面积也有所减小.故选择乙腈与水的体积比为25∶75作为流动相.2.2 定性分析分别取供试品溶液和对照品溶液进行液相分析，对照品溶液与供试品溶液的色谱图如图1和图2所示.由图1可以看出，桔梗皂苷D对照品溶液在14.23min时出现一色谱峰，即桔梗皂苷D的保留时间为14.23min.由图2可以看出，供试品溶液在14.24min时出现一色谱峰，表明供试品溶液中含有桔梗皂苷D.图1 对照品溶液色谱图Fig.1 HPLC chromatogram of standard solution图2 供试品溶液色谱图Fig.2 HPLC chromatogram of sample solution2.3 定量分析2.3.1 标准曲线的绘制将不同质量浓度的皂苷D对照品溶液进样，测其峰面积，以峰面积对质量浓度作图，绘制标准曲线，结果如图3所示.求得回归方程为y＝2.871 7x＋0.343 2，线性相关系数R2为0.999 6.图3 皂苷D的标准曲线图Fig.3 Standard curve for determination of platycodin D结果表明，皂苷D质量浓度在4.26～85.20 μg／mL范围具有良好的线性关系.2.3.2 样品的测定在试验的最佳条件下测定供试品溶液的峰面积，得样品峰面积分别为215.2，215.8，213.2，均值为214.7.计算得样品所对应的供试品溶液中皂苷D质量浓度为74.64μg／mL.2.3.3 检测结果的换算根据桔梗取样质量及样品处理过程中定容的体积，计算出桔梗样品中皂苷D的质量分数.计算公式为式中：X为样品中皂苷D的质量分数（mg／kg），C为样品测定液中查标准曲线得到的相当于标准的质量浓度（μg／mL），V 为样品定容体积（mL），m 为桔梗的取样量（g）.经计算得桔梗中皂苷D的质量分数为93.3mg／kg.2.4 精密度试验精密吸取“1.1”项下对照品溶液各20μL，连续进样6次，测其峰面积，计算RSD.得试验的相对标准偏差为0.15%，说明本方法精密度较好.2.5 稳定性试验精密吸取“1.1”项下供试品溶液20μL，于2，4，6，8，12，24h后测定，记录峰面积，计算 RSD.得试验的相对标准偏差为0.935%，表明本方法稳定性较好. 2.6 重复性试验精密称取6份桔梗粉末各4.000 0g，按“1.1”项下制备供试品溶液并稀释10倍，按“1.2”项下进样，测定，记录峰面积，计算RSD.得试验的相对标准偏差为2.12%，表明本试验方法重复性较好.2.7 加标回收率试验将已测定的样品精密称取3份，每份4.000 0 g，按“1.1”项下制备原供试品溶液，各取0.50mL，各精密加入适量的对照品溶液0.50mL，制成加标后的供试品溶液，按“1.2”项下进样，测定，记录峰面积，结果如表1所示.表1 加标回收率试验结果（n＝3）Table 1 Results of recovery tests（n＝3）样品编号本底值／（μg／mL）加入值／（μg／mL）测得值／（μg／mL）回收率／%平均回收率／%RSD／%1 37.32 10.65 47.45 95.12 2 37.32 21.30 57.10 92.86 94.18 1.20 3 37.32 42.60 77.60 94.55由以上结果可以看出，回收率为92.86%～95.12%，RSD为1.20%，说明本方法测定皂苷D的质量分数具有较高的准确度.3 结论（1）桔梗中皂苷D在高效液相色谱法下分离效率高，检测灵敏度好；本实验测得桔梗中皂苷D的质量分数为93.3mg／kg.（2）通过对桔梗中皂苷D稳定性的探讨，可以看出桔梗皂苷D在24h内基本无变化，说明其稳定性良好.（3）准确度试验和精密度试验结果均良好，表明本文对皂苷D的测量结果准确、稳定、可靠、简捷.建立了一种测定桔梗中皂苷D的液相色谱方法，可作为实验室测定桔梗皂苷D的方法.【相关文献】［1］杨壮.桔梗总皂苷的提取和纯化工艺研究［D］.杭州：浙江大学，2007.［2］舒娈，高山林.桔梗研究进展［J］.中国野生植物资源，2012，20（2）：4－6.［3］ CHOI C Y，KIM J Y，KIM Y S，et al.Augmentation of macrophage functions by an aqueous extract isolated from Platycodon grandiflorum ［J］.Cancer Leters，2001，166（1）：17－25.［4］周秀娟.桔梗的质量研究［D］.合肥：安徽中医药大学，2013.［5］ FU Wenwei，SHIMIZU N，DOU Deqiang，et al.Five new triterpenoid saponins from the roots of Platycodon grandiflorum［J］.Chemical and Pharmaceutical Bulletin，2006，54（4）：557－560.［6］付文卫，候文彬，窦德强.桔梗中远志酸型皂苷的化学研究［J］.药学学报，2006，41（4）：358－360.［7］ FU Wenwei，DOU Deqiang，SHIMIZU N，et al.Studies on the chemical constituents from the roots of Platycodon grandiflorum［J］.Journal of Natural Medicines，2006，60（1）：68－72.［8］ HE Zhendan，QIAO Chunfeng，HAN Quanbin，et al.New triterpenoid saponins from the roots of Platycodon grandiflorum［J］.Tetrahedron，2005，61（8）：2211－2215.［9］李伟.桔梗皂苷类化学成分及药理活性研究［D］.长春：吉林农业大学，2007.［10］贺红军.茅莓总皂苷提取及纯化工艺研究［D］.重庆：重庆医科大学，2011.［11］纵伟，李翠翠，赵光远，等.桔梗皂苷超声提取工艺优化研究［J］.江苏农业科学，2012，40（6）：244－247.［12］李喜凤，刘素梅，李振国.RP－HPLC法测定桔梗中桔梗皂苷D的含量［J］.中华中医药学刊，2008，26（2）：283－284.。
甘露醇检测
甘露醇（Mannitol），又称为D-甘露醇、D-甘露糖醇，是山梨糖醇的同分异构体，两种醇类物质的二号碳原子上羟基朝向不同，广泛应用于医药、食品、工业等领域。
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DPHA 液相色谱测试方法一、引言DPHA（2,4-二羟基苯丙酮）是一种重要的有机化合物，广泛应用于染料、农药、医药等领域。
为了准确测定DPHA的含量，液相色谱法已成为一种常用的分析方法。
本测试方法旨在为研究人员提供一种可靠的DPHA液相色谱测试方法，以便更好地了解DPHA的性质和应用。
二、仪器与试剂1.仪器：高效液相色谱仪（HPLC）、紫外可见光检测器（UV-Vis）、自动进样器、色谱工作站。
2.试剂：DPHA标准品、甲醇（色谱纯）、乙腈（色谱纯）、超纯水。
三、实验步骤1.色谱柱：选用合适的反相色谱柱，如C18柱。
2.流动相：甲醇和乙腈按一定比例混合，使用前需经0.45μm滤膜过滤并超声脱气。
3.检测波长：设定紫外可见光检测器的检测波长为254nm。
4.进样量：设定自动进样器的进样量为10μL。
5.洗脱程序：以流动相作为溶剂，按照一定的洗脱程序进行洗脱。
开始时，流动相的流速为1mL/min，然后以梯度方式增加流速至2mL/min，并维持一段时间，最后再以梯度方式降低流速至1mL/min，并维持一段时间。
6.数据处理：通过色谱工作站对色谱图进行积分处理，计算DPHA的峰面积。
四、结果与讨论1.分离效果：通过调整流动相的比例和洗脱程序，可以获得较好的DPHA 分离效果。
在优化条件下，DPHA的保留时间应在合理范围内，且与其他杂质峰分离度良好。
2.线性关系：配制不同浓度的DPHA标准溶液，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线。
在一定浓度范围内，DPHA的峰面积与浓度应呈线性关系。
通过线性回归分析，可以确定线性方程和相关系数。
3.检测限和定量限：在信噪比至少为3:1和10:1的情况下，分别确定DPHA的检测限和定量限。
这些参数将有助于评估该方法的灵敏度。
4.精密度和准确度：进行重复性和加标回收实验，以评估该方法的精密度和准确度。
通过计算相对标准偏差（RSD）和回收率来评估方法的可靠性。
5.实际应用：将该方法应用于实际样品中DPHA的测定。
D葡聚糖检验简介什么是D葡聚糖？D葡聚糖是一种多糖，它是由葡萄糖单元组成的线性多糖。
D葡聚糖广泛存在于自然界中，是植物、水果、蘑菇、真菌以及各种生物体的细胞壁和支持组织中的主要成分之一。
D葡聚糖具有很多生物活性，如增强免疫力、抗氧化、降血压等。
D葡聚糖检验D葡聚糖检验是通过检测样品中D葡聚糖的含量来确定其品质的一种检验方法。
D葡聚糖检验可以应用于许多领域，包括食品、医药、环境、生物工程等。
在食品行业中，D葡聚糖检验通常被用来检测食品添加剂或天然产物的D葡聚糖含量，帮助保证食品的品质和安全。
常见的D葡聚糖检验方法包括高效液相色谱法、气质联用法和质谱法等。
其中高效液相色谱法是最常用的一种方法，它可以快速准确地测定样品中的D葡聚糖含量。
高效液相色谱法检验D葡聚糖高效液相色谱法（HPLC）是一种常用的分离和分析技术，它通过分离样品中的化合物并通过检测器检测来确定它们的含量。
在D葡聚糖检验中，高效液相色谱法可以通过以下步骤来进行：1.样品制备：将需要检测的样品进行处理，使其适合于HPLC分析。
2.色谱条件设置：选择合适的色谱柱和操作条件，比如流速、温度、检测器等。
3.样品注入：将处理好的样品注入进色谱柱中进行分离。
4.检测结果分析：通过检测器获取分离后的D葡聚糖含量，并进行分析和计算。
高效液相色谱法检验D葡聚糖的优点是分析精度高、分离效果好、分析速度快等。
因此，它被广泛地应用于许多领域中的D葡聚糖检验。
D葡聚糖检验的意义D葡聚糖检验可以帮助人们确定一些食品、化妆品等物品中的D葡聚糖含量，以保证其品质和质量。
此外，D葡聚糖检验还可以用于研究生物体内D葡聚糖的含量变化，帮助了解其分布和功能，从而为后续的治疗和研究提供支持。
通过对D葡聚糖检验方法的了解和应用，我们可以更好地了解和认识D葡聚糖这种多糖，从而更好地应用于实际生产和生活中去。
高效液相色谱法测定魔芋精粉中葡甘聚糖的含量陈彦杰;褚银玲;韩超轶;张洁【期刊名称】《中国当代医药》【年(卷),期】2016(23)36【摘要】目的建立HPLC方法测定魔芋精粉中葡甘聚糖(konjac glucomannan,KGM)含量,并对高效液相色谱(HPLC)法与比色法测定结果进行比较.方法魔芋葡甘聚糖用2.5 mol/L的H2SO4溶液110℃水解2h,生成D-甘露糖、D-葡萄糖,经与1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)反应得到衍生物.HPLC法中采用的色谱柱为TOSOH TSK-GEL ODS,流动相A(乙腈)∶流动相B(0.45 g磷酸二氢钾、0.5 ml TEA、100 ml乙腈、900 ml纯水混合,pH=7.5)进行梯度洗脱,流速为1.0 ml/min,检测波长250 nm,柱温30℃;比色法参照GB/I 18104-2000进行测试.结果 HPLC法测定中D-甘露糖和D-葡萄糖分别在21.2～159.3 μg(r=0.9998)和21.5～154.2 μg (r=0.9999)范围内线性关系良好;KGM平均回收率为98.9％,RSD 为2.2％.与比色法比含量少5％～7％.结论 HPLC法与比色法相比测定KGM含量更准确,可更好地用于魔芋精粉质量控制和分级.【总页数】4页(P125-128)【作者】陈彦杰;褚银玲;韩超轶;张洁【作者单位】新奥集团新绎健康科技有限公司,河北廊坊065001;新奥集团新绎健康科技有限公司,河北廊坊065001;新奥集团新绎健康科技有限公司,河北廊坊065001;新奥集团新绎健康科技有限公司,河北廊坊065001【正文语种】中文【中图分类】R927.2【相关文献】1.高效液相色谱法测定丙泊酚中/长链脂肪乳注射液中甘油的含量 [J], 周朝东;苏喆;马冰;白海娇;黄哲甦2.高效液相色谱-荧光法或超高效液相色谱-四极杆/轨道阱质谱法测定抑郁症小鼠海马中5-羟色胺和相关的2种物质含量的比较 [J], 王丽; 朱军; 环飞; 程洁; 吴倩3.高效液相色谱法测定魔芋精粉中葡甘露聚糖的含量及其单糖组成 [J], 袁忠海;吴道澄;赵燕;吴红;李晓晔4.钩藤药材中异钩藤碱含量的超高效液相色谱和高效液相色谱法测定 [J], 李思蒙;侴桂新5.高效液相色谱法测定大豆中的维生素E含量及其与粗脂肪含量的线性回归分析[J], 王丽;宋志峰;纪锋;金卫东;黄璜;于志晶;唐晓博因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
