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酶法测定发酵液中甘油含量方法的研究
周泽林;王柱;王宪斌
【期刊名称】《食品与发酵科技》
【年(卷),期】2014(050)004
【摘要】微生物发酵转化生成甘油的过程中,发酵液成分复杂,传统检测方法受发酵液中杂质干扰大;酶法检测发酵液中甘油含量准确度高、精密度好、专一性强、简单快捷,可同时检测大批量样品并且分析仪器简单,价廉,特别适用于甘油菌种选育工作.本文建立的分析方法,甘油浓度显色线性范围0.1-0.9g/L,甘油含量检测平均相对偏差2.02％,RSD为3.11％小于5％,检测方法的线性范围、准确度、精密度满足甘油菌种选育工作的要求,甘油含量检测结果不受发酵液中杂质的影响,是一种理想的测定发酵液中甘油含量的方法.
【总页数】3页(P71-73)
【作者】周泽林;王柱;王宪斌
【作者单位】四川省食品发酵工业研究设计院,四川成都611130;四川省食品发酵工业研究设计院,四川成都611130;四川省微生物资源平台菌种保藏中心,四川成都611130;四川省食品发酵工业研究设计院,四川成都611130;四川省微生物资源平台菌种保藏中心,四川成都611130
【正文语种】中文
【中图分类】TS207.3;TQ920.6
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肌氨酸氧化酶法检测血清中肌酐含量的方法学评价关键词：肌酐；酶学测定；苦味酸法；血清［摘要］目的：评价肌氨酸氧化酶法(简称酶法)检测血清中肌酐含量的准确度、特异性和精确度。
方法：在设制好参数的前提下，取样本，于日立7170全自动生化分析仪上，进行重复、回收、干扰等一系列试验，同时用苦味酸法(Jaffe 法)进行相同实验，对比其结果。
结果：酶法测定肌酐的批内变异系数(CV)为0.67%，批间CV为0.83%，线性范围0 μmol/L～8 840 μmol/L，胆红素(≥165.5 μmol/L)和溶血(Hb<1 g/L )干扰接近零，回收率为101.7%。
准确度、精确度和特异性均较Jaffe法高。
结论:酶法抗黄疸干扰力强，操作简单、准确、重复性好，可作为常规测定方法。
［关键词］肌酐；酶学测定；苦味酸法；血清To Evaluate the Enzymatic Method for Assaying Creatinine in Serum Abstract：Objective To evaluate the precise、accurate and specific of enzymatic method for assaying creatinine in serum. Methods Both Enzymatic method and Jaffe’s method were used in HITACHI7170A automatic analyzr. After the pare meter of it was build them compared those results. Results The method affords a simple. Rapid and sensitive assay with good precision， extended linearity much better in clinical needs. Conclusion The method is easily automated and is suitable for routine work in clinical laboratories.Key words:Creatinine;Enzymatic assay;Jaffe’s assay;Serum肌酐是肌酸代谢的最终产物，它是由磷酸肌酸通过脱磷酸基并闭合成环而形成的内脱水物。
肌酐酶法测定的两点法分析摘要：目的：肌酐酶酶测定的两点分析。
方法：通过两种试剂进行比较。
反应温度为37℃，波长为500～520 纳米(主)/650 纳米(次)；标准为15毫升；样品也为15 毫升；试剂Ⅰ：200 毫升，孵育时间为300秒；试剂Ⅱ：50 毫升，第一点读数时间为120秒，第二点读数时间为300秒。
结果：酶法具有去除肌酸的干扰能力，有线性范围宽，精度高等特点。
结论：两点法对肌酐酶法测点有良好的作用。
关键字：肌酐酶法两点法对于酶法测定肌酐，目前已报告的有四种方式，其中三种均为紫外测定，一种为比色测定。
然而，在相比之下比色测定在除去肌酸的干扰能力、线性范围、精度等具有更高的优越性；市场上出售的商品试剂盒大多采用此法。
但fossati 原法的反应时间比较长，且要做一血清空白以除去血清中肌酸的干扰，这样不适合进行自动分析。
自动分析的一般反应时间为十分钟，为了除去肌酸的干扰必须采用两步法，反应时间要求在五分钟内达到。
根据实验。
必须将几种工具酶的用量增加到fossati原法的五到十倍。
然而，在实验过程中发现几种工具酶的水解速率均比较缓慢，反应的线性时间比较长；所以，将其改成两点法或是速率法测定，会取得很好的实验结果。
这也体现出两点法的优势。
1原理第一步反应：排除肌酸干扰第二步反应：测定肌酐2材料与方法2.1仪器：自动分析仪HITACHI7170，Beckman Synchron △CX5和Ciba Coring Express Plus。
分光光度计Beckman DU-640。
2.2原料试剂：原料试剂采用的工具酶比较多，如：肌酐酰氨基水解酶，肌酸脒基水解酶，肌氨酸氧化酶，棘根过氧化物酶，抗坏血酸氧化酶，这些工具酶均为Boehringer Mannheim公司产品。
3，5-二氯-2-羟-苯磺酸(DHBA)，4-氨基安替比林(4-AAP)和肌酐，均选用适量的剂量。
2.3应用试剂：试剂Ⅰ：每升磷酸盐缓冲液(150 Mmol/L,pH为7.5)中含CRTase 20 kU,SO 6 kU，POD 1 kU,ASO 1 kU,DHBA 3 Mmol,K4Fe(CN)6 20 Mmol,和4-AAP 4 Mmol。
尿肌酐测定方法
尿肌酐是一种常用的尿液指标，用于评估肾脏功能。
以下是常用的尿肌酐测定方法：
1. Jaffe法：这是目前最常用的尿肌酐测定方法。
该方法利用
酚与尿液中的肌酐在碱性条件下发生黄色酚酞反应，测量反应产生的黄色产物的吸光度。
由于该方法受到其他物质（如尿酸、葡萄糖等）的干扰，因此必须进行相应的校正。
2. 酶法：这种方法利用肌酸酐氨酸酶（creatinine amidohydrolase）催化反应，将尿液中的肌酐转化为肌酸和氨，通过测量反应中产生的氨量来确定肌酐浓度。
该方法对于尿液中的其他物质干扰较少，但在实验室条件下操作较为复杂。
3. 离子选择电极法：这是一种较为现代化的测定方法，利用离子选择电极对尿中的肌酐进行检测。
该方法操作简便，结果准确可靠。
以上是几种常用的尿肌酐测定方法，每种方法都有其特点和适用范围。
选择合适的方法需根据实验室的设备和研究需求来确定。
在进行尿肌酐测定前，建议咨询专业医生或实验室技术人员的意见。
肌酐生化方法学
肌酐（Creatinine）是一种由肌肉代谢产生的废物，通常通过肾脏排出体外。
肌酐生化方法学是用于测定血清或血浆中肌酐浓度的实验方法。
1. 碱性苦味酸法：这是最常用的肌酐测定方法之一。
在碱性条件下，肌酐与苦味酸反应生成红色化合物，通过比色法或分光光度法测定其吸光度，进而计算肌酐浓度。
2. 酶法：利用肌酐酶将肌酐转化为氨和肌酸，然后通过测定氨或肌酸的生成量来计算肌酐浓度。
酶法具有较好的特异性和准确性。
3. 干化学法：使用纸片或试纸等干式试剂，通过颜色变化或比色法来测定肌酐浓度。
这种方法通常用于快速检测，但准确性可能稍低。
4. 高效液相色谱法（HPLC）：这是一种分离和分析化合物的技术，可以用于肌酐的定量测定。
HPLC 法具有高分辨率和准确性，但设备和操作相对复杂。
5. 质谱法：利用质谱仪对肌酐进行分析，通过检测肌酐的特定离子或碎片来确定其浓度。
质谱法具有高灵敏度和准确性，但设备昂贵。
在选择肌酐生化方法时，需要考虑实验要求、设备条件和准确性等因素。
不同方法可能在灵敏度、特异性、操作简便性和成本等方面有所差异，因此应根据具体情况进行选择。
无论使用哪种方法，都应遵循标准操作程序，并进行质量控制以确保结果的准确性和可靠性。
肌酐测定试剂盒（肌氨酸氧化酶法）标准化操作规程1目的规范实验室操作，保证检验工作顺利有效进行特制定此规程。
2授权操作人经培训且考核通过的临床检验人员。
3适用范围本试剂适用于体外定量检测人血清、血浆或尿液中肌酐的浓度。
4检验方法本试剂采用酶法测定肌酐的浓度。
5检验原理样本中的肌酐在试剂中肌酐酰胺水解酶的催化下水解成肌酸，肌酸在试剂中肌酸脒基水解酶的催化作用下，被水解成肌氨酸和尿素，肌氨酸在肌氨酸氧化酶的作用下，生成的肌氨酸与水和氧反应，产生甘氨酸、甲醛和过氧化氢，生成的过氧化氢在过氧化物酶的催化下与苯胺类色原物质和4-氨基安替比林作用产生水和醍亚胺色素，醍亚胺色素的生成量与样本中总肌酐的含量成正比，通过测定特定波长处反应最终生成的色素量，可以计算出样品中总肌酐的浓度。
肌酐H O肌酐酰胺水解酶肌酸2"肌酸H O肌酸脒基水解酶，肌氨酸+尿素2肌氨酸+H O+O 肌氨酸氧化酶甘氨酸甲醛H O22'22H O +4-氨基安替比林+苯胺类色原物质过氧化物酶醌亚胺色素+H O22*26检验标本要求6.1样本为血清、血浆或尿液。
6.2血浆样本采用EDTA抗凝，应不溶血。
样本采集后应尽快分析。
6.3肌酐样本在2°C〜8°C可稳定7天。
7试剂及配套品7. 1试剂来源长春迪瑞医疗科技股份有限公司肌酐试剂盒（酶法）7.2试剂组成7.3试剂的稳定性与贮存：7.3.1试剂在2C8C条件下，干燥、避光、密封贮存，有效期为12个月。
7.3.2试剂开封后在2C8C条件下可稳定30天。
7.4试剂的变质指示：若试剂混浊，不能再使用。
8实验仪器及性能指标8.1实验仪器迪瑞CS系列全自动生化分析仪8.2试剂性能指标8.2.1空白吸光度：A<0.1o8.2.2分析灵敏度：测试1pnol/L被测物时，吸光度变化△ A>0.01。
8.2.3线性范围：30pnol/L〜25 pnol/L区间内，线性相关系数I r > 0.99;[30, 70] pnol/L区间内，线性偏差应不超过±7 mol/L; (70, 25] pnol/L区间内，线性偏差不超过±10%。
肌酐测定-酶促动力学法
肌酐测定是一种常用的临床检验方法，用于评估肾功能。
酶促动力学法是其中一种测定肌酐浓度的方法。
酶促动力学法是基于肌酸酐酶（creatinase）和肌酸酐酶动力学反应原理的测定方法。
该反应基本原理如下：
1. 首先，将待测样品中的肌酐与肌酸酐酶进行反应，生成肌酸酐。
2. 接着，通过添加一定浓度的辅酶（如NADH或NADPH），使产生的肌酸酐反应生成对应的还原酶，同时伴随着NADH （或NADPH）的氧化还原反应。
3. 最后，通过连续测定产生的NADH（或NADPH）的吸光度
变化，可以计算出样品中肌酐的浓度。
酶促动力学法具有检测速度快、准确度高、灵敏度较好等优点，广泛应用于临床肾功能检测中。
尤其适用于大量样本的高通量检测，如自动化生化分析仪中常采用的方法。
生物制药（题库版）1、填空题β-胡萝卜素是（）的前体物质，维生素C又称抗坏血酸，具有维持骨骼组织的正常机能的作用。
正确答案：维生素A2、单选氨基酸药物中产量最大的，占80%的氨基酸（）。
A.谷氨酸B.（江南博哥）赖氨酸C.蛋氨酸D.天冬氨酸正确答案：A3、单选（）是人体的主要免疫球蛋白，具有较强的抗感染、中和毒素和免疫调理作用。
A.IgGB.IgAC.IgMD.IgD正确答案：A4、单选各种免疫细胞都是从（）中的多能干细胞分化而来的。
A.骨髓B.脾脏C.B细胞D.T细胞正确答案：A5、判断题细菌只具有反应原性而没有免疫原性。
正确答案：错6、问答题糖蜜原料澄清常用的方法有哪三种？正确答案：（1）加酸通用处理法（0.2%-0.3%浓硫酸通入压缩空气1小时，静止澄清数小时）；（2）加热加酸沉淀法（在较高的温度和酸度下，对糖蜜中有害微生物的灭菌作用和胶体物质，灰分杂质的澄清沉降作用均较强）；（3）絮凝剂澄清处理法（添加聚酰胺（PAM）絮凝剂）。
7、单选下列药物哪些是基因药物（）。
A.基因工程药物B.遗传物质DNA为物质基础制造的药物C.天然生物药物D.半合成生物药物正确答案：B8、单选黄酮类化合物主要分布于（）中。
A.蕨类植物B．被子植物C．苔藓植物D．种子植物正确答案：B9、问答题风机分为哪几种？正确答案：用来压缩与输送气体，根据气体压缩后可达到的压力不同，可分为：压缩机（0.3MPA）、鼓风机（0.1－0.3MPA）、通风机（1-1 5KPA）。
10、单选从茶叶中提取咖啡因时，可将茶叶放于大小适宜的烧杯中，上面用圆底烧瓶盛水冷却，然后直接加热到一定温度时，咖啡因可凝结于烧瓶底部，此种方法是（）。
A.水蒸气蒸馏B.渗漉C.升华D. 结晶正确答案：C11、判断题执行体液免疫功能的是T细胞。
正确答案：错12、单选根据分子大小、形状不同的分子进行分离方法，称（）。
A.排阻层析B.吸附层析C.等电点分离D.离子交换层析正确答案：A13、单选盐析常数Ks是生物大分子的特征常数，它与下列哪种因素关系密切。
