论蔗糖合成甜味剂——三氯蔗糖的测定方法

食品中三氯蔗糖的测定HPLC法序列号：DM-P-125 1、适用范围本方案适用于液态奶、酸奶、酱油、醋、饼干、奶酪、奶茶、可乐和果冻中三氯蔗糖的检测，方法定量限7.5 mg/kg。

（GB 22255-2014 食品安全国家标准食品中三氯蔗糖（蔗糖素）的测定中提取为75%甲醇水溶液，减压浓缩过程中暴沸严重，不易操作。

）2、标准品配制标准储备溶液：准确称取标准品，用水配制成10 mg/mL的储备液，吸取一定体积10 mg/mL储备液用水配成浓度为1000 ug/mL的储备液。

3、提取3.1 含蛋白脂肪类液体：液态奶、酸奶、酱油和醋10 mL样品，加入8 mL 水和2 mL 200 g/L乙酸铅溶液，振荡2 min，超声提取5 min，6000 rpm离心5 min，取10 mL上清液，待净化。

3.2 含蛋白脂肪类固体：饼干、奶酪和奶茶5 g样品，加入8 mL 水和2 mL 200 g/L乙酸铅溶液，振荡2 min，超声提取5 min，6000 rpm离心5 min，取10 mL上清液，待净化。

3.3 饮料：可乐（量取前超声排气泡）10 mL样品，加入10 mL 水，混匀，取10 mL，待净化。

3.4 果冻5 g样品，加入5 mL 水，热水超声溶解，混匀，趁热净化。

4、净化ProElut 200 mg/6 mL PLS（Cat#68012）(1)活化：依次向柱中加入5 mL甲醇、5 mL水，弃去流出液；(2)上样：将待净化液加入柱中，弃去流出液（控制流速不超过每秒1滴）；(3)淋洗：(4)洗脱：向柱中加入5 mL20%甲醇水溶液，弃去流出液；向柱中加入3 mL甲醇，收集流出液。

(5)定容：将洗脱液在50℃下减压蒸干，用流动相定容至1 mL，供HPLC分析。

5、色谱条件色谱柱：Diamonsil C18(2) 150×4.6 mm，5 μm（Cat.#：99601），流速：1.0 mL/min，进样量：20 μL，柱温：35 ℃，检测器：SEDEX LT-ELSD，温度：40℃，压力：3.5 bar，Gain：6流动相：A：水；B：乙腈梯度设置食品中三氯蔗糖的HPLC检测的添加回收结果0102030Time (min)0.00.20.40.6V o l t s 1三氯蔗糖标准(100 ug/mL)液相色谱图0102030Time (min)0.0200.0220.0240.0260.0280.0300.032V o l t s 1三氯蔗糖标准(50 ug/mL)液相色谱图0102030Time (min)0.0200.0220.0240.0260.0280.0300.032V o l t s 1三氯蔗糖标准(37.5 ug/mL)液相色谱图0102030Time (min)0.0200.0220.0240.0260.0280.0300.032V o l t s 11 三氯蔗糖1 三氯蔗糖1 三氯蔗糖1 三氯蔗糖102030Time (min)0.0200.0220.0240.0260.0280.0300.032V o l t s 1添加水平为(20 mg/kg)早餐奶中三氯蔗糖检测的液相色谱图0102030Time (min)0.020.040.060.080.0100.0120.014V o l t s 1早餐奶中三氯蔗糖检测(空白样品)的液相色谱图0102030Time (min)0.020.040.060.080.0100.0120.014V o l t s添加水平为(20 mg/kg)巧克力奶中三氯蔗糖检测的液相色谱图0102030Time (min)0.020.040.060.080.0100.0120.014V o l t s 11 三氯蔗糖1 三氯蔗糖1 三氯蔗糖1 三氯蔗糖0102030Time (min)0.020.040.060.080.0100.0120.014V o l t s添加水平为(20 mg/kg)咖啡奶中三氯蔗糖检测的液相色谱图0102030Time (min)0.020.040.060.080.0100.0120.014V o l t s 1咖啡奶中三氯蔗糖检测(空白样品)的液相色谱图0102030Time (min)0.020.040.060.080.0100.0120.014V o l t s添加水平为(200 mg/kg)养乐多中三氯蔗糖检测的液相色谱图102030Time (min)0.00.20.40.6V o l t s 11 三氯蔗糖1 三氯蔗糖1 三氯蔗糖1 三氯蔗糖102030Time (min)0.00.20.40.6V o l t s 1添加水平为(200 mg/kg)酱油中三氯蔗糖检测的液相色谱图102030Time (min)0.00.20.40.6V o l t s 1酱油中三氯蔗糖检测(空白样品)的液相色谱图102030Time (min)0.00.20.40.6V o l t s 1添加水平为(20 mg/kg)醋中三氯蔗糖检测的液相色谱图0102030Time (min)0.000.020.04V o l t s 11 三氯蔗糖1 三氯蔗糖1 三氯蔗糖1 三氯蔗糖102030Time (min)0.000.020.04V o l t s添加水平为(20 mg/kg)饼干中三氯蔗糖检测的液相色谱图102030Time (min)0.022V o l t s 1饼干中三氯蔗糖检测(空白样品)的液相色谱图102030Time (min)0.022V o l t s添加水平为(20 mg/kg)奶酪中三氯蔗糖检测的液相色谱图0102030Time (min)0.022V o l t s 11 三氯蔗糖1 三氯蔗糖1 三氯蔗糖1 三氯蔗糖102030Time (min)0.022V o l t s添加水平为(20 mg/kg)奶茶中三氯蔗糖检测的液相色谱图0102030Time (min)0.0220.0240.0260.0280.0300.032V o l t s 1奶茶中三氯蔗糖检测(空白样品)的液相色谱图0102030Time (min)0.0220.0240.0260.0280.0300.032V o l t s添加水平为(20 mg/kg)酸奶中三氯蔗糖检测的液相色谱图102030Time (min)0.0220.0240.0260.0280.0300.032V o l t s 11 三氯蔗糖1 三氯蔗糖1 三氯蔗糖0102030Time (min)0.0220.0240.0260.0280.0300.032V o l t s添加水平为(20 mg/kg)可乐中三氯蔗糖检测的液相色谱图0102030Time (min)0.0220.0240.0260.0280.0300.032V o l t s 1可乐中三氯蔗糖检测(空白样品)的液相色谱图0102030Time (min)0.0220.0240.0260.0280.0300.032V o l t s添加水平为(20 mg/kg)果冻中三氯蔗糖检测的液相色谱图0102030Time (min)0.0220.0240.0260.0280.0300.032V o l t s 11 三氯蔗糖1 三氯蔗糖1 三氯蔗糖1 三氯蔗糖0102030Time (min)0.0220.0240.0260.0280.0300.032V o l t s1 三氯蔗糖1 三氯蔗糖。

三氯蔗糖标准和甜度
三氯蔗糖是一种常用的甜味剂，广泛应用于食品、饮料、药品等领域。

为了保证产品的质量和安全性，需要对三氯蔗糖进行严格的标准和甜度检测。

目前，国际上对三氯蔗糖的标准主要包括纯度、水分、铅、砷、重金属、微生物等指标。

其中，纯度要求在99.0%以上，水分不得超过1.0%，重金属、砷、铅等有害物质的含量应控制在严格的限制范围内，微生物指标也要符合卫生标准。

而对于甜度的检测，则主要采用比色法、电化学法、高效液相色谱法等方法。

比色法是最常用的方法之一，它通过测定三氯蔗糖溶液的吸光度，来确定其甜度值。

电化学法则是利用电极在溶液中的电位变化，来测定三氯蔗糖的甜度值。

高效液相色谱法则是一种分离和分析技术，可以更加准确地测定三氯蔗糖的甜度值。

总之，三氯蔗糖的标准和甜度检测对于保证产品质量和食品安全具有重要意义。

各生产企业应严格按照标准执行，并采用科学合理的方法对产品进行质量检测。

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三氯蔗糖含量测定方法
嘿，朋友们！今天咱就来聊聊三氯蔗糖含量测定方法。

这可关系到好多方面呢，比如说在食品行业，要是不知道怎么准确测定三氯蔗糖含量，那生产出来的东西能靠谱吗？就好像做菜不知道放多少盐一样，那味道能好吗！
先来说说一种常见的方法——高效液相色谱法。

就好像在一个大迷宫
里找特定的宝藏一样，通过这种方法可以把三氯蔗糖从一堆其他东西里精准地揪出来并测定它的量。

比如说，你可以拿一杯加了三氯蔗糖的饮料，通过这个方法就能知道里面到底有多少三氯蔗糖呀！
还有分光光度法，这就像是给三氯蔗糖穿上一件特殊的“衣服”，让它在特定的光线照射下“闪闪发光”，从而被我们发现和测量。

哎呀，你想想啊，要是没这个办法，我们怎么能搞清楚那些复杂混合物里三氯蔗糖的含量呢！
总之，这些方法都超级重要的！它们就像是我们了解三氯蔗糖的“眼睛”和“手”，帮助我们准确把握它的情况。

所以说，一定要好好掌握这些测定方法呀！。

中文名：三氯蔗糖英文名：Sucralose别名：4,1',6'-三氯-4,1',6'-三脱氧半乳蔗糖CAS NO.：56038-13-2分子式：C12H19Cl3O8分子量：397.064三氯蔗糖（Sucralose，TGS）是目前唯一以蔗糖为原料生产的功能性甜味剂，其甜度是蔗糖的600倍，且甜味纯正，甜味特性十分类似蔗糖，没有任何苦后味；无热量，不龋齿，稳定性好，尤其在水溶液中特别稳定。

经过长时间的毒理试验证明其安全性极高，是目前最优秀的功能性甜味剂之一，现已有美国、加拿大、澳大利亚、俄罗斯、中国等三十多个国家批准使用。

三氯蔗糖已广泛应用于饮料、食品、医药、化妆品等行业，由于三氯蔗糖是一种新型非营养性甜味剂，是肥胖症、心血管病和糖尿病患者理想的食品添加剂，因此，它在保健食品和医药中的应用不断扩大。

三氯蔗糖最早由英国Tate&Lyle公司和美国Johnson公司的子公司McNeil Specialty Products Company经过大量研究，于1976年开发成功并申请了专利。

80年代中期，国际上16位知名专家组成的专门小组对三氯蔗糖的安全性问题进行了权威评价，确认三氯蔗糖对于广泛用途来说是安全的。

1988年三氯蔗糖由McNeil Specialty Products公司以Splenda商标率先进入北美市场；FAO/WHO经过140多次安全和环境的研究来确定三氯蔗糖的安全性，于1990年确定其ADL值为15mg/kg。

我国于1997年7月1日起批准使用三氯蔗糖。

1998年3月21日，美国FDA批准了三氯蔗糖食品添加剂的地位；2001年三氯蔗糖专利保护到期。

目前已经有三十几个国家批准使用三氯蔗糖，其已经广泛应用于370多种食品当中。

三氯蔗糖仅是高度甜味剂的一种。

目前，我国高度甜味剂市场主要由糖精钠、甜蜜素、阿斯巴甜、安赛密、甜菊糖占据，三氯蔗糖、甜菊苷等也占据一定份额。

1 色泽、组织状态1.1仪器洁净的白搪瓷托盘1.2试剂无1.3实验步骤取20g样品置于清洁、干燥的白瓷盘中，在相同的自然或照明光线下，观察其色泽和组织状态。

1.4注意事项确保使用的取样签、取样袋干净无污染，取完样后立即扎紧袋口。

2 气味2.1仪器留样瓶2.2试剂无2.3实验步骤三氯蔗糖倒入留样瓶中，在塑料留样瓶中嗅其味。

2.4注意事项确保使用的取样签、取样袋干净无污染，留样瓶无污染。

3 含量3.1 仪器和设备高效液相色谱仪（配备示差折光检测器）、电子天平3.2试剂色谱纯乙腈、三氯蔗糖标准品。

3.3实验步骤参考色谱条件a) 色谱柱：SUPELCOSILTMLC-18 4.6*250 5μm。

或其他等效色谱柱。

b) 流动相：将150mL 乙腈与850mL 水混合均匀后，用0.45μm 滤膜过滤，超声脱气后备用。

c) 柱温：30℃。

d) 流动相流速：1.0 mL/min。

e) 进样量：60 μL。

f) 三氯蔗糖保留时间：9min 左右，为确保获得所需的保留时间，必要时可以调整流动相的比例。

注：系统适用性为重复注入标准溶液两次，所得响应面积的RSD不大于2.0％。

分析步骤标准溶液的制备：称取0.1500g 三氯蔗糖标准品（精确至0.0001g），溶于预先准确称取的49.0000g纯水中，所得溶液用0.45μm 滤膜过滤，滤液备用。

试样液的制备：称取约0.1500试样（精确至0.0001g），溶于预先准确称取的49.0000g纯水中，所得溶液用0.45μm 滤膜过滤，滤液备用。

测定在3.3 参考色谱条件下，分别对标准溶液和试样液进行测定，进样量为60 μL，重复进样一次，计算出其主峰面积平均值。

计算结果X1=A U*M S*P/（A S*M U）*100式中：X1——试样中三氯蔗糖的含量，%；A U——试样液色谱主峰面积的平均值；M S——称取三氯蔗糖标准品质量，g；P——三氯蔗糖标准品的含量，%；A S——标准溶液色谱主峰面积的平均值；M U——称取的试样质量，g；实验结果以平行测定结果的算术平均值为准。

460.01.02.03.04.05.06.07.08.09.0min12345678uRIU 0.000.250.500.75mL/min三氯蔗糖食品添加剂三氯蔗糖的分析方法摘要 开发了三氯蔗糖的HPLC 分析方法，该方法简单而且重复性好，最低检出限为2.1ppm ，在8ppm 至5000ppm 的浓度范围内，相关系数可达到0.9999以上。

该方法既可以作为三氯蔗糖质量检测方法，也可以作为三氯蔗糖在食品中添加量的控制检测方法。

关键词 HPLC 三氯蔗糖 食品添加剂三氯蔗糖是以蔗糖为原料经氯代而制得的一种非营养型强力甜味剂，其化学名4，1’，6’-三氯-4，1’，6’-三脱氧半乳型蔗糖，是一种白色粉末状产品，极易溶于水（溶解度28.2克，20℃），水溶液澄清透明，其甜度是蔗糖的400～800倍，三氯蔗糖具有如下优点：（1）水溶液化学稳定性好，高温下甜味不变，而且与食物中的蛋白质果胶等主要成分不起化学反应，在焙烤工艺中甜度更稳定。

（2）无毒副作用，在人体内几乎不被吸收，热量值为零，是糖尿病人的甜味代用品。

（3）甜味纯正，与蔗糖一样没有不愉快的苦后味和其他怪味，它不被龋齿病菌利用,所以不会引起龋齿。

正是基于这些优点，三氯蔗糖是目前食品和医药领域研究开发的热点。

仪器配置包括脱气机DGU-20A 3；泵LC-20AD ；自动进样器SIL-20AC ；高压混合器； 柱温箱CTO-20AC ；示差折光检测器RID-10A ； 系统控制器CBM-20A ； LC-Solution 数据处理软件分析条件流动相:水/乙腈 85/15 流速: 1 mL/min 进样体积: 20 μL色谱柱: Shim-pack VP-ODS (150 mmL x 4.6 mmid) 柱温: 40℃检测池温度: 40℃标样处理称取标样40mg ，流动相稀释至10mL ，完全溶解后，0.45μm 膜过滤，取20μL 进样。

色谱图如下：图 1 三氯蔗糖色谱图47重现性实验将上述样品连续进样6次，分别计算保留时间和峰面积的重复性。

1 色泽、组织状态1.1仪器洁净的白搪瓷托盘1.2试剂无1.3实验步骤取20g样品置于清洁、干燥的白瓷盘中，在相同的自然或照明光线下，观察其色泽和组织状态。

1.4注意事项确保使用的取样签、取样袋干净无污染，取完样后立即扎紧袋口。

2 气味2.1仪器留样瓶2.2试剂无2.3实验步骤三氯蔗糖倒入留样瓶中，在塑料留样瓶中嗅其味。

2.4注意事项确保使用的取样签、取样袋干净无污染，留样瓶无污染。

3 含量3.1 仪器和设备高效液相色谱仪（配备示差折光检测器）、电子天平3.2试剂色谱纯乙腈、三氯蔗糖标准品。

3.3实验步骤参考色谱条件a) 色谱柱：SUPELCOSILTMLC-18 4.6*250 5μm。

或其他等效色谱柱。

b) 流动相：将150mL 乙腈与850mL 水混合均匀后，用0.45μm 滤膜过滤，超声脱气后备用。

c) 柱温：30℃。

d) 流动相流速：1.0 mL/min。

e) 进样量：60 μL。

f) 三氯蔗糖保留时间：9min 左右，为确保获得所需的保留时间，必要时可以调整流动相的比例。

注：系统适用性为重复注入标准溶液两次，所得响应面积的RSD不大于2.0％。

分析步骤标准溶液的制备：称取0.1500g 三氯蔗糖标准品（精确至0.0001g），溶于预先准确称取的49.0000g纯水中，所得溶液用0.45μm 滤膜过滤，滤液备用。

试样液的制备：称取约0.1500试样（精确至0.0001g），溶于预先准确称取的49.0000g 纯水中，所得溶液用0.45μm 滤膜过滤，滤液备用。

测定在3.3 参考色谱条件下，分别对标准溶液和试样液进行测定，进样量为60 μL，重复进样一次，计算出其主峰面积平均值。

计算结果X1=A U*M S*P/（A S*M U）*100式中：X1——试样中三氯蔗糖的含量，%；A U——试样液色谱主峰面积的平均值；M S——称取三氯蔗糖标准品质量，g；P——三氯蔗糖标准品的含量，%；A S——标准溶液色谱主峰面积的平均值；M U——称取的试样质量，g；实验结果以平行测定结果的算术平均值为准。

论蔗糖合成甜味剂——三氯蔗糖的测定方法文章标题：论蔗糖合成甜味剂——三氯蔗糖的测定方法摘要:采用高效液相色谱法，Sugar-PakTM1色谱柱，以二次水为流动相，示差折光仪为检测器，外标法进行定量分析，测定三氯蔗糖含量，相对标准偏差为0.11(n=5)，线性相关系数为0.99990，最小检测浓度为0.2µg/mL。

该方法准确、可靠且无毒，是测定三氯蔗糖含量的有效方法。

关键词:三氯蔗糖，高效液相色谱法，Sugar-PakTM1色谱柱作者简介：王桂华，男，２８岁：研究生学历，在广州甘蔗糖业研究所工作，研究方向：糖品检测和标准化。

三氯蔗糖是以蔗糖为原料经氯代而制得的一种非营养型强力甜味剂，其化学名4，1’，6’—三氯—4，1’，6’—三脱氧半乳型蔗糖。

目前三氯蔗糖已广泛应用于饮料、口香糖、乳制品、蜜饯、糖浆、面包、糕点、冰淇淋、果酱、果冻、布丁等加工食品中。

另外，三氯蔗糖是一种新型非营养性甜味剂[1，2]，是肥胖症、心血管病和糖尿病患者理想的食品添加剂，因此它在保健食品和医药中的应用不断扩大。

我国卫生部在1997年颁发的《食品添加剂使用卫生标准》规定，可在饮料、酱菜、复合调味剂、配制酒、冰淇淋、糕点、水果罐头、饼干及面包中使用该产品，允许添加量为0.25g/kg，在改性口香糖、蜜饯中的添加量为1.5g/kg。

由于目前食品添加剂三氯蔗糖含量的检测无标准或行业标准方法,相关的报导较少。

我们用Waters高效液相色谱仪，以Sugar-PakTM1为色谱柱,水为流动相，示差折光检测器检测,外标法进行定量分析,建立了三氯蔗糖的含量测定方法,该方法简便，可靠且无毒，分离效果好,适用于生产过程及其应用厂家的监测。

1实验部分1.1仪器和试剂Waters1525HPLC,Waters2414示差折光检测器,WatersEmpower色谱管理软件；二次水（0.45µm水相滤膜过滤），三氯蔗糖标样（美国SIGMA公司）。

甜味剂三氯蔗糖检测的常见问题及解决方案一、案例背景及具体问题描述甜味剂是对能够赋予食品甜味的物质的总称。

甜味剂种类较多，按其来源可分为天然甜味剂和人工合成甜味剂；按其营养价值分为营养性甜味剂和非营养性甜味剂；按其化学结构和性质分为糖类和非糖类甜味剂。

目前作为食品添加剂的甜味剂主要有安赛蜜、糖精钠、甜蜜素、阿斯巴甜、三氯蔗糖、纽甜等。

三氯蔗糖是唯一以蔗糖为原料的功能性甜味剂，甜度可达蔗糖600倍，具有无能量，甜度高，甜味纯正，高度安全等特点，是目前最优秀的功能性甜味剂之一。

常用的检测方法有GB 22255-2014《食品安全国家标准食品中三氯蔗糖（蔗糖素）的测定》，由于该标准中所用检测器是蒸发光散射检测器（ELSD）或示差检测器（RID），只能根据保留时间定性，因此对样品处理要求比较高，但是在日常检测中，不同的产品类型其基质会有较大差异，若处理不好，很容易造成结果不准确。

二、解决问题的思路和方法及实践过程描述1、一种前处理方式是样品加入20 mL甲醇水（甲醇比例不超过10%）提取，通过HLB固相萃取小柱净化，氮吹浓缩，用1 mL水定容，过膜上机；另一种前处理方式，用80%甲醇水定容至20 mL，振荡提取，过膜上机。

样品有检出时可通过不同的前处理方式来验证检测结果是否准确。

2、酱油等样品在提取过程中可加入正己烷萃取，除掉其中的油脂及色素等杂质；如样品为粉或乳制品，可用挥发性酸（如盐酸）调pH 至4以沉淀蛋白。

3、上机前需开启ELSD检测器，接上氮气，调用方法使其工作温度上升至40℃，再通流动相平衡色谱柱。

此检测器为质量检测器，只能依靠保留时间定性，检测过程中通过流动相梯度洗脱，让三氯蔗糖出峰时尽可能减少水溶性杂质的干扰，再根据实际情况改变流动相的比例，由此改变三氯蔗糖的出峰时间来辅助定性。

样品处理前需注意配料表中是否有添加三氯蔗糖，对最终结果的确认有一定的参考意义。

测评三氯蔗糖的原理
测评三氯蔗糖的原理主要包括以下几个方面：
1. 高效液相色谱法（HPLC）：HPLC是通过样品在固定相（如色谱柱）中的慢速流动，利用不同化学物质在固定相中的分配、吸附和洗脱特性的差异来分离和定量化合物的方法。

对于三氯蔗糖，可以采用HPLC进行分析和定量，通过分离并检测三氯蔗糖分子在色谱柱中的保留时间和检测信号强度来确定其含量。

2. 紫外-可见吸收光谱法（UV-Vis）：三氯蔗糖在紫外-可见光谱范围内具有特定的吸收特性，可以利用该特性进行测评。

通过测定三氯蔗糖溶液对特定波长光线（如254 nm）的吸光度，可以推算出其浓度。

3. 核磁共振波谱法（NMR）：核磁共振技术是一种通过观察原子核在外加磁场下的行为来研究化合物的结构和特性的方法。

通过采集三氯蔗糖样品的核磁共振谱图，可以进一步确认分子中各原子的类型和位置，从而推导出其浓度。

4. 总体测评法：除了直接检测三氯蔗糖的含量，还可以通过一系列宏观指标来综合评估三氯蔗糖的品质。

比如，可以测定三氯蔗糖的水分、溶解度、糖度等指标，从而评估其纯度和适用性。

需要注意的是，具体使用哪种方法进行测评还取决于所需的精确度、分析时间、仪器设备的可用性以及实验室的专业技术和经验。

食品中三氯蔗糖（蔗糖素）的测定（可编辑优质文档）(可以直接使用，可编辑完整版资料，欢迎下载）食品安全国家标准食品中三氯蔗糖（蔗糖素）的测定（征求意见稿）中华人民共和国卫生部发布前言本标准代替GB/T 22255-2021《食品中三氯蔗糖(蔗糖素)的测定》。

本标准与GB/T 22255-2021相比，主要变化如下：——增加了含20%以上糖或糖醇的试样的制备步骤；——高效液相色谱分离采用了等度洗脱。

食品安全国家标准食品中三氯蔗糖（蔗糖素）的测定1 范围本标准规定了食品中三氯蔗糖的液相色谱测定方法。

本标准适用于食品中三氯蔗糖的测定。

2原理三氯蔗糖是水溶性物质，易溶于水和甲醇。

试样经75%（V+V）甲醇水溶液提取并去除蛋白，含脂肪高的样品再以正己烷萃取去除脂肪，水相经水浴蒸干，加水定容（可根据需要采取中性氧化铝固相萃取柱净化或者C18固相萃取柱富集净化），过滤后进高效液相色谱仪，经反相C18色谱柱分离后，由蒸发光散射检测器检测，根据保留时间定性,以峰面积定量。

3 试剂和材料除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。

3.1 甲醇（CH3OH）。

3.2 乙腈（CH3CN）：色谱纯。

3.3正己烷（C6H14）。

3.4商品化中性氧化铝固相萃取柱（2 g装）。

3.5 C18固相萃取柱（3 mL,500 mg）使用前依次用4 mL甲醇，4 mL水活化。

3.6 三氯蔗糖标准品（C12H19C l3O8）：纯度≥99%。

3.7 标准溶液的制备三氯蔗糖贮备液（0.50 mg/mL）：精确称取三氯蔗糖对照品0.0500 g，用水定容至100 mL，混匀，其中三氯蔗糖浓度为0.50 mg/mL。

贮备液置于4 ℃冰箱中保存。

三氯蔗糖工作液：分别吸取0.0 mL、1.0 mL、3.0 mL、5.0 mL、8.0 mL三氯蔗糖贮备液于10 mL容量瓶中，用水定容至刻度。

其中三氯蔗糖工作液浓度分别为0.00 mg/mL、0.050 mg/mL、0.15 mg/mL、0.25 mg/mL、0.40 mg/mL。

高效液相色谱法测定三氯蔗糖一、三氯蔗糖概述三氯蔗糖，又名蔗糖素，三氯半乳糖。

英文名为Surcalose，分子为C12H19C3O8，相对分子质量为397.64。

三氯蔗糖通常用作食品调味剂，甜度是蔗糖的600-650倍，其甜味曲线与蔗糖几乎重叠，毫无生涩感。

通过大白鼠和人体临床试验，对人体机能无损害，并且不会引起血糖波动，尤其适合糖尿病人食用。

其安全性被100多分科学权威科学报告证实了其作为食品添加剂的安全性。

三氯蔗糖广泛用于饮料、糖浆、面包、冰激凌等甜味食品当中。

三氯蔗糖于1976年在英国Tate&Lyie公司诞生，1991年加拿大批准食用，我国内陆于1997年批准食用。

目前三氯蔗糖全市需求量为46亿人民币，在3000多种食品、保健品、医疗和日化产品中应用。

二、食品中三氯蔗糖检测1.仪器与试剂型号为Agilent-1200的高效液相色谱仪1台，规格为4.6mm×250mm，5μm的C18色谱柱1套，型号为ELSD蒸发光检测仪1台。

取Dr.Ehrenstorfer公司生产的纯度为98.5%三氯蔗糖标准物质，用容量瓶配置成2.0mg/mL的标准贮备溶液。

2.色谱环境取C18色谱柱，水浴加热维持柱温35℃，色谱柱中流动相为乙腈水溶液，溶液流量为1.0mL/min，蒸发管温度为60℃，气态流量3.5L/min，进样量为20μL，放大倍数为10倍。

3.实验过程取配料中含有三氯蔗糖的饮料，移取一定体积的待测样品（精确到0.01g），视其需要调节pH值或加适量沉淀剂，经过0.45μm滤膜过滤的超纯水后进行超声波溶解，定容至一定体积，再通过0.45μm滤膜过滤用作色谱分析。

4.实验结果分析4.1样品预处理按照国标GB/T 22255-2008《食品中三氯蔗糖的测定》，为了除去蛋白质和脂肪，用75%甲醇水处理使蛋白分解，用正己烷除去脂肪，水相经水浴蒸干，最终发现除蛋白效果不理想，而且含糖量高的饮料处理蒸干后很难进行准确定容与过滤。

1 色泽、组织状态1.1仪器洁净的白搪瓷托盘1.2试剂无1.3实验步骤取20g样品置于清洁、干燥的白瓷盘中，在相同的自然或照明光线下，观察其色泽和组织状态。

1.4注意事项确保使用的取样签、取样袋干净无污染，取完样后立即扎紧袋口。

2 气味2.1仪器留样瓶2.2试剂无2.3实验步骤三氯蔗糖倒入留样瓶中，在塑料留样瓶中嗅其味。

2.4注意事项确保使用的取样签、取样袋干净无污染，留样瓶无污染。

3 含量3.1 仪器和设备高效液相色谱仪（配备示差折光检测器）、电子天平3.2试剂色谱纯乙腈、三氯蔗糖标准品。

3.3实验步骤参考色谱条件a) 色谱柱：SUPELCOSILTMLC-18 4.6*250 5μm。

或其他等效色谱柱。

b) 流动相：将150mL 乙腈与850mL 水混合均匀后，用0.45μm 滤膜过滤，超声脱气后备用。

c) 柱温：30℃。

e) 进样量：60 μL。

f) 三氯蔗糖保留时间：9min 左右，为确保获得所需的保留时间，必要时可以调整流动相的比例。

注：系统适用性为重复注入标准溶液两次，所得响应面积的RSD不大于2.0％。

分析步骤标准溶液的制备：称取0.1500g 三氯蔗糖标准品（精确至0.0001g），溶于预先准确称取的49.0000g纯水中，所得溶液用0.45μm 滤膜过滤，滤液备用。

试样液的制备：称取约0.1500试样（精确至0.0001g），溶于预先准确称取的49.0000g纯水中，所得溶液用0.45μm 滤膜过滤，滤液备用。

测定在3.3 参考色谱条件下，分别对标准溶液和试样液进行测定，进样量为60 μL，重复进样一次，计算出其主峰面积平均值。

计算结果X1=A*M*P/（A*M）*100USSU式中：X1——试样中三氯蔗糖的含量，%；A——试样液色谱主峰面积的平均值；U M——称取三氯蔗糖标准品质量，g；S P——三氯蔗糖标准品的含量，%；A——标准溶液色谱主峰面积的平均值；S M——称取的试样质量，g；U实验结果以平行测定结果的算术平均值为准。