稀释涂布平板法计数例题

本文格式为Word 版，下载可任意编辑第 1 页 共 1 页稀释涂布平板法计数公式“微生物数量测量”是2017年高考大纲中的新内容，也是教学中的重要难点。

稀释涂板法是计数微生物的常用方法，用于计数样品中活菌的数量。

当样品的稀释度足够高时，在培养基表面上生长的菌落来自样品稀释液中的活细菌。

通过计算平板上的菌落数，我们可以猜测样品中有多少种活细菌。

但是，菌落计数结果的处理常常成为学生容易出错的地方。

典型示例：在从土壤中分离产生脲酶的细菌的实验中，将10g 土壤样品溶液进行梯度稀释，并将0.1mL 稀释倍数为105的土壤样品溶液接种在三个中板上。

培养一段时间后，平板上的细菌菌落数分别为42、200和256。

1g 土壤样品中的细菌数为。

在PEP 高中生物学选修课“生物技术实践”中，有这样一条陈述：用稀释包被板法计数菌落：为了确保结果的准确性，菌落数在30到30之间通常选择300和300进行计数。

但是，如果我们理所当然地认为42、200和256个数据都在30?300范围内，那么直接对它们求平均并乘以稀释倍数就可以得出错误的结果1.66×108。

这也是许多学生犯错误的原因。

实际上，教材中的相关表述仅说明了可计数菌落数的适当范围。

在一定稀释度下，三个平板中的菌落数不能简单地直接平均，应注意稀释度的设定和计数结果的允许差异。

为了确保准确确定有效活菌计数，必须设置三个稀释度并进行分级，并且每个梯度应设置三个重复。

为了确定土壤中细菌的数量，通常使用104、105和106倍的稀释剂进行平板培养。

为了确定放线菌的数量，通常使用103、104和105倍的稀释度。

为了确定真菌的数量，通常使用102、103和104倍的稀释度。

如果平板中的菌落数太少，必然会导致计数误差太大；相反，如果培养皿中的菌落太多，将导致计数困难。

因此，世界上菌落计数的基本原理是对稀释的平板进行计数，其中平板上有30?300个菌落。

同时，相同稀释度重复3次的平板上菌落数的标准差应小于允许的差。

微生物的培育、分别、计数专题主讲教师：毕诗秀【考试说明对微生物培育、分别和计数部分的要求】微生物的培育、分别、计数要求掌握程度参照本考（1）微生物的分别和培育试纲领中的：（2）某种微生物数目的测定二、考试的能力要求（3）培育基对微生物的选择利用2. 实验与研究能力一、微生物培育的基本程序二、分别微生物纯种的方法1.平板划线法：线的尾端菌液渐渐稀释若线的尾端没有出现单菌落，其可能的可能原由？2.稀释涂布（平板）法3.利用选择培育基进行分别如利用只含尿素为氮源的选择培育基分别尿素分解菌如利用只含纤维素为碳源的选择培育基分别纤维素分解菌4.利用鉴识培育基进行鉴识后分别三、微生物的计数1.液体稀释涂布（平板）法2.显微察看法：用血球计数板计数计数室（中央大方格）的长、宽和高分别为：1 mm 、 1 mm和 0. 1mm3计数室的容积：0.1mm （万分之一毫升）取样：稀释必定倍数的菌液3.比浊法记数微生物细胞数目多→培育液浊度大→发生散射光芒多→分光光度计测得的吸光值增添核酸是遗传物质的凭证北京四中：毕诗秀一、 DNA 是遗传物质的凭证体内细菌转变实验思虑：格里菲斯实验能颠覆“遗传物质是蛋白质”这一学说吗？该实验为以后科学家证明 DNA 是遗传物质供给了什么帮助？体外细菌转变实验问题：（ 1） 1 和 2 结果比较，说明？（2） 1 和 3 结果比较，说明？从整个实验中，你能得出什么结论？（3）艾弗里设计实验的思路是如何的？噬菌体侵染细菌的实验（1）如何对噬菌体进行标志？（2）采用 S 和 P 做标志的原由？（3）混淆时间是否是越长越好？（4）使用搅拌器作用是什么？（5）对搅拌后的培育液进行离心目的？（6）积淀和上清液中主要的成分是什么？（7）进行噬菌体侵染实验的目的？二、 RNA 是遗传物质的凭证（1）烟草花叶病毒感染烟草叶实验是如何做的？实验结论说了然什么结论？（2）病毒重修实验说明所生殖的病毒种类取决于；证明RNA 是遗传物质，能控制。

稀释平板计数法实验目的学习稀释平板菌落计数的基本原理和方法。

实验内容用稀释平板菌落计数法对菌悬液进行计数。

实验原理平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。

统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。

但是，由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，所以，长成的一个单菌落也可能来自样品中的2—3或更多个细胞。

因此平板菌落计数的结果往往偏低。

为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已倾向使用菌落形成单位(cfu)而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。

平板菌落计数法虽然操作较繁，结果需要培养一段时间才能取得，而且测定结果易受多种因素的影响，但是，由于该计数方法的最大优点是可以获得活菌的信息，所以被广泛用于生物制品检验（如活菌制剂），以及食品、饮料和水〔包括水源水〕等的含菌指数或污染程度的检测。

实验器材酿酒酵母菌悬液马铃薯培养基1m1吸管，平皿，试管，试管架，恒温培养箱等。

实验步骤1．无菌器材的准备(1) 无菌培养皿：取培养皿9套，包扎、灭菌。

(2) 无菌移液管的准备：取1m1移液管，在后部管口处用铁丝塞入棉花少许（长约1~1.5cm ），以防将菌液吸出，同时也可避免将外面的微生物吹入。

棉花要塞得松紧适宜吹时能通气但不使棉花滑下为准。

然后将移液管尖端放在4~5cm宽的长纸条一端呈45o角折叠纸条包住尖端，用左手捏住管身，右手将吸管压紧，在桌面上向前滚动，以螺旋式包扎起来，上端剩余纸条折叠打结后干热灭菌。

(3) 无菌水：取6支试管，分别装入4.5m1蒸馏水，加棉塞，灭菌。

2．样品稀释液的制备(1) 编号取无菌平皿9套，分别用记号笔标明10-4、10-5、10-6(稀释度)各3套。

另取6支盛有4.5m1无菌水的试管，依次标是10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。

实验十一稀释平板计数法实验目的学习稀释平板菌落计数的基来源理和方法。

实验内容用稀释平板菌落计数法对菌悬液进行计数。

实验原理平板菌落计数法是将待测样品经适合稀释以后，此中的微生物充足分别成单个细胞，取必定量的稀释样液接种到平板上，经过培育，由每个单细胞生长生殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。

统计菌落数，依据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。

可是，因为待测样品常常不易完好分别成单个细胞，所以，长成的一个单菌落也可能来自样品中的2— 3 或更多个细胞。

所以平板菌落计数的结果常常偏低。

为了清楚地论述平板菌落计数的结果，此刻已偏向使用菌落形成单位(cfu) 而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。

平板菌落计数法固然操作较繁，结果需要培育一段时间才能获得，并且测定结果易受多种要素的影响，可是，因为该计数方法的最大长处是能够获取活菌的信息，所以被宽泛用于生物制品查验（如活菌制剂），以及食品、饮料和水〔包含水源水〕等的含菌指数或污染程度的检测。

实验器械酿酒酵母菌悬液马铃薯培育基1m1 吸管，平皿，试管，试管架，恒温培育箱等。

实验步骤1．无菌器械的准备(1)无菌培育皿：取培育皿 9 套，包扎、灭菌。

(2) 无菌移液管的准备：取 1m1 移液管，在后部管口处用铁丝塞入棉花少量（长约），以防将菌液吸出，同时也可防止将外面的微生物吹入。

棉花要塞得松紧适合吹时能通气但不使棉花滑下为准。

而后将移液管尖端放在4~5cm宽的长纸条一端呈45o 角折叠纸条包住尖端，用左手捏住管身，右手将吸管压紧，在桌面上向前转动，以螺旋式包扎起来，上端节余纸条折叠打结后干热灭菌。

(3) 无菌水：取 6 支试管，分别装入 4.5m1 蒸馏水，加棉塞，灭菌。

2．样品稀释液的制备(1)编号取无菌平皿 9 套，分别用记号笔注明 10-4、10-5、10-6(稀释度 )各 3 套。

另取 6 支盛有 4.5m1 无菌水的试管，挨次标是 10-1、 10-2、 10-3、 10-4、 10-5、 10-6。

显微镜计数法即血球计数法，事先把菌液稀释到一定的倍数，然后通过血球计数板在显微镜下计数。

此法计数比较精准。

活菌计数法是将待测样品经一系列10倍稀释，然后选择三个稀释度的菌液，分别取0.2ml放入无菌平皿，再倒入适量的已熔化并冷至45℃左右的培养基，与菌液混匀，冷却、待凝固后，放入适宜温度的培养箱或温室培养，长出菌落后，计数，按下面公式计算出原菌液的含菌数：每毫升原菌液活菌数=同一稀释度三个以上重复平皿菌落平均数×稀释倍数×5稀释涂布平板法是一种粗略的活菌计数法，即通过一定的稀释倍数，涂布到平板上，在适宜的条件下培养后，观察活菌数。

平板划线法是用来分离单菌落的一种方法，不是计数的方法。

如果只有一个稀释度的平均菌落数符合30~300这个范围
则以该稀释度平均菌落数除以涂布平板所用稀释液体积(0.1mL)，乘以稀释倍数作为该样品的细菌总数
如果有两个稀释度的平均菌落数符合要求
则按照两者菌落总数之比来决定
如果小于2，取两者的平均值
如果大于2，取较小的菌落总数
本题的46*10^3与295*10^2的比之为1.6
应取两者的平均值
（46*10^3+295*10^2)/0.1/2=3.775*10^5
相当于统计学里面的比较差异，
如果多比少大于2倍，则梯度浓度差异是10倍的情况下，其菌落是有很多重叠或者链接在一起的，这样就无法计算清楚是否为单菌落了，所以只有选择较小的菌落数。

来保证以上要求。

平板菌落计数法平板菌落计数法，是种统计物品含菌数的有效方法。

方法如下：将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液涂布到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞；统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。

目录一、菌落总数介绍：二、检验方法三、说明一、菌落总数介绍：二、检验方法三、说明展开但是，由于待测样品往往不宜完全分散成单个细胞，所以，长成的一个单菌落也可能来自样品中的2～3或更多个细胞。

因此平板菌落计数的结果往往偏低。

为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已倾向使用菌落形成单位（cfu ：colony-forming units），而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。

[1]编辑本段一、菌落总数介绍：菌落是指细菌在固体培养基上生长繁殖而形成的能被肉眼识别的生长物，它是由数以万计相同的细菌集合而成。

当样品被稀释到一定程度，与培养基混合，在一定培养条件下，每个能够生长繁殖的细菌细胞都可以在平板上形成一个可见的菌落。

菌落总数就是指在一定条件下（如需氧情况、营养条件、pH、培养温度和时间等）每克（每毫升）检样所生长出来的细菌菌落总数。

按国家标准方法规定，即在需氧情况下，37℃培养48h，能在普通营养琼脂平板上生长的细菌菌落总数，所以厌氧或微需氧菌、有特殊营养要求的以及非嗜中温的细菌，由于现有条件不能满足其生理需求，故难以繁殖生长。

因此菌落总数并不表示实际中的所有细菌总数，菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。

菌落总数测定是用来判定食品被细菌污染的程度及卫生质量，它反映食品在生产过程中是否符合卫生要求，以便对被检样品做出适当的卫生学评价。

菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣。

编辑本段二、检验方法菌落总数的测定，一般将被检样品制成几个不同的10倍递增稀释液，然后从每个稀释液中分别取出1mL置于灭菌平皿中与营养琼脂培养基混合，在一定温度下，培养一定时间后（一般为48小时），记录每个平皿中形成的菌落数量，依据稀释倍数，计算出每克（或每ml）原始样品中所含细菌菌落总数。

实验概要分离、纯化及初步鉴定土壤中的拮抗植物病原菌的放线菌。

实验原理土壤是微生物的“天然培养基”，也是最丰富的菌种资源库，我们可以从中分离出众多放线菌，尤其是可以从耕作土壤中筛选出拮抗植物病原菌的放线菌。

以耕作有武运粳和苏沪香粳的土壤为样品，应用稀释涂布平板法分离各种微生物。

菌落计数后，通过菌落形态观察并挑取放线菌进行划线分离纯化，多次重复后得到单菌落。

在进行放线菌形态等初步鉴定后，将纯化的菌株接入斜面传代保藏。

最后，分离纯化的放线菌，初步鉴定其拮抗性。

拮抗植物病原菌的放线菌的分离纯化在农业增产、作物种植等方面都有着重要的意义。

主要试剂1. 培养基：高氏1号培养基、马铃薯葡萄糖培养基、牛肉膏蛋白胨培养基、葡萄糖蛋白胨水培养基2. 其他试剂：银染液A液B液（细菌鞭毛染色） 40%KOH 5%α-萘酚（V.P.实验）主要设备培养皿试管锥型瓶接种环移液管震荡器电炉载玻片超净工作台恒温培养箱高压蒸汽灭菌锅显微镜等实验材料土样：苏沪香粳1，2组杨稻6号93113，4组武运粳5，6组实验步骤1.稀释涂布平板法(Spread Plate Method)稀释涂布平板法是一种将菌体按比例制备成若干个稀释度，再分别经涂棒涂布培养而进行微生物分离纯化的方法。

(1) 倒平板；(2) 制备土壤稀释溶液连续不断稀释，得到不同稀释度的土壤溶液；(3) 涂布分别吸取三种稀释度菌液，均匀涂于培养基表面；(4) 培养；(5) 划线分离，直到获得纯培养。

2. 平板菌落计数法平板菌落计数法是根据微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的现象进行的，也就是说一个菌落即代表一个单细胞。

计数时，先将待测样品作一系列稀释，再取一定量的稀释菌液接种到培养皿中，使其均匀分布于平皿中的培养基内，经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可换算出样品中的含菌数。

这种计数法的优点是能测出样品中的活菌数。

此法常用于某些成品检定（如杀虫菌剂），生物制品检定以及食品、水源的污染程度的检定等。

高三案例3：平板划线法和稀释涂布平板法撰稿人李红云【问题】平板划线法和稀释涂布平板法是常用的微生物接种方法，同时也用于微生物的分离和计数。

这两种方法存在一定的共性和差异性，学生比较容易混淆。

【原因】1、欠缺实验操作体验，或欠缺理智的实验操作习惯。

2、不善于建构知识框架。

【措施】亲自进行实验操作，并通过模拟实验和绘图理解相关实验原理。

绘图模拟操作（可以借用黑板和彩色粉笔，观察彩色粉笔笔迹的深浅，说明菌液的稀释程度），说明平板划线法和稀释涂布平板法的共性和差异性。

根据操作过程和模拟过程可知，平板划线操作中，只取一次菌种，但连续的划线，可以使菌种在培养基中逐步稀释，在划线的最后区域，能够得到单个细菌，培养后能得到单一菌落，因此，能达到接种细菌和纯化细菌的目的。

但是，因为培养出的菌落不都是单一菌落，因此，不能进行细菌计数。

根据操作过程和模拟过程可知，稀释涂布平板法实际包括稀释菌种和涂布两个环节。

只要取得适宜浓度的稀释菌液，就可以使菌种在培养基中完全分散成单个细菌，培养后得到的菌落全都是单一菌落，因此，不仅能达到接种细菌和纯化细菌的目的，因为培养出的菌落全都是单一菌落，也能进行细菌计数。

可见，稀释涂布平板法比平板划线法操作更复杂，功能也更完善。

可以简单比较为：【检测】1、新课标卷39.[生物—选修1：生物技术实践]（15分）有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。

某同学欲从污染的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株。

回答问题：（2）纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即________和____________。

2、山东卷 34.（8分）（生物—生物技术实验）研究发现柚皮精油和乳酸菌素（小分子蛋白质）均有抑菌作用，两者的提取及应用如图所示。

（2）筛选乳酸菌A时可选用平板划线法或____________接种。

3、（宁夏卷）.【生物——选修1生物技术实践】（15分）（3）若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还应保证待测样品稀释的_______。

稀释涂布平板法公式稀释涂布平板法是微生物学中常用的一种定量测定微生物数量的方法，它有一套相应的公式来帮助我们进行计算和分析。

咱们先来说说这个稀释涂布平板法到底是咋回事儿。

比如说，你从一块土壤里取了一些样本，这里面的微生物那可是种类繁多、数量庞大。

你要是直接去数，那简直就是不可能完成的任务。

这时候，稀释涂布平板法就派上用场啦！你把这个样本进行一系列的稀释，然后取一定量的稀释液均匀地涂在平板培养基上。

经过一段时间的培养，平板上就会长出一个个的菌落。

这些菌落可都是由单个微生物繁殖形成的哟！那这和公式有啥关系呢？假设你进行了一系列的稀释操作，比如 10 倍、100 倍、1000 倍……然后从某个稀释度的涂布平板上数出了菌落数。

这时候，就要用到公式来计算原始样本中的微生物数量啦。

公式是这样的：每克样品中的菌株数 = （C÷V）×M 。

这里的“C”表示某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，“V”代表涂布平板时所用稀释液的体积（单位是毫升），“M”则是稀释倍数。

我给您举个例子啊，就说有一次我带着学生们做实验。

我们从校园的花坛里取了土样，兴致勃勃地准备用稀释涂布平板法来测测里面的细菌数量。

一开始，大家都手忙脚乱的，不是这个同学稀释的时候比例弄错了，就是那个同学涂布不均匀。

好不容易都弄对了，放进培养箱里等着。

那几天，同学们天天盼着去看结果。

终于到了出结果的日子，大家围在实验台前，眼睛紧紧盯着那些平板。

有的平板上菌落密密麻麻，有的则稀稀拉拉。

我们就按照公式认真地计算起来。

有个小组特别有意思，他们数菌落的时候，因为太紧张，数错了好几次。

旁边的小组还笑话他们，结果等自己数的时候，也犯了同样的错误，把大家逗得哈哈大笑。

最后，通过计算，我们得出了花坛土壤中细菌的大致数量。

同学们都特别有成就感，也对微生物世界有了更直观的认识。

总之，稀释涂布平板法公式虽然看起来有点复杂，但只要咱们多做实验，多练习，就能熟练掌握。

涂布平板法Just be happy, remember on the morning of June 18, 2022涂布平板法实验器材牛肉膏蛋白胨琼脂培养基配制牛肉膏 0.3g蛋白胨 1g氯化钠 0.5g琼脂 2g自来水 100mLpH 7.0～7.2灭菌 1.05kg/cm2;22min配制具体步骤1．称量按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯中..牛肉膏常用玻棒挑取;放在小烧杯或表面皿中称量;用热水溶化后倒入烧杯..也可放在称量纸上;称量后直接放入水中;这时如稍微加热;牛肉膏便会与称量纸分离;然后立即取出纸片..蛋白胨很易吸潮;在称取时动作要迅速..另外;称药品时严防药品混杂;一把牛角匙用于一种药品;或称取一种药品后;洗净、擦干;再称取另一药品;瓶盖也不要盖错..2．溶化在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量;用玻棒搅匀;然后;在石棉网上加热使其溶解..待药品完全溶解后;补充水分到所需的总体积..如果配制固体培养基;将称好的琼脂放入已溶化的药品中;再加热溶化;在琼脂溶化的过程中;需不断搅拌;以防琼脂糊底使烧杯破裂..最后补足所失的水分..3．调pH在未调pH前;先用精密pH试纸测量培养基的原始pH值;如果pH偏酸;用滴管向培养基中逐滴加入1mol/L NaOH;边加边搅拌;并随时用pH试纸测其pH值;直至pH达7．6..反之;则用1mol/L HCl进行调节..注意pH值不要调过头;以避免回调;否则;将会影响培养基内各离子的浓度..对于有些要求pH值较精确的微生物;其pH的调节可用酸度计进行使用方法;可参考有关说明书..4．过滤趁热用滤纸或多层纱布过滤;以利结果的观察..一般无特殊要求的情况下;这一步可以省去本实验无需过滤..很多都是不需要过滤的..5．分装按实验要求;可将配制的培养基分装入试管内或三角烧瓶内..分装装置见图Ⅴ-1..分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上;以免沾污棉塞而引起污染..1液体分装分装高度以试管高度的1/4左右为宜..2固体分装分装试管;其装量不超过管高的1/5;灭菌后制成斜面;如图Ⅴ-2..分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜..3半固体分装试管一般以试管高度的1/3为宜;灭菌后垂直待凝..6．加塞培养基分装完毕后;在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞;以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染;并保证有良好的通气性能棉塞制作方法附本实验后面..7．包扎加塞后;将全部试管用麻绳捆扎好;再在棉塞外包一层牛皮纸;以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞;其外再用一道麻绳扎好..用记号笔注明培养基名称、组别、日期..三角烧瓶加塞后;外包牛皮纸;用麻绳以活结形式扎好;使用时容易解开;同样用记号笔注明培养基名称、组别、日期..8．灭菌将上述培养基以1．05kg/cm215磅/英寸2;121．3℃; 20分钟高压蒸汽灭菌..如因特殊情况不能及时灭菌;则应放入冰箱内暂存..9．搁置斜面将灭菌的试管培养基冷至50℃左右;将试管棉塞端搁在玻棒上;搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜..10．无菌检查将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24—48小时;以检查灭菌是否彻底..1．活材料：苏云金芽孢杆菌Bacillus thuringiensis菌剂..2．培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基附录三、13．器材：90ml无菌水、9ml无菌水、无菌平皿、lml无菌吸管、天平、称样瓶、记号笔、玻璃刮铲等..四、实验方法1．样品稀释液的制备准确称取待测样品l0g;放入装有90ml无菌水并放有小玻璃珠的250ml三角瓶中;用手或置摇床上振荡20min;使微生物细胞分散;静置20-30s;即成10-1稀释液；再用1ml无菌吸管;吸取10-1稀释液lml;移入装有9ml无菌水的试管中;吹吸3次;让菌液混合均匀;即成10-2稀释液；再换一支无菌吸管吸取10-2稀释液1ml;移入装有9ml 无菌水的试管中;也吹吸三次;即成l0-3稀释液；以此类推;连续稀释;制成10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9等一系列稀释菌液图22-1..图22-1 平板计数法中样品的稀释和稀释液的取样培养用稀释平板计数时;待测菌稀释度的选择应根据样品确定..样品中所含待测菌的数量多时;稀释度应高;反之则低..通常测定细菌菌剂含菌数时;采用10-7、10-8、10-9稀释度;测定土壤细菌数量时;采用10-4、10-5、10-6稀释度;测定放线菌数量时;采用l0-3、10-4、10-5稀释度;测定真菌数量时;采用10-2、10-3、10-4稀释度..2．平板接种培养平板接种培养有混合平板培养法和涂抹平板培养法两种方法..1混合平板培养法将无菌平板编上10-7、10-8、10-9号码;每一号码设置三个重复;用无菌吸管按无菌操作要求吸取10-9稀释液各1ml放入编号10-9的3个平板中;同法吸取10-8稀释液各lml放入编号10-8的3个平板中;再吸取10-7稀释液各lml放入编号10-7的3个平板中由低浓度向高浓度时;吸管可不必更换..然后在9个平板中分别倒入已融化并冷却至45—50℃的细菌培养基图22-2;轻轻转动平板;使菌液与培养基混合均匀;冷疑后倒置;适温培养..至长出菌落后即可计数..2涂抹平板计数法涂抹平板计数法与混合法基本相同;所不同的是先将培养基熔化后趁热倒入无菌平板中;待凝固后编号;然后用无菌吸管吸取0.1ml菌液对号接种在不同稀释度编号的琼脂平板上每个编号设三个重复..再用无菌刮铲将菌液在平板上涂抹均匀图22-3;每个稀释度用一个灭菌刮铲;更换稀释度时需将刮铲灼烧灭菌..在由低浓度向高浓度涂抹时;也可以不更换刮铲..将涂抹好的平板平放于桌上20—30min;使菌液渗透入培养基内;然后将平板倒转;保温培养;至长出菌落后即可计数..回答人的补充 2009-11-09 23:10三、实验器材1．活材料：你的材料2．培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基附录三、13．器材：90ml无菌水、9ml无菌水、无菌平皿、lml无菌吸管、天平、称样瓶、记号笔、玻璃刮铲等..提问人的追问 2009-11-10 17:16还有关于高氏一号、马丁氏的吗求解..万分感谢回答人的补充 2009-11-10 18:17高氏1号培养基是分离和培养放线菌的合成培养基..这种培养基是由可溶性淀粉作为碳源;KNO3作为氮源;NaCl、K2HPO4·3H2O、MgSO4·7H2O作为无机盐;为微生物提供钠、钾、磷、镁、硫等离子和FeSO4· 7H2O作为微生物的微量元素;提供铁离子等组成..由于磷酸盐和镁盐相混合时产生沉淀;因此;在混合培养基成分时;一般是按配方的顺序依次溶解各成分..对于象FeSO4·7H2O这样的微量成分;则可预先配成高浓度的贮备液;在配制培养基时按需要加入一定的量..高氏1号培养基配方如下：可溶性淀粉 20gNaCl 0．5gKNO3 1gK2HPO4·3H2O 0．5g MgSO4· 7H2O 0．5g FeSO4·7H2O 0．01g琼脂 15—20g水 1000mlpH 7．4—7．6三、器材可溶性淀粉;KNO3;NaCl;K2HPO4·3H2O;MgSO4·7H2O; FeSO4·7H2O;琼脂; 1mol/L NaOH; 1mol/ LHCl；试管;三角烧瓶;烧杯;量筒;玻棒;培养基分装器;扭力天平;牛角匙;高压蒸汽灭菌锅;pH试纸pH5．5—9．0;棉花;牛皮纸;记号笔;麻绳;纱布等..四、操作步骤1．称量和溶化按配方先称取可溶性淀粉;放入小烧杯中;并用少量冷水将淀粉调成糊状;再加入少于所需水量的沸水中;继续加热;使可溶性淀粉完全溶化..再称取其他各成分依次逐一溶化..对微量成分FeSO4·7H2O可先配成高浓度的贮备液后再加入;方法是先在100ml水中加入1g的FeSO4·7H2O配成0．01g/ml;再在1000ml培养基中加入1ml的0．01g/ml的贮备液即可..待所有药品完全溶解后;补充水分到所需的总体积..马丁氏培养基是一种用来分离真菌的选择性培养基..此培养基是由葡萄糖、蛋白胨、KH2PO4、MgSO4·7H2O、孟加拉红玫瑰红;Rose Bengal和链霉素等组成..其中葡萄糖主要作为碳源;蛋白胨主要作为氮源;KH2PO4和MgSO4·7H2O作为无机盐;为微生物提供钾、磷和镁离子..而孟加拉红和链霉素主要是细菌和放线菌的抑制剂;对真菌无抑制作用;因而真菌在这种培养基上可以得到优势生长;从而达到分离真菌的目的..马丁氏培养基配方如下：KH2PO4 1gMgSO4·7H2O 0．5g蛋白胨 5g葡萄糖 10g琼脂 15－20g用蒸馏水定容至1000ml此培养液1000ml加1%孟加拉红水溶液3．3ml..由于链霉素受热容易分解;所以临用时;将培养基溶化后待温度降至45℃左右时才能加入..可先将链霉素配成1%的溶液;在100ml培养基中加1%链霉素液0．3ml;使每毫升培养基中含链霉素30μg..后面的步骤都是差不多的..像这些培养微生物的方法;只是在培养基的培制上有一点区别;其它方面都是差不多的..。