食品中甜味剂的测定(糖精钠)

实验分子荧光光度法测定样品中糖精钠含量一、实验目的1．了解分子的电子结构、振动结构和转动结构2. 掌握荧光光谱分析法的基本原理,学会利用工作曲线进行荧光定量分析的方法。

二、实验原理糖精作为人工合成甜味剂, 其学名为邻-磺酰苯甲酰亚胺,分子式为C7H5O3NS。

糖精为无色到白色结晶或白色晶状粉末,在水中溶解度很低,易溶于乙醇,乙醚,氯仿,碳酸钠水溶液及氨水中。

对热不够稳定,无论是在酸性还是在碱性条件下,将其水溶液长时间加热则逐渐分解而失去甜味。

因糖精难溶于水,故常用其钠盐,即糖精钠。

糖精钠的分子式为C7H4O3NSNa·2H2O,它为无色结晶,易溶于水,不溶于乙醚,氯仿等有机溶剂。

其热稳定性与糖精类似但较糖精要好,其甜度为蔗糖的200-700倍。

糖精钠已有80多年的使用历史, 并广泛用于食品、医药、日用化工等行业中。

糖精钠被摄入人体后,不分解,不吸收,将随尿排出,不供给热能,无营养价值。

但是近年来国内外一些学者对糖精钠的致癌问题有所争论, 尤其食用性及安全性越来越引起人们的重视, 因此我国对糖精钠的使用量做出严格的规定(国标中规定糖精钠用于饮料等食品, 其最大使用量为0. 15—5.0g/k g) 。

由此看来, 研究快速、高效的检测糖精钠的方法是十分必要的。

目前测定食品中糖精钠的方法很多, 国标中规定的测定方法有高效液相色谱法、薄层层析法和离子选择电极法。

文献报道的测定方法有: 比色法和紫外吸收分光光度法等。

前者中以高效液相色谱法最为理想, 后者中或需高温反应, 或需配置大量试剂, 其分析速度也较慢。

1. 荧光产生原理荧光是光致发光。

某种物质的分子受到紫外光的激发, 吸收光能后使电子发生能量跃迁, 从基态能级跃迁至激发态能级, 处于激发态的电子很不稳定, 经过很短的时间后会释放出能量, 即发出荧光,重新回到分子基态。

荧光的产生过程:2.糖精钠可以用荧光光度法定量测定。

对于稀溶液，在实验条件相同的情况下，同一物质的荧光强度与其浓度成正比。

糖精钠是最古老的甜味剂，又称可溶性糖精，是糖精的钠盐，带有两个结晶水，无色结晶或稍带白色的结晶性粉末，一般含有两个结晶水，易失去结晶水而成无水糖精，呈白色粉末，无臭或微有香气，味浓甜带苦。

糖精于1878年被美国科学家发现，很快就被食品工业界和消费者接受。

糖精的甜度为蔗糖的300倍到500倍，它不被人体代谢吸收，在各种食品生产过程中都很稳定。

8.29
广泛用于以下行业：
1、食品：一般冷饮、饮料、果冻、冰棍、酱菜类、蜜饯、糕点、凉果、蛋白糖等。

应用于食品工业及糖尿病患者作甜化饮食，普遍使用的人工合成甜昧剂。

2、饲料添加剂：猪饲料、香甜剂等
3、日化行业：牙膏、漱口水、眼药水等
4、电镀行业：电镀级糖精钠主要是用在电镀镍上，是作为光亮剂使用的。

加少量的糖精钠，可以提高电镀镍的光亮度和柔软性。

一般使用量每升药水用0.1--0.3克，其中电镀行业用量较大，出口总量占到中国产量的大部分。

检测标准如下：
DB37/T1104-2008食品中糖精钠的测定液相色谱-质谱法
GB/T23495-2009食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定高效液相色谱法
GB/T23746-2009饲料级糖精钠
GB4578-2008食品添加剂糖精钠
GB/T5009.28-2003食品中糖精钠的测定
服务范围：成分分析、物理性能、配方分析、成分鉴定、含量分析、纯度分析等。

科标化工分析检测，从事化工材料与制品性能测试、成分分析、配方研究的分析测试研发。

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科标化工以“专心、专业、专注“为宗旨，致力于实现研究和应用的对接，从而推动化工行业的发展。

066苯甲酸、山梨酸、糖精钠是常用的食品添加剂，也是衡量食品卫生质量的重要指标。

苯甲酸、山梨酸具有防腐保鲜的作用，糖精钠是合成甜味剂，甜度比蔗糖甜300－500倍。

GB2760－2016《食品安全国家标准 食品添加剂使用标准》对这三者的添加范围和限量都有明确的规定，超范围或者超限量使用都是违法的。

GB5009.28－2016《食品安全国家标准 食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定》对其检测方法做了规定，有高效液相色谱法和高效气相色谱法，其中高效液相色谱法为第一法仲裁法被广泛应用。

国标方法在使用前要进行方法验证，核查实验室能否满足检测方法的要求。

本研究针对高效液相色谱法测定食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的适用性、线性、检出限、定量限、加标回收率等进行了一一验证，均能够满足检测方法的要求。

一、仪器与试剂1.仪器。

高效液相色谱仪（紫外检测器，Y001），岛津LC－20AT；电子分析天平（Y033），BSA623S－CW，d ＝0.001g。

2.试剂。

苯甲酸钠标准品（唯一性标识3422003，纯度100.0％），北京坛墨质检科技有限公司；山梨酸标准品（唯一性标识3192003，纯度99.9％），北京坛墨质检科技有限公司；糖精钠标准品（唯一性标识3212005，纯度99.5％），北京坛墨质检科技有限公司；甲醇（色谱级），Aigma－Aldrich；乙酸铵（色谱级），aladdin；亚铁氰化钾、乙酸锌（分析纯），天津市天力化学试剂有限公司；实验室用水为自制超纯水。

二、实验与方法1.色谱条件。

（1）色谱柱：Diamonsil Plus 5um C 18，250×4.6mm；检测波长230nm；进样量10uL。

（2）流动相：甲醇＋乙酸铵溶液（0.02mol/L）＝5＋95；流速1mL/min。

高效液相色谱法测定食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的方法验证2.样品前处理。

准确称取约2g（精确到0.001g）试样于50mL具塞离心管中，加水约25mL，涡旋混匀，于50℃水浴超声20min。

食品中糖精钠含量快速分析方法的探讨近年来随着人们生活水平日益提高，对于食品安全性也越来越重视。

各种食品添加剂被广泛使用，特别是人工合成的添加剂越来越受到人们的关注，食品添加剂中的糖精钠作为甜味剂是用来增强食品的感官性状。

适当使用是允许的，但要求使用量应控制在最低有效量的水平，否则会给食品带来毒性，影响食品安全，危害人体健康。

糖精（2-benziso thiazol-3(2H)-one-1,1-dioxide）为白色粉末，化学名称为邻苯甲酰磺酸亚胺，其钠盐称做糖精钠或可溶性糖精，易溶于水，稀水溶液的甜味约为蔗糖的400-500倍，无营养价值。

目前，国内研究报告报道的我国食品中糖精钠检验方法的主要技术路线是高效液相色谱法、气相色谱法、薄层层析法，目前已有的高效液相色谱特异性较强，仪器多不普及加之分析方法繁琐、费时并耗用大量有机溶剂，使其应用受到限制。

所以在实际工作中我们引进应用次甲基蓝快速测定糖精钠地方法，该法的试剂、操作方法和实验条件简便，可以广泛用于基层在食品中的糖精钠的测定，而且操作简单、快速、灵敏度高。

1 材料与方法1.1 原理糖精钠在酸性缓冲溶液中可与次甲基蓝生成蓝色缔合物,被有机溶剂萃取进行定量测定。

1.2 仪器和试剂分光光度计;60ml 分液漏斗;磷酸氢二钠—柠檬酸缓冲溶液;0.01%次甲基蓝溶液;糖精钠标准溶液:准确称取1.0000g干燥纯糖精钠,溶解后加水至100ml ,临用时稀释成使用液;分析纯氯仿。

1.3 检测方法根据检样适当取量5～10ml（测定前除去二氧化碳、酒精等气体）于60ml分液漏斗中;②另取标准使用液溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml入分液漏斗中各加水至10ml;③于样品和标准系列中各加入缓冲溶液5ml 摇匀,加次甲基蓝溶液2ml摇匀,再各加氯仿10ml 振摇萃取,静止分层,氯仿层通过0.5g无水硫酸钠脱水,于722型分光光度计650nm波长,2cm比色皿,以零管调节零点,测定标准和样品的吸光度。

甘草水果中糖精钠、甜蜜素的测定及结果分析邱晓丹（广东省潮州市质量计量监督检测所，广东潮州 521011）摘 要：目的：提高景区特色美食的食品质量，规范生产。

方法：随机抽取景区10家小餐饮店的甘草水果样品10批次，进行糖精钠和甜蜜素的含量测定。

结果：有2批次的糖精钠和4批次的甜蜜素项目结果不合格，总不合格率为60%。

结论：景区小餐饮店甘草水果的甜味剂使用存在很多问题，需要加强监督，增加抽检次数，让商家引起关注，不断改善产品质量。

关键词：甘草水果；甜味剂；检测Determination and Result Analysis of Saccharin Sodium andCyclamate in Licorice FruitQIU Xiaodan(Chaozhou Quality Measurement Supervision and Testing Institute, Chaozhou 521011, China) Abstract: Objective: To improve the food quality and standardize the production of the characteristic food in scenic spots. Method: The contents of saccharin sodium and cyclamate were determined by sampling 10 batches of licorice fruit samples from 10 small restaurants in scenic spots. Result: There were 2 batches of sodium saccharin and 4 batches of cydoline project results were unqualified, the total unqualified rate was 60%. Conclusion: There are many problems in the sweetener use of licorice fruit in small restaurants in scenic spots, so it is necessary to strengthen supervision, increase the number of sampling inspections, let businesses attract attention, and constantly improve product quality.Keywords: licorice fruit; sweetener; test甘草水果是潮汕的一道特色街头美食，是在现切水果中加入特制的甘草汁、白砂糖、食盐，腌制而成的水果制品，酸甜可口。

白酒中糖精钠、安赛蜜、甜蜜素的分析方法1 范围1.1本方法规定了食品中糖精钠、安赛蜜、甜蜜素检验的制样和液相色谱-质谱法。

1.2本方法适用食品、固态化发酵酒及勾兑低度饮料性用白酒糖精钠、安赛蜜、甜蜜素等的测定。

2 引用文件本方法引用了GB/T5009.28-2003；SN/T1948-2007。

3 总则3.1本方法所采用名词术语和计量单位均符合国家相关标准的规定。

3.2本方法所用的液相色谱-质谱联用仪要按时检定，所用的移液管、刻度吸管、容量瓶、微型进样器等计量器具应按相关检定规程进行校正。

3.3本方法所用的试剂均为色谱纯（HPLC）或经0.22μL膜过滤、所用的水为实验室一级。

4 基本要求4.1分析样品应做平行试验，以实测数据报告其分析结果，不需要按酒精度折算，有效数字要与技术要求相一致。

4.2分析中所用器皿应先用溶剂浸泡并经过过超声处理，再用自来水冲洗干净，然后用实验室一级水冲洗。

5 原理白酒样品处理后,经液相色谱-质谱联用仪进行测定,采用多反应监测离子扫描模式(MRM),以碎片离子的丰度比定性,标准样品定量离子外标法定量。

6 仪器及器材液相色谱串联质谱仪：配有电喷雾（ESI）离子源、分析天平、真空泵及真空过滤器、100ml烧杯、25ml容量瓶、2ml样品瓶、25ml吸管等。

7 试剂7.1甲醇7.2水7.3甲酸或乙酸7.4标准溶液7.4.1糖精钠标准储备溶液准确称量糖精钠标准品100mg溶液于100mL的容量瓶内加水定容，即为1000mg/L标准储备溶液。

7.4.2安赛蜜标准储备溶液准确称取100mg安赛蜜加水定容至100mL，即为1000mg/L的标准储备溶液。

7.4.3甜蜜素标准储备溶液准确称取100mg甜蜜素加水定容至100mL，即为1000mg/L的标准储备溶液。

7.4.4糖精钠、安赛蜜、甜蜜素、阿斯巴甜混合标准溶液（100mg/L）7.4.4.1混合标准溶液：分别吸取以上糖精钠、安赛蜜、甜蜜素标准储备溶液各10mL于100mL 容量瓶加水定容，即为100mg/L的糖精钠、安赛蜜、甜蜜素混合标准溶液。

苯甲酸、山梨酸、糖精钠是衡量食品卫生质量的重要指标，苯甲酸、山梨酸的检测参照GB /T5009.29-2003，糖精钠的检测参照GB/T 5009.28-2003，即可开展实验。

苯甲酸、山梨酸、糖精钠虽是较常见的检测项目，但是要得到一个准确可靠的结果，也存在一定的难度，许多新手常出现因对方法理解发生偏差而检测出错的事故。

笔者根据自己多年该方面工作的实际经验出发，以苯甲酸、山梨酸为着重点，从样品前处理、检测仪器的选择、超标时的判断等几个易出问题的方面，进行了详细的阐述。

2 样品前处理的注意事项GB/T5009.28-2003和GB/T5009.29-2003 在文字结构上有缺陷，在涉及用仪器法测定苯甲酸、山梨酸、糖精钠时，只讲述了液体样品的前处理方法，没有涉及对固体样品的前处理。

食品样品往往含有大量的油脂、蛋白质，对提取极为不利；如处理不干净也会污染色谱柱，影响检测工作。

这类样品处理的关键在于如何找到一种较理想的沉淀剂，尽量排除待测样品中的油脂、蛋白质，且不影响待测物组分的回收率。

GB/T5009.29-2003使用5％硫酸铜溶液沉淀蛋白，对于蛋白质含量较低的食品尚可，对于豆粉、奶粉、月饼等高油脂、高蛋白样品则沉淀效果不理想。

如用10％钨酸钠溶液作为沉淀剂，效果好些；如用10％亚铁氰化钾溶液和20％醋酸锌溶液则效果更理想（这是笔者目前用过最理想的沉淀剂）。

具体操作步骤如下：取一定量样品，捣碎，利用四分法原理称取样品5.0 克于50ml比色管中，加水20ml，浸泡、振荡均匀，加入氢氧化钠溶液(1mol/L)1.0 ml，加入9.5mL10%亚铁氰化钾溶液，9.5 0mL 20%乙酸锌溶液，定容，振荡使其充分混匀后,用滤纸初滤除去沉淀物, 初滤液过0.45μm微孔滤膜,收集滤液于样品瓶中，样品处理液和标准有溶液各进样5uL测定。

用这种方法简单易行，接触有机试剂少，重复性和回收率都令人满意；缺点是一定要用液相色谱法检测，有一定局限。

文献综述摘要糖精钠（邻苯甲酰磺酰亚胺钠）是一种最古老的化学合成甜味剂，摄入后在体内不分解，随尿液排出，不能供给热能，对人体无营养价值[1]。

目前，糖精钠的检测方法主要有液相色谱法[2]、分光光度法[3]、荧光光度法[4]、薄层色谱法[5]、极谱法[6]和非水滴定法[7]、液膜电极法[8]等，但是这些方法操作复杂、灵敏度较低、耗时长。

少量糖精钠的存在可以使食品吸收峰增强，且吸光度的增强随糖精钠浓度的增大而增大，因此建立紫外分光光度法是测定糖精钠的新方法。

关键词糖精钠（邻苯甲酰磺酰亚胺钠）吸光度紫外分光光度法测定1 研究的目的和意义食品的添加剂有多种，例如维生素C、柠檬酸、苯甲酸、山梨酸、糖精钠等，了解食品添加剂的益处以及对人体的危害是非常重要的，下面对糖精钠的研究目的和意义进行分析。

1.1 研究的目的糖精钠是美国的法利德别尔格在一次偶然的机会中发现的。

糖精钠化学名为邻苯甲酰磺酰亚胺钠盐，其分子式为C7H4O3NSNa·2H2O，又称为可溶性糖精，是广泛应用于食品中的甜味剂，失去结晶水后为无水糖精钠，结构式为。

由于食用过量会对人体造成伤害，具有潜在的致癌性，基于安全性问题，应严格控制糖精钠的使用量，故需要寻求快速高效的测定糖精钠含量的新方法，对维护食品安全和人们的身体健康有重要的意义。

因此，开发一种高选择性，简单，安全的方法测定糖精钠的含量是迫不及待的。

1.2 研究的意义糖精钠（邻苯甲酰磺酰亚胺钠）主要用于调味剂、饮料和诊断用药，广泛用于化妆用品和电镀工业。

在食品行业中一般用于冷饮、饮料、凉果、果冻、蛋白糖等；饲料行业用作添加剂，例如香甜剂、猪饲料等；日化行业一般用于眼药水、牙膏等；电镀行业，电镀级的糖精钠主要用在电镀镍上，是作为光亮剂而使用的。

加入少量的糖精钠，可以提高电镀镍的柔软性和光亮性。

本实验的重点就在于探讨一种方法简便，测定结果准确的方法来测定食品中糖精钠的含量。

从而，为保护人类的健康，生命科学和环境的发展提供参考。

《白酒中甜蜜素、糖精钠、安赛蜜和三氯蔗糖四种甜味剂的测定方法液相色谱-串联质谱法》地方标准编制说明一、标准制定背景我院从2010年来承担了我省每年的白酒风险监测和监督抽查工作，发现生产企业违规添加甜味剂的检出率在2%左右，小作坊的检出率更高，白酒中滥用甜味剂已成为行业潜规则。

一些白酒生产企业为迎合消费者需求，在白酒中加入甜味剂以增加白酒的甜味和回甜感来改善口感，从而赚取高额利润。

在实际检测工作中发现现有国家标准针对不同甜味剂采用不同的检测方法，检测效率低，前处理较繁琐，且容易出现假阳性。

据报道目前我国白酒中甜味剂的添加呈现出多样少量的特点，企业加到白酒中的甜味剂仅需微量甚至痕量即可改善白酒的口感，因此传统的色谱法并不能有效地对白酒中的微量甜味剂进行监控。

本标准拟建立高效液相色谱-串联质谱法同时检测白酒中四种甜味剂，该检测手段拥有灵敏度高、特异性好等优点，通过同时检测改善目前检测工作繁琐低效的现状，大大提高工作效率，减少误判，准确定量。

2013年贵州省卫生厅组织了食品安全地方标准审评委员会专家组召开了评审会议，通过了《白酒中甜蜜素、糖精钠、安赛蜜和三氯蔗糖四种甜味剂的测定方法液相色谱-串联质谱法》地方标准的立项，项目批准文号为：黔卫函【2014】26号。

二、主要工作过程（一）标准起草小组的成立《白酒中甜蜜素、糖精钠、安赛蜜和三氯蔗糖四种甜味剂的测定方法液相色谱-串联质谱法》地方标准任务下达后，我院于2014年2月成立了以贵州省产品质量监督检验院、贵州茅台酒厂（集团）习酒有限责任公司两家单位组成的标准起草小组，对职责进行分工，确定工作计划，由贵州省产品质量监督检验院负责起草。

（二）收集资料及市场调研标准起草小组按标准的编制计划，组织技术人员对白酒中甜蜜素、糖精钠、安赛蜜和三氯蔗糖四种甜味剂的测定方法液相色谱-串联质谱法进行了方法资料查找收集，了解了目前我省白酒的生产情况，主要香型为酱香型白酒居多，同时生产的还有浓香型白酒、兼香型白酒、少量清香型白酒和普通白酒。