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丹参种质资源遗传多样性的AFLP分析温春秀;吴志明;田伟;刘铭;周巧梅;谢晓亮【期刊名称】《华北农学报》【年(卷),期】2007(022)0z2【摘要】对55份不同来源的丹参材料,采用扩增片段长度多态性(AFLP)标记,对丹参种质资源在DNA水平上进行遗传多样性研究,利用NTSYSpc 2.1软件采用非加权配对算术平均法(UPGMA)方法进行聚类分析和计算遗传距离,构建遗传系统进化树.筛选得到的6对引物的扩增片段具有丰富的多态性,丹参种质资源存在很大的遗传变异,它们之间的相似系数为0.23～0.76,聚类分析将丹参种质资源分为4个主要类群.丹参种质资源存在丰富的遗传多态性,AFLP聚类分析结果与表型特征不完全一致,可能是基因型和环境共同作用于表型的结果.【总页数】4页(P122-125)【作者】温春秀;吴志明;田伟;刘铭;周巧梅;谢晓亮【作者单位】河北省农林科学院经济作物所,河北,石家庄,050051;河北省农林科学院经济作物所,河北,石家庄,050051;河北省农林科学院经济作物所,河北,石家庄,050051;河北省农林科学院经济作物所,河北,石家庄,050051;河北省农林科学院经济作物所,河北,石家庄,050051;河北省农林科学院经济作物所,河北,石家庄,050051【正文语种】中文【中图分类】S567【相关文献】1.丹参种质资源遗传多样性的AFLP分析 [J], 温春秀;吴志明;田伟;刘铭;周巧梅;谢晓亮2.红麻种质资源遗传多样性和分子鉴定技术研究Ⅱ.红麻种质资源的遗传多样性和亲缘关系的AFLP分析 [J], 程舟;杨晓伶;卢宝荣;鲛岛一彦;陈家宽3.楸树优良种质资源的AFLP遗传多样性分析 [J], 李永涛;董玉峰;王振猛;张鹏远;王卫东;荀守华;秦光华;姜岳忠4.90份鳄梨种质资源AFLP遗传多样性分析 [J], 董美超; 岳建强; 杨帆; 李进学; 付小猛; 高俊燕; 周东果; 王绍华; 龙春瑞; 郭莉娜5.41份木槿种质资源的AFLP遗传多样性分析 [J], 窦霄;陈俊强;董章凯;刘红;段正洪因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
两种产地丹参样品的质量辨别分析高燕菁，林佳佳，张剑平，刘宝河【摘要】目的探讨红外指纹图谱用于丹参质量操纵的可行性。
方式通过对照含量测定及傅立叶变换红外光谱法，对两种产地丹参样品进行质量辨别分析，并对方式的可行性进行分析、探讨。
结果采纳红外指纹图谱法不但能够对丹参进行有效辨别，还能够判别各批次之间质量的相关性。
结论在实际工作中应把红外指纹图谱分析与基源辨别、性状辨别结合起来，力求把握中药整体质量信息。
同时也要从整体的视角，把现代科技研究中与质量有关的数据和信息，与中医药传统体会相结合，研究谱效关系，为完善红外指纹图谱法鉴定丹参药效打下基础。
【关键词】丹参；傅立叶变换红外光谱法；质量分析唇形科(Labiatae)连年生草本植物丹参Salvia miltiorrhizae Bge，是临床经常使用中药，主产于四川、山西、河北、江苏、安徽等省，具有祛瘀止痛、活血通经、清心除烦等功效，经常使用于心脑血管、癌症、中风、肝炎等疾病的医治及抗衰老养生保健作用。
我院丹参用量较大，通常利用的丹参出产于山东。
有时山东产地丹参供给不足，也会从河北进货。
由于两种产地的丹参样品外观有不同，为了保证临床用药的平安性和稳固性，有必要对我院2020年购进的两种产地丹参样品进行质量辨别，分析出二者化学信息特点的相关性，以提高中药房的质量治理水平。
最初，咱们按《中国药典》2005年版项下规定的含量测定方式，对这两个样品进行质量鉴定。
但那个方式需要利用高级仪器，操作复杂，花费高，目前我国绝大多数中药房都没有条件采纳。
因此，咱们后来尝试采纳红外指纹图谱法进行测定，证明能够通过FTIR光谱特点对这两个样品的质量予以辨别，值得推行和采纳。
1 材料与仪器药材本实验所搜集的两种产地丹参样品，是我院2020年度从卫仁饮片厂购入的丹参药材，别离为：丹参1（批号：1，产地山东）、丹参2（批号：1，产地河北）。
两批次饮片的大小、色泽均有些不同。
见图1～2。
丹参种质资源的遗传多样性研究丹参(Salvia miltiorrhiza Bge)是我国常用大宗药材,具有广泛的药理作用,药材使用量逐年增加。
随着丹参野生资源的数量逐年减少,栽培面积逐年增大,但是栽培丹参存在严重混杂现象。
目前丹参的种植主要集中于四川的中江、陕西、山东、河南、河北等地。
对各产地丹参种源进行遗传多样性和群体遗传结构分析,明确各产地丹参资源的遗传基础和亲缘关系,可为丹参资源的收集保存、分类鉴定、合理开发利用奠定基础,对解决当前丹参种质资源混杂和指导丹参品种选育具有重要的意义。
本研究以来自山东省内外的9个丹参居群为材料,从形态学、细胞学、分子生物学等方面对其形态性状、开花生物学及繁殖特点进行了鉴定和观测,对供试丹参资源各居群的遗传多样性及亲缘关系进行了分析,对11个丹参分离类型进行了产量和品质性状的评价,从中筛选出适于泰安种植的优良栽培类型。
获得的主要研究结果如下:1.通过对9个居群的丹参种质资源地上部性状分析证明,42个性状中叶柄颜色、叶柄长、叶长、叶宽、叶形指数等叶片性状、花色、花萼颜色、株高、冠幅、分枝数等在丹参种质资源中的多样性较大;其遗传多样性存在于居群内和居群间且两者变异程度相近。
通过各居群的遗传多样性比较发现,泰安地区的丹参居群多样性程度最高,菏泽和四川中江的丹参居群较低,其它居群的多样性指数比较接近;省间材料聚类分析结果表明,河南内乡与河南卢氏丹参居群的亲缘关系最近,山东泰安与其它居群的亲缘关系最远;山东省内潍坊与临沂居群的亲缘关系最近,菏泽与其它居群的距离最远。
42个性状聚类可分成6组,综合为7个主成分,其累积贡献率达70.17%;根据主成分分析的结果与性状间的相关性,选出影响力较大的16个性状,包括花部因子、茎部因子、叶部因子等地上部性状,可较好的代替42个性状用于种质聚类分析。
利用欧式遗传距离进行UPGMA聚类可将90个材料分为6个类群;根据主成分分析结果和各类群特点,提出了丹参的分类标准,该标准对今后丹参种质的评价具有一定的指导意义。
不同产地丹参药材的ISSR分析与鉴别徐红;王燕燕;魏丹红;王峥涛【期刊名称】《中药新药与临床药理》【年(卷),期】2007(18)6【摘要】目的对不同产地丹参药材的亲缘关系进行分析研究,建立具有鉴别意义的DNA指纹图谱。
方法采用ISSR分子标记对丹参药材的基因组DNA进行PCR扩增,利用NTSYS-pc2.1和POPGENE 1.32软件分析不同产地药材间的亲缘关系,构建树系图。
结果从66条ISSR引物中筛选出两条具有鉴别意义的多态性引物,在11个不同产地的丹参药材中共得到32位点,1条是单态的,31条是多态的,多态性位点达96.88%,遗传距离在0.1699～1.0678,平均为0.4712。
结论不同产地的丹参药材间遗传分化明显,具有丰富的遗传多样性,但是遗传分化与地理关系没有表现出相关性。
ISSR标记可以作为不同产地丹参药材鉴别的有效分子标记。
【总页数】4页(P454-457)【关键词】丹参;ISSR;鉴别;亲缘关系【作者】徐红;王燕燕;魏丹红;王峥涛【作者单位】上海中医药大学中药研究所中药标准化教育部重点实验室【正文语种】中文【中图分类】R284.1【相关文献】1.不同产地丹参药材中水溶性成分分析 [J], 安睿;王新宏;唐莹;张建中2.基于高分辨液质联用技术的不同产地鲜丹参药材品质分析 [J], 邵远洋;刘春生;王学勇;徐国杰;晋小雁;刘思琦;张弛;王娟;马双双;张彩娟;邱敏懿3.对不同品种、不同产地丹参药材中原儿茶醛及丹参素含量的比较分析 [J], 马家燕4.不同产地丹参药材HPLC指纹图谱分析及4种菲醌类成分含量的比较 [J], 袁晓;高俊飞;袁萍5.FT-IR和HPLC对不同产地大黄药材的鉴别分析 [J], 单家明;孟岩;李焐仪;熊豪;杨武亮因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
不同产地丹参药材质量研究摘要】目的：建立丹参药材多指标成分测定方法，综合评价不同产地来源丹参药材的质量。
方法采用HPLC法测定，DiamonsilC18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm），以乙腈（A）-0.05%磷酸水（B）为流动相，梯度洗脱（0～8min、10%～25%A；8～20min、25%A；20～25min、25%～40%A；25～35min、40%～100%A；35～40min、100%～10%A；40～45min、10%A），体积流量1.0mL/min，检测波长280nm，柱温30℃。
结果丹参素、迷迭香酸、丹酚酸B及丹参酮IIA分别在0.03712～0.5568mg/mL（r＝0.9971）、0.02204～1.102mg/mL（r＝0.9992）、0.277～8.31mg/mL（r＝0.9999）、0.01608～0.804mg/mL（r＝0.9997）线性关系良好，平均回收率分别为101.3%（RSD＝1.72%）、102.4%（RSD＝1.05%）、102.9%（RSD＝1.67%）、97.9%（RSD＝1.42%）。
结论：通过上述的实验我们可以知道，不同产地的丹参其药材的质量也存在着很大的不同，多指标成分测定方法其本身就具有非常好的重复性和可靠性，可以有效的对不同产地的丹参材料进行质量评价。
【关键词】丹参；不同产地；质量评价；多指标测定；丹参素；迷迭香酸；丹酚酸 B；丹参酮 IIA丹参主要由根茎和和干燥根组成，其本身是一种唇形科的植物，在《本草纲目》中对丹参产地有相关的记载，丹参在我国很多地区都有大面积的种植，出现这种现象的主要原因就是丹参的市场需求量非常大，并且野丹参资源现在已经濒临绝迹。
现在我国很多地区都已经建立了丹参的栽培基地，在我国丹参的养殖已经逐渐的形成了一种产业。
丹参的质量对丹参的药用价值有着非常重要的影响，在进行丹参种植的时候必须要不断提高丹参种植土壤得质量，只有这样培育出来丹参药材质量才能够得到提高，同时在进行丹参栽培的时候还必须要不断加强对丹参种植地形的重视度，本文采用HPLC的方法对14批不同产地的丹参进行研究，对这14种不同产地丹参的丹酚酸B和丹参酮ⅡA的相关含量进行研究，并对研究的结构进行对比讨论，希望能够进一步促进我国丹参产业的发展，让丹参药材的本身的药用价值能够得到提升。
·资源与鉴定·不同产地丹参功能基因表达水平对丹参酮类成分积累的影响李贝宁1，周晓丽1，黄璐琦2，王学勇1*，刘春生1*（1.北京中医药大学中药学院，北京100102；2.中国中医科学院中药研究所，北京100700）［摘要］目的：研究不同产地丹参功能基因表达水平与有效成分积累之间的关系，为揭示丹参药材质量差异的分子机制奠定基础。
方法：采用HPLC 测定不同产地丹参中隐丹参酮和丹参酮ⅡA 含量；采用自己建立的实时荧光定量PCR 方法，测定3个功能基因SmAACT ，SmCMK ，SmIPPI 的表达量，探讨功能基因表达水平与丹参酮类成分含量之间的相关性，分析丹参质量差异可能的分子机制。
结果：道地产区河南、山西产丹参中有效成分含量及SmAACT 与SmCMK 的表达水平相关系数相对较高，相关性明显，北京栽培丹参的这种相关性则较低。
结论：SmAACT ，SmCMK 基因表达水平与丹参酮类成分积累具有一定相关性，而SmIPPI 基因表达则对成分积累影响不大，说明丹参酮类成分的积累受上游途径SmAACT ，SmCMK 基因调控作用明显，SmAACT ，SmCMK 基因及其表达可作为丹参植物质量差异分析的分子靶标之一。
［关键词］丹参；功能基因表达；丹参酮；实时荧光定量PCR［稿件编号］20110630013［基金项目］国家自然科学基金项目（30801517）；北京市自然科学基金项目（7092056）［通信作者］*王学勇，副教授，Tel ：（010）84738625，E-mail ：wxyph.d@ ；*刘春生，教授，Tel ：（010）84738624，E-mail ：max_liucs@丹参Salvia miltiorrhiza Bge.中的丹参酮类化合物具有显著的抗肿瘤、抗菌抗炎等活性［1-3］，是丹参中的主要药效成分之一。
丹参酮类化合物属于二萜醌类成分，其生物合成主要由2条独立的合成途径完成，一条为胞质溶胶中的甲羟戊酸（MVA ）途径，另一条为质体中的丙酮酸/磷酸甘油醛（DXP ）途径［4］，其中DXP 途径被认为是丹参酮类成分生物合成的主要途径［10］。
山东丹参(Salvia miltiorrhiza)不同地理居群的遗传多样性宋振巧;王建华;王洪刚;王明明;解玉丽【摘要】以山东泰安、临沂、莱芜、菏泽和潍坊5个居群的72份丹参株系为材料,利用ISSR引物进行群体遗传结构的研究.结果表明: 8个ISSR引物在5个居群中共扩增出219个位点,平均可扩增出27条带,在种级水平及泰安、临沂、莱芜、菏泽和潍坊5个居群水平多态性位点百分比分别为98.63%、81.28%、66.67%、66.21%、51.14%和50.68%,种级水平的Nei基因多样性和Shannon信息指数大于各居群;5个居群Nei基因多样性和Shannon信息指数相比较,泰安＞临沂＞莱芜＞菏泽＞潍坊;根据基因分化系数,测得的基因流值Nm为4.2352;UPGMA聚类分析结果表明,莱芜居群和临沂居群遗传一致度最大,遗传关系最近,泰安居群与其它4个居群遗传关系最远;分析发现菏泽居群、泰安居群是相对独立的群体,但5个居群间存在部分基因交流.所有参数分析表明,泰安居群遗传多样性最丰富,故在制定原位种质保护计划时应优先考虑泰山周边地区的丹参.【期刊名称】《生态学报》【年(卷),期】2008(028)011【总页数】7页(P5370-5376)【关键词】丹参;ISSR标记;遗传多样性【作者】宋振巧;王建华;王洪刚;王明明;解玉丽【作者单位】山东农业大学农学院,泰安271018;山东农业大学农学院,泰安271018;山东农业大学农学院,泰安271018;山东农业大学农学院,泰安271018;山东农业大学农学院,泰安271018【正文语种】中文【中图分类】Q346丹参(Salvia miltiorrhiza)为唇形科鼠尾草属多年生植物丹参的干燥根及根茎，是我国传统名贵常用大宗中药材。
其有效成分主要为丹参酮ⅠA、丹参酮ⅡA和隐丹参酮等二萜醌类化合物。
丹参以根入药，具有镇静安神、消肿止痛、祛瘀生新、活血调经等功效[1]，主要用于治疗冠心病、心绞痛、月经不调、痛经、失眠、心悸等症，特别是在治疗心脑血管疾病方面疗效显著。
不同产地丹参遗传关系的DNA标记分析（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）作者：徐红，王燕燕，王峥涛，胡之壁【摘要】目的分析不同产地丹参的遗传背景与遗传关系，为丹参药材的栽培育种提供依据。
方法采用RAPD与ISSR标记对4个产地的野生丹参、6个产地的栽培丹参共计50个样本进行分析，利用分析软件计算遗传相似性，建立遗传聚类图。
结果DNA标记共检测了102个位点，多态条带比率（P）为95.10%，栽培丹参的P值高于野生丹参；居群的总遗传变异Ht为0.238 9；UPGMA聚类可以将不同来源的丹参很好地区分开来。
结论不同产地间的丹参存在丰富的遗传多样性，丹参种质在遗传背景上较为复杂，不同产地的丹参已出现明显的遗传分化，但是与地理分布没有相关性。
【关键词】丹参；遗传关系；DNA标记Abstract：ObjectiveTo study the genetic background and relationship of Salvia miltiorrhizae from different population, and provide reference for the seed selection andcultivation.MethodsGenetic relationship of total 4 wild populations and 6 cultivated populations of S. miltiorrhizae were investigated by ISSR and RAPD analysis, the genetic identity was analyzed by software Popgene 3.2 and the DNA molecular dendrogram was set up by the software NTSYSpc 2.1. ResultsA total of 102 markers with 95.10% polymorphic loci (P) were scored, and the number of P among cultivation population was higher than that of wild population. The Nei’s gene diversity index (Ht) was 0.238 9, and the dendrogram from the clustering of UPGMA showed the good classification of all populations.ConclusionS. miltiorrhizae from different population shows abundant genetic diversities, and their genetic background are complex. There are obvious genetic differentiations among different S. miltiorrhizae, but the genetic relationships did not show coherent with geographical distribution.Key words：Salvia miltiorrhizae; Genetic relationship; DNA molecular markers丹参Salvia miltiorrhiza Bge.为唇形科多年生草本植物，具有活血化瘀、消肿止痛、养心安神等功效，常被用于单方、成药、保健品及化妆品，是我国重要出口大宗药材之一。
近年来，随着野生资源的减少，野生丹参已远远不能满足临床用药需求，全国许多地区开始栽培丹参，目前栽培品成为丹参的主要来源。
但是由于丹参分布范围广，各栽培地区种源来源不同，以及长期无性繁殖导致的品种退化，给丹参的栽培和育种工作造成困难，同时也严重影响丹参的产量与药材的质量。
本研究利用RAPD与ISSR标记对不同产地的野生与栽培丹参的遗传变异进行分析，以期为丹参药材的引种栽培与科学选育提供科学依据。
1 仪器与材料1.1 材料分别收集于我国丹参药材的主产区四川、山东、江苏、陕西、安徽及山西等地的野生和栽培药材，见表1。
药材标本现存于上海中医药大学中药研究所，由吴立宏博士鉴定药材原植物学名。
1.2 仪器与试剂PTC-200型PCR仪（Bio-Rad, USA）；Image Master VDS (Pharmacia Biotech, USA)；PowerPac Basic Power Supply 100-120/220-240V(Bio-Rad, USA)；Nucleic Acid and Protein Analyzer (Beckman, USA)。
DNA GenRulerTM DNA Ladder Mix (MBI Fermentas, USA)，CTAB、β-巯基乙醇、Tris、EDTA、琼脂糖均为分析纯；ISSR引物与RAPD引物由上海生工生物技术服务公司合成。
表1 丹参材料及其来源（略）2 方法2.1 基因组DNA的提取与纯化参照Rogers的CTAB方法稍加改进提取基因组DNA［1］，并将基因组DNA用小量PCR产物纯化试剂盒(上海华舜生物工程有限公司)进行纯化处理，以除去丹参中影响PCR反应的色素及多酚类的次生代谢产物。
2.2 PCR-RAPD与PCR-ISSR分析优化的PCR-RAPD反应体系（10 μl）含10×PCR buffer 1 μl，MgCl2 (25 mmol/L)0.8 μl，dNTP mix (10 mmol/L)0.3 μl，RAPD引物1.5 μl（10 pmol/L），Taq DNA polymerase (5U/μl) 0.15 μl，模板溶液1 μl（5～10 ng），ddH2O适量。
反应参数：①94 ℃预变性5 min; ②94 ℃变性45 s; ③36 ℃复性45 s; ④72℃延伸2 min; ⑤重复②～④步骤共37个循环; ⑥72℃保温5 min。
优化的PCR-ISSR反应体系（10 μl）含10×PCR buffer 1 μl，MgCl2 (25 mmol/L)0.8 μl，dNTP mix (10 mmol/L)0.3 μl，ISSR引物1.5 μl（10 pmol/L），Taq DNA polymerase (5U/ul) 0.12 μl，模板溶液1 μl（5 ng/μl），ddH2O适量。
反应参数：①94 ℃预变性5 min; ②94 ℃变性45 s; ③52 ℃复性45 s; ④72℃延伸2 min; ⑤重复②～④步骤共37个循环; ⑥72℃保温5 min。
PCR扩增结束后，以标准DNA GenRulerTM DNA Ladder Mix为分子量标记，用含有0.1% 溴化乙锭的1.5%琼脂糖凝胶电泳PCR产物，电泳缓冲液为0.5×TBE，在5V/cm稳定电压的条件下，电泳1.5 h，电泳结束后在凝胶成像系统下观察并照相保存DNA指纹图谱。
2.3 数据统计与分析同一引物PCR扩增产物电泳迁移率一致的条带被认为有同源性，按条带有无分别记录为1（有）或0（无），形成原始的表型数据矩阵用于进一步数据处理。
用POPGENE1.31与NTSYS-pc (version 2.1)分子进化软件对遗传变异进行分析，以多态条带比率P（Percentage of polymorphic loci，多态性位点除以总位点数）与基因多样性指数（居群的总遗传变异，Ht）衡量遗传多样性，以遗传距离（Genetic distance）、遗传一致性（genetic identity）与UPGMA（非加权配对算术平均法，unweighted pair group arithmetic averages method）聚类分析进行遗传关系的分析。
3 结果3.1 野生与栽培丹参的遗传多样性丹参10个产地的共计50个样本，用筛选的6个RAPD引物与2个ISSR引物进行PCR扩增，共扩增出102条重复性高、清晰的条带，扩增片段的长度从200 bp 至2000 bp，其中多态性条带97条，多态条带比率（P）为95.1%，基因多样性指数Ht为0.238 9。
6个产地栽培丹参的P值为85.29%，其中产于安徽亳州（S-AHBZ）的遗传多样性最高，P值为21.57%，产于江苏射阳（S-JSSY）的遗传多样性最低，P值为3.92%；4个产地野生丹参的P值为60.78%，产于陕西（S-SX）的遗传多样性最高，P值为16.67%，产于山东（S-SD）的丹参遗传多样性最低，P 值为3.57%（表2）。
该结果表明不同产地的丹参供试材料的遗传背景不同，存在丰富的遗传多样性，且多态条带比率与基因多样性指数表现出的变化趋势一致；用RAPD与ISSR进行PCR扩增，可以清晰、有效地分辨出不同居群样本的基因型，其中ISSR引物UBC835与UBC856可以将不同产地的丹参区分鉴别。
表2 不同产地丹参野生与栽培药材RAPD与ISSR标记的遗传变异（略）3.2 不同产地丹参的遗传分化根据POPGENE计算不同产地丹参间Nei无偏遗传距离与遗传一致性见表3。
10个产地的丹参间，产自山西运城的丹参（S-SXYC）与来自江苏滨海的丹参（S-JSBH）的遗传距离最小，为0.099 6；而来自山西运城的丹参（S-SXYC）与来自山东的丹参（S-SD）的遗传距离最大，为0.377 7；遗传一致性正好与遗传距离相反，遗传距离最小的两个产地的丹参，遗传一致性表现的最大，S-SXYC与S-JSBH之间的遗传一致性最大，为0.905 2，表明它们之间的亲缘关系最近。
江苏3个产地居群的遗传一致性介于0.826 7与0.838 9之间，平均0.833 9；山东3个产地的丹参遗传一致性介于0.689 8与0.808 8之间，平均0.759 7，表明不同产地的丹参间存在明显的遗传分化。
根据遗传距离，采用NTSYSpc2.1中的SHAN，用UPGMA 法进行聚类分析（图1），从图中可以看出，利用两种分子标记可以将本实验供试样品完全区别开，10个产地的丹参被划分为3个遗传聚类组，其中安徽亳州（A-AHBZ）、山西运城（S-SXYC）与江苏滨海（S-JSBH）的丹参聚为一组，四川中江（S-SCZJ）、山东（S-SD）与陕西（S-SX）的丹参聚为一组，其余5个产地的丹参聚为一组。
