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第三节 动物的克隆1.幼龄动物组织用胰蛋白酶处理 ――――――――→细胞悬浮液―→原代培养―→传代培养。
2．细胞株与细胞系(1)细胞系：原代培养细胞首次传代时就成为细胞系。
分为有限细胞系和连续细胞系两类。
(2)细胞株：从原代培养物中或细胞系中获得的具有特殊性质的细胞称细胞株。
也分为有限细胞株与连续细胞株。
3．克隆培养法把一个细胞培养为一个新的细胞群体的技术叫克隆培养法。
这样培养获得的细胞群叫纯系。
4.培养条件⎩⎪⎨⎪⎧ 无菌、无毒的环境营养需要：适宜的培养基、添加血清、激素胰岛素、 CO 2气体环境、调节pH 及滋养细胞等 条件1．把动物组织块分散成单个细胞所用的胰蛋白酶能否换成胃蛋白酶？【提示】 不能。
因为胃蛋白酶的最适pH 呈酸性，环境不适合。
2．为什么细胞系或细胞株中有些细胞可无限传代？这些细胞为癌细胞吗？【提示】 这些细胞往往有异倍体核型，使其能够无限传代。
能够无限传代的细胞有的仍保留接触抑制现象，一般不是癌细胞。
⎩⎪⎨⎪⎧⎭⎪⎬⎪⎫B 淋巴细胞能产生抗体骨髓瘤细胞能无限增殖――――――→用灭活的病毒诱导细胞融合并筛选 多种杂种细胞――→细胞培养筛选能产生专一抗体的且可无限增殖的细胞群。
2．单克隆抗体的获得⎩⎪⎨⎪⎧ 体外培养：从细胞培养液中提取抗体体内培养：从动物腹水中提取抗体3．应用 在疾病诊断、治疗与预防方面与常规抗体相比具有特异性强、灵敏度高的特点。
单抗可作为特异探针，研究相应抗原蛋白的结构、细胞学分布及其功能。
3．单克隆抗体生产中两次筛选的目的有何不同？【提示】 第一次筛选为了选出杂交瘤细胞，第二次筛选是从杂交瘤细胞中选出能产生单一抗体的杂交瘤细胞。
1.过程2．动物克隆成功证明了(1)高度分化细胞经一定技术处理，也可回复到类似受精卵时期的功能。
(2)在胚胎和个体发育中，细胞质具有调控细胞核(包括异源细胞核)发育的作用。
3．克隆的意义(1)为遗传病的治疗、优良品种的培育等提供了重要途径。
选修3 动物的克隆（动物细胞工程） 导学一、动物细胞工程的理论基础是： ，动物细胞工程包括：二、动物细胞培养：1、动物细胞培养条件：培养基状态及特殊成分： 取材：胰蛋白酶在动物细胞培养中的作用：①②2、动物细胞培养的过程：动物胚胎或幼龄动物器官、组织单个细胞细胞悬浮液 10代细胞 50代细胞 ……3、在动物细胞、组织培养过程中， 处理组织获得分散单个的动物细胞。
4、传代培养是指将＿＿＿＿＿＿＿＿分成若干份，接种到若干培养基中，使其继续＿＿＿＿＿。
5、细胞系是指＿＿＿＿＿＿ ＿＿的细胞。
6、有限细胞系和连续细胞系的主要区别是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。
7、细胞株是指从＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿中获得的具有＿＿＿＿＿的细胞。
细胞株的特性是 ；细胞株是具有＿＿＿＿＿＿的细胞系。
8、动物细胞培养的应用：①__________________________；②__________________________；③检测有毒物质毒性大小，原理是_______________________________。
9、植物组织培养和动物细胞培养的比较三、动物细胞融合（细胞杂交）1.概念：指 或 动物细胞结合形成一个细胞的过程，也称细胞杂交。
2、动物细胞融合原理： 。
3、细胞杂交：4.诱导动物细胞融合的方法：物理方法化学方法生物方法 。
5.动物细胞融合的重要用途：四、单克隆抗体1．概念：由单一B 淋巴细胞进行无性生殖形成的细胞所产生的化学性质单一、特异性强的抗体。
（剪碎、 酶 等等2.抗体：产生的，化学本质为，具有特异性。
但是每一个B淋巴细胞只分泌。
因此，要想获得大量的，必须克隆，形成。
从血清中分离出的抗体、纯度低、特异性差。
3、单克隆抗体的制备（1）过程：第一步：将注射到小鼠体内进行免疫；第二步：从该小鼠脾脏中获得能够产生抗体的细胞，与小鼠的细胞在或聚乙二醇的诱导下融合；第三步：在特定的培养基中，筛选出细胞；第四步：培养杂交瘤细胞，从中挑选出的细胞群，继续培养；第五步：将该杂交瘤细胞在体外条件下大规模培养或注射到小鼠内增殖，然后再分离纯化单克隆抗体；（2）B淋巴细胞的特点：，缺点：骨髓瘤细胞的特点：。
第三节动物的克隆一、关于动物细胞工程的一些问题讨论：1、用胰蛋白酶处理细胞以获得单个细胞的过程中胰蛋白酶是怎么起作用的？胰蛋白酶为什么不会把细胞消化掉？答：细胞外含有多种胞外蛋白，如胶原蛋白等，使细胞间或细胞与培养瓶内壁粘连起来。
胰蛋白酶有消化作用，胰蛋白酶处理动物组织，可以使动物组织细胞间的胶原纤维和细胞外的其他成分酶解，获得单个细胞。
处理时间长了的话胰蛋白酶对细胞也是有损害的，胰蛋白酶的处理时间一般控制在一分钟左右，不然所处理的组织细胞就会死亡。
2、动物细胞培养液中加血清的作用是什么？答：由于动物细胞生活的内环境还有一些成分尚未研究清楚，所以需要加入动物血清以提供一个类似生物体内的环境，此外动物血清中也包含了一些动物的激素和酶，可以促进细胞的发育。
3、美国和日本的两个研究小组2007年11月20日分别发表论文，宣布成功把普通的人体皮肤细胞转化为了具备胚胎干细胞功能的新型“万能细胞”。
万能细胞到底是什么细胞？它的克隆成功有什么意义？答：两个研究小组都是从人体中提取了一种名为“纤维原细胞”的皮肤细胞，然后向其中植入4种新基因，从而制造出一种名为IPS的细胞，它具有类似胚胎干细胞的功能，能够最终培育成人体组织或器官。
“万能细胞”的意义在于它跨越了伦理障碍：干细胞是未分化的原始细胞，通常分为三类，即全能干细胞、多能干细胞和专能干细胞。
其中，全能干细胞主要就是胚胎干细胞。
如果与克隆技术相结合，胚胎干细胞便可发展成遗传特征与病人完全吻合的细胞、组织或器官，以前器官移植治疗方法中经常出现的排异反应问题因此而得到了彻底解决，血细胞、脑细胞、骨骼和内脏等都将可以更换，白血病、帕金森氏症、心脏病等顽疾也有望得到有效治疗与治愈。
一直以来，如果想要获得人类胚胎干细胞，就必须损坏人类胚胎，这一点颇受非议。
这次人体皮肤细胞“直接改造”技术跨越伦理障碍。
4、利用动物细胞技术大规模生产抗体等产品的反应器是否与微生物反应器完全相同？答：由于动物细胞与微生物细胞有很大差异，传统的微生物反应器显然不适用于动物细胞的大规模培养。
第二章克隆技术一、课标内容1．简述植物的组织培养。
2．简述动物的细胞培养与体细胞克隆。
3．举例说出细胞融合与单克隆抗体。
二、教学要求第一节什么是克隆（选学）第二节植物的克隆第三节动物的克隆三、教学建议1．课时建议（共计9课时）（1）“第二节植物的克隆”的教学重点是植物细胞的全能性、植物组织培养程序和植物细胞工程；教学难点是植物组织培养程序。
在教学过程中可运用启发式教学，激励学生主动去探索，在探究过程中体验科学研究与发展的本质。
教师要注意激发学生的创新思维和创造能力，注意提高学生的批判性思维。
由于学生在必修模块中已经学习过有关细胞全能性及细胞分化的知识，因而可利用必修内容中的实例“胡萝卜根的组织培养”引导学生思考，接下来以图文结合的形式介绍植物组织培养的基本过程、概念、已取得的进展和尚未解决的问题，使学生认同科学是一个不断发展的过程，激发学生探索生命科学奥秘的兴趣。
（2）“第三节动物的克隆”的教学重点是动物细胞组织培养、细胞核移植和动物的克隆繁殖；教学难点是细胞株系、细胞核移植和动物的克隆繁殖。
在讲授有关“动物的克隆”的有关内容时，由于已经有“植物的克隆”为基础，学生易于理解，因此可以讲授为主，辅之与自学、指导、讨论、探究等相结合的教学方式。
重点围绕三个问题：为什么要进行动物细胞的培养？什么是动物细胞的培养？怎样进行动物细胞的培养？明确动物细胞培养的过程及条件，区分原代培养与传代培养的概念。
动物体细胞核移植技术及克隆动物，既是动物细胞工程的重点内容，又是近几年来的热点问题，学生对此有一定的了解，如何做到在原有基础上提高呢？可从动物体细胞核移植技术在克隆动物中的作用——克隆动物的核心技术介绍，使学生在学习及思维的过程中对核移植技术有较深入地理解。
《动物的克隆》教学设计一、教学目标1、知识目标（1）了解动物克隆的概念和基本原理。
（2）掌握动物克隆的主要技术流程，包括核移植、细胞培养等。
（3）认识动物克隆技术的应用领域和意义。
2、能力目标（1）通过学习动物克隆的技术流程，培养学生的逻辑思维和分析问题的能力。
（2）通过小组讨论和案例分析，提高学生的合作交流和解决实际问题的能力。
3、情感态度与价值观目标（1）引导学生关注生物科学技术的发展，培养学生对科学研究的兴趣和探索精神。
（2）使学生认识到动物克隆技术在造福人类的同时，也需要遵循伦理道德规范。
二、教学重难点1、教学重点（1）动物克隆的基本原理和主要技术流程。
（2）动物克隆技术的应用和意义。
2、教学难点（1）核移植技术的操作过程和原理。
（2）对动物克隆技术所引发的伦理道德问题的思考。
三、教学方法讲授法、讨论法、案例分析法、多媒体演示法四、教学过程1、课程导入（5 分钟）通过播放一段关于克隆羊多利诞生的视频，引起学生的兴趣，提问学生对克隆的初步认识，从而引出本节课的主题——动物的克隆。
2、知识讲解（20 分钟）（1）动物克隆的概念简单介绍克隆的定义，强调动物克隆是指通过无性繁殖的方式产生与亲本具有相同遗传物质的后代。
（2）动物克隆的基本原理讲解动物克隆的原理是细胞核的全能性，即一个细胞核包含了生物体全套的遗传信息，在一定条件下能够发育成完整的个体。
（3）动物克隆的主要技术流程以克隆羊多利为例，详细讲解核移植技术的操作过程，包括供体细胞的准备、受体细胞的去核、细胞核的移植、重构胚的培养和移植等步骤。
同时，介绍细胞培养技术在动物克隆中的重要作用。
3、小组讨论（15 分钟）将学生分成小组，讨论以下问题：（1）动物克隆技术有哪些优点和潜在的风险？（2）动物克隆技术在农业、医学和保护濒危物种等方面有哪些应用？（3）如何看待动物克隆技术所引发的伦理道德问题？每个小组推选一名代表进行发言，教师进行总结和点评。
第二章第三节动物的克隆第二课时教案【教学目标】知识目标1.说出动物细胞融合技术的概念、原理及方法2.区分细胞融合与细胞杂交3.简述单克隆抗体的制备过程方法目标：1.利用相近事物的比拟，提高学生比照分析的能力情感态度价值观目标：1.通过对动物的细胞融合技术开展历史的了解，认同科技的进步需要不断地开拓进取，坚持不懈地努力。
【教学重难点】教学重点：1.说出动物细胞融合技术的概念、原理及方法2.区分细胞融合与细胞杂交3.简述单克隆抗体的制备过程教学难点【学情分析】这一节内容选自必修3?现代生物科技专题?第二章克隆技术第三节动物的克隆第二课时。
本节课的主要内容为动物的细胞融合技术及其应用——单克隆抗体的制备，结合了上一节细胞培养技术和克隆培养法，将学生所学的原理与技术运用于实践之中。
本次教学的对象是温州第五十八中高二〔2〕班的学生，该班学生的学习习惯较好，，上课注意力比拟集中根底知识相对扎实，知识的应用能力有待加强。
【教学活动】导入展示癌症小资料：世界卫生组织〔WHO〕预测21世纪恶性肿瘤将成为人类“第一杀手〞。
中国已成为世界第一癌症大国，年新发病例约160万，死亡达130万，现癌症病人200多万，平均每死亡5人中，就有一人死于癌症。
癌症不仅严重威胁我国人民的生命与健康，而且给家庭、社会、国家造成了沉重的负担。
问：癌症的可怕之处〔癌细胞可无限增殖，易转移〕小资料：癌症治疗常用手段：手术、中医、化疗、放疗等缺点：无法铲除，“伤及无辜〞〔由“伤及无辜〞过渡到生物导弹〕生物导弹：由单克隆抗体与药物、酶或放射性同位素配合，因带有单克隆抗体而能自动导向，精确地瞄准和捕获靶细胞〔癌细胞〕，与之结合，并由其携带的药物产生治疗作用。
这种特异性导向作用，与抗体有关，请同学回忆抗体相关知识：抗体：免疫中，由分泌，能特异性识别抗原并与之结合的Y型蛋白质。
传统的抗体生产方法是向动物体内反复注射某种抗原，使动物产生抗体，然后从动物血清中别离所需要的抗体。
第二章克隆技术第三节动物的克隆动物克隆技术的基础是动物的细胞和组织培养，细胞培养主要是体外人工培养方法进行实验。
细胞全能性的揭示、细胞周期调节控制机理的分析、癌变机理和衰老原因的研究，都与细胞培养技术密不可分。
一、动物细胞的培养和克隆形成1．动物细胞、组织培养进行动物细胞培养时，首先将组织块剪碎，用机械法或胰酶处理，使其分散成许多单个细胞，然后，在人工控制的条件下，使这些细胞生存和生长、分裂乃至接触抑制和有规律的衰老、死亡等生命活动现象。
由于细胞培养中，细胞之间并非彼此独立而是在生命活动中相互依存，所以在某种程度上像体内一样呈现一定的组织特性。
(2)动物组织培养的含义(3)动物细胞、组织培养的关系①二者在离体情况下，都能培养并表现正常的生命活动；②不同点是，动物组织培养在得到离体组织后，需要机械处理或胰蛋白酶处理得到分散的细胞再进行细胞培养，同时动物组织培养过程中可以伴随组织分化。
2．动物组织培养技术的发展(1)发展简史及近况①萌芽时期在19世纪，1885年，鸡神经板在生理盐水中培养成活。
②1903年，皮肤及白细胞培养在腹水及血清中细胞存活时间长达1个月。
③1907年真正的组织培养开始，并在蛙胚神经管培养中看到了神经纤维末端的阿米巴运动。
(2)动物组织培养的流程取动物组织块→剪碎组织→用胰蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养液中进行原代培养→贴满瓶壁的细胞用胰蛋白酶处理分散成单个细胞，制成细胞悬液→转入培养液中进行传代培养→放入二氧化碳培养箱中培养。
原代培养的细胞生长比较缓慢，而且繁殖一定的代数后(一般10代以内)停止生长，需要重新更换培养基。
②传代培养：将原代培养的细胞从一个培养瓶转移到另一个培养瓶，叫传代培养。
有时也把最初的若干次传代培养归入原代培养范围。
正常细胞培养时，细胞传到一定代数便会衰老、死亡，不能无限制地传下去，但有些突变和转化的细胞却无限传代。
如HeLa细胞系就是1951年从一位黑人宫颈癌患者的癌细胞培养至今而形成的肿瘤细胞系。
第6课时动物的克隆(Ⅱ)[学习目标] 1.简述动物的细胞融合技术及应用。
2.描述动物细胞全能性的表现程度，说出动物难以克隆的缘由。
3.简述动物细胞核移植的概念和程序。
4.列举动物细胞培育与动物细胞核移植的应用和发展前景。
一、动物的细胞融合技术及其应用1.细胞融合与细胞杂交(1)细胞融合①含义：指两个或多个细胞融合成一个细胞的现象。
②促融方法：灭活的仙台病毒、聚乙二醇介导、电融合技术等，其中电融合技术是效率很高的新型细胞融合技术。
(2)细胞杂交①概念：基因型不同的细胞间的融合。
②应用：细胞杂交中染色体简单丢失，利用杂交细胞检测特定染色体丢失与特定基因产物(蛋白质)削减的对应关系可进行基因定位。
2.单克隆抗体的制备(1)过程(2)杂交瘤细胞的特点：无限增殖，产生单克隆抗体。
(3)单克隆抗体的优点：其识别抗原部位的专一性，比一般抗血清优越得多，缘由是一般抗血清中的抗体是一群识别不同抗原部位的抗体混合物。
(4)单克隆抗体的应用：单抗可作为特异探针，探讨相应抗原蛋白的结构、细胞学分布及其功能。
特殊提示单克隆抗体与血清抗体比较项目分泌细胞特点生产单克隆抗体杂交瘤细胞特异性强、灵敏度高产量高，易纯化分别血清抗体各B淋巴细胞特异性差、灵敏度低产量低，分别困难例1单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后，要用特定培育基筛选出杂交瘤细胞。
在这种培育基上不能存活增殖的细胞是( )①B淋巴细胞②小鼠骨髓瘤细胞③B淋巴细胞自身融合细胞④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞⑤杂交瘤细胞A.①②③④B.①③⑤C.②④D.①③答案 A解析单克隆抗体的制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞融合时，有以下三种状况：未发生融合的细胞(B淋巴细胞、小鼠骨髓瘤细胞)；自身融合的细胞(B淋巴细胞自身融合、小鼠骨髓瘤细胞自身融合)；骨髓瘤细胞与单个B淋巴细胞融合的杂交瘤细胞。
杂交瘤细胞是制备单克隆抗体必需的，因此要将其筛选出来。
例2(2024·衢州高二检测)如图为制备单克隆抗体的流程。
浙科版生物选修3第三节《动物的克隆》学案【学习目标】1．简述动物细胞组织培养与体细胞克隆。
2．说出动物组织培养技术的发展历程。
3．描述细胞系及细胞株的含义。
4．简述动物的克隆培养法。
5．描述动物细胞全能性的表现程度，说出动物难以克隆的原因。
6．简述动物细胞核移植的概念和核移植的程序7．列举动物细胞培养与动物细胞核移植的应用和发展前景。
【学习过程】1．阅读课文，观看视频，总结动物细胞培养的流程。
234植物体细胞杂交56．阅读课文，总结克隆羊多莉的诞生过程。
【知识梳理】过程：原代培养、传代培养动物细胞培养应用：生产产品、组织器官、进行细胞生理病理研究动物的克隆动物细胞培养与植物组织培养的比较：培养基、培养结果、培养目的原理：膜的流动性方法：物理法、化学法、生物法动物细胞融合应用：单克隆抗体单克隆抗体的制备：已免疫的B细胞杂交瘤细胞→单克隆抗体动物细胞的全能性：全能→多能→单能动物的克隆繁殖动物难以克隆的原因：细胞基因的差异表达细胞核移植：克隆羊多莉【典题解悟】1．关于细胞全能性的理解不确切的是A．大量的科学事实证明，高度分化的植物体细胞仍具有全能性B．细胞内含有个体发育所需的全部基因是细胞具有全能性的内在条件C．通过植物组织培养得到的试管苗，是植物细胞在一定条件下表现全能性的结果D．通过动物细胞培养获得细胞株或细胞系，证明了动物体细胞也具有全能性解析：所谓细胞的全能性，强调从一个细胞最终形成一个完整的个体的过程，从结果来看，动物细胞培养只能获得细胞株或者细胞系，即得到更多的细胞而不是个体，所以，动物细胞培养不能说明动物细胞具有全能性。
故选D。
2．植物体细胞杂交和动物细胞融合比较，正确的是A．诱导融合的方法完全相同 B．所用的技术手段基本相同C．所采用的原理完全相同 D．都能形成杂种细胞解析：由于动物细胞全能性表达的特殊性，动物细胞融合后的杂种细胞通过筛选和培养只能获得细胞系或者细胞株，而不能获得个体，所以两者的共同点在于都能形成杂种细胞。
第三节动物的克隆1.幼龄动物组织用胰蛋白酶处理――――――――→细胞悬浮液―→原代培养―→传代培养。
2．细胞株与细胞系(1)细胞系：原代培养细胞首次传代时就成为细胞系。
分为有限细胞系和连续细胞系两类。
(2)细胞株：从原代培养物中或细胞系中获得的具有特殊性质的细胞称细胞株。
也分为有限细胞株与连续细胞株。
3．克隆培养法把一个细胞培养为一个新的细胞群体的技术叫克隆培养法。
这样培养获得的细胞群叫纯系。
4.培养条件⎩⎪⎨⎪⎧无菌、无毒的环境营养需要：适宜的培养基、添加血清、激素胰岛素、CO2气体环境、调节pH及滋养细胞等条件1．把动物组织块分散成单个细胞所用的胰蛋白酶能否换成胃蛋白酶？【提示】不能。
因为胃蛋白酶的最适pH呈酸性，环境不适合。
2．为什么细胞系或细胞株中有些细胞可无限传代？这些细胞为癌细胞吗？【提示】这些细胞往往有异倍体核型，使其能够无限传代。
能够无限传代的细胞有的仍保留接触抑制现象，一般不是癌细胞。
⎩⎪⎨⎪⎧⎭⎪⎬⎪⎫B 淋巴细胞能产生抗体骨髓瘤细胞能无限增殖――――――→用灭活的病毒诱导细胞融合并筛选 多种杂种细胞――→细胞培养筛选能产生专一抗体的且可无限增殖的细胞群。
2．单克隆抗体的获得⎩⎪⎨⎪⎧ 体外培养：从细胞培养液中提取抗体体内培养：从动物腹水中提取抗体3．应用在疾病诊断、治疗与预防方面与常规抗体相比具有特异性强、灵敏度高的特点。
单抗可作为特异探针，研究相应抗原蛋白的结构、细胞学分布及其功能。
3．单克隆抗体生产中两次筛选的目的有何不同？【提示】 第一次筛选为了选出杂交瘤细胞，第二次筛选是从杂交瘤细胞中选出能产生单一抗体的杂交瘤细胞。
1.过程2．动物克隆成功证明了(1)高度分化细胞经一定技术处理，也可回复到类似受精卵时期的功能。
(2)在胚胎和个体发育中，细胞质具有调控细胞核(包括异源细胞核)发育的作用。
3．克隆的意义(1)为遗传病的治疗、优良品种的培育等提供了重要途径。
(2)对物种的进化、濒危动物的保存及对转基因动物的扩群有重要意义。
(3)丰富了人们的物质生活。
(4)缩短育种年限，提高生产效率。
1．细胞株是具有特殊性质(如病毒敏感性、生化特性)的细胞系。
(√)2．有限细胞系易于克隆。
(×)【提示】 有限细胞系不易克隆。
相反，无限细胞系易于克隆。
3．动物细胞杂交可利用物理、化学方法进行介导。
(√)4．制备单克隆抗体时使用的免疫细胞为T 淋巴细胞。
(×)【提示】 应为B 淋巴细胞。
5．“多莉”的性状与提供乳腺上皮细胞的6岁母羊完全相同。
(×)【提示】“多莉”的性状酷似6岁母羊。
6．低等动物的全能性一般较易体现。
(√)①动物细胞培养的具体过程如何？动物细胞培养与植物组织培养主要有什么区别？②什么是原代培养？什么是传代培养？分别有什么特点？③细胞株和细胞系有何区别与联系？1．过程动物组织块――→胰酶等分散成单个细胞―→制成细胞悬液―→原代培养―→接触抑制――→胰酶等传代培养(1)胰酶的作用：消化细胞间的蛋白(主要为纤维蛋白、层粘连蛋白、纤粘连蛋白、弹性纤维等)，使组织分散成单个细胞。
(2)原代培养与传代培养：从机体上获取的组织，通过酶或机械方法分散成单个细胞进行培养，在首次传代前的培养称为原代培养。
原代培养的细胞生长、繁殖一定的时间后，由于空间不足或细胞密度过大导致营养枯竭，会影响细胞的生长，因此需要进行分瓶扩大培养，即传代培养。
(3)细胞株与细胞系①含义：条件合适时，能连续传代的细胞称为细胞系。
通过一定的选择或纯化方法，从原代培养物或细胞系中获得的具有特殊性质的细胞称为细胞株，细胞系细胞的遗传物质若发生了改变，具有癌细胞的特点。
细胞株一般具有恒定的染色体组型、同工酶类型、病毒敏感性和生化特性等。
②图示：(3)细胞贴壁和接触抑制悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。
细胞数目不断增多，当贴壁细胞分裂生长到表面相互抑制时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。
当细胞癌变后，就失去接触抑制的特点，而无限增殖。
动物细胞培养的结果1．连续细胞系：能连续培养下去的细胞系。
是发生转化了的细胞系，大多数具有异倍体核型。
有的是恶性细胞系，具有异体致瘤性；有的连续细胞系获得了不死性，但保留接触抑制现象，不致癌。
2．有限细胞系：不能连续培养下去的细胞系。
二倍体细胞一般为有限细胞系。
3．连续细胞株：可连续多次传代的细胞株。
4．有限细胞株：可传代次数有限的细胞株。
2．应注意的问题(1)动物细胞培养时可以分散成单个细胞，也可以用细胞群(团)、组织块培养。
分散成单个细胞后培养，细胞易获得所需的营养物质，其代谢废物容易排出；同时，分散成单个细胞培养，可使得在细胞水平操作的其他技术得以实现。
(2)为了保证细胞培养时满足其营养物质和生长因子的供给，培养基中添加一定量的血清，因为血清中含有蛋白质、氨基酸、葡萄糖、激素及一些未知的营养物质。
(3)由于大多数动物细胞培养的适宜pH为7.2～7.4，而胃蛋白酶发挥活性的最适pH为2.0左右，因此不能使用胃蛋白酶使细胞分散开。
3．动物细胞培养技术的应用(1)生产病毒疫苗、单克隆抗体、干扰素等。
(2)利用动物细胞培养技术中的细胞贴壁生长和接触抑制的特点，可用烧伤病人自己的健康皮肤细胞培养出大量的自身薄层皮肤细胞，以供植皮所需。
(3)培养的动物细胞用于检测有毒物质，判断物质的毒性。
区分原代培养和传代培养原代培养和传代培养一般均需对细胞进行胰蛋白酶分散处理，区分两种“培养”的关键是看用胰蛋白酶处理的对象。
1．第一次：用胰蛋白酶对剪碎的动物组织进行处理，分散后培养，即为原代培养。
2．第二次：细胞培养过程中出现接触抑制，用胰蛋白酶使其从瓶壁上脱离下来，分散到多个培养瓶中继续培养，即为传代培养。
某研究小组进行药物试验时，以动物肝细胞为材料，测定药物对体外培养细胞的毒性。
供培养的细胞有甲、乙两种，甲细胞为肝肿瘤细胞、乙细胞为正常肝细胞。
请回答下列有关动物细胞培养的问题。
(1)将数量相等的甲细胞和乙细胞分别置于培养瓶中培养，培养液及其他培养条件均相同。
一段时间后，观察到甲细胞数量比乙细胞数量________。
(2)在动物细胞培养时，通常在合成培养基中加入适量血清，其原因是_______________________________________________________。
细胞培养应在含5%CO2的恒温培养箱中进行，CO2的作用是___________________。
(3)在两种细胞生长过程中，当乙细胞铺满瓶壁时，其生长________。
药物试验需要大量细胞，两种细胞频繁传代，甲细胞比乙细胞可以传代的次数更________。
若用动物的肝脏组织块制备肝细胞悬液，需要________处理。
(4)为了防止细胞培养过程中细菌的污染；可向培养液中加入适量的________。
【审题导析】由题干可获取的信息有：(1)试验材料是肝细胞。
(2)肝细胞有两种，一种是肝肿瘤细胞，一种是正常的肝细胞。
解答本题时需明确动物细胞培养的过程、条件及应用，再结合每小题作答。
【精讲精析】癌细胞具有无限增殖的特点，故相同培养条件下，肝肿瘤细胞数量多于正常肝细胞数量。
动物细胞培养需提供无菌环境，如向培养液中加入适量的抗生素可防止细菌的污染；需提供一定的营养，如向培养基中加入适量血清，以便补充合成培养基中缺乏的物质；需提供一定的气体环境，如向恒温培养箱中加入5%的CO2，目的是维持培养液的pH。
【答案】(1)多(2)血清可以补充合成培养基中缺乏的物质维持培养液的pH (3)停止多胰蛋白酶 (4)抗生素下列关于动物细胞培养的叙述，正确的是( )A．培养保留接触抑制的细胞在培养瓶壁上可形成多层细胞B．克隆培养法培养过程中多数细胞的基因型会发生改变C．二倍体细胞的传代培养次数通常是无限的D．恶性细胞系的细胞可进行传代培养【审题导析】解答此题的关键必须明确二倍体核型的体细胞为有限细胞系，而异倍体核型细胞如恶性细胞系的细胞属连续细胞系。
【精讲精析】有接触抑制的细胞只能形成单层细胞；克隆培养法培养的细胞可以是细胞株(遗传物质并未改变)；二倍体细胞形成的是有限细胞系，传代次数有限；恶性细胞系为无限细胞系可以传代培养。
【答案】 D①动物体细胞核移植技术的原理和过程是怎样的？②克隆动物的应用前景是怎样的？③体细胞核移植技术属于百分之百的克隆吗？1．动物核移植的概念将一种动物的细胞核移植到去核的卵母细胞中，并发育成新个体的方式。
2．核移植过程3．图例：4．核移植特点主要是指不同种的细胞的拆合，新个体主要具备供核亲本的遗传特性。
5．动物体细胞核移植技术的应用(1)畜牧生产方面：培育良种动物。
(2)保护濒危物种。
(3)医药卫生方面：生产医用蛋白、器官和组织等。
6．动物体细胞核移植技术存在的问题(1)成功率低。
(2)克隆技术的各个环节有待进一步改进。
(3)克隆动物存在健康问题，表现出遗传和生理缺陷。
克隆动物绝大部分DNA来自于供体细胞核，但其核外还有少量的DNA，即线粒体中的DNA。
所以，用教材中所述的方法克隆的动物不是对供核动物的完全相同的复制。
此外，即便动物的遗传物质完全相同，但动物的一些行为、习性的形成与所处环境有很大关系，核供体动物生活的环境与克隆动物所生活的环境不会完全相同，其形成的行为、习性也不可能和核供体动物完全相同，从这一角度看，克隆动物不会是核供体动物100%的复制。
“治疗性克隆”将是人胚胎干细胞(简称ES细胞)造福于人类的一种非常重要的途径。
应用人胚胎干细胞进行“治疗性克隆”研究的技术途径包括以下几个步骤：首先取病人的体细胞核，移植到去核的成熟受体卵母细胞中；在早期胚胎形成后，从中分离获得ES细胞；对ES细胞进行基因修饰和定向分化研究，将定向分化后的细胞移植给病人。
进行核移植的目的并不是用于克隆人，而是希望通过对ES细胞进行分离培养、定向分化等处理后，进一步获得再造的人体组织或器官。
请根据材料回答下列问题。
(1)人类“治疗性克隆”属于动物细胞工程的________________技术。
(2)科学家为何要将患者的体细胞核植入去核的卵母细胞中，而不直接用体细胞进行细胞培养？_____________________________________________________________________________________________________________。
(3)“治疗性克隆”的结果说明高度分化的体细胞的细胞核仍然具有________。
相同的胚胎干细胞，“克隆”的结果各种各样，如有的是胰岛细胞，有的是血细胞，有的是心肌细胞，究其本质原因是基因____________的结果。
(4)克隆的器官在给自身移植方面的主要优点是_____________________。
