食用菌组织分离制母种

食用菌菌种分离的方法和操作步骤以及注意事项食用菌菌种分离的方法和操作步骤菌种分离即是进行食用菌菌丝纯化的过程，它是制种工作的重要环节，通俗地讲就是把食用菌菌丝从自然中单独分离出来进行纯培养，从而获得纯食用菌菌丝的过程。

菌种分离是一项重要而又细致的工作，每个环节都必须严格按照无菌操作规程进行。

食用菌的分离方法很多，常用的有组织分离法、孢子分离法和基内菌丝分离法三种。

1.组织分离法组织分离法是将食用菌的部分组织移接到斜面培养基上获得纯培养的方法。

其特点：一是属于无性繁殖，能够保持原有菌种的优良特性，是生产中获得纯菌种的常用方法，且简单易行，取材广泛，菌丝萌发快。

二是组织分离操作简便，又不易带入杂菌，容易获得纯菌种。

但对银耳、黑木耳等胶质菌因其子实体种菌丝极少，如用组织分离培养，则往往不易成功。

1.1子实体分离种菇要选择朵大盖厚、柄短、八九分成熟的优良品种。

切去菇体基部，在超净工作台用75%的酒精棉球进行擦拭菌盖与菌柄两次，进行表面消毒。

接种时，只要将种菇撕开，用消毒后的小刀在菌柄与菌盖的交界处切取一小块组织，再用接种针将组织块放入PDA培养基的试管斜面中间。

置于24℃温度下培养3-5天就可以看到组织块上产生白色绒毛状菌丝，转管扩大即得到菌种。

如香菇、平菇等可以使用此方法。

1.2菌核组织分离茯苓、猪苓、雷丸等食用菌的子实体不易采集。

而常见的是它储藏营养的菌核。

用菌核分离，同样可以获得菌种。

方法是将菌核表面洗净，用酒精消毒，切开菌核，取中间组织一小块，约黄豆大小，接种在PDA培养基斜面上，在24℃下培养，产生菌丝后进行分离纯化。

应注意的是，菌核是储藏器官，大部分是多糖类杂质，只有少量的菌丝，因此挑选的组织块要大一些，如果组织块过小，则不易分离出菌种。

1.3菌索分离法菌索分离常用于蜜环菌分离。

方法是选新鲜的活菌索，用75%酒精棉球将菌索表面消毒后，去掉菌鞘，把白色菌髓部分用无菌剪刀切成小段，接入PDA斜面培养基上，在24℃下培养，有白色菌丝长出且无污染，即表明分离成功。

关键环节。

干燥温度越高,豇豆接收的热量越高,水分蒸发的越快,干燥速度越快。

但高温会导致豇豆干制品色泽呈现黄褐色,影响成品的质量。

此工序操作要点:将烘房的温度升高至50℃,将预处理好的豇豆推进烘房,每2小时增加5℃直至60℃保持恒温。

当豇豆水分降到8%以下即可停止干燥。

9.包装干燥后的豇豆进一步挑选,剔除不符合外观要求的豇豆干,按重量要求称重,装入复合食品包装袋并封口,或使用聚乙烯复合包装袋真空包装。

二、产品标准1.感官指标产品色泽正常、清洁;均匀一致、无黏结;具有原豇豆的气味和滋味,无异味;无病虫害、机械伤,无肉眼可见外来杂质;95℃热水浸泡2分钟基本恢复脱水前状态。

2.理化指标水分≤8%,总灰分(以干基计)≤6%,酸不溶性灰分(以干基计)≤1.5%,砷≤0.5毫克/千克,铅≤0.2毫克/千克,镉≤0.05毫克/千克,汞≤0.01毫克/千克,亚硝酸盐≤4毫克/千克,亚硫酸盐≤30毫克/千克。

3.微生物指标菌落总数≤100000CFU/克,大肠菌群≤300MPN/100克,致病菌(系指肠道致病菌及致病性球菌)不得检出。

4.净含量允差应符合国家质量监督检验检疫总局第75号令《定量包装商品计量监督管理办法》规定。

(收稿日期：2014-11-26)香菇母种制种方法宋燕(拜城县赛里木镇农业技术推广站,拜城842300)香菇又叫冬菇,它香味浓郁、味道鲜美,内含有多种氨基酸和人体必需的微量元素。

在拜城县栽培,使用麦秆、稻壳等农作物秸秆作原料,生产出的产品为绿色、无公害产品,不仅营养丰富、口感鲜嫩,而且具有一定的保健作用,深受广大消费者青睐。

在生产实践中,一般采用孢子分离法、组织分离法、基质内菌丝分离等方法繁殖母种。

一、材料准备菌种灭菌仪、酒精灯、卫生棉、试管斜面PDA培养基、香菇较成熟的子实体、75%酒精、接种针、超净工作台、解剖刀、玻璃漏斗、纱布、搪瓷盘等。

二、组织分离法制作母种利用香菇子实体内部组织,进行无性繁殖而获得母种的简便方法,即组织分离法。

食用菌制种技术 1食用菌制种前言食用菌生产所用的菌种，是提供繁殖而分级制作的菌丝体培养物，相当于高等植物的种子。

在自然界中，食用菌繁衍后代依靠孢子，孢子在适宜的环境下，萌发成菌丝体。

菌丝体生长繁衍达到生理成熟后，在适宜的环境下，就可形成子实体。

在人工栽培食用菌时，孢子虽然是它的种子，但人们至今都不用孢子直接播种，而是用孢子或子实体组织萌发而成的纯菌丝体作为播种材料。

因此，通常所指的菌种，实际上是经过人工培养并进一步繁殖的食用菌的纯菌丝体。

制种是食用菌生产最重要的环节。

常言道：“有收无收在于种，收多收少在于管”，可见菌种在生产中的重要性。

在食用菌生产过程中，菌种好坏，直接影响食用菌的产量和质量。

因此，培育优良菌种，是提高食用菌生产水平的重要环节。

人工培养的菌种，根据菌种培养的不同阶段，可分为母种、原种和栽培种三类。

一般把从自然界中，首次通过孢子分离或组织分离而得到的纯菌丝体称为母种，或称一级种。

它是菌种类型的原始种。

原始母种通过移接(转管)成数支试管(斜面)种，这些移接的试管种，亦可称为母种。

把母种移接到木屑、谷粒、棉籽壳、粪草等瓶(袋)培养基上培养而成的菌种称为原种，或称二级种。

它是母种和栽培种之间的过渡种。

把原种扩接到相同或类似的材料上，进行培养直接用于生产的菌种称栽培种，或称三级种。

制作菌种的具体操作工艺流程见图4—1。

原种和栽培种，均能直接用于生产。

栽培种不能再扩大繁殖栽培种(银耳菌种例外)，否则会导致生活能力下降。

分离母种培养基制备→高压灭菌→接种→筛选提纯→原始种→中试后确定母种↓↓—————转管扩接←保贮↓原种培养基制备→高压或常压灭菌→接种→培养→原种∣↓栽培种培养基制备→常压或高压灭菌→接种→培养→栽培种图4-1 制种工艺流程图食用菌的菌种生产，基本上是按菌种分离→母种扩大培养→原种培养→栽培种培养的程序进行。

菌种通过三级扩大，菌种数量大为增加，同时菌丝也从初生菌丝发育到次生菌丝，使菌丝更加粗状，分解基质的能力也增强。

食用菌菌种制作技术作者：夏宏志李希政路晓玉来源：《农业与技术》2017年第23期摘要：本文简要说明了菌种培养基的分类，从消毒、灭菌、菌种制作、菌种培养、菌种污染原因分析上进行了论述，并对菌种老化与退化标准，菌种质量标准，菌种质量鉴别标准上进行了论述，给菌种质量判别提供了依据。

关键词：食用菌；菌种；培养基；菌种制作中图分类号：S646 文献标识码：A DOI：10.11974/nyyjs.201712320091 菌种的级别划分1.1 母种母种又称一级种，试管种，是食用菌的原始出发菌株。

母种的来源：通过组织分离法或孢子分离法自己选育而成；向有信誉的科研单位购买（引种必须作出菇试验，验证考核后方能用于大面积生产）。

母种转接一般以1支母种可转10～20支，在25℃培养，6～22d长满（因品种而异），母种必须纯度高，活力强。

1.2 原种原种又称二级种。

是由母种扩繁而来。

一般1支母种可转接5～6瓶，25℃培养30d左右长满。

原种要求必须纯度高，活力强，营养丰富。

1.3 生产种生产种又称三级种，栽培种。

是由原种扩繁而来，直接用于生产的菌种[1]。

一般一瓶原种可转接50～60瓶。

25℃下培养20～30d能长满瓶。

一级菌种培养基配方（适用于平菇、香菇、金针菇、木耳、滑菇等大多数食用菌）：土豆200g、葡萄糖20g、琼脂20g、蛋白胨2g、磷酸二氢钾3g、硫酸镁2g、维生素B1或B2 6片、水1000mL。

1.4 二、三级种配方粉碎玉米芯70%、玉米面30%，另外加石膏1%、白灰2%、磷酸二氢钾0.3%、硫酸镁0.2%、多菌灵0.1%。

1.5 粮食菌种制作选用干净无霉变小麦粒或玉米粒、高粱粒，用清水浸泡12h以上，捞出用水煮，煮至熟而不烂、不开花为准，捞出控干水分，加入石膏粉2%～3%，有条件加入30%木屑拌匀，装点滴瓶较好。

优点：菌丝生长健壮有力，可最大限度提高产量，生长速度较常规配方缩短50%以上时间。

缺点：制作较繁琐，容易污染。

实验一、平菇多孢分离育种技术（一）（二）一、实验目的1.了解多孢分离制作母种与组织分离制母种的区别及意义2.掌握平菇多孢分离技术二、实验原理食用菌子实体生长健壮，八成熟时，可散发大量有性孢子，这些孢子在一定条件下，可相互配合，形成双核菌丝体，从而制取母种。

多孢子分离技术是有性繁殖过程。

通过这种方式可以选育出优良菌种，有时还可使退化的菌种复壮。

三、实验步骤（一）制备培养基马铃薯200g，葡萄糖20g，磷酸二氢钾3g，硫酸镁1.5g，VB1微量，琼脂18g，水1000mL，pH 值自然。

按常规方法制试管斜面或三角瓶底面0.5㎝厚的琼脂板。

（二）选择种菇选取生长健壮，八成熟，无病虫害的平菇一朵待用。

（三）收集有性担孢子在无菌条件下，拨出斜面试管口或瓶口的棉塞，在菌褶（猴头菇用菌刺）前端的五分之二处剪取约1.5～2㎝2的菌褶，用镊子挑取一片菌褶，贴附在已灭菌的斜面培养基正上方，迅速塞好棉塞。

于24－26℃条件下恒温培养6-24小时后取出。

（四）孢子萌发培养及菌丝体纯化在酒精灯火焰附近去掉棉塞，用消毒小钩钩出管内的小片菇种，将棉塞连同试管口在火焰上灼烧后，迅速塞上棉塞，于24～26℃恒温培养1周，待孢子萌发，井长成成片菌丝后，切取生长迅速、无杂菌污染的菌丝团转管纯化，待菌丝长满管后便可扩大繁殖备用。

四、作业1.多孢分离育种操作应注意什么？（种菇选择及整个过程无菌操作）2.多孢分离制作母种与组织分离制母种各自有什么优缺点？（多孢子分离制作母种优点：是有性繁殖过程，通过这种方式可以选育出优良菌种。

其缺点操作繁琐，成功率低。

组织分离制母种优点：是无性繁殖过程，操作简单，成功率高。

缺点：多次组织分离制得的菌种易退化。

）。

食用菌种的分离培育作者：陈新民来源：《新农村》2011年第15期摘要：食用菌美味可口，营养丰富。

结合生产实际，总结出方便、实惠、易于掌握的菌种生产技术，便于广大种植者参考使用。

关键词：协调推进几个关系采用优良的菌种是食用菌生产的关键。

而优良菌种来源于优质种如种耳和正确的分离培育方法。

现介绍菌种生产的基本方法如下：一、培养基配制分离培育母种较适用的培养基为琼脂培养基。

配方为：马铃薯（去皮）250克、葡萄糖25克、琼脂20克、清水1000毫升。

制作方法：将马铃薯去皮（若已发芽的，应挖去芽及周围的小块）后，切成薄片，放入铝锅，加水1000毫升，煮沸30分钟，用四层纱布过滤取汁，将浸水后的琼脂加入其中，文火加热至全部融化，最后加入葡萄糖，调节PH值至5.6。

或用黄豆粉40克代替马铃薯，其它配方同上。

制作时将黄豆粉加冷水调成糊状，加水、文火煮20分钟，过滤取汁、分装。

培养基煮熟后，趁热装入玻璃试管内。

培养基占试管的四分之一。

管口塞上棉塞，用牛皮纸包扎，每10支试管做一捆绑好，置于铁丝笼中，放入高压锅内，在1.2公斤/平方厘米压力、115℃的温度下，灭菌30分钟，取出后斜放桌上，即为斜面试管。

二、定系选优分离母种选个体健壮，朵形圆正，外表清洁，无病虫害的种茹或种耳作分离母体。

具体分离方法有以下几种：1.孢子弹射法：分离前把子实体用无菌水冲洗，用滤纸吸干表面水分，在接种箱或无菌室内，将种菇褶朝下，用不锈钢丝勾住，悬于三角瓶内培养基上方，瓶上用棉花塞紧，于适温下培养12~20小时，菌褶上的孢子散落在培养基上，形成一层白色或其它颜色的粉末状孢子印（香茹、金针菇、银耳的孢子为白色，平茹为淡紫、蘑菇、草菇为褐色）。

用无菌接种针沾取少量孢子，在试管中的琼脂斜面培养基上接种。

待孢子萌发、生成菌落时，选长势好的，转管培养即得母种。

2.组织分离法：将经筛选的茹、耳、子实体的组织块，作为分离材料。

分离时把种耳撕开，于菌盖和菌柄交界处或菌褶处，切去一小块组织作接种物。

食用菌菌种的制作与培养----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------一、母种制作（一）母种培养基制作1.母种培养基的种类母种是菌种生产的关键，要求纯度高，不能混生杂菌，同时母种的菌丝体较为纤细，分解培养料的能力较弱。

因此，母种菌丝体需要培养在营养丰富，易被吸收，表面光滑易于鉴别有无杂菌感染的琼脂培养基上。

适合母种菌丝生长的琼脂培养基种类很多，常用的有下列几种：（1）马铃薯—葡萄糖—琼脂培养基马铃薯（去皮）200克琼脂20克葡萄糖（或蔗糖）20克水1000毫升（2）麦芽汁—葡萄糖—琼脂培养基干麦芽250克琼脂15～20克葡萄糖（或蔗糖）10克水1000毫升（3）胡萝卜—葡萄糖—琼脂培养基胡萝卜100克琼脂20克葡萄糖（或蔗糖）20克水1000毫升（4）蘑菇汁—葡萄糖一琼脂培养基（适用于蘑菇）鲜蘑菇250克琼脂20克葡萄糖（或蔗糖）20克水1000毫升（5）蛋白胨—葡萄糖—琼脂培养基蛋白胨2克葡萄糖20克磷酸氢二钾2克维生素B1（硫胺素）0.5毫克磷酸二氢钾0.5克琼脂18克硫酸镁0.5克水l000毫升2.母种培养基的制法以最常用的马铃薯—葡萄糖—琼脂培养基的制法为例介绍如下：先将马铃薯去皮，洗涤，切成小块加水1000毫升，煮沸15～20分钟，取双层纱布过滤，取其滤液，加入琼脂和葡萄糖（或蔗糖），用文火加热使其溶化，最后补足水分，使其容量仍为1000毫升。

趁热分装于试管中，装量约为试管长度的1/5左右，装管时要注意不使培养基沾污试管壁和试管口。

试管口塞上大小合适的棉花塞，塞入试管口内的长度为棉塞总长的3/5。

塞好棉塞后，每10支作一捆，用牛皮纸包扎好后，置铁丝网笼中，然后进行高压灭菌。

如作为孢子分离用，则将培养基分装于三角瓶或培养皿中，然后高压灭菌。

平菇菌种制种的关键技术1、母种的生产平菇是用孢子分离和组织分离法获得菌丝体后扩大转试管制作母种。

1.1培养基：平菇母种分离和菌种保存宜用普通培养基。

平菇菌丝在此培养基上生长速度较慢。

扩大转管适宜用高粱粉培养基，配方和制作方法是：高粱粉30克，加1000毫升蒸馏水，加1%琼脂，置于铝锅中加热，待琼脂充分溶化后搅匀，分装于试管，灭菌接种。

平菇在高粱培养基上生长最快，长势均匀，菌丝旺盛。

高粱培养基适合于生产平菇母种。

菌种培养：分离后的平菇菌丝应放在最适宜的温度（25℃±2℃）培养并经过提纯、转管，一般培养7－10天菌丝可长满试管。

如果没有出现杂菌，分离培养就算成功。

但该菌株是否优良，生产价值如何，还需出菇栽培试验。

1.2母种扩繁：可以用碎玉米粒、稻子碎粒、高粱及其他一些谷物碎粒，在水中浸 12 小时后，捞出沥干水分，装入试管，一般装试管总长的 1/3，在料面上稍压一些，以防止料散开。

然后，擦净试管，塞上棉塞，用报纸包好棉塞，以7支试管为一捆，扎好后放入高压锅中，上汽至0.5Kg/cm2，放汽至 0，加热至1.5Kg/cm2时，保持压力1小时。

取出放凉后按常规方法在接种箱中转接，一般一支 1代母种扩繁 30管母种。

将接种后的母种放入室内，避光，尽量保持恒温 25℃，菌丝发满后 3天，即可使用。

2、原种的生产2.1母种菌丝数量太少，在实际生产中必须把一级种扩大繁殖成二级种（即原种）才能满足生产种的需要。

平菇原种培养基的配制和生产参照《制种技术》中的木腐菌制种的内容。

平菇菌丝在木屑培养基上一般原种20—25天可以满瓶。

在麦粒培养基上15—20天可以长满使用。

好的原种菌丝密集、洁白、长势均匀、粗壮、呈棉毛状，有爬壁现象。

原种长满瓶之后，应立即扩大为栽培种，否则一旦营养耗尽，菌丝就会衰老甚至死亡。

麦粒种更要及时使用。

2.2 原种制作：用玉米、稻子、高粱都可以，先将原料放入水中浸12小时，冬季用温水浸24小时，然后放入锅中加热煮30分钟，至谷物表皮胀开小缝而未开花烂开时捞出，凉干表面水分后，拌入2%, 的石膏或滑石粉或钙镁磷肥都可以。