硫酸庆大霉素注射液细菌内毒素检查的干扰试验

硫酸软骨素注射液细菌内毒素检查方法研究嵇 扬，高 锦，王文俊，胡 丹，沈 娟，聂渝琼（总后勤部卫生部药品仪器检验所药理室，北京 100071）摘 要：目的 建立检查硫酸软骨素注射液细菌内毒素的方法。

方法 用中国药典2005年版附录细菌内毒素检查法。

结果 硫酸软骨素注射液浓度0.025 mg/mL ，用灵敏度0.125 EU/mL 的鲎试剂检测细菌内毒素无干扰因素的影响。

结论 硫酸软骨素注射液可用鲎试剂检查细菌内毒素。

关键词：硫酸软骨素注射液；细菌内毒素；干扰试验中图分类号：Q538 文献标识码：A 文章编号：1672-979X(2009)09-0034-04收稿日期：2008-11-24作者简介：嵇扬（1957-），女，江苏阜宁人，主任药师，硕士生导师，研究方向为药检药理 E-mail: jiyang0809@Study on Bacterial Endotoxin Test for Chondroitin Sulfate InjectionJI Y ang, Gao Jin, W ang W en-jun, HU Dan, Shen Juan, Nie Y u-qiong(Institute for Drug and Instrument Control of Health Department, GLD of PLA, Beijing 100071, China )Abstract: Objective To establish a detection method for bacterial endotoxin in Chondroitin Sulfate Injection. Methods The bacterial endotoxin test in the appendix of Chinese Pharmacopoeia (2005 edition) was adopted. Results The maximum noninterference concentration was 0.025mg •mL -1 and the sensitivity of TAL was 0.125 Eu.mL -1. Conclusion The bacterial endotoxin test is suitable for Chondroitin Sulfate Injection by TAL.Key Words: chondroitin sulfate injection; bacterial endotoxin; interference test硫酸软骨素广泛存在于人和动物的软骨组织中。

制药GMP管理文件一．目的：制定硫酸庆大霉素内控质量标准，规范公司硫酸庆大霉素的采购与生产。

二．适用范围：适用于硫酸庆大霉素的采购与验收。

三．责任者：生产部经理、质管部经理、检验员四．正文：硫酸庆大霉素本品按无水物计算，每1mg的效价不得少于590庆大霉素单位。

【性状】本品为白色或类白色的粉末；无臭；有引湿性。

本品在水中易溶，在乙醇、丙酮、三氯甲烷或乙醚中不溶。

比旋度取本品，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1ml 中约含50mg的溶液，依法测定，比旋度为+107°至+121°。

【鉴别】（1）取本品约5mg，加水1ml溶解后，加0.1%茚三酮的水饱和正丁醇溶液1ml与吡啶0.5ml，在水浴中加热5分钟，即显紫蓝色。

（2）取本品与庆大霉素标准品，分别加水制成每1ml中含20mg 的溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2ul，分别点于同一硅胶G薄层板（临用前于105℃活化2小时）上；另取三氯甲烷-甲醇-浓氨溶液(1：1：1)混合振摇，放置1小时，分取下层混合液为展开剂，展开，取出于20~25℃晾干，置碘蒸气中显色，供试品溶液所显主斑点数、位置和颜色应与标准品溶液斑点数、位置和颜色相同。

（3）本品的红外吸收图谱应与对照的图谱一致。

（4）本品的水溶液显硫酸盐的鉴别反应。

【检查】酸度取本品，加水制成每1ml中含40mg的溶液，依法测定，PH值应为4.0～6.0。

溶液的澄清度与颜色取本品5份，各0.4g，分别加水5ml使溶解，溶液应澄清无色；如显浑浊，与1号浊度标准液比较，均不得更浓；如显色，与黄色或黄绿色2号标准比色液比较，均不得更深。

硫酸盐取本品约0.125g，精密称定，加水100ml使溶解，用浓氨溶液调节PH值至11，精密加氯化钡滴定液（0.1mol/L）10ml及酞紫指示液5滴，用乙二胺四醋酸二钠滴定液（0.05mol/L）滴定，注意保持滴定过程中的PH值保持为11，滴定至紫色开始消褪，加乙醇50ml，继续滴定至紫蓝色消失，并将滴定的结果用空白试验校正。

范围：原辅料、成品职责：检验室对本规程的实施负责正文：1. 供试品细菌内毒素限值（L）的确定1.1 按供试品标准规定限值。

1.2 尚无标准规定的供试品内毒素限值，一般按以下公式确定。

L=K/M式中：L为供试品的细菌内毒素限值，以EU/ml、EU/mg、EU/U表示。

K为按规定的给药途径，人用每公斤体重每小时最大可接受的内毒素剂量。

以EU/㎏/hr表示。

注射剂，K=5EU/㎏/hr，其中放射性药品注射剂K=2.5EU/㎏/hr，鞘内用药品，K=0.02EU/㎏/hr。

M为人用每公斤体重每小时最大剂量，以ml/kg/hr、mg/kg/hr、U/kg/hr 表示，中国人按人均体重60kg计算，注射时间小于1小时，按1小时计。

2. 供试品最大有效稀释倍数的计算：MVD=C·L/λL为供试品的细菌内毒素限值，λ为测试用鲎试剂的灵敏度标示值，C表示供试品的浓度，或供试品复溶所得溶液的浓度。

当L以EU/ml表示时C为1.0ml/ml，当L以EU/mg或EU/u表示时，C为mg/ml或u/ml。

如需计算供试品的测试浓度C，可设MVD为1。

3. 内毒素标准溶液的制备3.1取细菌内毒素国家标准品（NSE）或内毒素工作标准品（WSE）一支，轻弹瓶壁，使粉末落入瓶底，再用砂轮在瓶颈上部轻轻划痕，75%酒精棉球擦拭后启开，防止玻璃屑落入瓶内。

3.2按标准品使用说明书用移液管加入规定量的细菌内毒素检查用水（BET）溶解其内容物，用封口膜将瓶口封严。

置旋涡混合器上混合15分钟，然后制备成所需浓度的细菌内毒素标准溶液即2.0λ、1.0λ、0.5λ、0.25λ（λ为所复核鲎试剂的标示灵敏度），每稀释一步均应在旋涡混合器上混合30秒。

若为NSE，可按其使用说明书将其稀释至规定浓度后分装并保存4. 含供试品的内毒素溶液的制备4.1 根据供试品的限值（L）和使用鲎试剂的灵敏度（λ）计算供试品测试浓度（C）或MVD。

4.2 将供试品稀释，其稀释倍数不应MVD，并通过预试验确定正式试验供试品测试浓度。

细菌内毒素干扰试验方案好啦，今天咱们聊聊细菌内毒素干扰试验，听起来是不是有点复杂？别急，别慌，咱慢慢捋，保证你看完之后不仅能明白，还能把它讲给别人听，绝对能吓到他们“哇，原来你懂这么多”！不过咱也不搞什么深奥的东西，通俗点，贴近生活点，咱就从“细菌内毒素”开始说。

细菌内毒素，听名字好像挺吓人的，实际上就是细菌死掉之后，它们释放出来的一种毒性物质。

说白了，就是细菌一死，死得不够彻底，剩下的东西也够呛。

有的毒性强的内毒素甚至能引起发烧、低血压、休克，简直就像是一颗定时炸弹。

如果咱们的免疫系统没有及时反应过来，可能就会出事儿了。

所以呢，咱们需要弄明白，这个内毒素是怎么干扰咱们身体的，然后找个办法让它不那么“捣乱”——这就是为什么做这个试验的原因。

细菌内毒素干扰试验，嗯，听起来像个高大上的名字，其实就是通过模拟这些毒素怎么影响咱们身体的过程，看看咱们能不能找到一种方法来对付它。

举个例子吧，假设你是一个医生，碰到一位病人发烧，检查出来是内毒素引起的。

你需要知道的是，内毒素是怎么影响到这个病人的身体的。

咱们要通过一些试验，模拟这个过程，找出关键的干扰点，再针对性地治疗。

试验结果一出来，医生就能根据这些数据选择合适的治疗方案。

就像是有了指南针，你再也不会迷路。

那这个试验到底是怎么进行的呢？其实它就像一个“模拟大战”。

咱们通常会用动物模型来做实验，最常见的是小鼠。

通过给这些小鼠注射一定量的内毒素，看看它们的免疫系统是如何反应的。

小鼠这时候就像一个“小小的警报器”，一旦内毒素进入，它们的身体立刻做出反应，血压下降、体温升高，一系列症状就来了。

根据这些反应，研究人员能抓住细菌内毒素干扰身体的关键点，弄清楚为什么它会引发这么多症状。

不过，光靠小鼠也不够全面，试验的过程中还要加上一些化学试剂，模拟一下“打击”内毒素的药物效果。

这个就像是在战争中，咱们不能光靠前线的士兵，还得有后勤支持。

那些化学试剂或者药物，就是后方的“支援”。

细菌内毒素检查
3.干扰试验
3.1将供试品稀释至预试验中确定的不干扰稀释倍数。

3.2再用此稀释液将同一支细菌内毒素标准品稀释制成4个浓度，2λ，1λ，0.5λ，0.25λ
的含内毒素的供试品溶液。

标准品：10EU→1EU/ml→0.5EU/ml→0.25EU/ml→0.125EU/ml
供试品溶液的稀释：
2λ1λ0.5λ0.25λNC（加检查用水）○○○○
○○○○○
○○○○
○○○○○
供试品阳性对照：
2λ1λ0.5λ0.25λNC（加供试品溶液）○○○○
○○○○○
○○○○
○○○○○
3.3前提：1）当两组最大浓度2λ，均显“+”；最低浓度0.25λ，均显“—”，
阴性对照管（NC），均显“—”，结果方为可靠，有效。

2）内毒素检查用水制成的标准溶液的反应终点浓度的几何平均值（E S）
E S=lg-1（∑Xs/4）Xs,X t——反应终点浓度的对数值。

E t=lg-1（∑X t/4）E S，E t——反应终点浓度的几何平均值。

当E S∈[0.5λ,2λ],E t∈[0.5E S,2E S]则认为供试品在该浓度下不干扰试验，
可在该浓度下对供试品进行试验。

注：建立新品种的细菌内毒素检查方法，每个厂家至少取3个批号（不包括亚批）的供试品，用2个以上的鲎试剂生产厂家的鲎试剂进
行干扰试验。

. 1167 .文章编号：1001-8689(2019)10-01167-03硫酸庆大霉素盐酸林可霉素注射液细菌内毒素检查法的建立王凡1 王小婷2 李艳华3 郭文欣1,*(1 黑龙江省兽药饲料监察所，哈尔滨 150069；2 大庆市大同区农业农村局，大庆 163515；3 东北农业大学，哈尔滨 150030)摘要：目的 建立硫酸庆大霉素盐酸林可霉素注射液细菌内毒素检查方法。

方法 按照2015版《中国兽药典》附录1143“细菌内毒素检查法”项下凝胶法的要求，根据干扰试验确定样品成分最小不干扰稀释倍数，并进行方法学验证及3批中试产品细菌内毒素检查。

结果 供试品最小不干扰倍数为100倍，3批中试产品细菌内毒素检查均符合要求。

结论 建立的方法能够用于硫酸庆大霉素盐酸林可霉素注射液细菌内毒素检查，其细菌内毒素限制为37.5EU/mL 。

关键词：硫酸庆大霉素；盐酸林可霉素；细菌内毒素；鲎试剂中图分类号：R917 文献标志码：AEstablishment of a bacterial endotoxin test for gentamicin sulfate and lincomycinhydrochloride injectionWang Fan 1, Wang Xiao-ting 2, Li Yan-hua 3 and Guo Wen-xin 1(1 Heilongjiang Veterinary Drug and Feed Supervision Institute, Harbin 150069; 2 Daqing Datong District Agricultural and Rural Bureau,Daqing 163515; 3 Northeast Agricultural University, Harbin 150030)Abstract Objective To establish a bacterial endotoxin test method for gentamicin sulfate and lincomycin hydrochloride injection. Methods According to the requirements of the gel method under the “bacterial endotoxin test” in appendix 1143 of Chinese veterinary pharmacopoeia (2015 edition), the minimum non-interference dilution multiples of the sample components were determined based on the interference test, and the methodological verification and the bacterial endotoxin test of three batches of pilot products were carried out. Results The minimum non-interference multiple of the test product was 100 times, and the bacterial endotoxin test of the three batches of pilot products met the requirements. Conclusion The established method can be used in the bacterial endotoxin test of gentamicin sulfate and lincomycin hydrochloride injection, and the bacterial endotoxin limit is 37.5EU/mL.Key words Gentamicin slufate ; Lincomycin hydrochloride ; Bacterial endotoxin ; Limulus reagent 收稿日期：2018-12-13基金项目：国家科技支撑计划(No. 2015BAD11B03-07)作者简介：王凡，女，生于1979年，高级兽医师，主要研究方向为兽用化学药品的质量控制，E-mail: fan.www@*通讯作者，E-mail ：876011707@硫酸庆大霉素盐酸林可霉素注射液是由本实验室研制的主要治疗由链球菌、支原体、衣原体等感染引起的猪呼吸道疾病综合征的兽用复方注射液，主要成分是硫酸庆大霉素和盐酸林可霉素，两种药物分别作用于敏感菌核糖体的不同点位，最终阻碍了细菌细胞合成蛋白质。

硫酸庆大霉素注射液的C组分检查
赵晖;吴佩玲
【期刊名称】《中国兽药杂志》
【年(卷),期】2001(035)005
【摘要】用高效液相色谱法检查1999年及2000年共抽检的41批硫酸庆大霉素注射液的C组分及含量其中有16批C组分检查不合格.<中国兽药典>二000年版中增加了硫酸庆大霉素的C组分检查,而注射液没有增加[1],根据检测结果建议在硫酸庆大霉素注射液的标准中应增加此项检查.
【总页数】3页(P21-23)
【作者】赵晖;吴佩玲
【作者单位】中国兽医药品监察所,北京,100081;中国兽医药品监察所,北
京,100081
【正文语种】中文
【中图分类】S859.796
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