抗菌药物敏感试验课件

绕试条明显可见椭圆形抑菌圈，圈的边缘与试条交
点的刻度浓度即为抗菌药物抑制细菌的MIC。

依照CLSI标准判断其敏感、耐药、中介。
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有菌生长区 无菌生长区
26
椭圆形细菌 生长抑制区
256 128
8
判读抑菌浓度 （MIC ug/ml)
016
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E test 法特点

优点

连续浓度梯度，与琼脂稀释法相关性好 （相关系数为0.9）.可测MIC。 操作简单，影响因素少，稳定性高。 不适用于生长缓慢的苛养菌。
下限
敏感
3
敏感和耐药的概念
抗菌药物的治疗浓度与MIC的关系：

若MIC小于治疗浓度，
则为“敏感”（Sensitive , S ），推荐使用。

若MIC大于治疗浓度，
则为“耐药”（ Resistant , R ）；

若MIC介于治疗浓度的上下限之间，
则为“中度耐药”（ Intermediate , I ）或中度敏


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四种方法

比例法 放射同位素法 绝对浓度法 耐药率法
•直接法：直接采用图片阳
性的体液标本。（须经充
分消化五杂菌）
•间接法：经分离纯培养后
的次代培养菌。
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间接比例法（WHO推荐）

Middlebrook7H10琼脂 培养3周
无药
药1
药2
药3
不含药的对照格菌落数应为50~150 敏感：含药格无结核杆菌生长， 或菌落数﹤1%对照格
纸片法和稀释法 临床意义：产ESBL克雷伯菌和大肠埃希 菌对青霉素、头孢菌素和氨曲南治疗无效。
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G-菌产生的头孢菌素酶检测 -----头孢哨噻吩滤纸片法

用接种环挑取受试菌于头孢哨噻吩（产色头孢 菌素）滤纸片上(商品化)， 10分钟内由浅黄色转变为粉红色即阳性结果， 表示头孢菌素的β-内酰胺环被酶打开。 临床意义：产生该酶的细菌对头孢菌素类抗生 素耐药。


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G+菌产生的青霉素酶检测
-----碘淀粉测定法
• 受试菌混于青霉素溶液，振摇30分钟。加入淀 粉液后，再加入碘液，溶液变蓝，继续振摇。 10分钟之内蓝色消失者为产酶株。
青霉素酶
青霉素 青霉素噻唑酸
碘 碘淀粉复合物
变为无色
• 多为金黄色葡萄球菌产生，对青霉素G耐药。
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超广谱β-内酰胺酶 Extended-Spectyumβ-Lactamase，ESBL ESBLs

CLSI推荐的最简单的药敏试验。
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三、E试验法（浓度梯度法）
原理：

256 128
E试条是一条5mm×50mm无孔试剂载体，一面固定有 一系列预先制备的浓度呈连续指数增长的抗菌药物，8 另一面有判别的刻度。抗菌药物的梯度可覆盖有15-20个对倍稀释浓度的宽度范围。 016

将E试条放在细菌接种过的琼脂平板上，经孵育，围
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5.盖上平板的盖子，放置培养箱内孵育，放置 3~10分钟后贴上标准抗生素纸片。
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6.用无菌镊子或纸片分配器将抗菌纸片粘贴于M-H琼 脂的表面，一旦纸片贴上，不能移动；各抗菌纸片中
心距离应大于24mm，纸片距平板内缘应大于15mm。
20
7.经过35℃16～24h孵育。 8.取抑菌环直径， 根据CLSI标准，报告细菌对 该抗生素敏感、耐药、中介。

抗菌药物敏感性概述 抗菌药物敏感性试验方法
全国“细菌耐药监测网”简介
1
敏感和耐药的概念
从本质上讲：细菌对某种抗菌药物是敏感还是耐 药，常以该抗菌药物的 治疗浓度 与 MIC 的关系而 定。 常用剂量的抗菌药物通过常 用途径所能达到的血药浓度

2
血药浓度与MIC之间的关系
耐药
上限
中介耐药

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药敏试验结果的临床价值

影响抗菌药物临床疗效的因素很多，据报道药 敏试验结果与临床疗效的符合率约为70% ， 因此细菌培养及药敏试验报告只能作为临床用 药的参考，应根据患者用药后的治疗反应和临 床病情及时调整用药。 医学检验的灵魂是与临床沟通。


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新的药敏试验方法探索

流式细胞术检测抗生素最低抑菌浓度


缺点：E试条较昂贵;
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四、联合药物敏感试验
联合药物意义

用于病原菌尚未确定的急、重症感染的经验治 疗,以扩大病原治疗的覆盖面 治疗多种细菌所引起的混合感染

对于某些耐药菌可取得协同抗菌作用
减少或推迟治疗过程中细菌耐药性的产生
避免药物达到毒性剂量。
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两种药物的联合使用的效果

增强作用：两种抗生素联用的效果大于它们单 独使用时的效果之和； 20％～25％
4 格平板
耐药：含药格菌落数≧1%对照格。
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分枝杆菌微量直视 快速药敏试验法
4000 倍
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培养72h观察结果
阴性对照
阳性对照
INH敏感
RFP耐药
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第三节 厌氧菌体外药敏试验 （了解）

厌氧菌感染多为内源性感染，厌氧菌药物敏感性稳敏试验：
明确厌氧菌引起的严重感染；

相加作用：它们联用时的效果等于单用两种抗 生素效果之和； 60％～70％
无关作用：两种抗生素联用的效果，仅相当于 其中一种具有较强作用的抗生素的效果； 拮抗作用：两种抗生素联用时的效果反而小于 它们分别使用时的效果之和。 10％～15％


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抗菌药物协同作用发生原理
两种抗菌药物作用部位不同：

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药敏试验方法的比较

K-B法： WTO推荐使用的最简单的定性药敏 试验。

稀释法：准确测定MIC、 MBC，比较繁琐，
试管法一般不作为常规试验。
微生物自动分析系统采用微量稀释法原理。

E试验：可测定MIC。
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第二节 结核分枝杆菌的药敏试验 （了解）

首次分离的分枝杆菌需做药敏试验，有助于 合理用药和监测药物敏感性。 另外经过三个月正规治疗，标本分离培养仍 为阳性患者，或感染的严重疾患（如播散性 结核病和结核性脑膜炎）。 以及来自高耐药流行区的患者，均须做体外 药敏试验。

能水解青霉素类，头孢菌素和氨曲南。
不能水解碳青烯酶类，如亚胺培南

多数可被β内酰胺酶抑制剂（如克拉维酸，三 唑巴坦及舒巴坦）所抑制。
如为ESBL阳性，则对青霉素类，头孢菌素和氨 曲南均报告耐药，不考虑体外药敏结果。

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常见产ESBLs菌株

最常见是肠杆菌科细菌（大肠埃希氏菌、肺 炎克雷伯氏菌）； 其次，阴沟肠杆菌、粘质沙雷氏菌、弗劳地 枸橼酸菌、铜绿假单胞菌、奈瑟菌等。
感
4
5
CLSI标准 治疗浓度的上限 即表中的 R
治疗浓度 治疗浓度的下限 即表中的 S
耐药
中介耐药 敏感
MIC
6
第一节、抗菌药物敏感性试验方法
需氧和兼性厌氧菌
7
需氧和兼性厌氧菌药敏试验的方法

稀释法
• 肉汤稀释法（试管稀释法）
• 琼脂稀释法（平板稀释法）

纸片扩散法（纸片法）
E-试验 联合药物敏感试验

分枝杆菌药物最低抑菌浓度的快速测定 方法研究
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细菌耐药性的发生过程：
细菌获得与耐药相关的基因 基因：537
编码与耐药有关的蛋白
表型：书533页
表现出对某种抗生素的耐药 敏感性
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第35章第三节 细菌耐药性检测
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一、耐药表型检测 1、β-内酰胺酶检测



生物化学技术检测酶的等电点(等电聚焦电泳) 头孢哨噻吩滤纸片法 碘淀粉测定法 分析酶的底物谱及抑制物谱
10
抑菌圈边缘的药物浓度 与 MIC
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抑菌圈的大小与MIC：

二者呈负相关，即抑菌圈愈大，MIC愈小。
氨苄青霉素对肠杆菌科的抑菌试验 50 40
lgMIC
30 20 10 0 0 5 10 Diameter（mm） 15 20 系列1
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纸片法药敏试验抑菌圈直径与结果解释的标准
抗菌药物与细菌 纸片含量 抑菌圈直径：mm 相应MIC μg/ml
已确证的厌氧菌感染，经验性选药治疗未能奏效；
需长期用药的厌氧菌感染。
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厌氧菌体外药敏试验

基本原理和方法与需氧菌相同，只是在培养基、 操作环境和培养条件等应根据厌氧菌的特定需
要变动。

培养基为布氏血琼脂再加人补充剂 5μg/ml氯 化血红素，5％脱纤维羊,1μg/ml Vit K。 厌氧孵育条件 质控菌株为脆弱类杆菌ATCC25285。
β －内酰胺类抗生素（抑制细菌细胞壁合成）与
氨基糖苷类抗生素（干扰细菌的代谢）。
增强作用：增加了药物进入细菌细胞

杆菌肽（降低细胞通透性）与氨基糖苷类药物 （干扰细菌的代谢）。 拮抗作用：降低了药物进入细菌细胞
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联合药物敏感试验方法

棋盘稀释法 利用肉汤稀释法原理，依据两种药物的MIC， 以棋盘设计两种药物不同浓度的组合。
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抑菌浓度指数（FIC）
A药联合时的MIC FIC ＝ A药单测的MIC ＋ B药联合时的MIC B药单测的MIC
FIC ﹤0.5为协同作用；
0.5～1为相加作用；
1～2为无关作用； ﹥2 为拮抗作用
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A药：
32
B药: 16
16
8
4
生长