L_鼠李糖的制备及检测方法研究进展_高旭东
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鼠李糖研究报告
鼠李糖研究报告鼠李糖是一种由鼠李果制成的糖果，具有很高的营养价值和药用价值。
本报告旨在介绍鼠李糖的研究结果。
一、鼠李糖的制备方法鼠李糖是通过将鼠李果捣碎加热糖浆与糖混合搅拌而制得的。
制备过程中需要注意搅拌时间、温度和糖浆浓度等因素，以获得最佳的产品质量。
二、鼠李糖的营养价值1. 维生素含量高：鼠李果富含多种维生素，如维生素C、维生素B等，有助于增强人体免疫力，促进新陈代谢。
2. 抗氧化物质：鼠李果中富含花青素等抗氧化物质，具有很强的抗氧化作用，有利于预防衰老和减少慢性疾病的发生。
3. 矿物质：鼠李果中含有丰富的矿物质，如钙、铁、锌等，对维持骨骼健康、促进血液循环等方面有益处。
4. 膳食纤维：鼠李果中含有丰富的膳食纤维，有助于促进肠道蠕动，预防便秘和胃肠道疾病。
三、鼠李糖的药用价值1. 抗炎作用：鼠李果中的花青素具有很强的抗炎作用，可以减轻炎症，并对炎症相关疾病有一定的治疗作用。
2. 抗肿瘤作用：一些研究发现，鼠李果中的活性物质对肿瘤细胞具有细胞毒作用，有望作为抗肿瘤药物的候选物。
3. 降血糖作用：鼠李果中的某些成分有助于降低血糖水平，对于糖尿病患者具有一定的辅助治疗作用。
4. 保护心脑血管功能：鼠李果中的活性物质可以促进心脑血管的血液循环，提高氧气供应，有助于预防和治疗心脑血管疾病。
结论：鼠李糖作为一种新型的糖果，具有很高的营养价值和药用价值。
通过鼠李糖的制备方法，我们可以获得高质量的鼠李糖产品。
对于个人而言，鼠李糖可以作为一种营养食品和零食食用，有助于改善健康状况。
对于科学研究而言，鼠李糖的药用价值需要进一步探索和研究，有望成为一种新的药物开发方向。
一种微生物转化制备L-鼠李糖酸的方法[发明专利]
![一种微生物转化制备L-鼠李糖酸的方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s1/m/89bc41f3227916888586d755.png)
专利名称：一种微生物转化制备L-鼠李糖酸的方法专利类型：发明专利
发明人：路福平,毛淑红,王正祥,吴建琳,刘逸寒
申请号：CN201510531257.4
申请日：20150826
公开号：CN105063111A
公开日：
20151118
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及一种微生物转化制备L-鼠李糖酸的方法，步骤如下⑴添加L-鼠李糖到静息细胞溶液体系中，体系中静息细胞浓度为OD＝25～50，L-鼠李糖质量百分比浓度为10％～40％，在转化过程中加入NaCO或CaCO使pH保持恒定在5.0-7.0；⑵L-鼠李糖酸的提取：转化结束后，离心取上清，经蒸发浓缩、乙醇沉淀、烘干等步骤得到L-鼠李糖酸钙盐，最后用硫酸置换反应获得L-鼠李糖酸。
本发明提供的假单胞菌是一种可以转化L-鼠李糖为L-鼠李糖酸的菌，菌体发酵后得到的静息细胞转化制备L-鼠李糖酸提高了转化率。
申请人：天津科技大学
地址：300222 天津市河西区大沽南路1038号天津科技大学
国籍：CN
代理机构：天津盛理知识产权代理有限公司
代理人：赵瑶瑶
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L_鼠李糖的制备及检测方法研究进展_高旭东
经大量实践后，工业化生产选用发酵法为 L-鼠李糖的 主要制备方法。生产的 L-鼠李糖依据中间产物的不同可分 为 2 类：一类为由微生物或藻类生产含 L-鼠李糖基的多糖， 水解获得 L-鼠李糖；另一类为利用微生物生产 L-鼠李糖脂， 水解 L-鼠李糖脂得到 L-鼠李糖。然而，该法在制备 L-鼠李
甘露糖六位的一个羟基被氢取代而衍生的一种单糖， 称为 L-鼠李糖（Ｒhamnose），又称鼠李糖、甲基戊糖，L-鼠李糖 的纯品为无色粉末，呈结晶状，自然界里主要存在于植物多 糖、糖苷、植物胶及细菌多糖中，多为 L 型。其甜度是蔗糖的 33% ，可用于生产香精香料，可食用；可以作为药物的中间 体、合成强心药物；可与其他物质反应形成风味物质、用作甜 味剂；可用于农作物疾病的防治；还可作为肠道渗透测试剂 使用，并具有明显的抗癌作用［1 －3］。
L-鼠李糖可由 L-鼠李糖脂水解制备。碱法水解可用 1 mol / L NaOH 40 ℃ 回流 12 h，酸法水解可用 1 mol / L HCl 回 流 2． 5 h，或者在 30 ～ 100 ℃ 加 H2 SO4 水解。L-鼠李糖脂水 解后得到 L-鼠李糖和 3-羟基酸，可用乙酸乙酯萃取 3-羟基 酸，L-鼠李糖在水层；也可用离子交换法，调 pH ＞ 5，用阴离 子柱分离 3-羟基酸；还可用层析法分离 L-鼠李糖［11］。
基金项目 作者简介 收稿日期
国家高新技术研究发展计划（863 计划） （2011AA10A214） ； 中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目 （1610322012001 ） ； 西 藏 农 牧 厅 横 向 委 托 项 目 （ 2013 － 2014） 。 高旭东（1988 － ） ，女，满族，辽宁鞍山人，硕士研究生，研究 方向：食 品 安 全 与 品 质 控 制。 * 并 列 通 讯 作 者： 梁 剑 平 （1962 － ） ，男，研究员，博士生导师，从事新型中兽药的研 发；陈士恩（1964 － ） ，男，教授，硕士生导师，从事食品安全 与品质控制研究。 2014-05-19
甘露糖六位的一个羟基被氢取代而衍生的一种单糖， 称为 L-鼠李糖（Ｒhamnose），又称鼠李糖、甲基戊糖，L-鼠李糖 的纯品为无色粉末，呈结晶状，自然界里主要存在于植物多 糖、糖苷、植物胶及细菌多糖中，多为 L 型。其甜度是蔗糖的 33% ，可用于生产香精香料，可食用；可以作为药物的中间 体、合成强心药物；可与其他物质反应形成风味物质、用作甜 味剂；可用于农作物疾病的防治；还可作为肠道渗透测试剂 使用，并具有明显的抗癌作用［1 －3］。
L-鼠李糖可由 L-鼠李糖脂水解制备。碱法水解可用 1 mol / L NaOH 40 ℃ 回流 12 h，酸法水解可用 1 mol / L HCl 回 流 2． 5 h，或者在 30 ～ 100 ℃ 加 H2 SO4 水解。L-鼠李糖脂水 解后得到 L-鼠李糖和 3-羟基酸，可用乙酸乙酯萃取 3-羟基 酸，L-鼠李糖在水层；也可用离子交换法，调 pH ＞ 5，用阴离 子柱分离 3-羟基酸；还可用层析法分离 L-鼠李糖［11］。
基金项目 作者简介 收稿日期
国家高新技术研究发展计划（863 计划） （2011AA10A214） ； 中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目 （1610322012001 ） ； 西 藏 农 牧 厅 横 向 委 托 项 目 （ 2013 － 2014） 。 高旭东（1988 － ） ，女，满族，辽宁鞍山人，硕士研究生，研究 方向：食 品 安 全 与 品 质 控 制。 * 并 列 通 讯 作 者： 梁 剑 平 （1962 － ） ，男，研究员，博士生导师，从事新型中兽药的研 发；陈士恩（1964 － ） ，男，教授，硕士生导师，从事食品安全 与品质控制研究。 2014-05-19
重组大肠杆菌产耐热α-L-鼠李糖苷酶高密度发酵条件的优化
α-L-鼠李糖苷酶（α-L-rhamnosidase ，EC 3.2.1.40）广泛存在于自然界中，如哺乳动物组织、植物、真菌、细菌等[1-4]。
该酶是一种应用广泛的糖苷水解酶，它能高效水解多种末端含有非还原性鼠李糖残基的天然化合物，如水解芦丁为异槲皮苷[3]，水解淫羊藿苷C 为淫羊藿苷[5]，水解柚皮苷为普鲁宁等[4]。
此外，少数α-L-鼠李糖苷酶还能以L-鼠李糖为供体，通过逆水解反应催化合成鼠李糖苷，如甘露醇鼠李糖基化、酚类化合物鼠李糖基化等[6，7]。
迄今为止，根据CAZy 数据库，α-L-鼠李糖苷酶分属于三大糖苷水解酶家族，即GH13家族、GH78家族和GH106家族[8]，其中大部分属于GH78家族。
此外，α-L-鼠李糖苷酶是一种重要的酶，在食品和制药工业中有着广泛的应用。
然而，目前报道的α-L-鼠李糖苷酶普遍产量不高，到目前为止，全球还没有商品化的α-L-鼠李糖苷酶产品，这极大限制了该酶在工业上的应用。
大肠杆菌是遗传背景最清楚的菌株，其具有培养成本低、抗污染能力强、生长周期短、蛋白表达量高等优势，已经成为最常用的外源蛋白表达系统。
采用高密度发酵技术，能显著提高所培养的菌体密度，最终增加单位体积单位时间内目的产物的比生产率，缩减生产周期，提升经济效益，已经在工业中有很广泛的应用[9]。
在大肠杆菌高密度发酵中，大多采用补料分批发酵方式，以实现高密度的大肠杆菌和所需的蛋白质生产[10]。
这种补料方式一方面可以避免因某些营养成分初始浓度过高而出现底物抑制现象，另一方面又能够防止因限制性营养成分被耗尽而影响细胞的生长和产物的形成。
重组大肠杆菌高密度发酵是一个复杂的过程，需要对其生长的发酵参数进行优化，如葡萄糖进料速率、诱导温度、诱导pH 等。
葡萄糖是一种便宜且速效碳源，在大肠杆菌发酵生产中优于其他碳源。
但是，在有氧条件下，过多的葡萄糖会导致大肠杆菌代谢副产物的产生。
最常见的副产物是乙酸，它是由磷酸转乙酰酶（PTA ）/乙酸激酶（ACKA ）和丙酮酸氧化酶（POXB ）两种途径产生的[11]，主要原因是加入中央代谢系统的碳与细胞呼吸或三羧酸循环的有限能力之间不平衡[12]。
α-l-鼠李糖苷键
α-l-鼠李糖苷键α-l-鼠李糖苷键为题，用中文写一篇1500字文章。
文章一：α-l-鼠李糖苷键的发现与研究α-l-鼠李糖苷键，是一种在有机化学领域中被广泛研究的键。
它是由α连接一个l型鼠李糖分子的键。
这种键的发现以及对其性质的深入研究，对于我们理解生物体内的化学反应以及生物体的功能起着重要的作用。
鼠李糖是一种重要的天然产物，在许多植物中都有存在。
而α-l-鼠李糖苷键则是连接鼠李糖分子的一种键。
早期的研究表明，这种键与生物体内许多重要的反应有关，如酶催化、蛋白质结构以及糖代谢等。
因此，研究人员对α-l-鼠李糖苷键的深入研究逐渐引起了广泛的关注。
在研究中，科学家通过使用先进的实验技术，如核磁共振（NMR）和质谱法，成功地对α-l-鼠李糖苷键进行了非常详细的研究。
这些实验不仅揭示了α-l-鼠李糖苷键的结构特征，还对其性质和在生物体内的功能有了更深入的了解。
研究发现，α-l-鼠李糖苷键的稳定性和反应活性与其他类型的键有所不同。
它的稳定性使得它能够在生物体内起到重要的功能角色，而其较高的反应活性则使得它在生物体内的许多重要反应中起到关键的催化作用。
除了生物体内的重要功能外，α-l-鼠李糖苷键还被应用于药物研发、合成化学等领域。
通过对这种键的研究，科学家们可以更好地设计和合成具有特定生物活性的化合物，从而有助于新药的研制以及其他有机化学领域的发展。
总之，α-l-鼠李糖苷键是一种在有机化学和生物化学领域中备受关注的键。
通过对其性质和功能的研究，我们可以更好地理解生物体内化学反应的本质，并且为药物研发提供更好的指导。
随着技术的进步和研究的不断深入，相信我们对α-l-鼠李糖苷键的认识将越来越全面，为我们带来更多的启示与突破。
文章二：α-l-鼠李糖苷键在生物体内的功能探索α-l-鼠李糖苷键是一种连接α型糖基和l型鼠李糖分子的键。
对于这种键在生物体内的功能，科学家们进行了进一步的探索，并取得了显著的研究成果。
首先，研究表明α-l-鼠李糖苷键在酶催化中发挥着重要的作用。
一种鼠李糖脂的制备方法[发明专利]
![一种鼠李糖脂的制备方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s1/m/510b1f0b366baf1ffc4ffe4733687e21af45ffaa.png)
[19]中华人民共和国国家知识产权局[12]发明专利申请公布说明书[11]公开号CN 1891831A [43]公开日2007年1月10日[21]申请号200510040858.1[22]申请日2005.07.01[21]申请号200510040858.1[71]申请人南京理工大学地址210094江苏省南京市孝陵卫200号[72]发明人杨树林 宁长发 沈薇 陆晓 唐仕荣 孟广荣 高力虎 [74]专利代理机构南京理工大学专利中心代理人朱显国[51]Int.CI.C12P 19/02 (2006.01)权利要求书 2 页 说明书 7 页 附图 2 页[54]发明名称一种鼠李糖脂的制备方法[57]摘要本发明公开了一种鼠李糖脂的制备方法。
它包括以下步骤：菌种筛选，对取自油田污水或油泥的样品浸泡预处理后接入增殖培养基，划线法接种于血液琼脂平板上培养，挑取单菌落，并接种于蓝色琼脂平板上培养，挑取出现蓝色晕圈的菌落接入斜面作菌种保藏；将初筛菌株接入发酵培养基中发酵后测定其排油活性、乳化性能及发酵液表面张力，然后选取目的菌株；发酵工艺优化，将经筛选的菌株进行发酵，在发酵过程中进行发酵培养基优化、发酵条件优化、菌种优化得到鼠李糖脂发酵液；对鼠李糖脂发酵液进行提取得到鼠李糖脂粗产品。
本发明具有所筛选菌株的产量高、重烃降解效果明显、克服仅依靠生物表面活性剂溶血性进行判断的缺点、提高了筛选准确度等显著优点。
200510040858.1权 利 要 求 书第1/2页 1、一种鼠李糖脂的制备方法，其特征在于包括以下步骤：1.1在25～35℃的环境温度下菌种的筛选：对取自油田污水或油泥的样品浸泡预处理后接入增殖培养基培养22～24小时，经增殖培养的培养液采用划线法接种于血液琼脂平板上培养24～72小时，挑取溶血圈的单菌落，并接种于蓝色琼脂平板上培养24～120小时，挑取出现蓝色晕圈的菌落接入斜面作菌种保藏；将保藏在斜面培养基中的初筛菌株接入发酵培养基中发酵72～120小时后测定其排油活性、乳化性能及发酵液表面张力，然后选取目的菌株，并存种；1.2发酵工艺的优化：将经筛选选取的菌株进行发酵，在发酵过程中首先进行发酵培养基优化，对发酵过程的碳源、氮源、无机盐及各基质用量进行优化选择，通过考察菌株在各条件下的鼠李糖脂产量、发酵液表面张力变化、发酵周期长短、发酵成本和发酵过程控制难易度确定最优发酵培养基；其次，进行发酵条件优化，对发酵温度在20～50℃、pH＝3～11、溶解氧、搅拌速度和生物反应器装液量以及种子培养、接种量1％～10％的条件进行优化；最后进行菌种优化得到鼠李糖脂发酵液；1.3对鼠李糖脂发酵液的提取：将发酵液经离心除菌体后，过滤除去不溶性杂质和剩余液蜡，溶液pH＝6.0～6.5，加入萃取溶剂，搅拌、萃取分液，合并有机相，用等体积水洗，用旋转蒸发仪减压蒸除溶剂，得到鼠李糖脂粗样品。
一种L-鼠李树胶糖-1-磷酸醛缩酶在催化合成稀有糖中的应用[发明专利]
专利名称：一种L-鼠李树胶糖-1-磷酸醛缩酶在催化合成稀有糖中的应用
专利类型：发明专利
发明人：高晓冬,李子杰,吴晓茹,中西秀树
申请号：CN201510425072.5
申请日：20150717
公开号：CN105219756A
公开日：
20160106
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种L-鼠李树胶糖-1-磷酸醛缩酶在催化合成稀有糖中的应用，为避免直接使用DHAP，大幅度降低了合成稀有糖的成本。
其采用“一釜四酶法”的策略，利用来源于嗜热菌Thermotoga？maritima？MSB8的L-鼠李树胶糖-1-磷酸醛缩酶进行了D-阿洛酮糖、D-山梨糖、L-果糖和L-塔格糖等一系列稀有糖的合成，实验证明该醛缩酶具有很好热稳定性，并且在以D-甘油醛为受体时，能够以很高的选择性来合成具有重要应用价值的D-阿洛酮糖。
申请人：江南大学
地址：214122 江苏省无锡市蠡湖大道1800号江南大学
国籍：CN
代理机构：无锡互维知识产权代理有限公司
代理人：王爱伟
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也可利用再生材料制备 L-鼠李糖脂，水解后得 L-鼠李 糖。虽然生产 L-鼠李糖脂的原料一直来源很广，从石油化学 衍生的物质到天然原料，最常用的是植物油、糖和甘油。现 已证明，许多废弃物也可能用于生产 L-鼠李糖脂，如脂肪酸、 废煎炸油、橄榄油的生产废水、乳清废物［10］。总结了“传统 的”生产 L-鼠李糖脂的可再生原料：糖、油、甘油及潜在的可 利用废弃物。总结了对下一代产 L-鼠李糖脂菌种的要求，如 下：扩大原料谱，增加代谢谱，减少副产物的形成和更易于控 制。如果能达到这点，L-鼠李糖脂的规模化生产在经济上是 可行的，并且在不远的将来，可能在商业水平上获得成功。
L-鼠李糖可以在植物中提取，也可以用发酵法等途径进 行工业生产。目前，国内外提取、分离和制备 L-鼠李糖的技 术工艺水平日趋提高，笔者就近年来 L-鼠李糖的制备方法和 检测方法等几方面概述 L-鼠李糖的研究进展。 1 L-鼠李糖的制备方法 1． 1 植物中 L-鼠李糖的提取 在自然界中，由于 L-鼠李糖 多存在于植物和细菌中，故可利用植物资源提取 L-鼠李糖。 肖芳等在穿龙薯蓣皂甙酸解液中提取 L-鼠李糖所选方法为 醇提取联 合 高 压 酸 解 法［4］。具 体 操 作 为： 取 新 鲜 穿 龙 薯 蓣 100 g，研磨并过筛后离心 15 min，加醇提取所得离心沉淀 2 次，合并提取液，水浴蒸馏，溶剂回收，剩余馏渣即皂甙粗提
物；60 ℃ 干燥至恒重后，于 0． 14 MPa 下将其加适量酸水解一 定时间，过滤；滤液添加 Ca（ OH）2 中和至中性或偏酸性，脱 色并过滤，添加酵母培养数小时，跟踪测定葡萄糖至耗尽，发 酵终止；过滤除去酵母及部分杂质，测定滤液的 L-鼠李糖含 量，计算 L-鼠李糖得率；滤液浓缩后用乙醇重结晶，得 L-鼠李 糖晶体，最终 L-鼠李糖得率最高为 0． 196% 。
刘叔兴等以盾叶薯蓣（ 黄姜） 为原料，从皂苷酸解液中提 取出 L-鼠李糖［5］。粉碎干黄姜，研磨后过筛，精密称取 10 g， 萃取剂选用体积分数 30% 的乙醇，与适量的十二烷基硫酸钠 混合均匀。试验条件：黄姜和乙醇的质量比是 1∶10，25． 8 kHz 为超声波频率，超声 40 min，对总皂苷进行提取，抽滤后浓缩 滤液，加入浓度为 1． 5 mol / L 的硫酸 20 ml，于电热套内水解 4 h，完毕后抽滤，滤渣冲洗至中性后烘干，可于索氏提取器内 提取 制 备 皂 苷 元，滤 液 即 为 酸 解 液，向 酸 解 液 中 加 入 Ca（OH）2 调节 pH 至中性或者偏酸性，过滤除去 CaSO4 沉淀， 于滤液中加入活性炭进行脱色，过滤除去色素，得到无明显 颜色的滤液。然后加入 2% 的活化酵母，36 ℃ 恒温发酵，用 薄层色谱法跟踪测定葡萄糖，待其耗尽即可终止发酵，过滤 除去杂质，将滤液进行 L-鼠李糖含量测定并计算得率。滤液 浓缩后用甲醇重结晶，可得 L-鼠李糖晶体，最终 L-鼠李糖得 率最高为 1． 5% 。
基金项目 作者简介 收稿日期
国家高新技术研究发展计划（863 计划） （2011AA10A214） ； 中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目 （1610322012001 ） ； 西 藏 农 牧 厅 横 向 委 托 项 目 （ 2013 － 2014） 。 高旭东（1988 － ） ，女，满族，辽宁鞍山人，硕士研究生，研究 方向：食 品 安 全 与 品 质 控 制。 * 并 列 通 讯 作 者： 梁 剑 平 （1962 － ） ，男，研究员，博士生导师，从事新型中兽药的研 发；陈士恩（1964 － ） ，男，教授，硕士生导师，从事食品安全 与品质控制研究。 2014-05-19
肃省新兽药工程重点实验室，甘肃兰州 730050；2． 西北民族大学生命科学与工程学院，甘肃兰州 730030）
摘要 L-鼠李糖作为一种微量糖广泛分布于植物中，是食品加工中常用的甜味剂之一，还可用于生产香精香料。研究发现，L-鼠李糖 还可以诱导酵母甘露聚糖提高在动物机体中 α-甘露糖苷酶的活性，显示出良好的药用价值。一方面介绍了 L-鼠李糖的制备方法及应 用的研究情况，另一方面根据 L-鼠李糖的化学性质及测定原理，结合近年来 L-鼠李糖含量检测研究领域中的最新研究成果，综述了 L鼠李糖的检测方法，并重点从薄层色谱发（TLC）、高效液相色谱法（HPLC）及二硝基水杨酸法（DNS）等几方面介绍 L-鼠李糖的定性、定 量检测方法，并对各种检测方法的优缺点进行了比较。 关键词 L-鼠李糖；薄层色谱；高效液相色谱；二硝基水杨酸法 中图分类号 S 609． 9 文献标识码 A 文章编号 0517 － 6611（2014）18 － 05966 － 03
Ｒesearch Advanceon Preparation and Determination Method of L-rhamnose GAO Xu-dong，LIANG Jian-ping，CHEN Shi-en et al （Key Laboratory of Veterinary Pharmaceutical Development of Ministry of Agriculture，Gansu Key Laboratory of New Animal Drug Project，Lanzhou Institute of Husbandry and Pharmaceutical Sciences of CAAS，Lanzhou， Gansu 730050； College of Life Sciences and Engineering，Northwest University for Nationalities，Lanzhou，Gansu 730030） Abstract L-rhamnose as a trace sugar is widely distributed in plants，it’s one of the common sweeteners in food processing，it also can be used in the production of flavor and fragrance． The study found that L-rhamnose induced yeast mannan can improve α-mannosidase activity in animal body，and show a good medicinal value． On the one hand the research situation about preparation method and application of L-rhamnose was introduced，on the other hand，according to the chemical properties and determination principle of L-rhamnose，combined with the latest achievements，the detection methods of L-rhamnose were reviewed，qualitative，quantitative detection method of L-rhamnose were introduced from aspects of TLC，HPLC，DNS and other aspects，the advantages and disadvantages of various detecting technologies were compared． Key words L-rhamnose； TLC； HPLC； DNS
42 卷 18 期
高旭东等 L-鼠李糖的制备及检测方法研究进展
5967
虽然植物是提取 L-鼠李糖的重要来源，但由于其复杂的 分离工艺以及高浓度的多糖限制了发酵中氧和营养物质的 传递，故该方法有一定的局限性。 1． 2 生物酶解法制备 L-鼠李糖 L-鼠李糖多从天然植物 中获得，如从橡树皮中提取栎皮酮，通过水解得到含 L-鼠李 糖的溶液，经分离提纯获得 L-鼠李糖纯品。此类生产方法有 一定缺点，如劳动强度大，分离提纯过程中易生成有毒物质， 原材料受季节、地域及运输等因素影响［7］。
甘露糖六位的一个羟基被氢取代而衍生的一种单糖， 称为 L-鼠李糖（Ｒhamnose），又称鼠李糖、甲基戊糖，L-鼠李糖 的纯品为无色粉末，呈结晶状，自然界里主要存在于植物多 糖、糖苷、植物胶及细菌多糖中，多为 L 型。其甜度是蔗糖的 33% ，可用于生产香精香料，可食用；可以作为药物的中间 体、合成强心药物；可与其他物质反应形成风味物质、用作甜 味剂；可用于农作物疾病的防治；还可作为肠道渗透测试剂 使用，并具有明显的抗癌作用［1 －3］。
DOI:10.13989/ki.0517-6611.2014.18.029
安徽农业科学，Journal of Anhui Agri． Sci． 2014，42（18） ：5966 － 5968
责任的 制 备 及 检 测 方 法 研 究 进 展
高旭东1，2 ，郝宝成1 ，梁剑平1* ，陈士恩2* （1． 中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所，农业部兽用药物创制重点实验室，甘
作为方法改进，张美超等利用微生物所产的芦丁 α-L-鼠 李糖苷酶酶解制备 L-鼠李糖［1］。试验前期已筛选出一种芦 丁 α-L-鼠李糖苷酶，该酶能特异性水解芦丁上的 L-鼠李糖苷 键，生成异槲皮苷和 L-鼠李糖［8］。取芦丁 24． 0 g 酶解，产物 用大孔吸附树脂分离，得 L-鼠李糖粗糖液 4． 18 g，产率为 17. 4% 。基于结晶法对 L-鼠李糖粗糖液精制，在 L-鼠李糖水 溶液质量浓度 0． 4 g / ml 时，溶液达到过饱和状态并开始结 晶，得无色透明结晶，产率为 27． 5% 。经高效液相色谱检测， L-鼠李糖纯度高达 99． 0% 。研究可为生物转化法大量生产 L-鼠李糖提供研究依据，生物酶法因其具有水解特异性好、 环境友好等特点，为 L-鼠李糖的制备提供了新的思路。 1． 3 微生物发酵制备 L-鼠李糖 利用微生物生产含有 L鼠李糖的 L-鼠李糖脂是大规模生产 L-鼠李糖较有发展前景 的方法。发酵法生产 L-鼠李糖较常选用假单孢菌，其中铜绿 假单孢菌［9］最为常用。培养的碳源、氮源、无机离子种类及 浓度变化，均会影响 L-鼠李糖脂的生物合成，有些碳源适于 糖脂的形成。在微生物发酵法制备 L-鼠李糖的条件对比研 究中，李祖义等选取糠油为碳源，利用假单胞菌发酵制备 L鼠李糖脂，水解后分离得 L-鼠李糖［7］。
L-鼠李糖可以在植物中提取，也可以用发酵法等途径进 行工业生产。目前，国内外提取、分离和制备 L-鼠李糖的技 术工艺水平日趋提高，笔者就近年来 L-鼠李糖的制备方法和 检测方法等几方面概述 L-鼠李糖的研究进展。 1 L-鼠李糖的制备方法 1． 1 植物中 L-鼠李糖的提取 在自然界中，由于 L-鼠李糖 多存在于植物和细菌中，故可利用植物资源提取 L-鼠李糖。 肖芳等在穿龙薯蓣皂甙酸解液中提取 L-鼠李糖所选方法为 醇提取联 合 高 压 酸 解 法［4］。具 体 操 作 为： 取 新 鲜 穿 龙 薯 蓣 100 g，研磨并过筛后离心 15 min，加醇提取所得离心沉淀 2 次，合并提取液，水浴蒸馏，溶剂回收，剩余馏渣即皂甙粗提
物；60 ℃ 干燥至恒重后，于 0． 14 MPa 下将其加适量酸水解一 定时间，过滤；滤液添加 Ca（ OH）2 中和至中性或偏酸性，脱 色并过滤，添加酵母培养数小时，跟踪测定葡萄糖至耗尽，发 酵终止；过滤除去酵母及部分杂质，测定滤液的 L-鼠李糖含 量，计算 L-鼠李糖得率；滤液浓缩后用乙醇重结晶，得 L-鼠李 糖晶体，最终 L-鼠李糖得率最高为 0． 196% 。
刘叔兴等以盾叶薯蓣（ 黄姜） 为原料，从皂苷酸解液中提 取出 L-鼠李糖［5］。粉碎干黄姜，研磨后过筛，精密称取 10 g， 萃取剂选用体积分数 30% 的乙醇，与适量的十二烷基硫酸钠 混合均匀。试验条件：黄姜和乙醇的质量比是 1∶10，25． 8 kHz 为超声波频率，超声 40 min，对总皂苷进行提取，抽滤后浓缩 滤液，加入浓度为 1． 5 mol / L 的硫酸 20 ml，于电热套内水解 4 h，完毕后抽滤，滤渣冲洗至中性后烘干，可于索氏提取器内 提取 制 备 皂 苷 元，滤 液 即 为 酸 解 液，向 酸 解 液 中 加 入 Ca（OH）2 调节 pH 至中性或者偏酸性，过滤除去 CaSO4 沉淀， 于滤液中加入活性炭进行脱色，过滤除去色素，得到无明显 颜色的滤液。然后加入 2% 的活化酵母，36 ℃ 恒温发酵，用 薄层色谱法跟踪测定葡萄糖，待其耗尽即可终止发酵，过滤 除去杂质，将滤液进行 L-鼠李糖含量测定并计算得率。滤液 浓缩后用甲醇重结晶，可得 L-鼠李糖晶体，最终 L-鼠李糖得 率最高为 1． 5% 。
基金项目 作者简介 收稿日期
国家高新技术研究发展计划（863 计划） （2011AA10A214） ； 中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目 （1610322012001 ） ； 西 藏 农 牧 厅 横 向 委 托 项 目 （ 2013 － 2014） 。 高旭东（1988 － ） ，女，满族，辽宁鞍山人，硕士研究生，研究 方向：食 品 安 全 与 品 质 控 制。 * 并 列 通 讯 作 者： 梁 剑 平 （1962 － ） ，男，研究员，博士生导师，从事新型中兽药的研 发；陈士恩（1964 － ） ，男，教授，硕士生导师，从事食品安全 与品质控制研究。 2014-05-19
肃省新兽药工程重点实验室，甘肃兰州 730050；2． 西北民族大学生命科学与工程学院，甘肃兰州 730030）
摘要 L-鼠李糖作为一种微量糖广泛分布于植物中，是食品加工中常用的甜味剂之一，还可用于生产香精香料。研究发现，L-鼠李糖 还可以诱导酵母甘露聚糖提高在动物机体中 α-甘露糖苷酶的活性，显示出良好的药用价值。一方面介绍了 L-鼠李糖的制备方法及应 用的研究情况，另一方面根据 L-鼠李糖的化学性质及测定原理，结合近年来 L-鼠李糖含量检测研究领域中的最新研究成果，综述了 L鼠李糖的检测方法，并重点从薄层色谱发（TLC）、高效液相色谱法（HPLC）及二硝基水杨酸法（DNS）等几方面介绍 L-鼠李糖的定性、定 量检测方法，并对各种检测方法的优缺点进行了比较。 关键词 L-鼠李糖；薄层色谱；高效液相色谱；二硝基水杨酸法 中图分类号 S 609． 9 文献标识码 A 文章编号 0517 － 6611（2014）18 － 05966 － 03
Ｒesearch Advanceon Preparation and Determination Method of L-rhamnose GAO Xu-dong，LIANG Jian-ping，CHEN Shi-en et al （Key Laboratory of Veterinary Pharmaceutical Development of Ministry of Agriculture，Gansu Key Laboratory of New Animal Drug Project，Lanzhou Institute of Husbandry and Pharmaceutical Sciences of CAAS，Lanzhou， Gansu 730050； College of Life Sciences and Engineering，Northwest University for Nationalities，Lanzhou，Gansu 730030） Abstract L-rhamnose as a trace sugar is widely distributed in plants，it’s one of the common sweeteners in food processing，it also can be used in the production of flavor and fragrance． The study found that L-rhamnose induced yeast mannan can improve α-mannosidase activity in animal body，and show a good medicinal value． On the one hand the research situation about preparation method and application of L-rhamnose was introduced，on the other hand，according to the chemical properties and determination principle of L-rhamnose，combined with the latest achievements，the detection methods of L-rhamnose were reviewed，qualitative，quantitative detection method of L-rhamnose were introduced from aspects of TLC，HPLC，DNS and other aspects，the advantages and disadvantages of various detecting technologies were compared． Key words L-rhamnose； TLC； HPLC； DNS
42 卷 18 期
高旭东等 L-鼠李糖的制备及检测方法研究进展
5967
虽然植物是提取 L-鼠李糖的重要来源，但由于其复杂的 分离工艺以及高浓度的多糖限制了发酵中氧和营养物质的 传递，故该方法有一定的局限性。 1． 2 生物酶解法制备 L-鼠李糖 L-鼠李糖多从天然植物 中获得，如从橡树皮中提取栎皮酮，通过水解得到含 L-鼠李 糖的溶液，经分离提纯获得 L-鼠李糖纯品。此类生产方法有 一定缺点，如劳动强度大，分离提纯过程中易生成有毒物质， 原材料受季节、地域及运输等因素影响［7］。
甘露糖六位的一个羟基被氢取代而衍生的一种单糖， 称为 L-鼠李糖（Ｒhamnose），又称鼠李糖、甲基戊糖，L-鼠李糖 的纯品为无色粉末，呈结晶状，自然界里主要存在于植物多 糖、糖苷、植物胶及细菌多糖中，多为 L 型。其甜度是蔗糖的 33% ，可用于生产香精香料，可食用；可以作为药物的中间 体、合成强心药物；可与其他物质反应形成风味物质、用作甜 味剂；可用于农作物疾病的防治；还可作为肠道渗透测试剂 使用，并具有明显的抗癌作用［1 －3］。
DOI:10.13989/ki.0517-6611.2014.18.029
安徽农业科学，Journal of Anhui Agri． Sci． 2014，42（18） ：5966 － 5968
责任的 制 备 及 检 测 方 法 研 究 进 展
高旭东1，2 ，郝宝成1 ，梁剑平1* ，陈士恩2* （1． 中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所，农业部兽用药物创制重点实验室，甘
作为方法改进，张美超等利用微生物所产的芦丁 α-L-鼠 李糖苷酶酶解制备 L-鼠李糖［1］。试验前期已筛选出一种芦 丁 α-L-鼠李糖苷酶，该酶能特异性水解芦丁上的 L-鼠李糖苷 键，生成异槲皮苷和 L-鼠李糖［8］。取芦丁 24． 0 g 酶解，产物 用大孔吸附树脂分离，得 L-鼠李糖粗糖液 4． 18 g，产率为 17. 4% 。基于结晶法对 L-鼠李糖粗糖液精制，在 L-鼠李糖水 溶液质量浓度 0． 4 g / ml 时，溶液达到过饱和状态并开始结 晶，得无色透明结晶，产率为 27． 5% 。经高效液相色谱检测， L-鼠李糖纯度高达 99． 0% 。研究可为生物转化法大量生产 L-鼠李糖提供研究依据，生物酶法因其具有水解特异性好、 环境友好等特点，为 L-鼠李糖的制备提供了新的思路。 1． 3 微生物发酵制备 L-鼠李糖 利用微生物生产含有 L鼠李糖的 L-鼠李糖脂是大规模生产 L-鼠李糖较有发展前景 的方法。发酵法生产 L-鼠李糖较常选用假单孢菌，其中铜绿 假单孢菌［9］最为常用。培养的碳源、氮源、无机离子种类及 浓度变化，均会影响 L-鼠李糖脂的生物合成，有些碳源适于 糖脂的形成。在微生物发酵法制备 L-鼠李糖的条件对比研 究中，李祖义等选取糠油为碳源，利用假单胞菌发酵制备 L鼠李糖脂，水解后分离得 L-鼠李糖［7］。