临床检验与微生物_重点

SPA:葡萄球菌A蛋白,是一种具有种属特异性的完全抗原,从人体分离出的金黄色葡萄球菌几乎都含有SPA.表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌则不具有.SPA可与IgG的Fc段能非特异的结合而不影响Fab段的免疫活性,故可用作检测各种抗原或抗体的实验诊断试剂.MRSA:耐甲氧西林金黄色葡萄球菌,对甲氧西林等常表现出异质耐药性.能产生b-内酰胺酶而使青霉素失效而表现出耐药性。

胆汁溶菌试验: 胆汁或胆盐可溶解肺炎链球菌,可能是由于胆汁降低细胞膜表面的张力，使细胞膜破损或使菌体裂解；或者是由于胆汁加速了肺链本身的自溶过程。

因此主要用于肺炎链球菌与甲型链球菌的鉴别，前者阳性，后者阴性。

凝固酶试验: 血浆凝固酶是金葡菌产生的一种主要致病物质，能使含抗凝剂的人或兔血浆凝固，致病株大多数能产生，是鉴别葡萄球菌有无致病性的重要指标，能使细菌抵抗体内吞噬细胞的吞噬；保护细菌不受血清中杀菌物质的破坏；并使感染易于局限化和形成血栓。

组织培养：将人或动物离体的活组织或分散的活细胞，在实验室的试管或培养基中，模拟体内的生理条件使之生存和生长，称之为组织培养。

包涵体：包涵体是病毒在增殖的过程中，常使寄主细胞内形成一种蛋白质性质的病变结构，在光学显微镜下可见。

多为圆形、卵圆形或不定形。

TCID50 ：50%组织细胞感染的病毒剂量，将待测病毒液作10倍系列稀释，分别接种单层细胞经培养后观察CPE等指标，以能感染50%细胞的最高稀释度的病毒量为终点，经统计学处理计算出TCID50。

抗酸染色法：用石碳酸复红染色后，用盐酸乙醇分色，再用美蓝进行对比染色，即不再脱色而呈现石碳酸复红的红色，分歧杆菌为阳性。

BCG:卡介苗，即将有毒力的牛型结核分枝杆菌在甘油胆汁马铃薯培养基上长期培养传代，得到减毒菌株，可用于预防结核菌感染。

郭霍现象（Koch phenomenon）:有毒TB初次感染GP，10－14天后注射局部溃烂、坏死，附近LN肿大，细菌扩散漫延至全身，甚至死亡。

有毒TB再次感染GP，1－2天内注射局部迅速溃烂，但很快愈合，且不扩散至附近LN和全身。

说明机体对结核分枝杆菌所产生的CMI和超敏反应是同时存在的，是由不同的菌体成分激活不同的T细胞亚群释放出不同的细胞因子所引起的。

现一般认为超敏反应是由结核菌素蛋白和腊质D共同引起的，而CMI是由结核分枝杆菌核糖体RNA(rRAN)引起。

L型菌：L型是细菌、真菌等微生物的细胞壁缺陷型。

大多数细菌可在某些因素的影响下失去细胞壁变为L型。

因最早是从Lister研究所中分离出该菌，故命名为L型菌。

形态、染色、生化、抗药性、Ag性、致病性等生物学性状都与原菌不同，对作用细胞壁的抗生素均有抵抗力。

鉴定要点：(1)形态染色性：革兰染色着色不定，明显多态性，CW 染色可见缺壁浓染细菌；(2)生长情况：在液体高渗培养基中呈微混、颗粒沉淀和沿管壁生长，在高渗琼脂平板上呈三种菌落形态；(3)返祖试验：L型菌在等渗(回复)培养基中可返祖为原菌，再进行鉴定：染色、药敏、生化等。

正常微生物群或正常菌群（normal flora）：指定居在人类皮肤及粘膜上的各类微生物，在正常情况下无害，而且具有拮抗外来病原微生物和提供某些营养物的作用。

条件致病微生物(conditionalmicroorganism）：原属正常菌群，由于机体免疫力下降、寄居部位改变和微生态失调，能引起内源性感染。

病原微生物pathogenic microorganism）：少数能引起人与动植物致病的微生物，影响人类健康，是医学微生物研究的主要对象。

肥达反应：用已知伤寒、副伤寒沙门O、H抗原，检测受检者血清中无相应的Ab的半定量试管凝集试验称为肥达试验。

外斐试验：因变形菌属中某些菌株OX19、OX2、OX k的菌体与默写立克次体有共同的Ag成分，故可以用这些变形杆菌代替立克次体Ag与患者血清做凝集试验来协助立克次体病的诊断的一种试管交叉凝集试验。

冷凝集试验：肺炎支原体引起的肺炎患者血清中常产生冷凝集素（一种大分子球蛋白，非特异性自身Ab，IgM），它与2%O型人或自身的RBC，在4℃过夜，出现RBC凝集现象，效价>1：64（常规法）为阳性，50%的病人发病1-2周后呈阳性反应，是一种非特性血清学反应。

呼吸道合胞V 、腮腺炎V、流感V等感染后也可出现血中冷凝集素效价升高。

Vi-Ag：为酸性多糖聚合物，不耐热或经石碳酸处理即被破坏，人工传代也易丧失，新分离的伤寒级副伤寒丙沙门菌带有此抗原。

带菌者：体内带有病原菌，但无临床症状的人。

带菌者能不断排出病原菌传染周围的人群。

包括恢复期带菌者、慢性带菌者、健康带菌者。

X因子：是一种耐热的存在于血红蛋白中的一种血红素及其衍生物，是一种含铁卟啉，是细菌合成过氧化氢酶，过氧化物酶与细胞色素氧化酶的辅基。

V因子：是一种对热不稳定的vitB类物质，存在于血液和某些植物中，是脱氢酶的辅酶，在细菌的呼吸中起传递氢的作用。

卫星现象：把金黄色葡萄球菌与流感嗜血杆菌一起培养时，可见到流感杆菌的菌落较大，而远离金葡的流感杆菌菌落较小，这种现象称“卫星现象”。

“汹涌发酵”现象：在牛乳培养基中能分解乳糖产酸，使酪蛋白凝固，同时产生大量气体（H2与CO2），将凝固的酪蛋白冲成蜂窝状，并将液面上的凡土林层向上推挤，甚至冲开管口棉塞，气势凶猛，称为“汹涌发酵”（stormy fermentation），是此菌的特征。

泡沫肝：气性坏疽发病急剧，可见脏器和肌肉内有大量气泡，尤以肝脏最为明显，称“泡沫肝”。

预还原：培养基用前24h必须置于无氧环境，使其预还原或使用预还原制作的培养基，如为液体培养基，在用前必须煮沸10min，以驱除溶解氧，并迅速冷却，立即接种。

Nagler反应：在蛋黄琼脂平板上，菌落周围出现乳白色混浊圈。

是由于此菌产生的卵磷脂酶分解蛋黄中的卵磷脂，可被特异的抗血清所中和，这一现象称为Nagler反应。

最低抑菌浓度（minimal inhibitory concentration,MIC）：细菌生长被完全抑制的最低药物浓度为该药对测试菌的MIC。

最低杀菌浓度（minimal bactericidal concentration,MBC）：某抗菌药物能杀灭99.9%以上测试菌时的最低药物浓度。

感染（infection）：病原体在适宜的条件下突破机体的防御功能，侵入人体内并生长繁殖的过程即为感染，又称传染。

感染症（infection diseases）：在感染的过程中由于人体组织、细胞受损并出现一系列的临床症状即为感染症或感染病。

正常人的血液是无菌的。

菌血症（bacteremia）：当少量细菌侵入血液循环，为一过性，不繁殖或很少繁殖，不引起或仅引起轻微的炎症反应者称为菌血症。

对菌血症的新认识是在血液中可检测到细菌，包括一过性和持续性在血中存在。

脓毒症（sepsis ）：脓毒症是指有全身性炎症反应的表现。

简述细菌血清学检验的原理、方法与应用。

原理：Ag与Ab在体外适宜的条件下能特异性地结合成肉眼可见的复合物。

用已知的Ab检测或鉴定未知的Ag(细菌)，通常叫血清学鉴定；也可用已知的细菌Ag检测患者血清中的相应Ab及其效价的动态变化情况，作为感染性疾病的辅助诊断，通常称血清学诊断。

因Ab均存在血清中，该类试验均要用到血清，故又统称血清学试验。

非发酵菌（Nonfermenter）是一大群不发酵葡萄糖或仅以氧化形式利用葡萄糖的需氧或兼氧的无芽胞革兰杆菌.常见菌: 假单胞菌属,不动杆菌属、产碱杆菌属、黄杆菌属、莫拉菌属和军团菌属血清学鉴定：常用方法：凝集反应、免疫荧光技术、酶免测定等。

1.凝集反应 (1) 玻片法：已知Ab＋待测菌→肉眼可见的颗粒或凝集块。

该试验简单易行、特异性强，主要用于鉴定菌种及分型。

如沙门菌属、志贺菌属、致病性大肠埃希菌、霍乱弧菌、脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌、肺炎克雷伯菌、布鲁菌等的鉴定。

（2）反向间接血凝试验Ab-RBC(Ab致敏RBC) ＋待测菌(Ag) → RBC凝集。

试验敏感性高，反应快，结果易观察。

常用于霍乱弧菌、布鲁菌、脑膜炎奈瑟菌、炭疽芽胞杆菌、鼠疫耶尔森等菌的快速诊断，也可用于金葡肠毒素和肉毒毒素等的测定。

常在微量滴定孔板中做。

（3）乳胶凝集试验：Ab-聚苯乙烯颗粒(致敏颗粒) ＋待测菌(Ag) →凝集。

该试验敏感度不及反向间接凝集，但操作简便，反应快，故被临床广泛应用。

(4) 协同凝集试验原理：金葡细胞壁中的A蛋白(stapylococcal protein A SPA)能与IgG的Fc段非特异结合，Fab段暴露，并保持原有Ab的活性，当与相应Ag相遇时，Ag则与Fab段的Ag结合位点结合，从而使含A 蛋白的葡萄球菌相互联结而协同凝集。

应用：该法快速、简便，灵敏性高，易于观察结果。

已广泛用于肺双、沙门菌、志贺菌、脑双及链球菌的快速鉴定和分群(型)。

2.免疫荧光原理：利用免疫学特异性反应与荧光示踪技术相结合的显微镜检查手段。

方法：常用的有直接法、间接法和免疫荧光菌球法。

应用：该法快速、简便，特异性强，已广泛用于临床标本的细菌学检验。

3.酶联免疫吸附试验(ELISA) ：有双抗夹心法和竞争法，临床上常用成套的ELISA商品试剂盒。

该法具有高度的特异性和灵敏度。

既可检测细菌Ag，也可检测血清中的Ab。

4.其它免疫方法：对流免疫电泳、免疫印迹试验、发光免疫技术。

二血清学诊断：原理：用已知细菌或其特异性Ag检测病人血清中的Ab及其效价的动态变化。

结果：若Ab效价明显高于正常人水平或患者恢复期Ab效价比急性期≥4倍，则有意义。

应用：主要用于Ag性较强的致病菌和病程较长的感染性疾病的辅助诊断。

如伤寒和副伤寒的肥达试验，炭疽病的Ascoli试验……实验动物的用途：1.分离、鉴定病原微生物；2.测定细菌的毒力；3.制备免疫血清或诊断血清等生物制品；4.建立致病动物模型；5.动物血液或血清是制备细菌培养基的必须材料；6.用于生物制品或一些药物的安全、毒性及疗效检验。

遗传学控制分类：近交系动物、突变系动物、杂种动物、封闭群动物和杂交一代动物。

2.微生物控制分类：(1)无菌动物(germ free animal GF) (2)悉生动物(Gnotobiotic animal GB): (3)无特殊病原体动物(specific pathogen free animal SPF) (4)清洁动物或最低限度疾病动物(minimal disease animal): (5)普通动物:。

选择原则：1.选择对测试菌敏感的动物；2.据试验目的、性质和要求选用不同品系的动物；3.选用动物的数量必须满足统计学要求；4.由于个体差异，应考虑动物的年龄、性别、体型、生理状态和健康情况；5.在满足试验要求的前提下，一般选用小动物。