Hela细胞培养

HALA细胞工程实验培养方案背景知识：Hela Cells是细胞学与医学研究中使用的一种细胞，源自一位美国妇女海莉耶塔·拉克斯（Henrietta Lacks）的子宫颈癌细胞的细胞系。

这名美国妇女在1951年死于该癌症。

为了让拉克斯保持匿名，此细胞株原宣称是依“Helen Lane”命名。

HeLa细胞系被视为“不死的”（即不同于其他一般的人类细胞，此细胞株不会衰老致死，并可以无限分裂下去），至今都被不间断的培养。

此细胞系跟其他癌细胞相比，增殖异常迅速。

海拉细胞系被George Gey分送给众研究单位（并未通知拉克斯本人也未得到她的许可），并用作癌症模式细胞研究。

HeLa细胞系也被用作研究细胞信号传导。

海拉细胞系是被人类乳突病毒第18型转化的，和正常子宫颈细胞有许多不同。

已证实海拉细胞系难以控制。

此细胞系有时会污染同一实验室的其他细胞培养物，干扰生物学的研究。

污染程度难以估计，因为研究人员很少检定已确立细胞系的本质和纯度。

据说有相当数目的体外细胞系其实就是HeLa细胞系，因为原先的细胞株已被快速增殖的HeLa细胞系污染物取代了。

实验原理：(1)细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻快融，实验证明这样可以最大限度的保存细胞活力。

目前细胞冻存多采用甘油或二甲基亚砜作保护剂，这两种物质能提高细胞膜对水的通透性，加上缓慢冷冻可使细胞内的水分渗出细胞外，减少细胞内冰晶的形成，从而减少由于冰晶形成造成的细胞损伤。

复苏细胞应采用快速融化的方法，这样可以保证细胞外结晶在很短的时间内即融化，避免由于缓慢融化使水分渗入细胞内形成胞内再结晶对细胞造成损伤。

(2)体外培养过程中，随着培养时间的延长，细胞的分裂繁殖，培养物越来越大长满培养空间并因接触抑制而生长缓慢，此时须将培养物分割成小的部分，重新接种到另外的培养器皿中，这个过程称为传代（passage）或再培养（subculture）意义：①细胞生长、增殖的需要；②扩大培养，获得大量同种细胞，为后续研究做准备。

引用格式：毕禄莎, 汪丹, 李昊, 等. HeLa 细胞内及组织内纳米碳点含量测定[J]. 中国测试，2023, 49(11): 76-82. BI Lusha, WANG Dan, LI Hao, et al. Measurement of nano-carbon dots in HeLa cells and tissues[J]. China Measurement & Test, 2023, 49(11): 76-82.DOI: 10.11857/j.issn.1674-5124.2023040035HeLa 细胞内及组织内纳米碳点含量测定毕禄莎1， 汪 丹2， 李 昊3， 赵梦凡4(1. 西南医科大学附属医院药学部，四川 成都 646000; 2. 成都大学，四川 成都 610106;3. 西南医科大学附属医院临床研究中心，四川 成都 646000;4. 西南医科大学附属医院乳腺外科，四川 成都 646000)摘　要: 为解决纳米碳点无对照品而难以定量的缺陷，该文利用碳点稳定的荧光性，以纯荧光化合物为“替代对照品”，建立碳点的细胞内及组织内含量测定方法。

将具有良好成像性能的碳点作为候选碳点，以甲酚紫、罗丹明6G 为对照品，建立候选碳点及其叶酸偶联物HeLa 细胞内以及生物组织中的含量测定法及其方法学验证。

结果表明，三种候选碳点DCCDs 、ACUCDs 、UCPG-Fe 及其叶酸偶联物在HeLa 细胞内和组织内，均在一定浓度范围内具有良好的线性关系（r 2=0.993 3~0.999 2），平均回收率为86.61%~102.5%，精密度RSD 在2.82%~3.91%之间。

以此分别检测出细胞内DCCDs 和FA-DCCDs 在摄取时间3 、6、9 、12 h 的纳米碳点含量在0.125 5~0.266 5 μg/mL 之间及0.891 7~1.239 μg/mL 之间；肝、肾组织内DCCDs 在摄取时间20、30、40、50、60、70 min 的纳米碳点含量分别在1.132~1.756 μg/mL 之间及0.335 8~0.704 3 μg/mL 之间。

HeLa细胞株在生物学与医学研究中，HeLa细胞是指源自一名美国妇女的子宫颈癌细胞的细胞。

这名美国妇女名叫Henrietta Lacks，于1951年死于癌症。

本来为了让Lacks保持匿名，此细胞株宣称是依“Helen Lane”命名。

HeLa细胞株被George Gey分送给众研究单位（而未通知Lacks本人也未得到她的许可），因用作癌症研究而广为流传。

至今已被视为“不死的”，也就是说此细胞株（不同于其他人类细胞）不会老死，而且可以不限次数的分裂下去，而且已被培养出一个不间断的系列。

从1951年至今，Hela细胞已经培养了50多年，分裂了18000次以上仍然没有停止的迹象。

此细胞株即使和其他癌细胞相比，增殖依然异常迅速。

一般两天左右即可长到35000000～40000000个。

然而，由于当初采集细胞时并没有征得患者或家属的同意，HeLa细胞株广泛应用引发了一系列的医学伦理问题。

2009年，Rebecca Skloot将这个具有传奇性的故事编撰成书，书名为《永生的海拉》[1]。

此细胞株被用作“model cancer cells”来研究细胞信号传导（cellular signal transduction）。

HeLa细胞株是由正常子宫颈细胞被一种人类乳突状瘤病毒（Human Papillomavirus 18 或HPV18）转型成癌细胞的，而且和正常子宫颈细胞有许多不同。

目前已经证实HeLa细胞株难以控制。

此细胞株有时会污染同一实验室的其他细胞培养环境（cell culture），进而影响生物研究。

由于研究人员很少检查已确立的细胞株的本质和纯粹度，因此污染的程度不明。

据说有相当数目的“人造”细胞株其实是HeLa细胞株，也就是说原来的细胞株被一群受到HeLa细胞株污染的快速增殖细胞淹没了。

有的学者已经认为此细胞株其实是一新的品种，因为此细胞株能自行繁殖和散布。

在1991年此细胞株被命名为Helacyton gartleri。

利用MTT法测定不同浓度顺铂对Hela细胞增殖的抑制效果摘要：目的：观察不同浓度顺铂对Hela细胞增殖的抑制作用，并探讨出最适合用于抑制Hela增殖的浓度梯度。

方法：采用MTT比色法对经不同浓度顺铂处理后的Hela细胞进行测定，检测不同浓度顺铂对细胞增殖的抑制情况。

结果：0.3～1μg/mL浓度的顺铂对Hela细胞的增殖主要起到促进作用；1～7.5μg/mL梯度内的顺铂作用不清晰，而7.5～80μg/mL这一浓度梯度内的顺铂则都是起抑制作用，且抑制作用随浓度升高而增强；只是在7.5～25μg/mL这一浓度梯度内，不同浓度顺铂间的抑制作用存在较大差异，而在25～80μg/mL这一范围内顺铂的抑制作用相差不大。

结论：高浓度顺铂对Hela细胞的增殖确实有抑制作用，而低浓度顺铂则不然，所以通过归结之后可知，较适合用于抑制Hela细胞增殖的顺铂梯度应在10～25μg/mL之间，可以是10μg/mL，15μg/mL，20μg/mL，25μg/mL。

关键词：MTT法，顺铂，Hela细胞，增殖，抑制MTT全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di-phenytetrazo-liumromide，汉语化学名为3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐，是一种黄颜色的染料。

MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法；其检测原理是：外源性MTT在哺乳类动物类活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶的作用下还原为水不溶性的蓝紫色（或蓝色）结晶甲瓒（Formazan），并沉积在细胞中；在通常情况下，甲臜生成量与活细胞数成正比[1]。

二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，因此用酶联免疫检测仪在490nm或570nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。

而死细胞中不含琥珀酸脱氢酶，因此加入MTT 不会有反应。

该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。

实验十三培养细胞的形态观察和计数【实验目的】了解培养中的动物细胞的一般形态和生长状态；掌握细胞计数的基本方法。

【实验用品】一、材料和标本培养中的HeLa细胞(人子宫颈癌上皮细胞)、NIH3T3(小鼠成纤维细胞)、HL一60细胞(人白血病细胞)二、器材和仪器倒置显微镜、细胞计数板、普通光学显微镜、乳头吸管三、试剂 0.3％台盼兰染液、0.25％胰蛋白酶一0.02％EDTA混合消化液【实验内容】一、培养细胞的形态观察(一)原理体外培养的细胞主要有两种状态。

一种是能贴附在培养支持物上的细胞，如HeLa细胞、NH3T3等，叫贴壁型细胞，体外培养的细胞绝大多数都属于这种细胞。

另一种细胞并不贴附在容器的壁上，而是悬浮在培养液中生长，如HL—60，叫做悬浮型细胞，这类细胞主要是血液原性或癌原性的细胞。

(二)操作l．将细胞培养瓶从37℃二氧化碳培养箱(或温箱)中取出，注意观察细胞培养液的颜色和清澈度。

然后，将细胞培养瓶平稳地放在倒置显微镜载物台上，此时应注意不要将瓶翻转，也不要让瓶内的液体接触瓶塞或流出瓶口。

2．打开倒置镜光源，通过双筒目镜将视野调到合适的亮度。

3．调节载物台的高度进行对焦，在看到细胞层之后，再用细调节器将物像调清楚，注意观察细胞的轮廓、形状和内部结构。

在观察时，最经常使用的是10X 物镜。

(三)结果贴壁细胞一般有两种形状，即上皮细胞形和成纤维细胞形细胞。

上皮细胞形细胞呈扁平的不规则多角形，圆形核位于中央，生长时常彼此紧密连接成单层细胞片，如HeLa细胞。

成纤维细胞形细胞形态与体内成纤维细胞形态相似，胞体呈梭形或不规则三角形，中央有圆核，胞质向外伸出2～3个长短不同的突起，细胞群常借原生质突连接成网，如 NIH3T3(参照照片)。

贴壁细胞在生长状态良好时，细胞内颗粒少，看不到有空泡，细胞边缘清楚，培养基内看不到悬浮的细胞和碎片，培养液清澈透明，而当细胞内颗粒较多，透明差，空泡多时，表明生长较差。