专练9 细胞培养类

细胞培养期末考试试题一、选择题（每题2分，共20分）1. 细胞培养中常用的培养基是：A. 蒸馏水B. 营养琼脂C. RPMI 1640D. 细菌培养基2. 细胞培养中，以下哪项不是细胞生长必需的：A. 温度B. 氧气C. 二氧化碳D. 紫外线3. 以下哪种细胞培养技术不涉及细胞的遗传改造：A. 转染B. 转导C. 克隆D. 原代培养4. 细胞培养中，pH值的维持主要依赖于：A. 细胞自身的代谢B. 培养基中的缓冲系统C. 培养箱的温湿度控制D. 定期更换培养基5. 细胞培养中，细胞传代的频率通常取决于：A. 细胞的密度B. 细胞的类型C. 培养基的成分D. 培养箱的CO2浓度二、填空题（每空2分，共20分）6. 细胞培养中，细胞的贴壁依赖于细胞表面的_________与培养基表面的_________。

7. 细胞培养过程中，细胞的增殖速率通常用_________来表示。

8. 细胞培养中，常用的细胞计数方法包括_________和_________。

9. 细胞培养时，细胞的形态变化可能预示着_________。

10. 细胞培养中，细胞的冻存通常使用含有_________的冷冻保护剂。

三、简答题（每题10分，共30分）11. 简述细胞培养中常用的传代方法及其优缺点。

12. 描述细胞培养过程中可能出现的污染类型及其预防措施。

13. 解释细胞培养中为什么要维持适宜的pH值，并说明如何调节。

四、论述题（每题15分，共30分）14. 论述原代细胞培养与次代细胞培养的区别及其在生物医学研究中的应用。

15. 讨论细胞培养技术在药物筛选和毒性测试中的应用及其重要性。

五、实验设计题（共30分）16. 设计一个实验方案，以评估不同培养条件对特定细胞株生长的影响。

请包括实验目的、原理、材料与方法、预期结果和可能的实验变量。

细胞培养技术练习题选择题 1.接种工具灭菌常采用（A） A. 灼烧 B. 高压 C.过滤 D.熏蒸2.具有促进愈伤组织生产的物质是（ B ） A. 维生素 PP B. 维生素 B1 C.维生素 B6 D. 甘氨酸3.微量元素母液的配制浓度（ B ） A.10 倍 B.100 倍 C.1mg/ml D.10mg/ml4.配制 10 倍大量元素母液，所需硝酸铵（ C ） mg A.9000 B.3700 C.16500 D.44005.配制 100 倍有机物母液时，所需维生素B1 ( B )mg A.0.4 B.10 C.100 D.0.16.下列哪种不是组织培养常用的维生素（ A ） A. 维生素 B 2 B. 维生素 B 1 C.维生素 B6 D.维生素 C7.下列哪种激素不属于生长素类（ C ） A.IAA B.IBA C.6-BA D.NAA8.下面哪种是MS 培养基大量元素所用药剂（A） A.硫酸镁 B.硫酸亚铁 C. 硫酸锌 D.硫酸铜填空： 1、组织块的分离方法有机械分散法、剪切分离法、消化分离法。

2、目前，较常用的消化试剂有胰蛋白酶、胶原酶、EDTA 消化液。

3、接种培养瓶的细胞数量一般为5× 105-1× 106/ml。

4、培养细胞的污染一般包括微生物污染、细胞交叉污染、化学物质的污染。

5、细胞冻存时DMSO 常用的浓度为10%的浓度。

1. 体外培养的动物细胞其生长方式主要贴壁生长和悬浮生长两种，分别称为贴壁型细胞和悬浮型细胞。

体外培养的动物细胞其生长方式以贴附生长为主。

2. 贴壁生长的体外培养动物细胞，按形态来分，大体分为成纤维细胞型、上皮细胞型、游走细胞型、多形细胞型四种类型，最常见的为前两种。

3. 细胞在体外生长时具有一些特点，其中主要是贴附生长、接触抑制和密度依赖性。

4. 培养细胞生命期可分为原代培养期、传代培养期、衰退期三个阶段。

名词解释1、原代培养：原代培养也叫初代培养，是从供体进行细胞分离之后至第一次传代之前的细胞培养阶段。

简答：一、细胞培养目的与用途1. 药物研究与开发(1) 新药筛选:如化学合成药物药效研究,中药有效成分筛选与鉴定等.(2) 疫苗研究与开发:如病毒性疫苗的研究与开发(肝炎病毒疫苗,艾滋病疫苗等),肿瘤疫苗(多肽疫苗)等.(3) 基因工程药物研究与开发:如干扰素研究与开发,细胞生长因子研究与开发等.(4) 细胞工程药物研究与开发:生物活性多肽研究与开发,人参皂甙,紫杉醇等生物活性成分研究与开发.(5) 单克隆抗体制备:包括诊断用单克隆抗体,治疗用单克隆抗体.基础研究(1) 药物作用机理(2) 基因功能(3) 疾病发生机理2, 生物制药(1) 疫苗生产:如病毒性疫苗(肝炎病毒疫苗,艾滋病疫苗等),肿瘤疫苗(多肽疫苗)等.(2) 基因工程药物生产:如在临床医学中具有治疗价值的一些细胞生长因子如干扰素,粒细胞生长因子,胸腺肽等 (3) 诊断用和药用单克隆抗体生产(4) 细胞工程药物生产:生物细胞内的一些生物活性多肽,生物活性物质等二、细胞培养基本条件1,合适的细胞培养基合适的细胞培养基是体外细胞生长增殖的最重要的条件之一,培养基不仅提供细胞营养和促使细胞生长增殖的基础物质,而且还提供培养细胞生长和繁殖的生存环境.2,优质血清目前,大多数合成培养基都需要添加血清.血清是细胞培养液中最重要的成分之一,含有细胞生长所需的多种生长因子及其它营养成分.3,无菌无毒细胞培养环境无菌无毒的操作环境和培养环境是保证细胞在体外培养成功的首要条件.在体外培养的细胞由于缺乏对微生物和有毒物的防御能力,一旦被微生物或有毒物质污染,或者自身代谢物质积累,可导致细胞中毒死亡.因此,在体外培养细胞时,必须保持细胞生存环境无菌无毒,及时清除细胞代谢产物. 4,恒定的细胞生长温度维持培养细胞旺盛生长,必须有恒定适宜的温度.5,合适的气体环境气体是哺乳动物细胞培养生存必需条件之一,所需气体主要有氧气和二氧化碳. 细胞培养基种类与基本成分细胞培养基的种类很多,按其来源分为合成培养基和天然培养基(目前使用的培养基绝大部分是合成培养基),按其物质状态分为干粉培养基和液体培养基两类.干粉培养基需由实验者自己配制并灭菌,液体培养基由专业商家提供,用户可直接使用,非常方便.每种细胞都有其合适的培养基,三、细胞冻存与复苏要点与注意事项1、细胞冻存要点(1)冷冻过程要缓慢.需要冷冻保存的细胞先在4℃冰箱中放置 30-60分钟;然后转入-20℃,放置30分钟;然后再转入-80℃放置16-18小时(或过夜);最后放入液氮中长期保存.有条件的地方,可用程控降温仪,按每分钟-1 到-3℃速度降温,一直到-80℃以下,然后直接放入液氮中长期保存.(2)冻存细胞必须处在对数生长期,活力大于90%,无微生物污染.(3)细胞浓度控制在:1×107-5×107/ml.(4)使用高浓度血清或蛋白保护剂.一般情况下,用于冷冻保存完全细胞生长培养液中血清浓度大于20%.(5)使用合适的细胞冷冻保护剂,以保护细胞在冷冻过程中免受冰晶破坏.目前,最常用的冷冻保护剂是DMSO(二甲基亚砜),使用终浓度为5-10%.但是,有些细胞系不能用DMSO作为冷冻保护剂,如人白血病细胞系HL-60.因为,DMSO能诱导HL-60细胞分化.在这种情况下,可选用其它冷冻保护剂,如甘油(glycele),羟乙基淀粉等.特别注意:(1)细胞在冷冻过程中在-20℃冰箱内放置时间不可超过1小时,以防止冰晶过大而破坏细胞.也可跳过-20℃这一步骤直接放入-80℃冰箱中,但这样做细胞存活率要低一些.(2)DMSO稀释时会释放大量热量.因此,DMSO不能直接加到细胞液中,必须事先配制.(3)DMSO 必须是细胞培养级别的.新买的DMSO本身处于无菌状态,第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管或瓶中,4℃保存.避免反复冻融造成DMSO裂解产生有害物质.并可减少污染机会.如要过滤DMSO,必须选用耐DMSO 的尼龙滤膜. 细胞冷冻保存液主要成分:冷冻保护剂,基础培养液,血清或蛋白.常用细胞冷冻保存液:(1)10%DMSO + 完全细胞生长培养液(20%血清+基础培养液)(2)10%甘油 + 完全细胞生长培养液(20%血清+基础培养液)悬浮细胞冷冻保存操作程序(液氮保存法):(1)取对数生长期细胞培养物,离心200-400g 5分钟.用粘附(贴壁)细胞冷冻保存操作程序(液氮保存法):2、冷冻保存细胞的解冻与复苏要点:(1)快速解冻.冻存细胞从液氮中取出后,应立即放入37℃水浴中,轻轻摇动冷冻管,使其在1分钟内全部融化(不要超过3分钟).(2)解冻操作过程动作要轻.由于冷冻保存过的细胞变得非常脆弱,不仅解冻速度要快,而且动作要轻.一般情况下,解冻后的细胞可直接接种到含完全生长培养液的细胞培养瓶中直接进行培养(1ml 冻存细胞液加入到25-30ml新鲜完全培养液中),24小时后再用新鲜完全培养替换旧培养液,以去除DMSO.如果,细胞对冷冻保护剂特别敏感,那么,解冻后的细胞应先通过离心去除冷冻保护剂,然后再接种到含完全生长培养液的培养瓶中.特别注意:(1)解冻时务必注意安全,预防冷冻管爆裂.,要带手套,用镊子将细胞冷冻管从液氮中取出,放入37℃水浴中.切不可直接用手,以免冻伤.(2)冷冻管在水浴中解冻时,液面不可超过冻存管盖面,否则,易发生污染.解冻冷冻保存细胞的离心方法:(1)从液氮中取出冻存的细胞,立即放入37℃水浴中快速解冻.(2)将1-2ml 冻存细胞液加入到25ml新鲜完全细胞生长培养液中,轻轻混匀.(3)用80g 离心2-3分钟,弃上清液.(4)用完全生长培养液轻轻悬浮细胞团,并计数细胞.(5)接种细胞到培养瓶中,起始密度为3×105/ml.四、细胞传代要点与注意事项1 细胞传代方法贴壁细胞（1）洗掉旧培养液；（2）、用无钙镁PBS洗涤细胞一至二次；（3）、加入适量Trypsin-EDTA溶液方法一：37℃或温室作用数分钟，于倒立显微镜下观察，当细胞将要分离而呈现圆颗粒状时，洗掉消化液，轻敲培养瓶边缘使细胞自瓶壁脱落，然后加入适量的新鲜培养液，与脱落的细胞或细胞团块混合均匀后，依稀释比例转移至新的培养瓶中，依正常条件继续培养之。

细胞实验试题及答案1. 细胞培养中常用的培养基有哪些？- 答案：常用的细胞培养基包括DMEM、RPMI-1640、MEM、F12等。

2. 细胞传代时应注意哪些事项？- 答案：细胞传代时应注意以下事项：1. 使用无菌操作技术。

2. 确保培养基新鲜且无污染。

3. 传代时细胞应处于健康生长状态。

4. 传代比例要适当，避免细胞过于拥挤或过于稀疏。

3. 细胞冻存液的主要成分是什么？- 答案：细胞冻存液的主要成分包括：1. 基础培养基。

2. 冷冻保护剂（如DMSO）。

3. 血清。

4. 细胞凋亡的形态学特征有哪些？- 答案：细胞凋亡的形态学特征主要包括：1. 细胞体积缩小。

2. 细胞核浓缩。

3. 细胞膜泡化。

4. DNA片段化。

5. 细胞周期各阶段的特点是什么？- 答案：细胞周期各阶段的特点如下：1. G1期：细胞生长，进行RNA和蛋白质的合成。

2. S期：DNA复制。

3. G2期：细胞继续生长，准备进行分裂。

4. M期：细胞分裂。

6. 细胞转染常用的方法有哪些？- 答案：细胞转染常用的方法包括：1. 脂质体介导的转染。

2. 电穿孔。

3. 病毒载体转染。

7. 细胞克隆形成实验的步骤是什么？- 答案：细胞克隆形成实验的步骤包括：1. 细胞消化。

2. 细胞计数。

3. 细胞稀释。

4. 细胞培养。

5. 克隆选择。

6. 克隆扩增。

8. 细胞培养中常见的污染类型有哪些？- 答案：细胞培养中常见的污染类型包括：1. 细菌污染。

2. 真菌污染。

3. 支原体污染。

4. 病毒污染。

9. 细胞培养箱的基本条件是什么？- 答案：细胞培养箱的基本条件包括：1. 恒温。

2. 恒湿。

3. 5% CO2环境。

4. 无菌。

10. 细胞毒性实验中常用的检测方法有哪些？- 答案：细胞毒性实验中常用的检测方法包括：1. MTT法。

2. LDH释放法。

3. 细胞克隆形成实验。

4. 细胞存活率检测。

以上是细胞实验试题及答案的排版和格式示例。

细胞培养技术考试试题一、选择题1. 细胞培养的基本步骤是：A. 细胞获取和处理；B. 细胞传代；C. 培养基配置；D. 细胞实验操作答案：ABCD2. 细胞培养的最佳温度范围是：A. 4-10°C；B. 15-25°C；C. 28-37°C；D. 40-50°C答案：C3. 常用的细胞培养基包括：A. DMEM；B. RPMI 1640；C. MEM；D. FBS答案：ABCD4. 细胞分离的方法有：A. 酶消化；B. 机械分离；C. 磁珠分离；D. 筛选分离答案：ABCD5. 细胞培养器具清洗消毒的方法包括：A. 高温蒸汽消毒；B. 紫外线照射消毒；C. 化学消毒；D. 过滤器过滤消毒答案：ABCD二、简答题1. 请简述细胞培养的原理及意义。

细胞培养是将细胞从生物体中分离出来，在无菌条件下通过培养基提供养分和适宜环境，使细胞在体外持续增殖和生长的过程。

细胞培养技术的意义在于：①探究细胞的生理生化特性和功能；②研究生物发育和分化机制；③药物筛选；④生物工程和生物制造的基础；⑤治疗和诊断疾病。

2. 请简述细胞培养的几种常用技术方法。

（1）传代：将细胞从一代细胞培养物中分离出来，移植到新的培养基中，继续培养和传代。

传代通常采用酶消化和机械分离的方法进行。

（2）冻存：将细胞冻存保存，以备后续使用。

常用的冻存方法是将细胞与冻存液混合，缓慢冷却至低温下保存。

（3）细胞分化：通过调控培养条件，使细胞表现出特定的细胞型态和功能。

（4）细胞感染：将病毒或质粒导入细胞，使细胞表达外源蛋白或产生特定生理反应。

3. 请简述细胞培养中常见的细胞污染及预防方法。

常见的细胞污染包括细菌污染、真菌污染和其他细胞污染。

预防细胞污染的方法有：①无菌操作，使用无菌工具和无菌培养基；②定期检测细胞污染，如细菌和真菌检测；③定期更换培养器具和培养基；④定期消毒培养环境。

三、论述题细胞培养在生物科技领域的应用细胞培养技术在生物科技领域起着重要的作用。

细胞培养技术题库细胞培养技术准备⼯作常⽤设备准备室的设备：单蒸馏⽔蒸馏器、双蒸馏⽔蒸馏器、酸缸、烤箱、⾼压锅、储品柜（放置未消毒物品）、储品规（放置消毒过的物品）、包装台。

配液室的设备：扭⼒天平和电⼦天平（称量药品）、PH计（测量培养⽤液PH值）、磁⼒搅拌器（配置溶液室搅拌溶液）。

培养室的设备：液氮罐、储品柜（存放杂物）、⽇光灯和紫外灯、空⽓净化器系统、低温冰箱（-80℃）、空调、⼆氧化碳缸瓶、边台（书写实验记录）。

必须放在⽆菌间的设备：离⼼机（收集细胞）、超净⼯作台、倒置显微镜、CO2孵箱（孵育培养物）、⽔浴锅、三氧消毒杀菌机、4℃冰箱（放置serum和培养⽤液）。

⽆菌操作⽆菌室的灭菌：1.定期打扫⽆菌室：每周打扫⼀次，先⽤⾃来⽔拖地、擦桌⼦、超净⼯作台等，然后⽤3‰来苏尔或者新洁尔灭或者0.5％过氧⼄酸擦拭。

2.CO2孵箱（培养箱）灭菌：先⽤3‰新洁尔灭擦拭，然后⽤75％酒精擦拭或者0.5％过氧⼄酸，再⽤紫外灯照射3.实验前灭菌：打开紫外灯、三氧杀菌机、空⽓净化器系统各20-30分钟4.实验后灭菌：⽤75％酒精（3‰新洁尔灭）擦拭超净台、边台、倒置显微镜的载物台。

实验⼈员的⽆菌准备：1.肥皂洗⼿。

2.穿好隔离⾐、带好隔离帽、⼝罩、放好拖鞋3.⽤75％酒精棉球擦净双⼿。

⽆菌操作的演⽰：1.凡是带⼊超净⼯作台内的酒精、PBS、培养基、胰蛋⽩酶的瓶⼦均要⽤75％酒精擦拭瓶⼦的外表⾯2.靠近酒精灯⽕焰操作。

3.器⽫使⽤前必须过⽕灭菌4.继续使⽤的器⽫（如瓶盖、滴管）要放在⾼处，使⽤时仍要过⽕。

5.各种操作要靠近酒精灯，动作要轻、准确，不能乱碰。

如吸管不能碰到废液缸。

6.吸取两种以上的使⽤液时要注意更换吸管，防⽌交叉污染。

器械的清洗和消毒玻璃器械洗消：⼀、新的玻璃器⽫的洗消：1.⾃来⽔刷洗，除去灰尘。

2.烘⼲、泡盐酸：烤箱中烘⼲，然后再浸⼊5％稀盐酸中12⼩时以除去脏物、铅、砷等物。

3.刷洗、烘⼲：12⼩时后⽴即⽤⾃来⽔冲洗，再⽤洗涤剂刷洗，⾃来⽔冲⼲净后⽤烤箱烘⼲。

补2.3下列选项中，哪个是“胚胎干细胞”的正确 的英文翻译：D A. multipotent stem cell B. Adultderived Stem Cell C. Totipotent stem cell D. Embryonic Stem Cell 补2.4. 下列哪个选项不属于转基因动物的常用方 法（D） A.反转录病毒法 B.基因显微注射法 C.胚胎干细胞移植法 D.基因敲除法
补3.4.以下选项中关于植物组织培养的特点 描述不正确的是:（B） A. 取材少，培养材料经济 B.人为控制培养条件，受自然条件影响。 C.生长周期短，繁殖率高， D.管理方便，利于自动化控制
补3.5．动物克隆是一种通过核移植过程进 行有性繁殖的技术。× × 补3.6．胚胎克隆与体细胞克隆的最主要差 ． 异在于所使用的核供体细胞不同，前者来自 多细胞阶段的胚胎，而后者使用的核供体细 胞来自动物体。
显微注射技术显微注射技术就是借助光学显微镜的放大作用利用显微操作仪直接把dna注射到动物早期胚胎胚胎干细胞体细胞或卵母细胞中然后生产动物个体的技术
练习
第一次：
补1.1. 世界上第一种克隆成功的生物是：C A牛 B人 C羊 D鸡 补1.2. 显微注射技术 显微注射技术就是借助光学显微镜的放大作用，利 用显微操作仪，直接把DNA注射到动物早期胚胎、 胚胎干细胞、体细胞或卵母细胞中，然后生产动物 个体的技术。 补1.3. 组织培养可以根据培养物的不同可以分为： 器官培养、组织培养、胚胎培养、细胞培养、原生 质体培养等。
第六次
补5.1.胚胎干细胞（embryonic stem cell， ES）是从早期胚胎内细胞团分离出来的， 能在体外培养的一种高度未分化的多能干细 胞 补5.2.细胞融合（cell fusion)，又称体细 胞杂交（somatic hybridiazation），是 指两个或更多个相同或不同细胞通过膜融合 形成单个细胞的过程

细胞培养试题细胞培养是一项重要的实验技术，在生物医学研究和药物开发领域具有广泛的应用。

本文将介绍细胞培养的基本原理、步骤和相关技术，并附上一些常见的细胞培养试题，帮助读者巩固对细胞培养的理解和应用。

一、细胞培养的基本原理细胞培养是通过模拟体内环境，使细胞在体外生长和繁殖的过程。

其基本原理是将细胞从生物体中取出，营养培养液中提供适当的营养物质和生长因子，以及合适的温度、湿度和气体条件，创造出类似于体内的环境，从而使细胞在培养皿或培养器中持续增殖。

细胞培养可以分为原代细胞培养和细胞株培养两种类型。

原代细胞培养是指从生物体中提取的未经分离纯化的细胞，而细胞株培养则是通过无限次的细胞分裂后，形成一株生长相对稳定的细胞系。

二、细胞培养的步骤1. 细胞的收获和制备：从活体器官或组织中取得细胞，通过机械或酶解方法将细胞分离，并制备成单细胞悬液。

2. 细胞的传代和分离：将原代细胞悬液接种到培养皿中，在适当培养条件下使其增殖。

当细胞达到一定密度时，需要进行传代，即将细胞移植到新的培养皿中继续培养。

3. 细胞的培养和维持：根据细胞特性，选择合适的培养基和培养条件，如温度、湿度和CO2浓度等，维持细胞的正常生长和增殖。

4. 细胞的检测和鉴定：通过形态学观察、免疫细胞化学染色等方法，鉴定细胞的纯度、稳定性和功能。

5. 细胞的应用和使用：将培养好的细胞应用于各种实验和研究中，如体外毒理学、药物筛选和细胞凋亡研究等。

三、1. 请简要介绍细胞培养的基本原理和步骤。

2. 原代细胞培养和细胞株培养有什么区别？3. 细胞的传代是什么意思？为什么需要传代？4. 请列举一些常见的培养基和培养条件。

5. 如何判断细胞的纯度和稳定性？6. 细胞培养在哪些领域有广泛的应用？7. 解释细胞凋亡的概念和细胞培养中相关的实验方法。

8. 如何选择合适的细胞培养器具？9. 细胞培养中常见的问题和解决方法有哪些？10. 请简述细胞培养的意义和挑战。

以上是一些常见的细胞培养试题，通过回答这些问题，读者可以进一步巩固对细胞培养的理解和应用，同时增加对细胞生物学的整体认识。

细胞培养考试题目(总3页) -本页仅作为预览文档封面，使用时请删除本页-细胞培养特性：分为贴壁性（上皮细胞型、成纤维细胞型）和悬浮型（白细胞、癌肿细胞）体外培养细胞生长特点：贴附和伸展以及接触抑制和生长的密度限制。

原代培养（原代细胞）：取自动物并置于体外培养中生长的细胞在其传代之前称为原代培养或原代细胞。

传代培养：细胞持续生长繁殖一段时间，到达一定浓度之后，就应当将细胞分离成两部分（或更多）至新的培养器皿，并补充更新培养液。

细胞系：原代培养物经首次传代成功后即成细胞系。

有限细胞系：一般正常细胞系的寿命只能维持一段时间期限。

无限细胞系：传代中极少的后代发生转化，通过“危机期”，获得不死性而具有持久或无限增值能力，这种永生化细胞即为无限细胞系。

细胞株：通过选择法或克隆形成法，从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志物的培养物称为细胞株。

克隆：在动物细胞培养中从细胞群体中分离出一个细胞开始，其在体外无性繁殖成新的基因型相同的细胞群体，这种纯化的细胞群称为细胞株，他们中的每个细胞的遗传特征及生物特性极为相似，常用的细胞克隆技术有有限稀释法和平皿克隆分离法。

杂交瘤技术：主要由免疫动物、细胞融合、筛选杂交瘤细胞、克隆化培养、单克隆抗体的制备与鉴定等一系列实验组成的实验系统，核心是细胞融合。

杂交瘤：由产生抗体的肿瘤细胞与抗原-刺激的正常浆细胞融合而形成的细胞，这种细胞产生的抗体称为单克隆抗体。

基本原理是用分泌抗体但不能长期培养的B细胞与能在体外长期培养并可低温保存的肿瘤细胞进行杂交。

筛选得到的杂交瘤细胞应该是既能分泌抗体又有瘤细胞的特性，可长期传代培养，又可在液氮中保存的细胞。

把这些细胞单克隆化，用单克隆化的杂交瘤细胞进行单克隆抗体的生产。

细胞杂交：通过人工培养和诱导将不同种生物或同种生物不同类型的两个或多个细胞合并成一个双核或多核细胞的过程。

杂交技术过程:①免疫动物及细胞培养:用特定抗原免疫纯系动物获得预定抗体B 淋巴细胞,利用细胞融合技术可使短寿命抗体形成细胞与能永久生长的同种骨髓瘤细胞系融合,获得既有分泌抗体能力,又有无限繁殖能力的细胞②筛选杂交瘤细胞(在具有筛选作用的培养基上培养)③克隆化培养④单克隆抗体的大量制备与鉴定(动物体内诱生法和体外培养法)⑤进一步分离和纯化单克隆抗体,鉴定单克隆抗体类型及亚类,测定抗体亲和力以及相应抗原的分子量等.显微镜的分辨率是指能被显微镜清晰区分的两个物点的最小间距，其计算公式是σ=λ/NA 式中σ为最小分辨距离；λ为光线的波长；NA为物镜的数值孔径。

14．某研究小组为测定药物对体外培养细胞的毒性，准备对某种动物的肝肿瘤细胞(甲)和正常肝细胞(乙)进行动物细胞培养。下列叙述正确的是（）
A．制备肝细胞悬液时可用胶原蛋白酶处理肝组织
B．动物细胞培养时通常需要加入血清等天然成分
C．恒温培养箱中CO2浓度维持在5%左右，主要促进细胞呼吸
D．乙细胞在原代培养过程中，通常会出现停止增殖的现象
16．下列有关动物细胞培养和植物组织培养的叙述，正确的是（）
A．动物细胞培养和植物组织培养所用培养基中的成分不同
B．动物细胞培养和植物组织培养过程中都要用到胰蛋白酶
C．动物细胞培养可用于检测有毒物质，茎尖组织培养可获得脱毒植株
D．烟草叶片离体培养能产生新个体，小鼠杂交瘤细胞培养能得到细胞代谢产物
三、非选择题
2.2.1动物细胞培养同步练习
一、单选题
1．某兴趣小组在进行人体皮肤细胞原代培养过程中，将培养瓶瓶口密封后置于二氧化碳培养箱中培养。下列叙述正确的是（）
A．瓶口密封可有效的防止污染B．瓶口密封可有效的防止接触抑制
C．瓶口密封会导致培养基呈弱酸性D．瓶口密封会导致培养的原代细胞生长过快
2．Vero细胞系来源于非洲绿猴肾上皮细胞，具有无限分裂和贴壁生长的特性。将新冠病毒接种到Vero细胞后，经Vero细胞培养、新冠病毒灭活及提纯，可制成新冠病毒灭活疫苗。下列叙述错误的是（）
19．接种新冠病毒疫苗是建立群体免疫屏障、防止疫情暴发的主要手段。我国已有3个灭活疫苗、1个腺病毒载体疫苗和1个重组亚单位疫苗批准附条件上市或紧急使用。灭活疫苗是使用非洲绿猴肾（Vero）细胞进行病毒培养扩增，经β-丙内酯灭活的病毒，保留抗原成分以诱导机体产生免疫应答，并加用氢氧化铝佐剂以提高免疫原性。回答下面的问发的主要环节，非洲绿猴肾（Vero）细胞培养时，除了适宜的营养物质、温度等条件外，还需要控制气体条件是与5%二氧化碳的混合气体，二氧化碳的主要作用是。在使用合成培养基时通常需加入血清，血清的作用是。

1.体外培养的细胞按生长方式可分为哪二种? 按细胞在体外生长的形态特征,可分为哪几种常见类型?⑴按生长方式分为二型:粘附型细胞:附着在某一固相支持物表面才能生长的细胞。

悬浮型细胞:不必附着于固相支持物表面, 而在悬浮状态下即可生长的细胞。

（绝大多数有机体细胞属粘附型细胞。

）⑵可分四型: (1)上皮型细胞 (2)成纤维型细胞 (3)游走型细胞 (4)多形型细胞2.简述体外培养细胞的整个生命活动过程的分期及每代贴附生长细胞的生长过程⑴通常, 体外培养细胞的全部生命期大致可被分为以下三个阶段:①原代培养期: 也称初代培养, 是指从机体中取出细胞接种培养到第一次传代之前的这一阶段。

此期的细胞呈现出活跃移动的特点, 可见细胞分裂, 但不旺盛。

处于原代培养阶段的细胞与体内原组织在形态结构和功能活动上有很大的相似性。

细胞群具有明显的异质性, 细胞间的相互依存性强, 在软琼脂培养基培养时细胞集落形成率很低。

②. 传代期：通常是培养细胞全生命期中持续时间最长的时期, 原代培养的细胞经传代后常被称做细胞系。

一般情况下, 正常体细胞在传代10-50次左右后, 细胞分裂的能力就会逐渐减弱, 甚至完全丧失, 细胞便进入衰退期。

③衰退期：处于衰退期的培养细胞, 增殖速率已经变得很慢或不再增殖, 直至最后衰退死亡。

以上特点, 主要是针对体外培养的机体正常细胞, 对于体外发生转化的细胞和肿瘤细胞而言, 永生性或恶型性的获得使得这类细胞获得持久性的增殖能力, 这样的细胞群体常被称为无限细胞系或连续细胞系。

⑵每代贴附生长细胞的生长过程：①游离期：细胞接种后在培养液中呈悬浮状态, 也称悬浮期。

此时细胞质回缩, 胞体呈圆球形。

时间：10分钟一4小时②贴壁期：细胞附着于底物上, 游离期结束。

底物：玻璃、塑料、胶原、其它细胞等③潜伏期：此时细胞有生长活动, 而无细胞分裂。

细胞株潜伏期一般为6～24小时。

④对数生长期：细胞数随时间变化成倍增长, 活力最佳, 最适合进行实验研究。

1.为什么要热灭活血清？加热可以灭活补体系统。

激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞核血小板释放组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。

（在免疫学研究，培养ES细胞，昆虫细胞和平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。

）2.谷氨酰胺在细胞培养中起什么作用及使用方法？作用：几乎所有的细胞对谷氨酰胺有较高的要求，细胞需要谷氨酰胺合成蛋白质，在缺少谷氨酰胺时，细胞生长不良而死亡。

使用方法：谷氨酰胺在溶液中很不稳定，4℃放置1周可分解50％，故应单独配制，置于-20℃保存，临用前加入培养液。

配制方法：谷氨酰胺2.922g溶于三蒸水加至100ml即配成200mmol/L的溶液，充分搅拌溶解后，过滤除菌，分装小瓶，-20℃保存，使用时可向100ml培养液中加入1ml谷氨酰胺溶液。

3.如何用台盼兰计数活细胞？正常的活细胞，胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞内；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。

台盼蓝染色后，通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞存活率进行比较精确的定量。

（用无血清培养基把细胞悬液稀释到200-2000个/毫升，在0.1毫升的细胞中加入0.1毫升的0.4％的台盼兰溶液。

轻轻混匀，数分钟后，用血球计数板计数细胞。

）4.如何消除组织培养的污染？确定污染物是细菌、真菌、支原体或酵母，把污染细胞与其它细胞系隔离开，用实验室消毒剂消毒培养器皿和超净台，检查HEPA过滤器。

（一）认真做好外植体的选择和消毒工作，防止外植体带菌。

（二）改善接种室和培养室的环境条件，保证接种与培养环境清洁无菌。

（三）操作人员严格遵守无菌操作规程。

（四）培养基及接种工器具要严格灭菌，确保灭菌质量。

（五）在培养基中加入适量的抗生素。

（六）利用病毒在植株体内分布不均匀的原理，生产脱毒苗。

（七）利用培养基中高盐或高糖的浓度，抑制微生物的生长。

（八）减少培养基中的某些有机成分，可抑制微生物的生长繁殖。

细胞培养（动物细胞培养）：动物细胞培养是指将动物活体体内取出的组织用机械或消化的方法分散成单细胞悬液，然后放在类似于体内生存环境的体外环境中，进行孵育培养，使其生存、生长并维持其结构与功能的方法。

组织培养：从生物体内取出活的组织（多只组织块）在体外进行培养的方法。

有时泛指所有的体外培养。

器官培养：是将活体内的器官（一般是胚胎器官）、器官的一部分或器官原基在体外进行培养的方法。

合成培养基：根据细胞生存所需物质的种类和数量，用人工方法模拟合成的、配方恒定的培养基。

无血清培养基：由基础培养基和替代血清的补充因子（生长因子和激素、结合蛋白等）组成。

完全培养基：在合成培养基里添加血清后的培养基。

接触抑制：体外培养的细胞在贴附底物上连接成片、相互接触后失去运动的现象。

无限细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。

去分化（脱分化）：细胞在体外不可逆地失去原有特性。

注意：去分化不意味分化能力完全丧失！在适当调节信号刺激下仍能表现出分化特性。

但分化能力会随培养时间延长而逐渐丧失。

不适应：各种分化细胞，在体外培养时逐渐失去各自的形态与功能特征，表现出某种趋同性。

原因：培养条件变化使分化发生阻抑细胞分裂指数（MI）：是指细胞群中每1000个细胞中的分裂相数量细胞群体倍增时间：是指培养物中细胞数量翻倍的时间。

原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。

培养的第1代细胞与传10代以内的细胞称为原代细胞培养。

传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。

1）体外培养细胞，其生长方式主要有贴壁生长和悬浮生长两种，分别称为贴壁细胞和悬浮细胞。

2）一般可将贴壁细胞生长的体外培养细胞大体分为成纤维细胞型、上皮细胞型、游走细胞型、多行细胞型四种类型，最常见的为前两种。

3）体外培养细胞的主要生长特点：①贴附生长②接触抑制③密度依赖性培养细胞分化状态的变化：①去分化（脱分化）②不适应1、细胞培养的基本要求有哪些和工作方法要求：1）培养前准备2）操作间消毒3）洗手和着装4）火焰消毒培养前的准备的基本要求：培养基的选择和无菌配制动物细胞培养用液的类型、配制和无菌处理方法：1）操作程序规范2）试剂设备专人负责3）培养用品定点存放2、平衡盐溶液（BBS）：（1）成分：无机盐和葡萄糖，少量酚红。

名称解释细胞培养（动物细胞培养）：动物细胞培养是指将动物活体体内取出的组织用机械或消化的方法分散成单细胞悬液，然后放在类似于体内生存环境的体外环境中，进行孵育培养，使其生存、生长并维持其结构与功能的方法。

组织培养：从生物体内取出活的组织（多只组织块）在体外进行培养的方法。

有时泛指所有的体外培养。

器官培养：是将活体内的器官（一般是胚胎器官）、器官的一部分或器官原基在体外进行培养的方法。

合成培养基：根据细胞生存所需物质的种类和数量，用人工方法模拟合成的、配方恒定的培养基。

无血清培养基：由基础培养基和替代血清的补充因子（生长因子和激素、结合蛋白等）组成。

完全培养基：在合成培养基里添加血清后的培养基。

接触抑制：体外培养的细胞在贴附底物上连接成片、相互接触后失去运动的现象。

无限细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。

去分化（脱分化）：细胞在体外不可逆地失去原有特性。

注意：去分化不意味分化能力完全丧失！在适当调节信号刺激下仍能表现出分化特性。

但分化能力会随培养时间延长而逐渐丧失。

不适应：各种分化细胞，在体外培养时逐渐失去各自的形态与功能特征，表现出某种趋同性。

原因：培养条件变化使分化发生阻抑细胞分裂指数（MI）：是指细胞群中每1000个细胞中的分裂相数量细胞群体倍增时间：是指培养物中细胞数量翻倍的时间。

原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。

培养的第1代细胞与传10代以内的细胞称为原代细胞培养。

传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。

1）体外培养细胞，其生长方式主要有贴壁生长和悬浮生长两种，分别称为贴壁细胞和悬浮细胞。

3）完全培养基;定义：在合成培养基里添加血清后的培养基。

细胞生长培养基:常用培养基，血清含量高, 10-20%。

维持培养基:维持细胞不死或缓慢生长，血清含量低, 2-5%。

动物细胞工程（动物细胞培养、核移植）练习题1．一般来说，动物细胞体外培养需要满足以下条件( )①无毒的环境②无菌的环境③培养液中需加血清④温度与动物体温相近⑤需要O2，不需要CO2⑥CO2能维持培养液的pHA．①②③④⑤⑥B．①②③④C．①③④⑤⑥D．①②③④⑥2．下列对动物核移植技术的描述不正确的是( )A．哺乳动物核移植包括胚胎细胞核移植和体细胞核移植B．体细胞核移植过程中可通过显微操作去除卵母细胞的细胞核C．通过体细胞核移植方法生产的克隆动物是无性繁殖D．通过体细胞核移植方法生产的克隆动物是对动物进行了100%的复制4．在动物细胞培养前胰蛋白酶所起的作用是( )A．分解细胞膜易于融合B．分解培养基的蛋白质供给细胞营养C．使组织分散成单个细胞D．用于细胞内物质的分解5．下列动物细胞工程技术利用了细胞膜流动性原理的是( )①动物细胞培养②动物细胞融合③核移植④胚胎移植A．①④B．②③C．①②D．③④10．现将“细胞工程”中动、植物细胞培养技术列表比较如下，你认为哪一项比较有错误( )C．结果D．培养目的6．有关全能性的叙述，不正确的是( )A．克隆羊的诞生证明了已分化动物细胞的细胞核仍具有全能性B．生物体内细胞由于分化，全能性不能表达C．卵细胞与受精卵一样，细胞未分化，全能性最高D．植物细胞离体培养在一定条件下能表现出全能性7．下列属于动物细胞培养与植物组织培养区别的是( )A．动物细胞培养所用的培养基的成分与植物的不同B．动物细胞培养需在无菌条件下进行，而植物组织培养不需要C．动物细胞培养过程中可发生基因重组，而植物组织培养不能D．动物细胞培养需控制温度，而植物组织培养不需要14．下列关于动物细胞培养的叙述，不正确的是( )A．培养基为液体培养基B．培养结果只能获得大量细胞及生物制品，而不能获得生物体C．需要氧来满足细胞代谢的需要，不需要二氧化碳D．通过细胞培养可以检测有毒物质，判断某物质的毒性8．某研究小组为测定药物对体外培养细胞的毒性，准备对某种动物的肝肿瘤细胞(甲)和正常肝细胞(乙)进行动物细胞培养。

高二生物细胞工程练习题细胞工程是一门综合性的学科，将细胞和分子生物学与工程学相结合，旨在开发新方法和技术来研究、改造和应用细胞。

在高二生物学的学习中，细胞工程是一个重要的话题。

以下是一些细胞工程的练习题，帮助加深对细胞工程的理解和应用。

题目一：细胞培养基本操作细胞培养是细胞工程常用的方法之一。

请你描述一下进行细胞培养时所需的基本操作步骤，包括培养基的配制、细胞的处理、培养环境的控制等。

以细胞培养基本操作为题，撰写一份实验报告。

题目二：细胞转染技术细胞转染是将外源基因或其他物质导入目标细胞中的方法。

请你选择一种常用的细胞转染技术，如热冲击法、电穿孔法或化学转染法，描述其原理、步骤和应用场景，并分析其优缺点。

题目三：细胞组织工程细胞组织工程是一种通过培养和操纵细胞以构建组织和器官的技术。

请你选择一个你感兴趣的细胞组织工程应用领域，如人工皮肤、人工骨骼或人工心脏等，详细介绍其构建原理、方法、难点和应用前景。

题目四：细胞工程在医学中的应用细胞工程在医学领域有着广泛的应用，如干细胞治疗、基因治疗和组织工程等。

请你选择一个你认为最具潜力的细胞工程应用，对其进行详细的介绍，包括原理、方法、临床应用状况和未来发展方向。

题目五：细胞工程的伦理和社会问题细胞工程的发展给我们带来了诸多医学和科学上的突破，同时也涉及到一些伦理和社会问题。

请你选择一个与细胞工程相关的伦理或社会问题，如生命伦理、隐私保护或社会公正等，论述其现状、争议和解决方案。

总结：细胞工程是一个快速发展的领域，其应用潜力和挑战都非常巨大。

通过对细胞培养基本操作、细胞转染技术、细胞组织工程及其应用、细胞工程在医学中的应用以及与细胞工程相关的伦理和社会问题的学习和练习，我们能够更全面地了解细胞工程的核心概念、方法和应用前景，为未来的学习和研究奠定坚实的基础。

同时，也需要我们思考和探讨如何平衡科技发展与伦理道德、社会公正的关系，以推动细胞工程的可持续发展与应用。

动物细胞培养习题名词解释1、细胞工程（cell engineering）是指应用现代细胞生物学、发育生物学、遗传学和分子生物学的理论与方法，按照人们的需要和设计，在细胞水平上的遗传操作，重组细胞的结构和内含物，以改变生物的结构和功能，即通过细胞融合、核质移植、染色体或基因移植以及组织和细胞培养等方法，快速繁殖和培养出人们所需要的新物种的生物工程技术。

2、细胞培养（cell culture）将组织块用机械方法或酶解法分离成单个细胞，做成细胞悬液，再培养于固体基质上，成单层细胞生长，或在培养液中呈悬浮状态培养的技术称为细胞培养。

3、细胞核移植(nuclear transplantation)细胞核移植，就是将一个细胞核用显微注射的方法放进另一个细胞里去。

前者为供体，可以是胚胎的干细胞核，也可以是体细胞的核。

4、染色体工程(chromosome engineering )是人们按照一定的设计,有计划地消减,添加或代换同种或异种染色体,从而达到定向改变遗传特性和选育新品种的一种技术.5、胚胎工程(embryonic engineering)胚胎工程：指在胚胎发育过程中进行的生物技术。

包括：胚胎移植、胚胎融合、胚胎分割、胚胎冷冻、胚胎性别鉴定、胚胎细胞核移植、转基因操作。

6、干细胞（stem cell）是一类具有自我复制能力(self-renewing)的多潜能细胞，在一定条件下，它可以分化成多种功能细胞。

7、组织工程；组织工程是指应用工程学和生命科学的原理和方法来研究正常或病理状况下哺乳动物组织的结构、功能和生长的机制，研究开发能够修复、维持或改善损伤组织的人工生物替代物的一门学科。

8、初代培养也称初代培养，即从体内取出组织接种培养到第一次传代阶段，一般持续1-4周。

9、继代培养对来自于外植体所增殖的培养物(包括细胞、组织或其切段)通过更换新鲜培养基及不断切割或分离，进行连续多代的培养，就称为继代培养10、酶连免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）它是一种特殊的试剂分析方法,是在免疫酶技术( immunoenzymatic techniques ) 的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术.它采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接,然后通过酶与底物产生颜色反应,用于定量测定.测定的对象可以是抗体也可以是抗原.11、抗原抗原是指能够刺激机体产生（特异性）免疫应答，并能与免疫应答产物抗体和致敏淋巴细胞结合，发生免疫效应的物质。