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高效液相色谱法测定辣椒及辣椒制品中辣椒素类物质
1.范围：
用高效液相色谱法测定辣椒及辣椒制品中辣椒素类物质的方法及辣度表示方法。
本方法的检出限：辣椒素、二氢辣椒素均为1mg/Kg，线性范围为
1mg/L-150mg/L。
2.试样提取：
在样品中加入甲醇—四氢呋喃混合溶剂25ml，用保鲜膜封口，用针扎几个小孔，然后在60℃浴条件下，使用超声波清洗器提取30min。
用滤纸过滤，收集滤液，然后将滤渣连同滤纸重新加甲醇—四氢呋喃混合溶剂25ml，使用超声波清洗器提取10min，重复两次，将三次过滤收集的滤液合并，用氮吹仪在70℃温度下浓缩至10ml—20ml，然后用甲醇—四氢呋喃混合溶剂定容至50ml，经过滤器(0.45µm微孔过滤膜)过滤后进行色谱分析。
根据样品中辣椒素类物质总量和检测器的灵敏度，必要时可以适当调整稀释倍数。
3.色谱参考条件：
色谱柱：Kromasil C-18 (4.6mm*250mm 5um)
流动相：甲醇：水=65：35
进样量：10 µl
流速：1.0 ml/min
紫外检测波长：280nm
柱温箱温度：30℃
4.结果：
按照色谱条件，进行HPLC分析，用标准物质色谱峰的保留时间定性；根据辣椒素、二氢辣椒素标准曲线及试样中的峰面积定量。
高效液相色谱法测定辣椒制品中的辣椒素类物质孙胜枚【摘要】该研究采用了高效液相色谱法对辣椒制品中的辣椒素类物质进行检测,并对其提取条件和检测方法进行了研究.以乙醇∶水=70∶30 (V∶V)作为提取液,采用直接萃取法提取样品中的辣椒素和二氢辣椒素,以0.3％磷酸二氢钾溶液-乙腈(62∶38,V∶ V)为流动相,检测波长230 nm,Macherey-Nagel Nucleosil120-5 C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm)分离.结果表明,辣椒素和二氢辣椒素在20～100 μg/mL质量浓度范围线性关系良好(R12=0.999 8,R22=0.999 9),检出限为0.001 g/kg,加标回收率分别为93％～104％和86％～103％,相对标准偏差RSD ＜5％.该方法操作简单、快速,具有良好的准确性和精密度,可有效排除香辛料物质的杂峰干扰,适合各类辣椒制品中辣椒素类物质的检测.【期刊名称】《中国酿造》【年(卷),期】2016(035)003【总页数】4页(P148-151)【关键词】高效液相色谱;辣椒素类物质;测定【作者】孙胜枚【作者单位】广东省江门市李锦记(新会)食品有限公司,广东江门529100【正文语种】中文【中图分类】TS262.5日常所食用的辣椒制品中的辣味主要来源于辣椒当中的辣椒素类物质。
辣椒素类物质主要包含有以下5种：辣椒素（capsaicin，CAP）、二氢辣椒素（dihydrocapsaicin，DCAP）、高辣椒素（homocapsaicin）、高二氢辣椒素（homodihydrocapsaicin）、降二氢辣椒素（nordihydrocapsaicin）［1-2］。
其中辣椒类制品辣感的主要来源是辣椒素和二氢辣椒素，占辣椒素类物质总含量90%以上［3］，因此这两种辣椒素类物质也是辣味水平研究的主要对象［4-5］。
目前对于辣椒素类物质含量的检测主要方法有：比色法、薄层色谱法、紫外分光光度法和高效液相色谱（high performance liquid chromatography，HPLC）法［6-9］。
高效液相色谱法测定不同品种辣椒药材中辣椒碱的含量目的：探讨不同品种辣椒药材中辣椒碱的含量的测定方法。
方法：采用高效液相色谱法，色谱柱选择Hanbon Sci.& Tech.Lichrospher C18（250.0×4.6 mm，5 μm）进行分离，流动相为甲醇：0.1%磷酸水溶液（65%～90%，0～45 min）梯度洗脱，检测波长为280 nm，柱温为28 ℃。
结果：辣椒碱的线性回归方程为：Y=11.918×106X-3.925×103（r=0.9997），辣椒碱在1.0007～4.0261 μg范围内呈良好的线性关系，辣椒碱的平均回收率为99.93%，RSD=1.32%。
结论：高效液相色谱法用于测定辣椒中辣椒碱的含量，成分分离效果好，系统稳定性高，操作简单，同时适用于不同品种辣椒药材中辣椒碱的含量测定，不同品种不同成熟度的辣椒中辣椒碱的含量具有差异性。
辣椒（Capsicum frutescence L）又称辣角、辣子、秦椒、番椒，属于茄科辣椒属植物[1]，起源于南美洲的秘鲁和中美洲的墨西哥一带，在大约十六世纪末期辣椒传入中国，被作为药物的调味品使用[2]。
辣椒传入我国之后其分布地区较广，品种多，应用范围广，具有一定的药用价值[3]。
《中国药典》2010版（一部）将其作为新增品种进行规定，并通过了高效液相色谱法测定辣椒碱成分的含量以控制辣椒的质量。
有研究表明，辣椒产生辣味的主要成分为辣椒碱，辣椒果实中的主要药用成分也是辣椒碱，辣椒碱类化合物具有镇痛、消炎、杀菌的作用，已经被应用于治疗风湿、跌打损伤、镇痛、糖尿病性神经痛以及银屑病等疾病中[4-6]。
本研究为了评价不同品种辣椒药材的质量，以辣椒中的有效成分辣椒碱为指标成分，采用高效液相色谱法对不同品种辣椒药材中的成分含量进行了测定，为辣椒药材的应用和质量控制提供参考，同时为从植物资源中提取辣椒碱类物质提供检测依据[7]。
辣椒中辣椒素的高效液相色谱法测定2008年第6期现代科学仪器ModernScientificInstruments辣椒中辣椒素的高效液相色谱法测定李如华韩振泰(中国林科院森林生态环境与保护研究所国家林业局森林生态环境重点实验室北京100091)摘要辣椒素的化学组成主要为辣椒碱和二氢辣椒碱.辣椒碱具有镇痛,消炎,促进食欲,改善消化,抗菌,杀虫及对神经递质的选择性等药理作用.辣椒碱可以治愈和缓和一些难治愈慢性神经疼痛,可为这些疾病的治疗提供一条新的途径,是一个很有发展潜力的药物本文采用高效液相色谱法,通过对流动相,检测波长等分离条件的优化,建立了辣椒素的分析方法.经实验证实,本方法操作简单,重复性好,准确度高,可以对辣椒素的工业化生产提供帮助J.方法回收率90%～92%,相对偏差:2.5%,相关系数:r=0.9956.关键词辣椒素;二氢辣椒碱;高效液相色谱中图分类号Q946.88 DeterminationofCapsaicinoidsinHotPepperbyRP—HPLCLiRuhua,HanZhentai (ResearchInstituteofForestryEnvironmentandProtection,CAF;KeyLaboratoryofForestr yEcologyandEnvironment,StateForestryAdministration,Beijing,100091,China) AbstractThechemicalcompositionofCapsaicinoidsiscapsaicinanddihydrocapsaicin.Cap saicinhastheeffectsofAnalgesia,antiphlogosis,increasingtheappetite,improvingthedigestion,antibact erial,disinfectionsandSOon.CapsaicinoidsCallcureandmitigatesomechronicneuralache,provideanewwayf orthesediseasetreatments.Capsaicinoidsisthemedicinewithhighdevelopmentpotentials.Inthispaper,byt heHPLCmethod andwiththeoptimizationofmobilephaseanddetectionwavelength,theanalysismethodofC apsaicinoidswases—tablished.Experimentsprovedthatthemethodhasthecharacteristicsofsimpleoperation,go odreproducibility, highaccuracyandcanprovidehelptotheindustrialproductionofCapsaicinoids-4j.TheReco veryrate.relativedeviationandcorrelationcoefficientofthemethodare90%～92%.2.5%and0.9956respectively.KeywordsCapsaicinoids;Dihydrocapsaicin;HPLC辣椒是一种药食同源的蔬菜,含有生物碱,色素,维生素,有机酸,矿物质等成分j.辣椒所独具的特性是辣味,其成分为辣椒素类物质.辣椒素是辣椒果实中结构为N一香草基酞胺类的生物碱.辣椒素的化学组成主要为辣椒碱(Capsaicin,C),二氢辣椒碱(Dihydrocapsaicin,DC),二者约占整个辣椒素的90%,其它为二者的同系物.辣椒素类提取物通常是混合物J,晶体颜色为白色(或微黄,微红),没有固定的熔点,通常熔点范围为57℃一66℃,沸点范围为210~C一220℃,易溶于低级醇和丙酮,氯仿,石油醚等有机溶剂,由于其酚羟基表现出弱酸性,因而能溶于强碱J.辣椒素属于酰胺类化合物,因而可发生水解生成香草基胺和癸烯酸.辣椒素的结构通式:收稿日期:2008—07—29作者简介:李如华,男,大学本科.1实验部分1.1仪器与试剂液相分析仪:Waters244高效液相色谱仪,Wa—ters486紫外检测器,M510泵,浙大色谱工作站.甲醇为优级并经0.5m滤膜过滤.水为重蒸水并经0. 451xm滤膜过滤.辣椒碱标样:天然,Sigma公司. 1.2色谱条件色谱柱:250am×4.6mmODS柱;流动相:75%的甲醇/水溶液;流速:1mL/min;检测器:220nm.1.3标准样品配制准确称取50mg辣椒碱标样,用甲醇定容至1O mL,备用.1.4辣椒碱样品配制准确称取60—200mg辣椒碱样品,用甲醇定容至10mL.68?现代科学仪器ModemScientificInstruments2008年12月2实验结果与讨论2.1流动相的选择和优化实验前我们对辣椒碱的HPLC法进行了调研,目前所采用的流动相主要有以下几种体系.张继敏等人采用稀磷酸(pH3.1～3.5)溶液/乙腈(50:50)为流动相,这与美国药典USP2003磷酸水溶液(1:1000, v/V)/乙腈(600:400)相似;赵仁邦等人采用甲醇作流动相.用甲醇作流动相,价格低廉,且避免了使用酸性溶液.为此,我们选择以甲醇作流动相进行实验.实验发现,用纯甲醇作流动相,辣椒碱和二氢辣椒碱的色谱峰未完全分开.于是,我们分别配制85%,75%,70%的甲醇溶液作流动相.实验结果显示,随着流动相中水的含量增加,辣椒碱和二氢辣椒碱的t逐渐增加,当流动相为85%的甲醇/水溶液时,辣椒碱和二氢辣椒碱基本分开;当流动相为75%的甲醇/水溶液时,辣椒碱和二氢辣椒碱可实现基线分离;但当水的含量增加至40%时,即60%的流动相对辣椒碱样品溶解性降低.因此,我们认为,流动相以70—75%的甲醇溶液较为合适.此时样品各组分能实现基线分离(如图1).图1辣椒碱标样图谱图2辣椒提取物样品图谱2.2检测波长的影响我们用标准样品,在图1的条件下,测定了不同检测波长下的辣椒素和二氢辣椒素的峰面积,其结果见表1. 表1不同检测波长下的辣椒素和二氢辣椒素的峰面积蝗面积l波长选择波长(m)图3检测波长对峰面积的影响根据表1,我们绘出了保留时间t为17.3min的辣椒碱组分的检测波长对峰面积的影响趋势,如图3所示.由图3看出,当波长在220nm时,辣椒碱的峰面积最大,此时灵敏度最高.2.3定量分析2.3.1重复性实验在上述优化条件下,即流动相为75%的甲醇/水溶液,检测波长为220am,连续钡定七次标样,测定结果见表2.经计算,平均测定相对偏差为2.5%.表2计算相对误差2.3.2标准曲线通过测量不同浓度的标样,得出辣椒碱,二氢辣椒碱的峰面积与浓度的关系,(见表3),即可绘出标准曲线,如图4,图5所示.结果表明,辣椒碱在0,25 —5mg/mL浓度范围内,浓度与峰面积具有良好的线性关系.蝗面积浓度/mL)图4辣椒碱标准曲线直线回归方程:Y=2.0927+2.801X,蝗面积维度/mL)图5二氢辣椒碱标准曲线直线回归方程:Y=0.6805+2.2141X.2.3.3样品测定表4样品中的辣椒碱含量测定表5样品中的二氢辣椒碱含量测定3结论本文建立了辣椒素的高效液相色谱分析方法.其优化条件是:色谱柱250cm×4.6mmODS柱;流动相75%的甲醇/水溶液;流速1mL/min;UV220nm.平均相对偏差为2.5%,辣椒碱在0.25—5mg/mL浓度范围内,浓度与峰面积具有良好的线性关系.经实验证实,本方法操作简单,重复性好,准确度高,满足分析要求.参考文献[1]彭书练,单扬,丁芳林.辣椒碱的制取,纯化及应用研究.辣椒杂志, 2005,3:40～41[2]张甫生,庞杰,徐秋兰,陈梅芳.辣椒红色素的研究进展.辣椒杂志, 2003,2:37[3]江和源,段文华,尉蕊仙.分子蒸馏技术及其应用.西部粮油科技, 2003.6:41—43[4]杨村,于宏奇,冯武文.分子蒸馏技术.北京:化工工业出版社, 2003,1:1—55,110—111[5]张志栋.辣椒碱的研究进展.天津药学,1997,9:25—26[6]伍明,任仲皎,王杰.天然辣椒红色素的提取新工艺.精细化工, 1994.11:30—33[7]阳勇.重庆大学学报.2004,12[8]张世文.吉首大学学报.2002,2。
