肝癌中p53基因突变的检测

p53基因突变和p16基因缺失与肝癌的相关性(一)【关键词】,基因,p53；基因,p16；癌,肝细胞Correlationofp53genemutationandp16genedeletionwithhepatocellularcarc inoma【Abstract】AIM:Todetecttheprobabilityofp53genemutationandp16genedeletioninthep lasmaofthepatientswithhepatocellularcarcinoma(HCC)andtoexploreitscorr elationwithonsetanddevelopmentofHCCanditsclinicalsignificance.METHOD S:PCRwasusedtoamplifyp53geneexon58andtheimmunohistochemistry(SPp 16)wasemployedtodeterminethedeletionofp16gene.Thedifferencebetwee nthepatientswithorwithoutlivermetastasiswasanalysedingenemutationand deletion.RESULTS:Of33casesofHLL17(51.55%),showedthemutationofp53;th emutationrateinmetastasisgroup(n=18)washigherthanthatinnonmetastasis group(n=15).CONCLUSION:ThereisacorrelationbetweenHCCandp53genem utationandp16genedeletion.Themutationratemayhavethereferencevaluein diagnosisandprognosispredictionofHCC.【Keywords】genesp53;genesp16;carcinoma,hepatocelluar【摘要】目的：检测肝癌患者血浆中p53基因突变和细胞核中p16基因缺失的机率，研究与疾病发生、发展的相关性并探讨其意义.方法：实验采用聚合酶联链式反应（PCR）扩增p53基因外显子5~8和免疫组织化学方法SPp16，对其突变和缺失进行分析.结合临床患者有无肝组织以外转移来对比差异性.结果：33例肝癌患者中，有17例结果显示血浆循环核酸p53基因突变；有转移病灶组18例的突变率高于无转移病灶组15例.结论：血浆p53基因突变和p16基因缺失与肝癌的发生、与疾病的轻重及病灶转移有相关性，突变机率在临床鉴别诊断和治疗预后中有参考价值.【关键词】基因，p53；基因，p16；癌，肝细胞0引言在各类疾病中，肝癌以恶性程度高、治疗效果差、病灶易转移和给患者带来极大身心损害而排在前列〔1〕.检测血浆中p53和细胞核中p16基因突变机率，对治疗效果判定、康复干预都有参考和使用价值〔2〕，对肝癌的发生和发展的危险因素评估、早期预防提供实验方法学.1材料和方法1.1材料收集病例35例，患者均经腹部B超、CT或MRI影像学诊断，CEA,AFP多项肿瘤标志物蛋白检测.有胸腹水患者21例抽取样本进行组织细胞学，4例肝穿刺活检病理学诊断.21例术后证实为肝癌，12例失去手术机会，2例因病情恶化死亡.本组研究实为33例，肝癌无转移15例，肝癌合并肺、胃、肠、脑等部位转移癌18例.男性27例，女性6例，年龄27~69（中位年龄48.27岁）.自静脉采血分离血浆，不受时间、饮食和治疗影响.31例正常对照为献血员血浆，男性20例，女性11例，年龄25~55岁（中位年龄42.93岁）.1.2方法PCR扩增仪使用美国PE 公司智能型热循环仪，引物设计参照序列如下〔3〕：p53基因外显子5，扩增第5个显子（P56.1和P5.2）序列上游引物顺序5＇TTCCTCCTGCAGTACC3＇,214bp，上游引物顺序3＇GCCCCAGCTGCTCACCAT3＇；p53基因外显子6，扩增第6个显子（P6.1和P6.2）序列上游引物顺序5＇CACTGATTGCTCTTAGGTCT3＇,144bp，上游引物顺序5＇AGTTGCAAACCAGACCTCAGG3＇；p53基因外显子7，扩增第7个显子（P7.1和P7.2）序列上游引物顺序5＇TCTCCTAGGTTGGCTCTGAC3＇,133bp，上游引物顺序5＇CAAGTGGCTCCTGACCTGGA3＇；p53基因外显子8，扩增第8个显子（P8.1和P8.2）序列上游引物顺序5＇CCTATCCTGAGTACTGGTAA3＇,166bp，上游引物顺序3＇GTCCTCCTTGCTTACCTCG3＇.DNA提取方法为静脉血2.5mL，EDTAK2抗凝，混匀后3500r/min离心10min，分离血浆低温-20℃保存.操作程序按DNA提取试剂盒（由博华公司提供QLAmpDNAminikit，Germany）说明书进行.PCR扩增循环条件为：95℃40s，60℃30s，75℃40s，重复循环32次，70℃10min完成延伸反应.再经非变性聚丙烯酰胺凝胶SSCP电泳，银染，应用凝胶自动成像系统分析.阳性（基因突变）条进行基因测序.免疫组织化学方法采用SP方法，p16单克隆Ab及SP试剂购自成都医药工业总公司.p16蛋白以细胞核染棕兰色为阳性，每张切片中以东西南北中五个高倍镜下视野计数，按100%计算.判定标准为阳性细胞数≥5%.阳性对照同批实验对照.2结果2.1p53基因突变p53基因突变与转移癌的相关性（表1）和p53基因突变分布有区别（表2）.表1小细胞肝癌（HCC）p53基因突变与转移癌的关系（略）表217例肝癌患者血浆p53基因热点区外显子突变的分布（略）2.2p53基因突变相关性分析正常对照血浆31份，结果均为阴性（未发现泳动变位），33例肝癌患者血浆，有17例结果为阳性（有泳动变位）.33例肝癌血浆p53基因有突变的17例（17/33,51.55%），在第8外显子居多（6/17,35.4%）.5~8外显子扩增结果表明，HCCp53基因发生突变的机率在临床有转移的HCC中明显高于无转移的HCC（P0.05）.因此在一定程度上提示出抑癌基因突变与肿瘤发生事件有关，并与肿瘤恶性程度、病情轻重程度有关(χ2=67.33,P0.05).。

tp53基因检测结果解读
TP53基因是一个重要的抑癌基因，它在调控细胞生命周期以及DNA修复过程中起着重要的作用。

TP53基因突变常常与各种癌症的发生和发展相关。

因此，TP53基因检测结果的解读对于癌症风险评估和治疗决策具有重要意义。

1. 野生型：如果TP53基因没有发生任何突变，即野生型（wild type），通常意味着该基因功能正常，细胞能够正常执行DNA修复和细胞周期控制的任务，相对低风险患癌。

2. 突变型：如果TP53基因发生突变，即突变型（mutant type），可能导致基因功能异常，无法正常抑制细胞的恶性增殖以及DNA损伤的修复，增加了患癌风险。

- 基因突变类型分析：检测结果应该包括具体的突变类型，例如错义突变、无义突变、剪接位点突变等。

这些突变类型可以影响TP53蛋白的结构和功能，进而影响细胞的正常调控机制。

- 突变频率分析：TP53基因的突变频率通常与不同类型的癌症相关。

根据患者检测结果中的突变频率，可以评估患者患癌的风险以及治疗策略的选择。

- 突变位置和功能分析：TP53基因突变的位置和功能分析可以进一步指导治疗策略的选择。

例如，有些突变可能会导致TP53基因失活或不稳定，可能需要使
用特定的药物或治疗方法来恢复TP53功能或针对突变靶点进行治疗。

肝癌组织中p53基因的突变
吴怡春;陈旭峰
【期刊名称】《浙江中西医结合杂志》
【年(卷),期】1998(008)002
【摘要】目的：对２３例原发性肝细胞肝癌组织中ｐ５３基因的５～８四个外显子可能发生的点突变进行检测分析，方法：通过聚合酶链反应／单链构象多态性分析技术，结果：１３例（５６．５０％）癌变组织中检测到点突变的发生，第７及５外显子的突变率分别为４７．８３％，４３．４７％，１１例癌变组织中同时出现两个外显子以上的多位点突变。

结论：提示ｐ５３基因的突变在原发性肝细胞肝癌中可能是细胞内一系列基因调变至癌过程中的一个关键
【总页数】2页(P85-86)
【作者】吴怡春;陈旭峰
【作者单位】浙江省卫生学校;浙江省卫生学校
【正文语种】中文
【中图分类】R735.7
【相关文献】
1.人肝癌组织胰岛素样生长因子Ⅱ基因P3,P4启动子表达及其与p53基因突变的关系 [J], 陈潮文;刘序友;杨冬华;汤绍辉
2.肝癌组织中c-myc基因突变的研究 [J], 李莉;刘利锋;武彦宁;李庆;陈德喜
3.喉癌中P53基因突变与突变型P53基因蛋白表达的相互关系及意义 [J], 刘克杰;王惠忠;张信行
4.肝癌组织中p53基因及其下游基因的研究进展 [J], 赵劲风;张阳德
5.利用酵母功能检测技术筛选肝癌组织p53基因显性负抑制效应突变体 [J], 傅景庚;王佳琦;曾敏;施慧莉;霍克克
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p53基因与蛋白质水平检测技术方法
检测p53基因和蛋白质水平的常用技术方法有：
1. 基因测序：通过测序技术检测p53基因的DNA序列，从而
确定基因是否存在突变或缺失。

2. PCR（聚合酶链反应）：通过特异性引物扩增p53基因的片段，采用凝胶电泳或实时荧光定量PCR测定扩增产物的数量。

3. Southern印迹：通过限制性内切酶切割DNA并通过凝胶电
泳分离DNA片段，然后将片段转移到膜上并进行特异性探针
杂交，来检测p53基因是否存在缺失或重组。

4. Northern印迹：通过RNA提取、琼脂糖凝胶电泳和探针杂
交技术，来检测p53基因的转录水平。

5. Western印迹：通过蛋白质提取、SDS-PAGE凝胶电泳、膜
转移和抗体识别等步骤，来测定p53蛋白质的表达水平。

6. 免疫组织化学染色：通过对组织标本进行抗体染色，来观察p53蛋白质在组织中的表达。

7. 免疫荧光染色：通过使用荧光标记的抗体与细胞中的p53蛋白质结合，然后通过荧光显微镜观察p53蛋白质的分布和表达情况。

8. 酶联免疫吸附试验（ELISA）：通过特异性抗体与p53蛋白
质结合，在酶的作用下产生发光或色素反应来测定p53蛋白质的浓度。

9. 质谱法（Mass spectrometry）：通过分析p53蛋白质的质量和碎片谱图，确定蛋白质是否含有突变。

以上这些方法可以在基础科研和临床实验室中使用，用于检测p53基因和蛋白质的水平，以研究其在细胞内的作用及与疾病的关联。

肝癌的组织病理学特征与分子标志物肝癌是一种严重的恶性肿瘤，其组织病理学特征和分子标志物对于肝癌的早期诊断、治疗和预后评估具有重要意义。

本文将深入探讨肝癌的组织病理学特征以及相关的分子标志物。

一、肝癌的组织病理学特征肝癌主要分为原发性肝癌和转移性肝癌两大类。

原发性肝癌是指起源于肝组织的癌症，包括肝细胞癌和胆管细胞癌。

肝细胞癌是最常见的原发性肝癌类型，其病理特征主要包括肿瘤细胞呈现多形性、异型性增生和浸润性生长等。

胆管细胞癌则来源于肝内外胆管上皮细胞，其病理特征包括胆管样结构的形成和弥漫性浸润生长。

肝癌的组织病理学特征还包括肿瘤的分级和分期。

肿瘤的分级是根据肿瘤细胞的异型性和分化程度来进行评估的，一般分为I到IV级，分级越高，肿瘤的恶性程度越高。

肿瘤的分期则是根据肿瘤的大小、浸润范围和淋巴结转移情况等来评估肿瘤的扩散程度，常用的分期系统包括TNM分期和Barcelona分期。

二、肝癌的分子标志物肝癌的分子标志物是指在肝癌发生和发展过程中发生变化的特定分子，可以通过检测这些分子的表达水平来辅助肝癌的诊断和预后评估。

以下是一些常见的肝癌分子标志物：1. AFP（α-胎球蛋白）：AFP是最常用的肝癌标志物之一，其在肝癌细胞中高度表达。

AFP的升高与肝癌的存在和病情严重程度相关，可以用于肝癌的筛查、诊断和预后评估。

2. P53蛋白：P53蛋白是一种肿瘤抑制基因产物，其在正常情况下可以抑制肿瘤细胞的生长和分裂。

在肝癌中，P53基因常发生突变，导致P53蛋白的异常表达。

检测P53蛋白的表达水平可以评估肝癌的恶性程度和预后。

3. VEGF（血管内皮生长因子）：VEGF是一种促进血管生成的因子，在肝癌中高度表达。

VEGF的高表达与肝癌的血管生成和转移有关，可以作为肝癌的预后评估指标和靶向治疗的标志物。

4. miRNA：miRNA是一类长度约为22核苷酸的小分子RNA，可以调控基因的表达。

在肝癌中，一些miRNA的表达发生变化，参与肝癌的发生和发展。

《碳点作为基因载体递送p53基因用于肝癌治疗的研究》篇一一、引言肝癌是全球范围内常见的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率均居高不下。

目前，肝癌的治疗方法主要包括手术切除、放疗、化疗等，但治疗效果并不理想，且存在诸多副作用。

因此，寻找新的治疗方法和手段成为当前研究的热点。

近年来，随着纳米技术的快速发展，碳点（Carbon Dots，CDs）作为一种新型的纳米材料，因其独特的物理化学性质和生物相容性，在生物医学领域中展现出巨大的应用潜力。

本研究旨在探讨以碳点作为基因载体递送p53基因用于肝癌治疗的效果及机制。

二、碳点与基因递送碳点是一种新型的纳米材料，具有优异的荧光性能、良好的生物相容性和较低的细胞毒性。

此外，碳点表面易于修饰，可与其他生物分子结合，因此被广泛应用于生物医学领域。

在基因递送方面，碳点可以作为基因载体的候选材料，通过与DNA、siRNA等基因片段结合，实现高效、安全的基因递送。

三、p53基因与肝癌治疗p53基因是一种重要的肿瘤抑制基因，具有调控细胞生长、分化和凋亡等多种生物学功能。

在肝癌中，p53基因的突变或缺失导致肿瘤细胞的增殖失控和凋亡抑制，从而促进肿瘤的发生和发展。

因此，通过基因工程手段恢复或增强p53基因的表达，有望成为肝癌治疗的有效手段。

四、实验方法本研究采用碳点作为基因载体，将p53基因递送到肝癌细胞中。

首先，通过化学方法合成碳点，并对其进行表面修饰，以提高其生物相容性和与p53基因的结合能力。

然后，将修饰后的碳点与p53基因结合，形成碳点-p53基因复合物。

将该复合物通过静脉注射或局部注射的方式递送到肝癌模型动物体内。

通过观察动物生存情况、肿瘤生长情况以及相关生物标志物的变化，评估碳点-p53基因复合物对肝癌的治疗效果。

五、实验结果1. 碳点-p53基因复合物的制备与表征通过化学方法和表面修饰技术成功制备了碳点-p53基因复合物。

该复合物具有良好的稳定性和生物相容性，且在体外实验中显示出较高的转染效率和较低的细胞毒性。

肝癌的遗传性疾病与诊断肝癌是一种严重的疾病，其发病率和死亡率在全球范围内都呈上升趋势。

虽然肝癌的主要原因是慢性病毒性肝炎和酒精滥用，但遗传因素也在一定程度上影响了肝癌的发生。

本文将讨论肝癌的遗传性疾病和其诊断方法。

一、肝癌的遗传性疾病1. 遗传性肝癌相关基因遗传性肝癌与多个基因的突变或缺失有关。

最重要的两个基因是TP53基因和肝癌抑制基因（HCCS1）。

TP53基因突变与酒精滥用等环境因素相关，但遗传上的突变也可能导致肝癌的发生。

HCCS1基因突变则参与了肝癌的早期转化和细胞凋亡等过程。

2. 遗传性肝癌的病因遗传性肝癌的病因复杂，既受基因突变的直接影响，也受环境因素的间接作用。

家族性肝癌的发生率较高，这表明基因的突变在遗传性肝癌中起着重要作用。

此外，肝癌常见的共显遗传病变如肝纤维化和肝硬化等，也会增加肝癌的遗传风险。

二、肝癌的诊断方法1. 临床症状和体征肝癌的早期阶段通常没有明显的症状，但随着病情发展，患者可能出现乏力、食欲减退、体重下降、腹胀等非特异症状。

体格检查时发现肝脏肿大、腹水、黄疸等体征可能提示肝癌的存在。

2. 影像学检查肝癌的影像学检查是诊断肝癌的关键步骤之一。

常用的影像学检查方法包括超声、CT扫描和MRI。

这些技术能够帮助医生确定肿块的大小、位置和形态，并评估肝癌的分期和分级。

3. 病理学检查通过肝组织的病理学检查，可以明确诊断是否为肝癌。

主要的病理学检查方法包括肝穿刺活检和手术切除后的病理学检查。

这些方法能够提供肝癌的组织学类型、分级和分期等重要信息。

4. 分子生物学检查近年来，分子生物学检查在肝癌的诊断和治疗中扮演着越来越重要的角色。

常用的分子生物学检查方法包括肝癌相关基因的突变检测、体液生物标志物的检测等。

这些检测方法有助于早期发现肝癌、预测预后和指导个体化治疗。

总结：肝癌的遗传性疾病和诊断是当前研究的热点领域。

遗传性肝癌与多个基因的突变或缺失有关，而肝癌的诊断主要依靠临床症状和体征、影像学检查、病理学检查以及分子生物学检查等方法。

肝细胞癌中ras,P53基因突变的研究
朱争艳;宫恩聪
【期刊名称】《临床肝胆病杂志》
【年(卷),期】1997(013)001
【摘要】为了探讨原癌基因ｒａｓ和肿瘤抑制基因Ｐ５３在肝癌中的变化，我们利用免疫组化技术检测了福尔马林固定，石蜡包埋肝癌组织内ｒａｓＰ２１，Ｐ５３蛋白的过量表达，利用聚合酶链式反应－单链构象多态性分析技术分析了ｒａｓ和Ｐ５３基因部分外显子的单链构象多态性。

【总页数】3页(P31-33)
【作者】朱争艳;宫恩聪
【作者单位】天津第三中心医院;北京医科大学病理系
【正文语种】中文
【中图分类】R735.7
【相关文献】
1.肝细胞癌中p53基因突变的检测及新DNA片段的发现 [J], 刘明旭;王福生
2.原发性肝细胞癌组织中乙肝病毒整合与p53基因突变关系研究 [J], 温增庆;杨甲梅;吴孟超;陈汉;钱光相
3.乙型肝炎病毒及黄曲霉毒素双暴露下肝细胞癌中p53基因突变及蛋白表达的意义 [J], 白涛;齐鲁楠;陈洁;叶甲舟;吴飞翔;彭涛;黎乐群
4.大肠癌P21、P53蛋白表达和K-ras基因、p53基因突变研究 [J], 马红光;王钦富;李加林;宿明先
5.大肠癌P21、P53蛋白表达和k-ras基因、P53基因突变研究 [J], 王钦富;宋琨;李加林
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