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微生物纯培养方法微生物纯培养是一种将微生物从混合群体中分离出来并在无害的实验室条件下进行单一菌种的培养和研究的方法。
纯培养对于研究微生物的形态、生理、代谢、遗传等方面具有重要意义。
下面将详细介绍微生物纯培养的方法及步骤。
1. 选择合适的培养基和条件选择合适的培养基和条件对微生物的纯培养非常重要。
培养基的选择应根据微生物的特性、需求和研究目的来确定。
常用的培养基包括富含养分的肉汤、琼脂等。
另外，培养基的pH、温度、氧气和二氧化碳含量等条件也需要注意调节。
2. 样品的采集和消毒样品的采集应注意卫生消毒，避免外界微生物的污染。
常用的消毒方法包括用酒精或火焰对工具进行灭菌处理。
样品采集完毕后应立即送至实验室进行处理。
3. 稀释培养和平板分离将样品进行逐级稀释，然后通过平板分离的方法将微生物分离出来。
首先将样品加入适量的稀释液中，进行混合均匀。
然后取出一部分稀释液进行再次稀释，直到得到适宜的微生物数量。
接着，将适量的稀释液均匀涂布在培养基平板上，用细菌铲将液体均匀平铺开来。
待液体固化后，将平板倒置放在培养箱中，进行培养。
4. 单菌种的选择和分离通过观察，可以选择出与其他菌落不同的单个菌落，将其重新接种到培养基上进行培养。
取一根消过毒的铂丝球，沾取单个菌落然后在培养基上划线。
5. 温度调控和培养根据微生物的特性和生长条件，调整培养箱的温度和湿度。
不同的微生物对温度要求不同。
将培养好的微生物放入恒温培养箱中，进行培养。
6. 微生物纯种的筛选和保存通过观察微生物在培养基上的生长情况和形态特征，可以初步筛选出纯种菌株。
然后，将纯种菌株进行存储和保存。
常见的保存方法包括冷冻保存、冷冻干燥以及酒精保存等。
7. 纯种菌株的鉴定和性质研究通过生理生化和遗传学等方法，对纯种菌株进行鉴定和性质研究。
这些研究可以揭示微生物的生态学行为、生产能力以及其与环境的相互关系。
微生物纯培养的关键是选择合适的培养基和培养条件，并保持无菌操作。
第二章微生物的纯培养和显微技术微生物学特有的实验技术微生物如何纯培养？研究其群体如何分离微生物纯种？小！镜下微生物形态多样显微镜观察各种显微技术第一节微生物的纯种分离和纯培养菌种是宝贵的天然资源，生境中多种微生物混杂群居，以纯种进行研究、应用和繁衍。
因此，纯种分离、培养是最基础的工作。
一、纯种分离、培养“特有的实验技术”微生物的纯种分离将多种混杂的微生物，经某种技术或方法分离或纯化的过程。
纯培养（pure culture)：在适宜条件下培养纯化获得的培养物（群体）。
纯种分离、培养所用器具及操作要“严格无菌”（一）无菌技术（aseptic technique)在分离纯种、转接纯种、培养纯种过程中，为保持纯种的“纯洁”性而防止其它微生物污染的技术。
1、所用物品的灭菌技术A、玻璃或金属器皿灭菌干热灭菌：干燥箱（160－170 °C 干热空气2小时灭菌）B、培养基或溶液灭菌湿热灭菌：高压蒸汽灭菌器（121 °C 热蒸汽30分钟灭菌）干燥箱高压自动灭菌锅压力表C、血清或生长因子溶液灭菌过滤除菌：细菌滤器滤膜(孔径小于细菌细胞的大小)C、无菌室UV杀菌、超净工作台火焰区操作。
“树立无菌意识，规范无菌操作、保证纯种培养”B、超净工作台无菌操作----移液2、无菌操作A、火焰旁无菌操作----接种（二）固体培养基分离纯种菌落（colony) ---琼脂营养平板菌落单个微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度形成的肉眼可见、有一定形态结构的子细胞生长群体。
一个菌落是一个纯种，也是一个纯培养；单个微生物只在固体培养基上形成菌落，在液体培养基中不会形成菌落。
微生物样品多种混杂某种方法培养分散成单个微生物平板单菌落每个菌落为纯种（纯培）纯种（纯培养）单菌落转接培养1、微生物纯种分离的原理和方法2．纯种平板分离的不同方法99ml无菌水试管10倍稀释图从土壤中分离细菌纯种方法10倍稀释1：100 1克土壤（1）涂布平板法（spread plate method）（2）稀释倒平板法（pour plate method）涂布平板法稀释倒平板法稀释菌落在表面菌落在表面下含培养基（3）平板划线法（streak plate method ）蛇形线法操作图平行线法操作图“在平板表面长出的菌落是需氧菌”（4）厌氧细菌的纯种分离厌氧培养箱图平板放在厌氧罐内培养（三）液体培养基分离纯培养个别较大细菌原生动物、藻类固体平板不能长菌落如何分离纯培养？接种物液体培养基顺序稀释法分离。
可编辑修改精选全文完整版微生物纯培养的方法一、固体培养基分离1、稀释倒平板特点：菌落分离较为均匀，进行微生物计数结果相对准确。
但操作相对麻烦，热敏感菌有时易被烫死，而严格好氧菌也可能因被固定在培养基中生长受到影响。
2、涂布平板法特点：操作相对简单，是较常使用的常规方法。
但有时会因涂布不均匀使某些部位的菌落不能分开，进行微生物计数时需对稀释和涂布过程的操作特别注意，否则不易得到准确的结果。
3、平板划线法特点：操作简单，多用于对已有纯培养的确认和再次分离。
应用：这三种方法可用于所有能在固体培养基表面形成菌落的微生物的纯培养分离。
并且，通过选用适当的选择平板及培养条件，可直接分离各种具有特定生理特征的微生物。
和厌氧罐或厌氧手套箱技术结合，这3种方法也可用于获得各种厌氧菌的纯培养。
4、稀释摇管法特点：稀释倒平板法的一种变通形式，但由于菌落形成在琼脂柱的中间，观察和挑取都相对困难。
应用：在缺乏专业的厌氧操作设备的情况下对严格厌氧菌进行分离和观察。
二、液体培养基分离1、稀释法特点：工作量大，是否获得纯培养需依靠统计学的推测。
应用：不能或不易在固体培养基上生长的微生物进行纯培养分离或数量统计。
2、富集培养特点：一般不能直接获得微生物的纯培养，在通过富集培养使原本在自然环境中占少数的微生物的数量大大提高后，需再通过平板法进行相应微生物纯培养的分离和检测。
应用：（1）根据某种微生物的特殊生长要求，按照意愿从自然界中对这种微生物进行有针对性的有效分离；（2）分离培养出由科学家设计的特定环境中能生长的微生物，尽管我们并不知道什么微生物能在这种特定的环境中生长。
三、显微操作单细胞（孢子）挑取特点：分离过程直观，可靠，但对仪器和操作技术要求较高，多限于高度专业化的科学研究。
而挑取的微生物单细胞或孢子需经固体或液体培养基培养后才能获得其纯培养物。
应用：从样品中直接分离所需的微生物细胞或孢子，获得其纯培养。
