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连翘发酵茶多酚类物质提取工艺优化及抗氧化活性研究
连翘是一种常见的中药材，具有清热解毒、消肿止痛等功效。
近年来，研究表明连翘中含有丰富的多酚类物质，具有很好的抗氧化活性。
因此，对连翘发酵茶多酚类物质提取工艺进行优化，并研究其抗氧化活性，具有一定的研究意义。
本研究以连翘为原料，通过发酵和提取等工艺，提取出多酚类物质，并对其进行抗氧化活性研究。
首先，对发酵条件进行优化。
在发酵过程中，控制温度为30℃，湿度为80%，发酵时间为48小时。
通过比较不同发酵条件下的多酚类物质含量，确定了最佳的发酵条件。
接着，对提取工艺进行优化。
采用乙醇提取法和水提取法进行比较，结果表明乙醇提取法提取出的多酚类物质含量更高。
在乙醇提取法中，控制乙醇浓度为70%，提取时间为2小时，提取温度为60℃。
通过比较不同提取条件下的多酚类物质含量，确定了最佳的提取条件。
最后，对提取出的多酚类物质进行抗氧化活性研究。
采用DPPH自由基清除率和还原力两种方法进行测定。
结果表明，连翘发酵茶多酚类物质具有很好的抗氧化活性，能够有效清除自由基。
综上所述，本研究通过优化连翘发酵茶多酚类物质提取工艺，并研究其抗氧化活性，得出了一些有意义的结论。
这些结论对于进一步开发和利用连翘中的多酚类物质具有一定的指导意义。
连翘含量测定方法（连翘苷）来源: 作者:佚名连翘为木犀科植物连翘Forsythia suspense（Thunb.）Vahl的干燥果实。
2005版《中国药典》采用高效液相色谱法测定了连翘苷的含量。
文献报道的连翘苷的含量测定方法主要有高效液相色谱法和薄层扫描法。
一、高效液相色谱法2005《中国药典》连翘含量测定项下：色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水（25：75）为流动相，检测波长为277nm；理论板数按连翘苷峰计算应不低于3000。
供试品溶液的制备：取本品粉末约1克，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇15ml，称定重量，浸渍过夜，超声处理25分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。
精密量取续滤液5ml，蒸至近干，加中性氧化铝0.5g拌匀，加置中性氧化铝（100～120目，1g，内径1～1.5cm）上，用70%乙醇80ml洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，残渣用50%甲醇溶解，转移至5ml 量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
文献报道的HPLC法，流动相系统以乙腈-水为多，也有以乙腈-冰醋酸溶液为流动相的。
现总结如下：王隶书等用HPLC法测定抗病毒滴丸中连翘苷的含量。
采用日本岛津LC210AT高效液相色谱仪，紫外分光检测器；日立U23400型分光光度计；日本岛津ODS-C18柱(150mm×4.6mm，5μm)；以乙腈-水(24：76)为流动相；柱温30℃；检测波长277nm。
杨德柱等采用高效液相色谱法测定夏莲颗粒剂中连翘苷的含量时，采用日本岛津公司高效液相色谱仪；色谱柱：Shim-pack ODS柱（日本岛津公司, 5μm，150mm×4.6mm）；柱温：25℃；流动相：乙腈-水-三乙胺（24：76：0.02）；流速：1.0mL/min；检测波长：276nm。
样品的制备方法同药典。
徐晓梅等采用RP-HPLC法测定病毒清口服液中连翘苷的含量。
连翘水提液中连翘苷的含量检测作者：王建舫穆祥来源：《农业开发与装备》 2015年第3期王建舫，穆祥*（北京农学院兽医学（中医药）北京市重点实验室，北京 102206）摘要：本试验旨在建立一种高效液相色谱-紫外检测法（HPLC-UV）测定连翘水提液中连翘苷含量的方法。
采用博纳艾杰尔Venusil MP C18色谱柱（150mm×4.6mm，5μm），以乙腈-水（25：75）为流动相，流速1.0ml/min，检测波长277nm，柱温25℃，结果表明连翘苷在50～500μg/ml范围内线性关系良好（r=0.9998），平均加样回收率为99.98%（n=6），峰面积的相对标准偏差（RSD）为0.80%。
此方法专属性强、重复性好，可用于连翘水提液中连翘苷的含量测定。
关键词：连翘；连翘苷；高效液相色谱；含量测定0 引言连翘为木犀科植物连翘Forsythia suspensa（Thunb.）Vahl的干燥果实。
具有清热解毒，消肿散结，疏散风热之功效。
用于痈疽，瘰疬，乳痛，丹毒，风热感冒，温病初起，温热人营，高热烦渴，神昏发斑，热淋涩痛[1]。
本试验采用高效液相色谱法对连翘水提液中的连翘苷含量进行了测定，建立了一种专一性强、重复性好的测定方法，以期为连翘水提物的质量控制提供依据。
1 材料与方法1.1 仪器与试药高效液相色谱仪（Waters Alliance e2695）；美国Millipore水纯化系统；针筒式微孔滤膜过滤器（天津市科亿隆实验设备有限公司，孔径0.22μm）。
连翘苷（批号487-41-2，购自上海同田生物技术股份有限公司）；连翘水提液，本实验室自制；乙腈（色谱纯，天津市光复精细化工研究所）。
1.2 色谱条件博纳艾杰尔Venusil MP C18色谱柱（5μm，150mm×4.6mm）；流动相：乙腈-水（25：75）；流速1.0ml/min；检测波长277nm；柱温25℃。
1.3 溶液的制备1.3.1 对照品溶液的制备。
第二章 连翘酯甙分离提取、鉴定研究连翘[Forsythia suspensa(Thunb)Vahl]为木犀科连翘落叶灌木，果实入药，具有清热解毒、散结消肿、抗菌及抑制真菌等功能[1]。
连翘酯甙(Forsythiasid 或forsythoside A)为其主要活性成分，它不仅对金黄色葡萄球菌等十一种致病菌有极强的抑制作用，而且具有抑制磷酸二酯酶（c-AMP ）及抑制真菌[2]和抗病毒[3]作用。
连翘酯甙为淡黄色粉末，其分子式为C 29H 38O 10，结构组成为3,4-dihydroxy-ß-phenethyl-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1-6)-4-O-caffeoyl-ß-L-rhamno- - pyranosyl-(1-6)-4-O-caffeoyl-ß-D-glucopyranoside[3，4-二羟基- ß-苯乙基-O-α-L-鼠李糖基-（1-6）-4-O-咖啡酰基- ß-D-吡喃（型）葡萄糖苷[4]。
其结构式如图2-1示意。
关于连翘酯甙的提取分离方法已有文献报道，最早从连翘中提取连翘酯甙的是等几位日本学者[5,6]，他们的提取方法是采用热水提取，水提取物再用甲醇提取，然后用硅胶柱进行柱层析初步分离， 最后用制备性硅胶薄层层析板进行纯化，甲醇重结晶得到纯品连翘酯甙。
我国的梁文藻等人采用化学分离法，通过制备性硅胶薄层层析法从连翘叶中也成功地分离提取得到了纯品连翘酯甙[4]。
匡海学[7]等人从连翘的未成熟果实青连翘中也分离得到了连翘酯甙，同时进行了抗菌活性对比实验，指出连翘酯甙是中草药连翘中最有效的、最主要的抗菌活性成分，在评价连翘及连翘制剂质量时，应该以此成分作为一种主要考察指标。
基于上述研究我们可以看到连翘酯甙不仅对金黄色葡萄球菌等十一种致病菌有极强的抑制作用，而且具有抑制磷酸二酯酶（c-AMP ）及抑制真菌和较强的抗病毒功能，因而对连翘酯甙的研究愈来愈受到人们的重视。
连翘叶中连翘苷的提取分离实验原理
连翘叶中的连翘苷是一种具有抗菌、抗炎、解毒等药理作用的有效成分。
提取分离连翘苷可以采用常规的醇沉法和枸橼酸盐沉淀法。
醇沉法是将连翘叶经过研磨后加入80%的乙醇，搅拌均匀后静置沉淀，再在60摄氏度下真空干燥即可得到连翘苷。
枸橼酸盐沉淀法是将连翘叶粉末加入枸橼酸钠溶液中，搅拌均匀后加入氯化钙溶液，混合均匀后静置沉淀，再用乙醇重悬沉淀物，离心干燥即可得到连翘苷。
通过这些方法都可以提取分离出高纯度的连翘苷用于进一步研究和应用。
连翘苷的提取及其稳定性研究赵咏梅;王雷【摘要】采用甲醇提取法提取连翘叶中的连翘苷,HPLC法进行含量测定,并用分光光度法测定温度、酸碱度、光照条件和不同食品添加剂对连翘苷提取液稳定性的影响.结果表明,样品连翘苷含量为48.182 mg·L-1,纯度为96.3％.连翘苷提取液不耐高温,50℃以上时,吸光度值下降;连翘苷提取液在中性条件下最稳定,并且光稳定性好.糖类对连翘苷稳定性无明显影响,经过蔗糖、麦芽糖、葡糖糖和果糖处理之后其吸收值在0.4035～0.4037之间;柠檬酸盐类对连翘苷提取液的稳定性影响较大,但与时间因素无关.【期刊名称】《陕西农业科学》【年(卷),期】2016(062)005【总页数】3页(P21-23)【关键词】连翘苷;食品添加剂;吸光度;稳定性【作者】赵咏梅;王雷【作者单位】西安文理学院生物与环境工程学院,陕西西安710065;西安文理学院生物与环境工程学院,陕西西安710065【正文语种】中文连翘(Forsythia suspense)属木犀科植物，主要分布于陕西、山西、四川、河南、河北等地［1］，其良好的经济效益、生态效益、以及在新药开发和新资源利用中的重要地位已被越来越多的人所认识。
连翘中的主要活性成分是木脂素类化合物连翘苷［2］。
连翘苷不仅具有清除自由基、减肥降血脂作用，同时其抑制神经细胞损伤，增加细胞活性的作用已被证实［3～5］。
笔者还就连翘苷的甲醇提取法进行了研究，认为采用甲醇提取的连翘苷具有纯度大、稳定性较好的优点，然而，其稳定性分析和研究还较缺乏［6］。
为此，笔者实验选择连翘叶为提取原料，通过单因素试验研究连翘苷提取液在不同温度、pH、糖类和光照条件下的稳定性，并检测了几种食品添加剂对连翘苷提取液稳定性的影响，为更好控制连翘提取物质量提供依据。
现报道如下。
1．1 材料、试剂和仪器设备1．1．1 植物材料连翘叶，采摘自秦岭北麓蓝田灞源段，清洗、烘干后保存备用;连翘苷标准品购自于陕西省食品药品监察局，冰箱中避光保存。
第三章连翘酯甙理化性质研究1. 连翘酯甙稳定性研究中药连翘（F ructus F orsythiae）为木犀科（Oleaceae）植物连翘[Forsythia Suspensa (Thunb)Vahl]的干燥果实，具有清热解毒消肿散解的功效[1]。
以前，在考察连翘的提取工艺时，是以检测连翘甙的含量作为考察指标，近年来对连翘有效成分研究发现，连翘甙无抗菌活性，因此把测定连翘甙的含量作为考察指标无意义[2]，应选择具有抗菌活性的成分连翘酯甙作为考察的指标。
连翘酯甙为咖啡酸的衍生物，分子结构中具有酯键和糖苷键，因而在酸、碱和高温条件下应不稳定，易引起分解产生咖啡酸、D-葡萄糖、L-鼠李糖和一次级甙。
因而在加工含有连翘的中成药时，加工条件稍有不当，就有可能使连翘酯甙分解。
事实也证实了这一点，虽然连翘酯甙在连翘叶、壳及心中含量都很高，但在检测银翘解毒丸、银翘解毒片成药时只检出咖啡酸，未检出连翘酯甙，可能在加工过程中连翘酯甙已发生了水解。
为了进一步证实上述推断和提出科学的连翘加工条件，我们从酸度、碱强度和温度三个方面考察了连翘酯甙的稳定性。
1.1仪器和试剂1.1.1仪器：HP 8453 UV-Vis 紫外光谱仪；Huber 型恒温水浴；1.2.2试剂：中草药连翘：山西大同；连翘酯甙：本研究室提取[4]；咖啡酸：Sigma 试剂；邻苯二甲酸氢钾，混合磷酸盐：上海雷磁仪器厂试剂分厂；碳酸钠和碳酸氢钠为分析纯试剂；所用水均为二次蒸馏水。
1.2实验方法用双蒸馏水分别配制pH值为4.03邻苯二甲酸氢钾标准缓冲液、6.86混合磷酸盐标准缓冲液和9.40碳酸盐缓冲液以及用各种缓冲液配制浓度为：6.04×10-2mol•L-1连翘酯甙储备溶液，测定溶液浓度为6.04×10-4mol•L-1。
pH值为4.03和6.86的连翘酯甙溶液水浴恒温至80℃，每隔30分钟测定一次紫外吸收光谱，连续测定4小时，观察紫外光谱图形和最大吸收峰的变化；pH值为9.40连翘酯甙溶液水浴恒温至60℃和80℃，每隔1分钟测定一次紫外吸收光谱，观察371nm和262nm处吸光度的变化；对pH值为6.86的连翘酯甙溶液水浴恒温至60℃，每隔15分钟测定一次紫外吸收光谱，观察326nm和286nm处吸光度值的变化。
连翘花中连翘苷的超声提取工艺高首勤;雒慧娟;陈芳【摘要】目的:连翘花中连翘苷的最佳超声提取工艺及含量的测定.方法:通过单因素试验分别考察了甲醇体积分数、料液比、提取时间对连翘苷得率的影响,并在此基础上设计正交试验以确定超声提取连翘苷的最佳提取工艺.结果:料液比对连翘苷的得率有显著的影响,且最佳提取工艺条件为用25倍量的70％甲醇,超声提取40min.结论:超声提取工艺简单、快捷,适用于连翘花中连翘苷的提取、测定和资源开发.%Objective: To optimize the ultrasonic extraction process of phillyrin fromForsythiae Flos and determine the content. Methods: Single factor experiments were conducted to investigate the effects of methanol volume fraction, material liquid ratio and extraction time on yield of phillyrin, and on the basis of that, orthogonal test was designed to determine the optimal extraction process of phillyrin. Results: Material-to-liquid ratio had the most significant effect, the optimum conditions for phillyrin obtained were as follows: 25 times the amount of 70％ methanol and the extraction of 40 min. Conclusion: Ultrasonic extraction technology is simple and rapid, it is suitable for the extraction, determination and resource developmentof the phillyrin.【期刊名称】《中国现代中药》【年(卷),期】2018(020)001【总页数】4页(P79-82)【关键词】连翘花;连翘苷;超声提取;正交试验【作者】高首勤;雒慧娟;陈芳【作者单位】山西中医学院中药学院, 山西晋中 030619;山西中医学院中药学院, 山西晋中 030619;山西医科大学基础医学院, 山西太原 030001【正文语种】中文连翘(Forsythia suspense)为木犀科连翘属的落叶灌木，在我国分布广泛，主要产地有山西、陕西、河南、山东等，而且其他各地几乎均有栽培。
连翘叶中连翘甙的提取和含量测定
罗定强
【期刊名称】《西北药学杂志》
【年(卷),期】1998(13)2
【摘要】从连翘叶中取分离得到连翘甙；用薄层－紫外分光光度法测定了连翘叶及其同属植物金钟花叶中连翘甙的含量；连翘叶含４．２８％，金种花叶含４．９５％。
【总页数】1页(P58)
【作者】罗定强
【作者单位】西安医科大学预防医学系;西安医科大学预防医学系
【正文语种】中文
【中图分类】R284
【相关文献】
1.不同加工方式连翘叶中连翘酯苷A和连翘苷的含量测定 [J], 马梅芳;杨晓日;高慧;宋敬丽;李洁
2.某地区不同采收期连翘叶中连翘酯苷、芦丁和连翘苷的含量测定 [J], 王雨虹;贺爱玲
3.不同产地连翘叶中连翘苷和连翘酯苷A的含量测定 [J], 杨棣华;黄兰;郑显辉
4.不同采收期连翘叶中连翘苷、连翘酯苷和芦丁的含量测定 [J], 张杲;李发荣;段飞;靳谨;郭颖;王喆之
5.基于响应面法和熵权法优化连翘叶中连翘酯苷A、连翘苷和芦丁提取工艺 [J], 刘路路;李可;韦智江;郭然;赵梓邯;代熙;李卫东
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连翘中连翘苷和多糖的提取工艺优化及含量测定∗冯素香;郝蕊;吴兆宇;刘富岗;周悌强;王蒙蒙【摘要】目的：通过正交设计优选出闪式提取法提取连翘苷的最优工艺。
方法以提取物中连翘苷含量为指标,以乙醇浓度、料液比、提取时间为考察因素,采用正交实验法优选连翘苷的闪提最优工艺；对闪式提取和回流提取连翘苷后的药渣提取多糖,并比较多糖的提取率。
结果闪式提取的最佳工艺为：电压120 V,加10倍量70%乙醇闪式提取1 min,提取2次。
此条件下连翘苷的含量为4．50 mg·g-1；回流法提取连翘苷的含量为4．06 mg·g-1。
闪式提取和回流提取法的药渣中多糖的出膏率分别为2．16%,1．51%。
结论闪式提取的连翘苷的含量及药渣中多糖的出膏率均高于回流提取,该工艺稳定可行。
%Objective To optimize homogenate extraction process of Forsythia suspensa. Methods With the content of phillyrin serving as the index, the homogenate extraction process of phillyrin was optimized by orthogonal design, in which the ethanol concentration, ratio of solid to liquid and extracting time were selected as affecting factors. And the transfer rates of the polysaccharide in the dregs from homogenate extracting process and ethanol refluxing process were compared. Results The optimum conditions of the homogenate extraction were as follows: 10 times amount of 70% ethanol and 1 minute for each extraction with voltage of 120 V. The content of phillyrin extracted by the optimum process of homogenate extraction was 4. 50 mg·g-1 ,and 4. 06 mg·g-1 by ethanol refluxing method. The extraction rate of the polysaccharide from the dregs in the two processes was 2. 16% and 1. 51%, respectively. Conclusion Both the content of phillyrin and the extractionrate of polysaccharide from the dregs are higher in homogenate extraction than in refluxing extraction.【期刊名称】《医药导报》【年(卷),期】2016(035)012【总页数】4页(P1348-1351)【关键词】连翘苷;多糖;正交实验;闪式提取【作者】冯素香;郝蕊;吴兆宇;刘富岗;周悌强;王蒙蒙【作者单位】河南中医药大学药学院，郑州 450008; 呼吸疾病诊疗与新药研发河南省协同创新中心，郑州 450008;河南中医药大学药学院，郑州 450008;河南中医药大学药学院，郑州 450008;河南中医药大学药学院，郑州 450008;河南中医药大学药学院，郑州 450008; 呼吸疾病诊疗与新药研发河南省协同创新中心，郑州 450008;河南中医药大学药学院，郑州 450008【正文语种】中文【中图分类】R282;R927.2DOI 10.3870/j.issn.1004-0781.2016.12.013连翘在我国已经有近千年的药用历史，被视为“疮家要药”。
连翘为木犀科植物连翘Forsythia suspensa(Thunb.)Vahl 的干燥果实，味苦，性微寒，归肺、心、小肠经，具有清热解毒、消肿散结、疏散风热之功效，主治痈疽、瘰疬、丹毒、风热感冒、温病初起、高热烦渴、神昏发斑、热淋涩痛等症[1]。
现代药理学研究表明，连翘有降血脂[2]、抗氧化[3]、抗菌、抗病毒[4]、抗肿瘤[5]、解热镇痛活性，以及抗糖尿病、镇吐止呕[6]作用。
连翘苷是连翘的主要有效成分，具有抗病毒、抑制毛细血管通透性、强心和抗肝损伤[7]等作用。
据文献报道，连翘苷目前使用较多的提取方法有水煎煮法[8]、超声提取法[9]、回流法[10]等。
但尚未见到用闪式提取法提取连翘苷的报道，笔者针对此方法对其进行工艺研究。
另外，在连翘有效成分提取方面往往忽略了多糖的提取，本研究同时对提取连翘苷后的药渣进行了多糖的提取，并与回流法进行比较。
1.1 仪器 JHBE-50闪式提取器(河南金鼎科技发展有限公司)，Waters e2695高效液相色谱仪(配Waters2998紫外检测器，Empower色谱工作站)；KH2200DB 型超声波清洗器(江苏省昆山市超声仪器有限公司)；XS105型电子分析天平(瑞士梅特勒仪器有限公司，感量：0.01 mg)；SHE-D(III)循环水式真空泵(巩义市予华仪器有限责任公司)；数显电热恒温水浴锅(常州国华电器有限公司)；Evolution 260 Bio紫外-可见分光光度计(赛默飞世尔科技公司)。
1.2 试药连翘苷对照品(批号：110821-201112)，D-无水葡萄糖(批号：110833-200904)均购于中国食品药品检定研究院；连翘药材购于张仲景大药房，经河南中医药大学药学院陈随清教授鉴定为木犀科植物连翘Forsythiasuspensa(Thunb.)Vahl 的干燥果实；乙腈(HPLC grade，Fisher Scientific)、磷酸、无水乙醇、丙酮、乙醚等均为分析纯，水为超纯水。
2.1 连翘苷的含量测定方法2.1.1 色谱条件与系统适用性实验色谱柱为Venusil XBP-C18(天津博纳艾杰尔科技有限公司，4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相：乙腈-水(25∶75)，流速：1.0 mL·min-1；柱温为25 ℃；检测波长：277 nm；理论板数按连翘苷峰计算应不低于3 000；连翘苷对照品及供试品的色谱图见图1。
2.1.2 对照品溶液的制备精密称定干燥至恒重的连翘苷对照品7.10 mg，置25 mL量瓶，加甲醇溶解并稀释到刻度，作为对照品溶液(0.284 mg·mL-1)。
2.1.3 供试品溶液的制备取提取物25 mg，精密称定，置5 mL量瓶，加甲醇使溶解并稀释至刻度。
再用孔径0.45 μm 微孔滤膜过滤，取续滤液，即得供试品溶液。
2.1.4 线性关系考察精密量取连翘苷对照品溶液0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL，分别置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。
精密吸取对照品溶液以及上述稀释对照品溶液10 μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，以对照品进样质量浓度(mg·mL-1)为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线：Y=4.85920×105X-8 760.8；r=0.999 2。
结果表明，连翘苷在0.014 2～0.142 0 mg·mL-1浓度范围内与峰面积线性关系良好。
2.1.5 精密度实验精密量取同一对照品溶液，重复进样6次，每次10 μL，记录峰面积，计算其相对标准偏差(RSD)为1.09%，表明仪器精密度良好。
2.1.6 稳定性实验取供试品溶液分别于配制后的0，1，2，4，6，8，12 h进样，测定连翘苷的峰面积，RSD为1.62%，说明供试品溶液在常温下12 h内稳定。
2.1.7 重复性实验取样品6份制备供试品溶液，并按“2.1.1”项下色谱条件进样，计算结果：连翘苷含量的RSD为1.57%，表明方法的重复性良好。
2.1.8 加样回收率实验取已知含量的同一批样品9份，分别置于5mL量瓶中，按照供试品测定的连翘苷的含量，以其80%，100%，120%比例精密加入对照品贮备液，挥干甲醇后加入样品，按供试品制备方法处理并按“2.1.1”项下色谱条件进样测定，结果平均回收率为101.7%，RSD为2.61%，见表1。
2.2 正交实验优化连翘苷提取工艺2.2.1 考察因素和水平的确定根据预实验的结果，固定闪式提取电压为120 V和提取次数为2次，选取影响提取的乙醇浓度(A)、料液比(B)、提取时间(C)为考察因素，以提取物中连翘苷的含量为考察指标，因素和水平见表2。
2.2.2 实验方法取连翘药材粗粉，在120 V电压下按L9(34)正交表，分别闪式提取2次，合并滤液，回收乙醇，用石油醚萃取2次，取下层溶液挥去石油醚，浓缩至浸膏，后冷冻干燥，得粗提物。
取本品粗提物约25 mg，精密称定，精密加入甲醇并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，按“2.1.1”项下色谱条件进样测定，正交实验结果见表3，方差分析结果见表4。
由表3可知，3个因素的影响大小顺序是：乙醇浓度>料液比>提取时间。
在表4中可知，A、B因素对连翘苷均有显著的影响(PA<0.01，PB<0.05)，而且A2>A3>A1，B2>B3>B1故选A2、B2；而C对连翘苷量无显著影响。
根据测定结果，确定连翘苷的闪提最佳工艺是A2B2C1，即加10倍70%乙醇闪式提取1 min。
2.3 最优工艺验证实验为验证正交设计实验中最优工艺的重现性和可靠性，分别取连翘50 g，用闪提最优工艺，即：在120 V电压下，加10倍70%乙醇闪式提取1 min，平行操作3份，药材中连翘苷的含量分别为 4.51，4.49，4.50 mg·g-1，可见其可靠性和重复性良好。
2.4 乙醇回流提取法目前连翘普遍采取加热回流方法提取连翘苷，根据文献报道加热回流提取连翘中连翘苷的最优工艺为：6倍量70%的乙醇提取1 h[10-11]。
按此条件制备3批样品，并按照“2.1.1”项方法测定，计算平均结果与闪式提取的最优结果。
闪式提取法虽然使用溶剂量较大，但是所用的时间比较短，而且连翘苷的量和转移率也较回流提取有所提高，由此可知从连翘中提取连翘苷，闪式提取优于回流提取。
