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・专 栏・ ・中药与天然药・中药分离中高速逆流色谱溶剂体系的选择颜继忠,褚建军,童胜强(浙江工业大学药学院,浙江 杭州310032)摘要:目的 寻找高速逆流色谱溶剂体系的选择规律。
方法 综述了文献中所使用的溶剂体系,从以往文献相反的角度概括出一些规律。
结果 把高速逆流色谱所用的溶剂体系分为弱极性、中等极性和强极性三种,并给出了一种用于中药分离时溶剂体系的选择方法。
结论 可以快速、简便地选择出合适的溶剂体系。
关键词:高速逆流色谱;溶剂体系;中药;分离中图分类号:R284.2 文献标识码:B 文章编号:100727693(2003)0520374203The selection of solvent system for high speed countercurrent chromatography in the separation of Chinese tra2 ditional medicineYAN Ji2zhong,CHU Jian2jun,TON G Sheng2qiang(Pharm acy institute of zjut,Hangz hou310032,China)ABSTRACT:OB JECTIVE To find the rule of solvent systems for high speed countercurrent chromatography.METH OD Re2 viewed the recent application of high speed countercurrent chromatography in the separation of Chinese traditional medicine and ob2 tained some rules of solvent system from the reverse.RESU LTS The solvent systems were divided into three catalogs as weak polar、medium polar and polar system.And the rule for selection solvent s ystem was elicited.CONC L USION According to the results,the proper solvent system can be slected easily.KE Y WOR DS:high speed countercurrent chromatography;solvent system;Chinese traditional medicine;se paration 高速逆流色谱(HSCCC)是一种液液分配色谱,由于它不采用固态物质为固定相,所以不存在固态载体所造成的吸咐损耗、样品变性、沾染和色谱峰形拖尾畸变等问题[1]。
高速逆流色谱技术目录介绍 (1)高速逆流色谱的原理 (1)1.系统描述 (2)1.1主机 (2)1.2恒流泵 (2)1.3紫外检测器 (3)1.4恒温循环器 (3)1.5色谱工作站 (3)2.主机描述 (3)2.1操作 (4)2.1.1传感器控制面板 (4)2.1.2电源开关 (4)2.1.3样品进样口及样品出样口 (4)2.1.4进口 (4)2.1.5出口 (4)2.2六通阀 (4)2.3进样步骤 (8)2.4控制面板 (9)2.4.1功能键介绍 (9)2.4.2控制面板的操作 (9)2.5TBE-300B高速逆流色谱的工作流程 (10)3.安装 (10)3.1检查包裹 (10)3.2安装环境 (10)3.3连接管 (10)3.4连接保温系统的管路 (11)3.5连接信号线 (12)4.操作 (12)4.1准备 (12)4.2操作程序 (12)4.3系统平衡 (13)4.3.1单泵平衡 (13)4.3.2双泵平衡 (14)4.4样品分离 (14)5.维护 (14)5.1清洗系统 (14)5.2警告 (15)6.系统特性及工作参数 (15)附录A (15)附录B (16)附录C (17)同田生物介绍逆流色谱（CCC）是一种无固体载体支持的液-液分配色谱技术。
与其他柱色谱相比，逆流色谱不会导致不可逆吸附，样品，变性，污染及等问题。
除此之外，它能够分离分子量从小变到大的化合物，甚至一些生物大分子。
高速逆流色谱（HSCCC）是逆流色谱中的最新的发展。
高速逆流色谱不仅减少的分离时间，而且也极大地提高了分离度和制备能力。
高速逆流色谱的应用：1、制备性地分离毫克到克规模的样品；2、从粗样品中分离目标化合物；3、分离放射性同位素。
高速逆流色谱在分离天然产物中的优势：1、更加方便和迅速；2、不需要对样品进行前处理；3、液-液分配容积系统的选择广泛；4、因为没有固体载体，所以无死吸附，无污染；5、高的重现性及重复性。
高速逆流色谱技术1.概述高速逆流色谱（high-speed counter current chromatography，简称 HSCCC），是20世纪70年代由美国国立卫生院（National Institute of Health，简称NIH）Ito博士首创，并且在最近10年之内发展迅速，是一种可在短时间内实现高效分离和制备的新型液-液分配色谱技术，这项技术可以达到几千个理论塔板数的。
它具有操作简单易行、应用范围很广、无需固体载体、产品纯度高、适用于制备型分离等特点。
自1982年第一台仪器问世，就开始了HSCCC的现代化进程。
HSCCC用于天然药物化学成分的分离始于1985年，到1989年达到一个高潮。
自2000年9月起国际逆流研究领域每隔2年举行一次世界逆流色谱学术会议。
近几年, 人们对健康的认识越来越深刻, 更多的人追求天然绿色的健康理念, 故HSCCC 作为一种对提取物污染小的制备技术, 它的应用越来越受到了人们的关注。
鉴于HSCCC的显著特点, 此项技术已被应用于生化、生物工程、医药、天然产物化学、有机合成、环境分析、食品、地质、材料等领域。
目前,HSCCC已从制备型发展到了分析型, 甚至是微量分析型, 应用范围也十分广泛[ 2]。
高速逆流色谱技术在我国的应用较早, 技术水平在国际领域也处于领先地位。
目前, 我国是世界上为数不多的高速逆流色谱仪生产国之一。
我国的深圳同田生化技术有限公司是全球第一家多分离柱高速逆流色谱仪专业生产企业。
公司拥有自主知识产权的高速逆流色谱专利技术, 现已研制并生产出TBE 系列分析型, 半制备型TBE 300，300A, 制备型TBE1000高速逆流色谱仪设备。
2.基本原理高速逆流色谱技术(HSCCC)是一种不用任何同态载体的液-液色谱技术，其分离原理是进行分离纯化时，首先选择预先平衡好的两相溶剂中的一相为固定相, 并将其充满螺旋管柱, 然后使螺旋管柱在一定的转速下高速旋转, 同时以一定的流速将流动相泵入柱内。
高速逆流色谱中样品分离原理：样品进入分离柱内，分离管柱内的轻相和重相是动态的。
随着逆流色谱仪的高速旋转产生的二维力场，轻相由于比重轻相对重相摔在分离管的内侧；而重相相对轻相摔在分离管的外侧。
样品进入分离管之后，随着流动相（重相）慢慢穿过轻相和重相。
在穿越过程中根据样品组分对轻相、重相的分配系数不同而保留时间发生变化；对轻相分配系数大的组分的保留时间长，而对重相分配系数大的组分的保留时间则短。
如图所示：————————————————————————————————————ooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooo………………………………………………………………………………………………①②③④⑤⑥⑦…………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………………图1. 样品进入分离管时的情况………………――――轻相oooooooooooo ――――重相 ①②③④⑤⑥⑦——样品（7组分）————————————————————————————————————ooooooooooooooooooooooooooo ②ooooooooooooooooooo ⑦oooooooooooooooooooooooo…………………④……………………………………………………………………………………………①…③……⑥…………………………………………………………… …………………⑤……………………………………………………………………………样品分离管内侧 分离管外侧 样品分离管内侧 分离管外侧———————————————————————————————————ooooooooooooooooooooo ooooooooooooooooo。
高速逆流色谱法的概况及应用高速逆流色谱( High-Speed Countercurrent Chromatography，HSCCC) 是Yoichiro Ito 博士于二十世纪八十年代首先研发、应用并发展起来的一种新型液-液分配色谱技术；HSCCC运用同步多层螺旋管进行行星式离心运动，使得在互不相溶的两相溶剂系统中可以实现样品在短时间内的高效分离，从而制备样品[1,2]。
高速逆流色谱技术不需要固体支撑物，主要根据样品在两相中所具有的不同分配系数进而对样品进行分离，相对于其他色谱技术如高效液相色谱、柱色谱等来说，具有高回收率、无吸附损耗、无峰拖尾等优点。
1、HSCCC法概况1.1 HSCCC法的基本原理HSCCC属于液 -液分配色谱，所以其基本分离原理与其他同类色谱技术相同，即利用物质在两相间分配系数的差别进行分配。
而 HSCCC将两溶剂的分配体系置于高速旋转的螺旋管内 ,建立起一种单向性流体动力平衡体系。
螺旋管的运动形式，是在自身自转的基础上，同时绕一公转轴旋转，成行星运动[3]。
这样 ,加在分配体系上的离心力场不断发生变化，使两相溶剂充分的混合和分配，从而达到洗脱分离目的。
HSCCC技术已经广泛应用于天然产物的分离。
1.2 溶剂系统的选择利用 HSCCC分离物质的关键是溶剂系统的选择。
经查阅多篇文献，总结要点如下。
对用于 HSCCC分离的溶剂体系，应该满足这几方面的要求：1)不造成样品的分解与变性；2)足够高的样品溶解度；3)样品在系统中有合适的分配系数值；4)固定相能实现足够高的保留[4]。
而对于溶剂体系选择的原则，Ito博士本人总结的几个要点是这样描的：1)待分析组分应易溶于溶剂系统 ,并不与之发生反应；2)溶剂体系的各组分应分成体积比例适合的两相，以免浪费溶剂；3)组分在溶剂系统中的分配系数 K应为适当的定值 (0.5≤K≤1)；4)固定相的保留值要满足一定要求 (保留值越大峰形越好 )。
[中药指纹图谱]高速逆流色谱(H SCCC)技术与色谱指纹谱沈平(国家中药制药工程技术研究中心,上海201203)关键词:高速逆流色谱(HSCCC );指纹图谱;提取分离摘要:介绍了高速逆流色谱(HSCCC )技术与色谱指纹谱的研究近况,HSCCC 的工作原理,技术特点。
HSCCC 技术在中草药分离分析方面尚属起步阶段,随着中药产业的迅猛发展,HSCCC 技术在中草药分离、分析方面的应用前景广阔。
中图分类号:R917 文献标识码:A 文章编号:100121528(2001)0520313203High 2speed Counter 2current Chromatography and Finger PrintSHEN Ping 2niang(N ational Engi neeri ng Research Center f or T raditional Chi nese Medici ne ,S hanghai 201203,Chi na )K ey w ords :HSCCC ;finger print ;extraction and separationAbstract :In this article ,the author reported the recent development in study on high 2speed counter 2current chromatography (HSCCC )and finger print ,work principle and technology speciality of HSCCC ,and noted that the prospect of HSCCC application in separation and analysis of Chinese medicines and herbal medicines is broad as rapid development of the pharmacentical industry of Chinese medicine ,even though the application is still in its infancy at present.收稿日期:2000210220作者简介:沈平(1954～),女,硕士,高级工程师。
高效逆流色谱仪HPCCC常见问题解答1.什么情况下需要使用高效逆流色谱H PCCC?HPCCC是一种独特的技术，可以在低压状况下实现高质量的色谱纯化分离，并且进样量大，溶剂使用量低。
在化学纯化技术方面存在着许多挑战；但是HPCCC特别适用于下列情况：z样品的溶解度不好，使用现有的其它纯化技术无法满足要求时z从未经加工的原料样品中直接提取目标组份时z产品开发过程中，涉及到多个制备级别时使用HPCCC的主要优势:z无样品损失——因为两相（流动相和固定相）都是液体，样品可以全部回收z高通量技术——液/液分配体系除了有助于增加样品的溶解度，还能加大样品负载量，实现高通量的效果z消耗溶剂少——处理相同数量的未加工原料样品，这种技术消耗溶剂量仅为（其它技术的）10%z工艺放大十分容易-——由于柱子填料容易再生，在任何条件和所有级别设备的操作中，分离条件非常容易复制。
2.高效逆流色谱HPCCC是如何发展起来的？HPCCC是从液—液萃取技术发展而来的。
通常在一个分液漏斗中，使样品溶解在两相溶剂体系中，激烈振荡，静置待两相发生分离。
由于组分在两相溶剂中的溶解度不同，目标组分就会在两相中进行分配。
待分配平衡后，从分液漏斗中移走重相，然后混合另一新的更轻相或者加入一些更重相到分液漏斗里，重复萃取过程。
目标组分将再次被分配，如此反复多次，被分离样品的纯度就会越来越高。
上述方式尽管有效，但很明显既费时又费力，因此需要对分液漏斗进行改进。
Craig发明了非连续逆流分溶装置（Craig Counter-Current Distribution Apparatus），该装置由一系列分液漏斗连接而成，两相不混溶液体在分液漏斗间有序地重复混合、倾析，最终使溶质以逆流分配的方式分离在不同的漏斗中（Droplet Counter-CurrentChromatography，DCCC），该装置由一系列通过毛细管连接的垂直管组成。
这种设计能够让其中一相，固定相(SP)保留在管中，另一相流动相 (MP)从管中流出，如果流动相相对密度大就从设备顶端泵入。
高速逆流色谱技术名词解释
高速逆流色谱法（High Performance Reversed Phase，HPLC）是用于分离高分子物质的一种有效的分析技术。
其原理是利用两相溶液的相分离效应，将分子大小和组成的不同物质分离出来，以提高分析的灵敏度和准确度。
HPLC是一种高精密和快速的技术，在多学科领域有着广泛的应用，比如说化学、分析化学、药理、免疫学和生物学等。
高速逆流色谱法的关键是精确控制好柱温，使用色谱液和流速。
色谱液中含有目标分离物质，可以用弱酸或碱性溶液，以及选择性的表面活性剂进行改性，以形成两种不同的溶剂，用不同的流速进行分离。
扩散和摩擦力作用会导致分离物质在柱内停留不同时间，以达到分离目的。
使用高速逆流色谱分离物质时，必须使用高品质的过滤器和检测仪，以确保色谱柱中的溶液质量，并获得准确的分离结果。
这种技术不仅能用于分离物质，而且还能
快速检测滤失和含量，甚至可以检测目标物的性质。
HPLC在药物的研制和测试方面也有着重要的作用。
它能够准确地检测出药物制剂中不同原料之间的比例，从而保证制剂质量，同时也能快速测定药物的组分和结构含量等。
另外，高速逆流色谱法还可用于药物的发掘，通过检测不同地质环境中各类有用的生物活性物质，可以大大提高寻找新药的效率。
可以看出，高速逆流色谱法影响着一系列领域的分析方法，它可以提高分析的准确性，简化试验过程，还可以避免出现许多不必要的错误。
虽然HPLC有着一系列优良的性能，但是在使用时，仍然应该采用谨慎，确保滤失和污染等方面的控制，为科研和实验提供准确可靠的数据。
高速逆流色谱仪 高速逆流色谱仪（HSCCC) 高速逆流色谱法 (High-speed Countercurrent Chromatography，简称HSCCC)，于1982年由美国国立卫生院Ito博士研制开发的一种新型的、连续高效的液液分配色谱技术，与其它色谱技术不同的是它不需任何固态载体，因此能避免固相载体表面与样品发生反应而导致样品的污染、失活、变性和不可逆吸附等不良影响。同时它也具有适用范围广、快速、进样量大、费用低、回收率高等优点。因此，己在生物、医药、食品、材料、化妆品和环保等领域获得了广泛的应用，尤其是在天然产物活性成分的分离纯化领域倍受重视。 一、高速逆流色谱法的发展简史 二十世纪六十年代，首先在日本，随后在美国国家医学研究院发现了一种有趣的现象：即互不相溶的两相溶剂在绕成螺旋形的小孔径管子里分段割据，并能实现两溶剂相之间的逆向对流。Ito及其后来者在此基础上研究并设计制造出了一系列逆流色谱装置，早期的是封闭型的螺旋管行星式离心分离仪CPC（coil planet centrifuge），用于分离染料，蛋白质和细胞粒子。数年后Ito把流通机制引入到螺旋管柱体系中，使逆流色谱和现代色谱一样可以实现连续的的洗脱、分离、检测和收集，并建立了两个基本的流通体制。其中有在比较简单的流体静力学平衡体制HDES基础上开发的作为分析分离的CCC、用作制备分离的DCCC以及移位腔室CCC等。另一方面，以流体动力学平衡体制HDES为基础，研制出在重力场作用下的大制备量分离仪器和在离心力场作用下的分析型和半制备型分离仪器。 二、高速逆流色谱原理记忆器的基本配置 1．高速逆流色谱技术的原理 高速逆流色谱法是建立在单向性流体动力平衡体系之上的一种逆流色谱分离方法，它是在研究旋转管的流体动力平衡时偶然发现的。当螺旋管在慢速转动时，螺旋管中的两相都从一端分布到另一端。用某一相作移动相从一端向另一端洗脱时，另一相在螺旋管里的保留值大约50%，但这一保留量会随着移动相流速的增大而减小，使分离效率降低。但使螺旋管的转速加快时，两相的分布发生变化。当转速达到临界范围时，两相就会沿螺旋管长度完全分开，其中一相全部占据首端的一段，我们称这一相为首端相，另一段全部占据尾端的一段，称为尾端相。高速逆流色谱正是利用了两相的这种单向性分布特征，在高的螺旋管转动速下，如果从尾端送入首端相，它将穿过尾端相而移向首端，同样，如果从首端相送入尾相，它将穿过首端相而移向螺旋管的尾端。分离时，在螺旋管内首先注入其中的一相(固定相)，然后从合适的一端泵入移动相，让它载着样品在螺旋管中无限次的分配。仪器转速越快，固定相保留越多，分离效果越好，且大大地提高了分离速度，故称高速逆流色谱。 2．高速逆流色谱色谱仪的基本配置 仪器的中心部分：(a) ITO多层线圈分离柱，它是由100-200米长、内径为1.6mm左右的聚四氟乙烯管沿具有适当内径的内轴共绕十多层而成，其管内总体积可达300mL左右。(b)平衡器，它可以调节重量，它的作用是让(a)， (b)相对于中心轴两边重量平衡。当在旋转控制器的控制下，在齿轮传动装置作用下，(a)，(b)同时绕中心轴作顺时针或反时针的行星运动，即(a)- (b)本身既在自转，但同时又在绕中心轴公转，公转转速可从0-4000r/min。从线圈分离柱中通过中空的中心轴还同时牵引出了线圈的两端，一端供泵入液用，一端输出液体。仪器工作需要互不相溶的两种液体，一相作固定相，一相作移动相。仪器工作前，先将作为固定相一相的液体通过恒流泵压入线圈分离柱，然后用进样器将待分离的样品按如图所示进样，最后用恒流泵压入移动相，同时启动中心部分运转直到转速大于600r/min。此时，两相在线圈分离柱中具有相对运动之势。由于移动相源源不断的压入，阻止了固定相的流出，同时，移动相带着样品在线圈分离柱中进行无限次的分配而使复杂样品得到分离。当移动相经过检测器时，由于不同的样品组分会产生不同大小的信号，用记录仪就能得到逆流色谱图谱，同时用馏分收集器分步收集移动相就会得到复杂样品被分开的组分。较大的制备型HSCCC，柱容积可达530m1，一次最多进样可达20g粗品；较小的分析型的HSCCC柱容积为8m1，进样量为几十微克，最大转速可达4000r/min，分析能力堪与HPLC相媲美。 在常用的HSCCC基础上，有人提出双向模式的高速逆流色谱" (dua-mode counter crurrent chromatography简称Dccc)，即前一次的流动相作下一次的固定相，洗脱方向相反。与常规的HSCCC相比，Dccc可以降低制备时间，免去柱冲洗时间，提高分离效率，不必预测溶质的保留时间和分配系数，减少了溶剂选择的繁琐。但目前由于溶剂体系系统不完善，应用范围较窄。 三、高速逆流色谱法的技术特点 1．应用范围广，适应性好 由于溶剂系统的组成及配比可以是无限多的，因而从理论上讲可以适用于任何极性范围内样品的分离，在分离天然化合物方面具有其独到之处。由于聚四氟乙烯管中的固定相为液体不需要固相载体，因而可以消除固-液色谱中由于使用固相载体而带来的吸附损失，特别适用于分离极性物质。 2．操作简便，容易掌握 仪器操作简单，对样品的预处理要求低，一般的粗提物即可进行的制备分离或分析。 3．回收率高 不需要固相载体，消除了由于样品在固相载体上的不可逆吸附和降解造成的损失，理论上样品的回收率可达。在实验中只要调整好分离条件，一般都有很高的回收率。 4．重现性好 如果样品不具有较强的表面活性作用，酸碱性也不强，即使多次进样，其分离过程都保持很稳定，而且重现性相当好。 5．分离效率高，分离量较大 由于其与一般的色谱分离方式不同，能实现梯度洗脱和反相洗脱，亦能进行重复进样，使其特别适用于制备性分离，产品纯度高，制备量大。 6．分配系数 溶剂系统的选择是同时选择色谱分离过程的两相，是对样品成功分离的关键所在，而样品中各组分的分配系数决定着这种溶剂系统是否合适，因此分配系数的测定是选择溶剂系统的重要环节。目前，分配系数的测定多采用薄层色谱法、毛细管电泳法、HPLC法、生物活性分配比率法及分析型HSCCC法。 7、溶剂体系和溶液系统
被分离物质种类 基本两相溶剂体系 辅助溶剂
非极性或弱极性物质 正庚（己）烷-甲醇 氯烷烃
正庚（己）烷-乙睛 氯烷烃
正庚己烷-甲醇（或乙睛）-水 氯烷烃
中等极性物质 氯仿-水 甲醇、正丙醇、异丙醇
乙酸乙酯-水 正己烷、甲醇、正丁醇
极性物质 正丁醇-水 甲醇、乙酸 高速逆流色谱常用基本溶剂体系表 上表中是根据被分离物质的极性列出一些基本的可供参考的溶剂体系，它包括非水体系和含水体系。 溶剂系统的选择对于HSCCC分离十分关键。遗憾的是到目前为止溶剂系统的选择还没有充分的理论依据，而是根据实际积累的丰富经验来选择。通常来说，溶剂系统应该满足以下要求：溶剂系统不会造成样品的分解或变性样品中各组分在溶剂系统中有合适的分配系数，一般认为分配系数在0.2-5的范围内是较为合适的，并且各组分的分配系数值要有足够的差异，分离因子最好大于或等于1.5；溶剂系统不会干扰样品的检测；为了保证固定相的保留率不低于50%，溶剂系统的分层时间不超过30秒；上下两相的体积比合适，以免浪费溶剂；尽量采用挥发性溶剂，以方便后续处理尽量避免使用毒性大的溶剂。根据溶剂系统的极性，可以分为弱极性、中等极性和强极性三类。经典的溶剂系统有正己烷-甲醇-水、正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水、氯仿-甲醇-水和正丁醇-甲醇-水等。在实验中，应根据实际情况，总结分析并参照相关的专著及文献，从所需分离的物质的类别出发去寻找相似的分离实例，选择极性适合的溶剂系统，调节各种溶剂的相对比例，测定目标组分的分配系数，最终选择合适的溶剂系统。 四、高速逆流色谱法的应用 中国是世界上较早开展研究逆流色谱技术的国家，它的应用范围十分广泛，如生物工程、医药、天然产物化学、有机合成、环境分析、食品、地质、生物化学、医药学、农业、环境、材料、化工、海洋生物以及无机离子、保健品原料、食品添加剂和化妆品等众多领域。 1．天然产物 HSCCC可采用不同物化特性的溶剂体系和多样性的操作条件，具有较强的适应性，为从复杂的天然产物粗制品中提取不同特性(如不同极性)的有效成分提供了有利条件。因此在80年代后期，在世界范围内的"回归大自然"浪潮的席卷之下，HSCCC被大量用于天然产物化学成分的分析和制备分离，目前报道也最多。 例如：用正己烷／乙酸乙酯/甲醇／水(3：7：5：5)分离粉防己干根粗提物 ；正己烷／乙酸乙酯／乙醇／水(6：3：2：5)或正己烷／乙酸乙酯／甲醇／水(1：1：I：I)体系分离红豆杉粗提物 ；分离紫杉醇混合物采用石油醚(40-60℃)／乙酸乙酯／甲醇/水(50：70：80：65)体系比较合适；采用正己烷/乙酸乙酯／甲醇／水(3：7：5：5)有效分离肉桂酸、阿魏酸、咖啡酸混合物 ；采用正己烷/乙酸乙酯/甲醇/乙醇／水(5：7：5：1：1．5)五元体系分离紫杉醇和caphalornannine；氯仿／0.07 mol/L磷酸钠 0.04 mol／L柠檬酸缓冲液体系(pH： 5.08，1：1)分离制备马钱子碱和番术鳖碱 ；用氯仿/甲醇/丙酮 /水(5：6：1：4)分离挪威云杉针叶粗提物 ；用正庚烷／乙酸乙酯／甲醇/水(3：l0：IO：7)分离杂交番茄枝种子的粗提物 等等，一般均采用下相作流动相。 其它，尚有用正己烷／乙酸乙酯／甲醇／水两步分离紫杉醇的同系物例(eaphalonmmaine，7-epi-10-deaeetyltaxo1)等 ，第一步采用(1：1：1：1)，第二步采用(3：3：2：3或4：4：3：4)并实现制备分离，并发现甲醇
