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高密度组织芯片简易制作方法及体会赵静;徐明堂;赵焕芬;宋光耀【摘要】目的介绍高密度组织芯片的简易制作技术.方法使用内径1.8 mm的自制套针,手工制成组织芯蜡块及组织芯片,并进行HE染色、免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)及荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)技术检测.结果制备组织芯片蜡块2个,为9×12点阵的乳腺癌组织芯蜡块,9×10点阵的结肠癌及胃癌混合组织芯蜡块.蜡块内无空泡及裂痕,组织芯阵列整齐,无组织芯移位或倒浮.切片数十张,经HE染色后观察,芯片上微阵列整齐分界清楚,无微组织片皱褶及脱片现象.经IHC及FISH技术检测,与常规病理切片检测进行对照观察,结果准确一致.结论组织芯片技术具有大样本、高通量、高效率、低消耗、易于标准化等诸多优点,本研究所述制备技术简单易掌控,有利于组织芯片技术在临床和科研中普及并推广.【期刊名称】《河北医科大学学报》【年(卷),期】2015(036)009【总页数】5页(P1090-1093,封3)【关键词】乳腺肿瘤;胃肿瘤;组织芯片;诊断技术和方法【作者】赵静;徐明堂;赵焕芬;宋光耀【作者单位】河北省人民医院肿瘤一科,河北石家庄050051;河北省人民医院病理科,河北石家庄050051;河北省人民医院病理科,河北石家庄050051;河北省人民医院内分泌科,河北石家庄050051【正文语种】中文【中图分类】R737.9;R735.2·论著·随着肿瘤生物学的迅猛发展，大量基因及蛋白逐渐被发现参与肿瘤的发生发展。
为了评价新检测到的潜在癌基因和靶蛋白的临床意义，通常需要检测大量的肿瘤样本。
用传统的分子病理学方法制作样本，耗时耗力，而且消耗试剂及宝贵的组织资源，亟需高通量技术方法解决。
组织芯片也称组织微阵列(tissue microarray,TMA)，是将数十个甚至上千个组织标本规则有序地排布于一张载玻片上，进行同一指标检测的原位组织学研究技术[1]。
《中国癌症杂志》2015年第25卷第9期 CHINA ONCOLOGY 2015 Vol.25 No.9683一种简便易行的组织芯片制作技术秦广琪，魏 巧，顾燕子，向春平，蔡 旭，周晓燕，孙孟红复旦大学附属肿瘤医院病理科组织库，复旦大学上海医学院肿瘤学系，上海 200032 ［关键词］ 组织芯片；肿瘤；制作技术 DOI: 10.3969/j.issn.1007-3969.2015.09.007 中图分类号：R73-3 文献标志码：A 文章编号：1007-3639(2015)09-0683-04A simple and feasible method of tissue microarray QIN Guangqi, WEI Qiao, GU Yanzi, XIANG Chunping, CAI Xu, ZHOU Xiaoyan, SUN Menghong (Tissue Bank of the Department of Pathology, Fudan University Shanghai Cancer Center; Department of Oncology, Shanghai Medical College, Fudan University, Shanghai 200032, China)Correspondence to: SUN Menghong E-mail: sunmh@ ［Key words ］ Tissue microarray; Tumor; Technology 通信作者：孙孟红 E-mail:sunmh@ 组织芯片又称组织微阵列(tissue microarray)是将数十至数百个组织芯点按预先设计的阵列图排列在固相载体上形成矩阵的微缩组织块。
1998年Kononen 等［1］首次提出组织芯片的概念并证实了组织芯片的实用价值，此后组织芯片技术得到了迅速发展。
其最大潜在作用是将基因、蛋白水平的研究与组织形态学相结合，应用同一实验指标，同时将快速研究大量不同组织样本(高通量、多样本)的设想成为现实，减少了实验误差，几十倍、上百倍地提高组织形态学研究的效率，节约实验材料和试剂，同时使实验结果有更可靠的可比性，由于其巨大的应用潜力和实用价值，已经得到全球科学家的广泛关注。
自制M8晶体管测试仪器创意DIY话说前几天整理电脑内文件发现图纸库里存着这么一套图纸就是前几年很多电子论坛上炒得非常火的M8晶体管测试仪顾名思义，就是以ATMEL出品的AtMega8为核心的一个自制的电子元件测试装置可以测量诸如电阻、电容、二极管、三极管这些常用元件的简单参数应该说，是一个非常简洁的自制小工具，好像现在作者又对它进行了升级改造，功能更多正好最近工作不忙，于是决定尝试一下这个小东西全套资料齐备，不知道什么时候收藏的测试仪的电路图，非常简单，不得不说MCU功能的强大这要是用分立元件做，那工作可海了去了主核心是ATmega8 MCU和6只精密电阻构成的测试网络使用LCD1602作为显示，左侧两只晶体管组成了自动关机电路考虑到测量电路的核心有6只电阻构成了一个测量网络因此仪器的性能和这6只电阻肯定有很大关系，因此决定这六只电阻采用精密电阻原来想用0.5%的精密电阻，可惜这个精度级的电阻不零卖，最少500只于是只好采用可零售的0.1%精度的精密电阻，718厂的RJ-24A，以前用过很多虽然比较贵，但是质量可靠，性能出色这个电路很简单，在原作者基础上稍加修改单面板即可了，采用SpringLayout画板热转印制版话说这个国产XX硒鼓真是不行，断线很多，转印效果很差和HP原装硒鼓真是没法比，不过打印纸的话效果还可以断线的地方，用记号笔描吧腐蚀，完后打孔涂一层松香酒精溶液，一是为了助焊，二是为了保护铜箔不易氧化线路板做好了，剩下的事情就简单了，按部就班焊接元件即可，都是直插件，焊接简单，要不了一个小时就搞定了先焊跳线焊接好的PCB，4根铜柱用来固定液晶屏1620液晶，使用非常广泛，这里使用单排插针/座进行电气连接方便拆卸这是最重要的核心元件，MCU，型号是ATmega8后续的升级版测试仪可以用ATmega168或328俗话说，硬件是躯体，软件是灵魂，没有软件的支持，再强大的MCU也是垃圾一块，向MCU内写入程序，注入灵魂由于采用片内RC振荡器，因此，烧录程序时，MCU并没有接时钟电路用面包板做的简易烧录器将烧好程序的MCU装好，插上LCD液晶屏，拧紧螺丝，焊上两根电源线M8晶体管测试仪就组装好啦通电测试，一次成功，按下启动按钮，LCD自动点亮测试仪进入测试状态，9V供电下工作电路约87mA应该主要都是LCD背光的耗电，没有接测试元件，因此显示“Test Failed”既然组装好了，那就看看这个小测试仪如何工作吧先抓了一个三极管进行测试能显示一些基本参数这是2N29072N22222SC2060找了一个JFET,对于结型场效应管只能显示管脚HEXFET，这个能被正常识别2N7225，一样可以测试1N54082AP9双二极管半桥也可以被识别，没有被识别成三极管下面测试测试电阻，这个对于这种测试仪来说应该是比较考验精50R，0.01%精密电阻，显示49R，鉴于M8的内置ADC，可以接受500R，显示499R，可以13.5K，这个显示的相当准确啊120K电阻，显示119.2K，也不错了，误差在1%之内再测测电容WIMA 0.22uF西门子0.47uF飞利浦0.01uF MKT国产0.022uF CBB总之，拿这些三极管二极管测试一圈，这个小东西用来玩玩还是辨别元件好坏还是能有很大帮助的，尤其是一些三极管或者MOS 辨别管脚顺序很方便有空再把它升级一下看看效果如何。
SOP一、总纲1.简介1. 1 原理组织芯片（tissue chip），又称组织微阵列（tissue microarray ，TMA），是生物芯片（组织芯片、基因芯片、蛋白质芯片、细胞芯片）技术的一个重要分支，是将许多不同个体组织标本以规则阵列方式排布于同一载体（使用载玻片最多）上，利用免疫组化、原位杂交等技术分析目的基因的表达差异，进行同一指标的原位组织学研究。
1.2 组织芯片的发展及其应用组织芯片的雏形是Barrifora 等（1986）最早建立的；Wan 等（1987）创造了带有一个管中空隙中心的石蜡嵌入来决定单克隆抗体的染色模式，经过10 年发展，Kononen 等（1998）首先提出组织芯片（tissue chip ，TC），并首次成功运用组织芯片技术对乳腺癌组织中6 种基因的表达情况进行了研究，证实了该技术的实用价值并宣告组织芯片概念的诞生。
Fejzo 等（2001）成功的研制出冰冻组织芯片并利用它进行了非放射性RNA 原位杂交，荧光原位杂交（FISH）和免疫组化等试验。
目前组织芯片技术已广泛应用于人类基因组学研究、疾病相关基因验证、新药的开发与筛选、治疗过程的追踪和预后等方面的研究。
由于组织芯片技术能在细胞水平定位和蛋白质水平检测，实现基因及其表达产物与组织形态学研究相结合，所以在肿瘤病理学研究中价值极大，目前结合免疫组织化学和原位杂交技术在组织芯片上对各种不同肿瘤的研究相对成熟，国内外研究报道已囊括各种消化道肿瘤、泌尿系肿瘤、妇科肿瘤、呼吸道肿瘤及各种软组织瘤等。
不仅要建立规模化的各类型肿瘤的组织库，还要建立正常组织的组织库，使组织芯片的构建形成系统化，为人类攻克癌症提供试验材料。
该技术自1998 年问世以来，以其大规模、高通量、标准化等优点得到大范围的推广应用。
其最大优势在于，芯片上的组织样本实验条件完全一致，有极好的质量控制。
节省时间、节省试剂更是显而易见的。
将数十至上千个小组织整齐地排列在一张载玻片上而制成的组织切片，主要用于研究同一种基因或蛋白质分子在不同细胞或组织中表达的情况。
临床与实验病理学杂志J Clin Exp Pathot2020Doc；36(12)・1289・网络出版时间：2020-12-2016：33网络出版地址：—/”：//4_”cndl.ne/kcms/ke///32.1073.R.00201220.1258.020.0t/l 介绍一种简单易行的组织芯片制作方法、迈新二□歹技术交流武振汝2陈梦琳、，李丽2石毓君、，步宏3，关键词:组织芯片;灌注包埋；制作技术中图分类号:R322-C3文献标志码：B文章编号：1201-7820（2222）12-1280-23doi：122332//cnki.cjce/.0020.12.032组织芯片技术又称组织微阵列（tissue micmuroy,TMA）,是将数十至上百个小组织块按预先设计的阵列图排列在同一玻片上形成矩阵的微缩组织块。
由Ko/oxen等⑴首次提出，并证实了其实用价值。
组织芯片具有体积小、易操作、信息量大等特点，该技术被广泛应用到临床和科学研究中。
组织芯片有多种制作方法［2-0］,但鉴于设备昂贵，操作复杂,不易切片，掉片率高等问题未被推广使用。
本科室在此基础上进行改进,总结出一种操作简便，成本低廉，切片简单，不易掉片，易于推广的组织芯片制作方法,现介绍如下。
1材料与方法1.1材料选取四川大学华西医院生物样本库肝细胞癌、肝内胆管癌以及其对应的癌旁冷冻新鲜组织802例。
H耗材与仪器石蜡（熔点58OC）、HE染液、显微防脱玻片、组织切片机（HM355S型）等，均购自美国Thermo Fish-er公司；组织芯片仪（Quich-Roa,UNTMA，中国）；特尖头长嘴镊子（深圳上河科技公司）。
H组织芯片制作步骤2.0.1制备供体蜡块冷冻新鲜组织用镊子从冻存管中取出，在组织未完全融化时用取材刀修整成大小2cmX1.5cm X2.5cm的组织块，修整好的组织放入12%中性福尔马林中固定48h后，按照常规方法脱水、浸蜡、包埋。
组织芯片制作流程及注意事项一、组织芯片（OrganonChip，简称OoC）技术作为生物医学工程领域的创新之一，旨在模拟人体器官的微环境，为药物测试和疾病研究提供高度精确的实验平台。
本文将详细探讨组织芯片的制作流程及在实验过程中需要注意的关键事项。
二、组织芯片制作流程1. 设计与布局制作组织芯片需要一个精确的设计。
设计师必须考虑到模拟器官的结构、功能需求以及与外部环境的交互。
在这一阶段，CAD（计算机辅助设计）软件和仿真工具被广泛用于模拟和优化设计。
2. 材料选择与预处理选择合适的材料对于组织芯片的成功制作至关重要。
常用的材料包括聚合物、玻璃和硅等。
在使用前，这些材料通常需要经过表面处理或功能化，以增强其生物相容性和化学稳定性。
3. 制造芯片基板制造芯片基板可以通过微纳米加工技术实现，例如光刻、蚀刻和沉积。
这些技术能够精确地控制微米级的结构和通道，以满足组织芯片对于结构复杂性和流体动力学特性的要求。
4. 组织细胞培养一旦芯片基板制备完成，就可以开始进行细胞培养。
选择适当的细胞类型并将其培养在芯片内部的指定区域。
这需要严格控制细胞密度、培养介质和培养条件，以确保细胞的健康和功能活性。
5. 模拟生理环境组织芯片的核心是模拟器官的生理环境。
通过微流控技术控制介质的流动和化学梯度，模拟体内器官的微环境。
这不仅包括细胞的供养和排泄，还涉及到机械性刺激和生物化学信号的模拟。
6. 数据采集与分析在进行实验过程中，必须实时采集和分析数据。
传感器和成像设备用于监测细胞的生长状态、药物反应和疾病模型的进展。
数据分析则需要利用统计学和计算模型来解释实验结果并提取关键信息。
三、注意事项1. 生物安全性组织芯片设计和制作过程中必须严格遵循生物安全性标准。
使用的材料和培养条件必须能够保证细胞的健康和稳定性，避免对实验人员和环境造成潜在风险。
2. 实验重复性为了确保实验结果的可靠性和可重复性，必须严格控制每一批次组织芯片的制作工艺和细胞培养条件。
手工制作组织芯片及体会目的：探索组织芯片的制作方法，从而使其在临床和科研工作中得到使用和推广。
方法：使用内径2 mm的套针、自制石蜡模具及病理科石蜡包埋用石蜡，手工制成组织芯片，并进行HE染色。
结果：制作3×4的组织芯片4张，芯点共48个，经HE染色后低倍镜下观察，芯片成功率达100%。
组织芯片蜡块内组织芯条完整，未见微组织缺失，芯条未见脱落、倒浮现象。
结论：组织芯片具有高信息量、高效、节省检测试剂、易于标准化等优点，且其制备技术简单，容易掌控，便于组织芯片技术在临床和科研的普及及推广。
标签：组织芯片；病理学；手工制作组织芯片（tissue chip），也称组织微阵列（tissue microarrays），是生物芯片技术的一个重要分支，是将许多不同个体组织标本以规则阵列方式排布于同一载玻片上，进行同一指标的原位组织学研究。
该技术自1998年[1]问世以来，因其具有高信息量、高效、节省检测试剂、减少实验误差、增加可比性、易于标准化等优点，且其制备技术简单[2]，容易掌控，得到大范围的推广应用。
为此本文参照部分文献自行手工方法制作组织芯片，取得了比较满意的效果，现制作过程和经验体会简短介绍如下。
1 材料与方法1.1 材料套管打孔针，采用北京博康实验仪器有限公司生产的组织芯片制备仪所佩带直径2 mm套针。
1.1.1 石蜡采用国产的熔点为58～60℃医用石蜡1.1.2 主要的实验仪器及设备自制石蜡包埋用铅模；恒温恒湿箱（上海博讯是也有限公司医疗设备厂）；莱卡全自动石蜡切片机（德国）；莱卡DM3000多头显微镜（德国莱卡公司）。
1.1.3 实验用病理标本为大理学院附属医院病理科2012 年1 -5 月乳腺癌手术切除的病理乳腺癌标本1.2 方法1.2.1 制作前石蜡石蜡在65～67 ℃条件下熔化并放65恒温恒湿箱中保持熔化状态下备用。
1.2.2 供体标本的准备及筛片实验用供体蜡块为病理科常规蜡块标本，调取其对应HE 染色玻片，经有经验的病理科医师显微镜阅片后选取病变典型部位并在供体蜡块上作好相应标记备用1.2.3 组织芯片制作方法用自制铅模为蜡块模具制作厚约8 mm，大小2 cm×2.5 cm的受体蜡块，并将其置于40 ℃恒温台上用打孔套针打孔，在受体蜡块上构建3×4个点阵，孔间距为3 mm。
简易组织芯片仪的制作
（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）
【关键词】芯片分析技术；分子探针技术；显微镜检查
与传统的病理研究方法相比，组织芯片具有省时、经济、信息量大，并能节约标本及大大提高实验效率等优点，应用非常广泛[1]，但由于组织芯片机价格昂贵，难以普及推广。
笔者利用本科室退役的显微镜研制组织芯片仪，并用其制作组织芯片，取得很好的效果，现报告如下。
1 材料与方法
1.1 材料骨髓穿刺针2支（16G和18G），16 W发热元件，温度控制器1个，强力胶水1瓶，退役的带有三坐标的显微镜支架1台，45号圆钢2段（分别为长104 mm，直径56 mm；长40 mm，直径88 mm），电源线2条。
1.2 方法
1.2.1 打孔针和取样针的制作 16G带有M4螺纹的骨髓穿刺针（最小内径为1.1 mm）用于取样；18G带有M4螺纹的骨髓穿刺针（最大外径为1.3 mm）用于打孔。
用砂轮将针尖末端截断（包括芯和鞘），
保留螺纹以下至针尖末端的长度约1～2 cm。
取一段内径分别与16G 或18G骨髓穿刺针外径相当的单芯电线绝缘护套，将其相应地紧紧套在16G或18G骨髓穿刺针的鞘上，使其下缘与针末端的距离为5 mm。
塑料外套与针末端的距离可根据供体蜡块的厚度调整，但打孔针和取样针的外套层和针末端的距离应保持一致（图1）。
上为打孔针，下为取样针.
图1 打孔针和取样针的制作
Fig 1 Top one is hole puncture needle and bottom one is sampling needle
1.2.2 恒温加热装置的制作根据热学原理设计出蓄热体（由45号圆钢加工制成）（图2A、B），内嵌入加热元件（图2C），采用双加热系统，通过温控装置调节温度，使其保持在（60±1）℃（较石蜡的熔点58 ℃稍高），保证打孔针和取样针处于恒温。
1.2.3 操作平台和矩阵定位系统的制作利用退役的显微镜，保留机械和支架系统，利用载物台放置供体蜡块和受体蜡块。
用一块厚度为3 mm的有机工程塑料板，制成尺状结构，利用强力胶水粘在显微镜的推进器上，用于蜡块的准确定位（图3）。
推进器用于受体蜡块打孔时前后（X轴）左右（Y轴）的位移，以保证所打的孔矩阵排列整齐。
旋转镜柱上的调节器（粗细螺旋）使镜台作上下方向（Z轴）的移动，实现打孔和取样深度的准确控制。
至此，一台功能基本齐全的组织芯片仪就改装成功，并可用于组织芯片的制作（图4）。
1.3 结果用制作完成的组织芯片仪制作组织芯片，芯片以规则的点
阵方式排列不同的圆形组织芯片样本，排列整齐，无点阵移位现象，供、受体蜡块紧密融合，经H E染色验证，样本组织大小均匀、结构完整（图5）。
2 讨论
笔者自行研制组织芯片仪，实现废物利用，制作成本低廉；且应用此组织芯片仪制作组织芯片，简化了对蜡块的烘烤等制作流程，对操作者的技术要求不高，只要简单培训即可做出高质量的组织芯片。
在制作芯片仪的过程中，选择打孔针和取样针时应注意针的孔径，打孔针的外径要等于或稍大于取样针的内径，但最多不超过0.2 mm，以保证供受体蜡块完全融合；打孔针和取样针的有效使用长度应适宜（约1～2 cm），太长导热慢且效果差，而且容易变形，无法保证针的刚性，太短则无法有效地打孔和取样；塑料外套与打孔针和取样针末端的距离可根据供体蜡块的厚度调整，但两针的外套层和末端的距离应相等，保证打孔的深度与所取的组织芯柱的长度一致，使所有待检的组织芯片在受体蜡块的同一水平面上。
在恒温加热装置的设计时将温度控制在（60±1）℃，比石蜡的熔点58 ℃稍高一些，其目的是：（1）在打孔和取样的过程中供、受体蜡块不开裂；（2）受体蜡块和所取组织芯柱能够更好地融合；（3）更好地保留供体组织的抗原性，减少免疫组化染色时的边缘效应。
加热恒温装置的引入，解决了传统手工制作时烤蜡块“火候”难以掌握的缺点，在制作芯片过程中无需对供、受体蜡块进行加热，并且在蜡块制成后也不必烤蜡块，就能直接切片，简化组织芯片的制作流程，降低芯片的制作难度，节约了大
量的时间和精力。
用自制的组织芯片仪制作的组织芯片各孔排列整齐，大小均匀。
与组织芯片制孔器等相比［2］，其优点是可根据需要设计不同孔径的打孔、取样针和调节孔间距，其功能元素可与市售的组织芯片仪相媲美。
【参考文献】
[1] 孙廷谊,张云汉,孔令非. 组织芯片的研制及效果[J]. 郑州大学学报:医学版, 2007,42(1):116118.
[2] 沈洪武，叶莉,吴文乔,等. 组织芯片制孔器和受体蜡块的制作[J]. 中华病理学杂志, 2007,36(9):624.(编辑:何佳凤)Self Fabrication of Tissue Chip Instrument。
