人胰腺癌荷瘤裸鼠束缚应激模型的建立

小鼠荷瘤模型实验流程及注意事项
小鼠荷瘤，是将相关的肿瘤细胞通过原位注射或者通过皮下注射入小鼠体内，使其致瘤。

它是肿瘤机制和治疗研究的非常常用的实验手段。

流程：
1、荷瘤小鼠模型建立
2、药物治疗
3、荷瘤鼠临床症状观察
4、卡尺测量不同时间点肿瘤体积变化
5、荷瘤鼠体重变化
6、血液标本采集
7、实验终点肿瘤重量
8、肿瘤标本采集
注意事项：
小鼠的选择：可选择裸鼠或NOD/SCID小鼠
细胞的选择：细胞由用户提供，理论上建株的肿瘤细胞都可以，但建议选择国际公认度较高的细胞系：
头颈部肿瘤-Hep2（喉癌）、CNE（鼻咽癌）
肺癌-NCI-H460（大细胞肺癌）、SPC-A-1（肺腺癌）
胃癌-MNK-45、BGC-823
食道癌-Eca-109
前列腺癌-PC-3、DU-145
结肠癌-HT-29、Lovo
乳腺癌-MCF-7
肝癌-Hep-G2、EL7402
黑色素瘤-A375/B16-F10
原发肿瘤：结肠癌、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、黑色素瘤、淋巴瘤、白血病、肾癌、宫颈癌、软组织肉瘤和骨肉瘤等移植于裸鼠，有一定几率也能成瘤。

需要预实验测试
细胞量：接种的细胞量：无血清培养基重悬成1×107个/ml的悬液，0.2ml/只/针。

一只裸鼠至少2×106个细胞，有的细胞需求可能会达到1×107个/只。

裸鼠模型在肿瘤治疗研究中的应用近年来，肿瘤治疗研究一直是医学界的热门话题。

而其中一个被广泛应用的模型就是裸鼠模型。

该模型是一种没有免疫系统的小鼠，其所患种类繁多的人类癌症与人体癌症的生理和生化特征高度一致。

因此，裸鼠模型被视为一种可靠的人类癌症模型，在肿瘤治疗研究中得到越来越广泛的应用。

一、裸鼠模型有助于肿瘤药物筛选和剂量的选择裸鼠模型的特点是没有免疫系统，因此可以有效地模拟人类癌症患者对化疗药物的反应。

研究人员可以将不同类型的人类肿瘤细胞种植到裸鼠的体内，然后观察不同药物的疗效以及适应性。

这种方法可以帮助筛选出最有效的化疗药物，并确定最佳的剂量方法，以降低剂量过大或过小的患者药物副作用和治疗效果不佳的风险。

二、裸鼠模型可以用于研究免疫药物的作用机制裸鼠模型的另一个重要特点是它们缺乏免疫系统。

因此，在研究免疫药物的作用机制时，其免疫抑制作用可以被完全消除。

这些免疫药物通常用于治疗肿瘤细胞免疫逃逸的疾病。

研究人员可以在裸鼠体内种植癌细胞，并给予不同的免疫药物处理，以便研究药物在治疗肿瘤免疫逃逸方面的作用和机制，为开发更加有效的肿瘤免疫疗法提供理论基础。

三、裸鼠模型可以模拟人类癌症的药物耐受性药物耐受性是肿瘤治疗中的一个重要问题。

但是直接在人体内进行研究很难获得满意的结果，因为某些药物在实验室中表现出的耐受性可能与实际情况不同。

通过使用裸鼠模型，可以准确地模拟人类癌症的耐受性情况，并研究这些药物的各种机制。

这种方法可以帮助人们更好地了解药物耐受性的机制，促进新药物的开发，改善现有的肿瘤治疗方法。

四、裸鼠模型可以进行肿瘤的转移研究在许多情况下，治疗肿瘤并不仅仅是消灭原发肿瘤，还需要防止肿瘤进行转移。

而裸鼠模型在这个方面有很大的应用潜力，尤其是在研究转移性肿瘤时。

研究人员可以通过种植具有转移潜力的细胞系，观察肿瘤转移的过程和机制，并测试不同的治疗方案，以便开发更加有效的肿瘤转移治疗方法。

五、裸鼠模型可以用于研究基因治疗基因治疗是一种新型的肿瘤治疗方法，其作用机制涉及基因转导、表达、调控和重组等方面。

裸鼠前列腺原位肿瘤模型的建立裸鼠前列腺原位肿瘤模型是研究前列腺癌的一种重要方法，可以帮助研究前列腺癌的发生机制、治疗方法以及预后。

在这篇文档中，我们将介绍创建裸鼠前列腺原位肿瘤模型的步骤和需要注意的事项。

一、实验动物选择当前，最常用的裸鼠前列腺原位肿瘤模型是使用BALB/c裸鼠进行实验。

这种鼠标品系的免疫系统极度压制，不会产生对异位移植物的免疫反应，从而提供了可行的肿瘤原位移植模型。

二、细胞株选择在建立裸鼠前列腺原位肿瘤模型的时候，选择合适的细胞株非常重要。

选择常用的前列腺癌PC-3和LNCaP细胞，或者使用病人前列腺癌细胞系，也可以根据需要转移所选原位移植物的特定表型。

三、移植前肿瘤细胞的处理肿瘤细胞的本质是异种细胞体，从人体获取到的肿瘤组织处理一般包括酶处理过程和细胞悬液制备过程。

酶液（例如胰酶）可以消化组织基质和纤维素，使细胞更容易生长。

酶液需要在恰当的温度和pH值下进行消化，并获得最高的细胞产量。

消化完毕后，过滤产生的细胞系悬液，以获得细胞。

四、移植前的裸鼠准备在移植前，要为裸鼠准备好阴茎垫和保持体温的设备。

可以使用小激光剪切器轻轻地切割皮肤做一个小孔，将悬液注入到前列腺内。

五、细胞移植移植前，应将细胞重新悬浮在适合的细胞培养基中，调整至合适的细胞浓度。

将细胞直接注入到头孢钠和甲苯磺丁脲等抗生素加载的BALB/c裸鼠前列腺中。

六、术后护理在移植完成后，将裸鼠安置在恰当的环境中，并监测它们的舒适程度。

为了预防感染和控制感染，需要注射抗生素和止痛药，以及监测患处的融合情况。

七、标本收集和肿瘤评估从移植的裸鼠体内收集原位移植物的标本，并用组织学方法鉴定癌细胞的形态学，确定癌细胞类型。

在肿瘤评估过程中，还可以进行微管道侵袭实验、体内药物毒理学试验等进一步的研究。

总之，裸鼠前列腺原位肿瘤模型的建立对研究前列腺癌的发生机制、治疗方法和预后等方面有重要意义。

从以上步骤和注意事项可以看出，建立该模型的过程繁琐，需要确保实验严谨，才能有效提高研究精度和推进前列腺癌的临床治疗。

动物体内抑瘤实验具体步骤及方法活体生物发光成像技术的原理：在小型哺乳动物体内利用报告基因（荧光素酶基因）表达所产生的荧光素酶蛋白与其小分子底物荧光素在氧、Mg2+存在的条件下消耗ATP 发生氧化还原反应，将部分化学能转化为可见光能释放。

因此只有在活细胞内才会发生发光现象。

并且光的强度与标记细胞的数目线性相关。

一、材料准备1. 动物：裸鼠9 只，6～8周龄，雄性；C57小鼠24 只，6～8 周龄，雄性；动物均为自由饮水采食。

2. 细胞：MDA-MB-231人乳腺癌细胞系，使用荧光素酶基因标记。

方法：用荧光素酶报告基因标记的质粒转染人乳腺癌细胞，共转染的还有选择性标记基因，从而保证转染细胞的稳定性，形成表达荧光素酶的肿瘤细胞株；B16 黑色素瘤细胞。

二、实验步骤1. 紫杉醇混合胶束的制备（1）将适量紫杉醇溶解在少量无水乙醇和丙二醇的混合溶剂中.（2）加入适当比例的磷脂和表面活性剂A 进行充分混合，制得稳定的紫杉醇混合胶束前体制剂，载药浓度为6 g/L。

（3）临用时按剂量加入生理盐水中稀释、摇匀后即可使用。

制剂体系的粒径大小与分布特征采用动态激光光散射粒度仪检测。

2. MDA-MB-231人乳腺癌细胞荷瘤鼠模型的建立（1）培养荧光素酶基因标记的MDA-MB-231人乳腺癌细胞系，使用DMEM 培养基（添加10%胎牛血清），37 ℃、5% CO2 培养箱中培养，每3天传代1次。

（2）待细胞密度为80%～90%、细胞总量达到实验所需要求时，使用胰酶消化，收集于PBS溶液重悬。

（3）如有需要，在细胞培养一定时间后，应使用抗生素Zeocin进行抗性筛选，保证荧光素酶基因的表达量足够。

（4）收集细胞，使用PBS稀释至细胞数1.5×108/mL，接种于裸鼠腋下，每只裸鼠的接种量为0.1 mL 。

3. 动物活体成像检测（1）接种后将裸鼠随机分为3组，分别为生理盐水组、紫杉醇注射液组、紫杉醇混合胶束制剂组，每组3只。

如何进行小鼠肿瘤模型的建立及鉴定小鼠肿瘤模型的建立及鉴定是癌症研究中非常重要的一步，可以用于研究肿瘤的发生机制、治疗策略以及评估新的抗癌药物。

下面将详细介绍小鼠肿瘤模型的建立及鉴定的方法并提供一些实用的技巧。

肿瘤模型建立的方法主要包括人工移植方法、化学物质诱导方法和遗传工程方法。

一、人工移植方法：1.将人类肿瘤细胞、移植物肿瘤组织或细胞株移植到小鼠体内，可以通过裸鼠或免疫缺陷小鼠模型建立人类肿瘤模型。

当细胞或组织取出并经过相关处理后，通过给小鼠注射或将其移植到小鼠体内，研究人类肿瘤的生长和发展。

2.移植人体肿瘤片段。

3.使用免疫缺陷小鼠模型，如裸鼠、严重联合免疫缺陷小鼠等，可以接受外源组织移植而不会引发排斥反应。

二、化学物质诱导方法：1.化学物质诱导肿瘤模型是通过给予小鼠致癌物质或诱导剂来诱发肿瘤发生。

2.应遵循相关伦理原则使用易获得且时间成本低的致癌物质。

3.诱导剂可通过各种途径给予小鼠，如口服、皮下注射、腹腔注射等。

4.对于使用化学物质诱导的肿瘤模型，需要在给药期间和给药后对小鼠进行定期观察和血液检测，以评估肿瘤的发生和发展情况。

三、遗传工程方法：1.遗传工程方法可利用转基因技术将特定肿瘤相关基因引入小鼠体内，例如，通过敲除或激活肿瘤抑制基因或癌基因等，产生特定类型的肿瘤模型。

2.通过基因敲除、敲入或点突变技术，可改变小鼠体内特定基因的表达水平，以模拟人类肿瘤的发生和发展。

确定小鼠肿瘤模型建立成功后1.观察和检测小鼠是否出现明显的肿瘤体积增大和质地变硬等症状。

2.定期观察小鼠的体重变化，以评估肿瘤对小鼠健康状况的影响。

3.使用体重表、肿瘤质量表等测量工具定期测量肿瘤体积，以评估肿瘤生长速度。

4.进行组织学检测，通过活体组织活检或解剖后进行病理学检测，以确定肿瘤种类和分级。

5.对肿瘤样本进行免疫组织化学染色、分子生物学检测等，以确定肿瘤的分子特征。

总结：建立和鉴定小鼠肿瘤模型是一项复杂的工作，需要专业的知识和技术支持。

三种裸鼠胰腺癌建模方法的比较刘娜;杨文彬;曹罡;王磊【摘要】目的建立人胰腺癌细胞株BXPC-3裸鼠皮下瘤、腹腔内种植转移瘤以及原位移植瘤模型,探讨模型建立方法及其生物学特性.方法采用直接皮下瘤细胞注射法建立胰腺癌裸鼠皮下瘤模型,开腹后瘤块包埋法建立腹腔内种植转移瘤模型,瘤细胞悬液置入胰腺包膜下建立原位移植模型,观察三种模型接种阳性率及瘤块生长的速度,对移植瘤做病理检查.结果 3种模型构建的阳性率分别为:皮下瘤模型47％(7/15),腹腔种植转移瘤模型100％(14/14),原位移植模型100％ (14/14).后两种模型1月后发生肝转移、腹膜转移、肠系膜转移,3组间肿瘤生长速度比较,原位移植模型最快,腹腔种植转移模型其次,皮下瘤模型最慢,差异具有统计学意义(P＜0.01).病理检查符合胰腺低分化腺癌.结论成功建立了胰腺癌BXPC-3细胞株的皮下移植瘤模型、腹腔种植转移模型及原位移植模型,显示了各种模型的独特优势,为胰腺癌生物学行为的基础研究及治疗提供了实验平台.%To establish models of subcutaneous tumor, intra-abdominal metastasis tumor and in situ xenograft in nude mice with human pancreatic cancer cell line BXPC-3 to discuss the modeling methods and the biological characteristics of human pancreatic cancer model in nude mice. Methods Subcutaneous pancreatic tumor model was established by direct subcutaneous injection of human tumor cells in nude mice. Intra-abdominal metastasis tumor model was established by embedding tumor blocks in nude mice after laparotomy. Tumor orthotopic transplantation model was established by injecting tumor cell suspension into pancreatic capsules in nude mice. We observed all the three models for the positive rate of tumor inoculation and growthrate of tumor size, and then made pathological examination of the tumor. Results The positive rate of construction of the three models is as follows: 47% (7/15) for subcutaneous model, 100% (14/14) for tumor blocks embedded peritoneal metastatic tumor model, and 100% (14/14) for orthotopic model. The latter two models presented liver metastasis, peritoneal metastasis and mesenteric metastasis one month later. The rates of tumor formation in the three groups had significant differences (P<0.01). Pathological results accorded with poorly differentiated adenocarcinoma of the pancreas. Conclusion We have successfully established the models of subcutaneous tumor, intra-abdominal metastasis tumor and in situ xenograft in nude mice with human pancreatic cancer cell line BXPC-3. Different models show their unique advantages, which provides an experimental platform for basic research of the biological behavior of human pancreatic cancer and its treatment.【期刊名称】《西安交通大学学报（医学版）》【年(卷),期】2012(033)003【总页数】4页(P300-303)【关键词】胰腺癌;裸鼠;移植模型【作者】刘娜;杨文彬;曹罡;王磊【作者单位】西安交通大学医学院第二附属医院普外科,陕西西安710004;西安交通大学医学院第二附属医院超声科,陕西西安710004;西安交通大学医学院第二附属医院普外科,陕西西安710004;西安交通大学医学院第二附属医院普外科,陕西西安710004;西安交通大学医学院第二附属医院普外科,陕西西安710004【正文语种】中文【中图分类】R735.9流行病学调查显示，截止到2010年，全世界范围内大于230万的患者被确诊为胰腺癌，在最常见的导致死亡的肿瘤中排第8位。

人乙状结肠管状腺癌移植裸鼠模型的建立及应用黄靖香;纪小龙;韩冰【期刊名称】《肿瘤防治研究》【年(卷),期】1992(19)1【摘要】本文报导用人乙状结肠原发部位的管状腺癌组织块移植到裸鼠体内荷瘤后,在生物学研究和临床诊断治疗方面的应用,建立了一个有实用价值的动物模型,该模型先后传代20余次、因各种实验需要接种裸鼠125只:其形态及生物学特征和组织的抗原性仍保持不变,用鼠间传代第1(?)代肿瘤组织做体外细胞培养,第5天就可见到单层细胞长出,呈腺样管状结构,在应用性实验中,用放射性核素标记的抗结肠癌单克隆抗体2C10在本模型裸鼠体内的放射免疫显象,为过渡到临床病人的定位诊断提供了必要的参数和依据,另外还用鼠间传代的肿瘤组织块,经液氮冻存28个月后再接种到裸鼠皮下肿瘤仍同样生长,并能传代,其形态特点与原发肿瘤基本一致,这对保持裸(?)肿瘤模型的延续性,减少鼠间传代的工作量和所需费用,为肿瘤实验研究工作的重复性,将有很明显的实际意义。

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人宫颈癌SiHa细胞荷瘤裸鼠模型的建立及鉴定侯柏龙;杜王琪;熊一融;蔡一奇;宋易玲;林晓云;薛向阳;张丽芳【摘要】目的：建立人宫颈癌SiHa细胞裸小鼠体表荷瘤模型，并对其成瘤特性进行分析和鉴定。

方法：将5x100／mL、1x107／mL及5×107／mL3个浓度的SiHa细胞悬液分别在3组裸小鼠背部右腋近上肢皮下接种，建立人宫颈癌裸小鼠体表荷瘤模型，观察荷瘤裸鼠的成瘤率并测量肿瘤的大小，5周后取肿瘤组织经病理学方法观察其组织学特性，并采用PCR及免疫组织化学方法对肿瘤组织的HPV16E7DNA表达进行检测。

结果：3组裸小鼠接种SiHa细胞的成瘤率均为100％，5周后肿瘤大小分别达到（77．29土28．34）mm2、（178．91±61．55）mm3和（305．1l土12．62）mm3。

3个浓度组间肿瘤体积大小差异有统计学意义（P〈0．001）。

病理学大体观察可见SiHa肿瘤的生长均以局部浸润为主；组织切片观察新生肿瘤细胞特点呈现体积大、核大深梁及易见核分裂相的病理性特征；SiHa新生肿瘤组织经PCR检测证实了HPV16E7DNA 阳性，并经免疫组织化学检测证实了HPV16E7蛋白表达阳性。

结论：成功建立了SiHa细胞荷瘤裸鼠模型，为人宫颈癌肿瘤靶向治疗及生物学特性研究提供了理想的动物模型。

【期刊名称】《温州医科大学学报》【年(卷),期】2016(046)002【总页数】5页(P92-96)【关键词】宫颈肿瘤动物模型 BALB／c-nu裸小鼠 SiHa细胞【作者】侯柏龙;杜王琪;熊一融;蔡一奇;宋易玲;林晓云;薛向阳;张丽芳【作者单位】[1]温州医科大学分子病毒与免疫研究所、微生物学与免疫学教研室,浙江温州325035;[2]温州医科大学附属第一医院胃肠外科,浙江温州325015【正文语种】中文【中图分类】R3宫颈癌是全球最常见的妇科恶性肿瘤之一，其发病率在女性恶性肿瘤中仅次于乳腺癌排第二位，而我国宫颈癌患病率和病死率约占世界的28.8%，宫颈癌患病人数约占世界三分之一[1]。