液质联用分析实验报告

⾼级物理化学实验讲义-液质联⽤⾼级物理化学实验讲义实验项⽬名称：L C Q-F l e e t液质联⽤仪的原理、实验技术及应⽤姓名: 张诗群学号：130420123 指导教师：谢莉莉成绩评定：评阅教师：⽇期：2012 年6 ⽉17 ⽇⼀、实验⽬的1.掌握L C Q-F l e e t液质联⽤仪基本原理。

2.熟悉该仪器的各部分的功能，并能进⾏简单的进样操作及控制软件的使⽤。

3.初步使⽤该仪器的数据处理软件，对得到的较简单实验谱图进⾏正确的判断及归属。

⼆、实验原理1. 质谱简化流程：2. LCQ-fleet的结构⽰意图。

3. 质谱相关名词质荷⽐（m/z）：以原⼦质量单位表⽰的离⼦质量与其电荷数的⽐值。

基峰：在质谱图中，指定质荷⽐范围内强度最⼤的离⼦峰称作基峰。

总离⼦流谱图（TIC）：对质荷⽐（m/z）在⼀定范围内的离⼦电流总和进⾏连续检测与记录的谱图。

原⼦质量单位（u）：⽤来衡量原⼦或分⼦质量的单位，它被定义为碳12原⼦质量的1/12。

4.离⼦的产⽣离⼦源类型：1.Electrospray Ionization (ESI) 电喷雾电离- ⼤多数情况下是液态过程。

2.Atmospheric Pressure Photo-Ionization（APCI）⼤⽓压下化学电离-⽓相过程。

3.Atmospheric Pressure Photo-Ionization（APPI）⼤⽓压下光离⼦化-⽓相过程。

离⼦源作⽤：1.去溶剂2.真空过渡3.离⼦化4.去除⼲扰5. 电喷雾（ESI）电离过程6. ESI离⼦化特点：1. 软电离⽅式，⼀般得到分⼦离⼦峰，如M+H+，M+Na+，M-H+;2. 液态电离⽅式，流速耐受有限（＜250 ul/min）；3. 可在常温下进⾏，热不稳定化合物⾸选；4. 可产⽣多电荷离⼦；有利于⼤分⼦化合物（如蛋⽩和多肽）的分析；5. 适⽤于强极性化合物；6. 灵敏度⾼；7. ⼤⽓压化学离⼦化（APCI）电离过程8. ⼤⽓压化学离⼦化（APCI）电离过程通过电晕放电离⼦化⼤⽓压化学电离有三个过程：1. 在⾼压电极作⽤下，氮⽓载⽓和⽓化的液相⾊谱溶剂发⽣反应，产⽣预反应离⼦。

液相色谱串联质谱联用仪检测技术实验指导（2014、2015级）课程内容（一个实验8学时）：（1）AB Sciex Qtrap 4500 三重四级杆/离子阱液相色谱串联质谱联用仪的结构原理、操作及定性定量应用。

（2）利用液相色谱串联质谱联用仪快速测定水果中7种农药的残留量。

吉林农业大学农业部参茸质检中心2017.03实验一AB Sciex Qtrap 4500 三重四级杆/离子阱液相色谱串联质谱联用仪的结构原理、操作及定性定量应用一.实验目的和意义通过学习液质联用仪的构成和使用方法，及其在定性、定量分析中的应用，培养学生使用液质联用仪进行仪器分析的能力，并培养学生严谨的科学态度、细致的工作作风、实事求是的数据报告和良好的实验习惯（准备充分、操作规范，记录简明，台面整洁、实验有序，良好的环保和公德意识）。

培养培养学生的动手能力、理论联系实际的能力、统筹思维能力、创新能力、独立分析解决实际问题的能力、查阅手册资料并运用其数据资料的能力以及归纳总结的能力等。

（一）检测仪器1、仪器名称高效液相色谱串联质谱联用仪（简称LC-MS-MS）。

型号：4500 QTRAP（美国Applied Biosystems公司）。

2、仪器组成液相色谱部分：岛津LC-30A，配有在线脱气机、超高压二元泵、自动进样器；串联质谱部分：QTRAP4500，配有ESI离子源、串联四级杆/线性离子阱。

3、主要性能指标离子化方式：ESI电离质量范围：（5 ~ 1700）amu 分辨率：> 6900 质量稳定性：0.1 amu/12h 灵敏度：1pg reserpine, ESI+, MRM扫描（m/z : 609/195），信噪比S/N > 120:1 扫描速度：4000 amu/sec 质量准确度：< 0.01%（全质量数范围）4、方法原理高效液相色谱二元泵将流动相泵人系统并混合，自动进样器将待测样品注入流动相中，随流动相进入色谱柱，由于样品不同组分在色谱柱中保留时间不同，各组分被分开，依次进入离子源。

现代分析技术之液相色谱-质谱联用技术一、 概述1、质谱质谱法（Mass Spectrometry）即质谱分析法不同质荷比的离子经质量分析器分离，而后被检测并记录下来的谱图叫做质谱图(Mass Spectrum)质谱图的横坐标是质荷比（m/z)，纵坐标是离子强度2、质谱检测的是离子质量质谱中采用的质量单位—Da=Dalton（道尔顿）质量单位，等于一个碳原子（12C）质量的十二分之一，约为1.66×10-24克；一克约为6×1023道尔顿—amu=atomic mass unit，原子质量单位1amu=1Da3、质量数¾名义质量数—采用元素质量数的整数进行计算，例如：C=12，H=1，O=16¾单同位素质量数或准确质量数—用丰度最大的同位素准确质量数计算—例如：12C=12,1H=1.0078,16O=15.9948¾平均质量数或化学质量数—考虑到所有天然同位素丰度的该元素原子量来计算—例如：C=12.001，H=1.00794，O=15.9994¾质谱获得的单电荷离子的m/z值，是单同位素质量数4、分子量的计算利血平，C33H40N2O9的MW的计算5、液质联用（LC/MS）色谱质谱的联用将色谱的分离能力与质谱的定性功能结合起来，实现对复杂混合物更准确的定量和定性分析。

6、LC/MS中的液相色谱液质联用的前提和基础=进样+分离根据化合物的化学特性分离样品（比如极性化合物，非极性化合物，酸性化合物，碱性化合物等）LC的特点：分离技术分离效率高连续流出，峰宽有限有时需要使用缓冲盐提高分离度高压环境工作（>1000 psi）7、LC/MS中的质谱质量是物质固有特征之一，不同的物质有不同的质量谱分析物被转化为气相离子而被分析离子按其质荷比（m/z）被分离及检测MS的特点：灵敏度高定性/定量高真空环境工作溶剂参与反应（API电离源）8、LC/MS的局限性异构体，立体化学方面区分能力差。

实验报告质谱联用实验（一）引言概述实验报告质谱联用实验是一项重要的实验室技术，它使科学家们能够通过结合质谱分析技术和其他分析技术，如色谱或电泳，来得到更加准确和全面的分析结果。

本文将介绍实验报告质谱联用实验的基本原理和步骤，并详细讨论实验中的五个关键点。

正文1. 选择合适的质谱联用实验方法1.1 确定实验目的和样品类型1.2 确定合适的质谱分析方法，如气相质谱（GC-MS）或液相质谱（LC-MS）1.3 确定质谱联用实验的适用范围和限制2. 设置实验条件和准备实验样品2.1 确定质谱分析仪器的工作参数，如电子轰击能量或离子源温度2.2 选择适当的色谱或电泳条件，如流动相组成或电泳缓冲液2.3 注意实验样品的准备，如固相萃取或前处理步骤3. 进行质谱联用实验3.1 将色谱或电泳系统连接到质谱仪3.2 运行样品，并记录质谱和色谱或电泳数据3.3 注意质谱仪的校准和质控标准的使用4. 数据处理和结果分析4.1 使用专业软件对质谱和色谱或电泳数据进行整合和分析4.2 标定质谱和色谱或电泳数据，如通过添加内标物或标准曲线法4.3 分析质谱联用实验的结果，如物质的定性和定量分析5. 错误分析和优化实验条件5.1 分析可能的误差来源和影响因素5.2 优化实验条件，如调整质谱仪器参数或色谱或电泳条件5.3 进行反复实验和质控实验，以确保结果的准确性和可重复性总结实验报告质谱联用实验是一种强大的分析方法，通过结合质谱和色谱或电泳等技术，可以得到更准确和全面的分析结果。

本文介绍了实验报告质谱联用实验的基本原理和步骤，并深入讨论了实验中的五个关键点。

通过合理选择实验方法、设置适当的条件、准备好实验样品、正确处理数据和进行错误分析优化实验条件，我们可以获得可靠和准确的实验结果。

在未来的研究中，我们还可以进一步探索质谱联用实验的应用和发展。

液质联用法液质联用法液质联用法（LC-MS）是一种分析技术，结合了高效液相色谱（HPLC）和质谱（MS）技术。

这种技术可用于分离和鉴定化合物，尤其是生物样品中的化合物。

液质联用法被广泛应用于药物代谢、蛋白质组学、代谢组学等领域。

一、HPLC1. HPLC基本原理高效液相色谱是一种基于分子间相互作用的分离技术。

它使用固定相和流动相来将混合物中的化合物分离开。

在HPLC中，混合物通过固定在柱子内部的填料。

填料通常是小颗粒状的，具有大量的表面积，这些表面积上吸附了流动相中的溶剂和溶质。

2. HPLC设备HPLC设备主要由以下几个部分组成：（1）泵：将流动相压入柱子中。

（2）进样器：将样品注入柱子。

（3）柱子：填料所在的管道。

（4）检测器：检测出来自柱子的化合物。

3. HPLC操作步骤（1）制备样品：将待测物质溶解在适当的溶剂中。

（2）选择填料：根据需要选择合适的填料。

（3）调整流动相：根据填料和待测物质的特性，确定最佳的流动相组成。

（4）注入样品：将样品注入进样器中。

（5）运行柱子：将流动相压入柱子中，让样品通过柱子并分离出化合物。

（6）检测化合物：使用检测器检测出从柱子中流出来的化合物。

二、MS1. MS基本原理质谱是一种利用分子离子在磁场和电场作用下进行分离、检测和鉴定的技术。

质谱仪通常由以下三部分组成：（1）离子源：将待测化合物转化为气态离子。

（2）质量分析器：将不同质量的离子分开，并记录它们的信号强度。

（3）检测器：将信号转换为电信号，并输出到计算机上进行处理和分析。

2. MS设备MS设备主要由以下几个部分组成：（1）离子源：通常使用电喷雾、MALDI等技术将待检化合物转化为气态离子。

（2）质量分析器：通常使用四极杆、飞行时间等质量分析器。

（3）检测器：通常使用离子倍增管或电荷耦合器件等检测器。

3. MS操作步骤（1）制备样品：将待测物质溶解在适当的溶剂中。

（2）选择离子源：根据待测物质的特性，选择合适的离子源。

液质联用多级质谱法分析甲基硫菌灵中的杂质摘要：采用液质联用和多级质谱法对甲基硫菌灵中的主要杂质进行了定性分析。

通过对比分析已知主成分和未知杂质的多级质谱图，推断了杂质的可能结构式，为化工生产中分析杂质产生的原因并改进工艺条件从而保证产品质量提供了重要信息。

关键字：液质联用；多级质谱；杂质分析；定性分析 前言：在化工生产过程中，为了保证产品质量，需要对中间体和最终产品的纯度进行控制。

对其中杂质的定性定量分析可以帮助改进工艺路线和生产操作条件，而对其中主要杂质的定性分析是其关键之处。

对于小分子和热稳定的化合物可以方便地利用GCMS 获得杂质的EI 质谱图来快速定性；但是对于沸点较高或者热不稳定的化合物，LCMS 以及多级串联质谱法将是一个强有力的定性方法。

1 实验部分 1.1 样品和试剂甲基硫菌灵样品以及伐菌灵和甲基硫菌灵对照品均由某化工厂提供。

甲醇为色谱纯（HPLC grade ），水为纯净水。

1.2 实验方法实验仪器为美国热电公司（Thermo Fisher Scientific ）LCQ Deca XP Max 液质联用仪，配有Finnigan Surveyor PDA 紫外可见二极管阵列检测器、ESI/APCI 离子源和离子阱质量分析器。

液相色谱柱为安捷伦公司（Agilent ）TC C18 150*4.6mm 5um ，液相色谱流动相为1:1甲醇/水，流速1.0 mL/min ，柱后分流0.2 mL/min 进质谱仪离子源。

样品用流动相配成1 mg/mL 溶液，进样量20 L 。

2 结果和讨论 2.1 样品的色谱图图1是样品的紫外（265 nm ）吸收色谱图和ESI+ 全扫描（m/z 100-500）总离子流图。

其中，1# 和4# 峰是已知物，分别是伐菌灵（分子量225）和甲基硫菌灵（分子量342）；伐菌灵的质谱图上出现了 [M+H]+ 和[M+K]+ 准分子离子峰（图2上）；甲基硫菌灵的质谱图上出现了 [M+H]+、[M+Na]+ 和[M+K]+ 准分子离子峰（图2下）。

食品安全评价：液质联用检测和确认牛奶中的氯霉素Rebecca S. Nicolich a,∗, Eduardo Werneck-Barroso b, Marlice A. S´ıpoliMarques aa Dep◦Qu′ımica Anal′ıtica-IQ/UFRJ, C. Tecnologia, BL A, Ilha do Fund˜ao, 里约热内卢, RJ CEP 219749-970, 巴西b FIOCRUZ-SEF AR/IPEC, Av. 巴西, 4365, Manguinhos, 巴西里约热内卢RJ CEP 21040-900收稿2005年10月18日；修订2006年1月9日；定稿 2006 年 1 月 31 日：在线使用2006年3月9日摘要简单和快速的方法，在牛奶中提取氯霉素(CAP)和液相色谱分析中提取过程耦合四极串联质谱进行分析。

该方法包括使用醋酸乙酯液-液提取，一步酸化的水(10 mmol L−1 甲酸) 和高效液相色谱-质谱/质谱检测。

氯霉素被用作内部标准。

验证方法根据欧盟委员会2002年/657/EC。

校准曲线是线性的典型的r2 值高于0.98。

牛奶中氯霉素绝对回收率证明是95%以上，然而氯霉素-D5d的回收率75%。

该方法是准确和可重现正在成功应用于检测从巴西市场获得的牛奶样品中的氯霉素。

定量限(CCα) 是0.05ng mL−1 和检测限(CCβ) 是0.09ng mL−1。

© 2006埃尔塞维尔科学出版社B.V.保留所有的权利。

关键词: 氯霉素；抗生素；食物控制；高性能液相色谱串联质谱法（高效液相色谱法-质谱/质谱)1.介绍氯霉素(CAP图1）是一种广谱抗生素，它能够对人类造成致命的血液疾病。

因此，当没有其他替代品可用的时候，才会被应用作为治疗严重感染。

然而，在动物中的应用是很有吸引力的，因为动物有良好的耐受性，而且氯霉素在组织和体液中有良好的分布，氯霉素的其他属性对于生产者也很有兴趣。

开题报告农业资源与环境液质联用法测定水产品中的孔雀石绿残留量一、综述本课题国内外研究动态，说明选题的依据和意义：（一）国内外研究动态当今世界，人类面临着人口、资源、环境三大问题，面对21世纪谁来养活中国人的问题，我国在大力开发利用海洋生物资源的同时，也大力发展水产养殖，减轻对海洋水产品资源的过分依赖，同时也缓解人口增加而带来的食品、资源等一系列问题。

水产养殖是我国国民经济的重要组成部分，为国民经济建设和人民生活水平提高做出了重要贡献，但随着养殖业的迅猛发展，食用水产品质量等问题迅速暴露出来，水产养殖中存在水体污染与滥用各种渔药与添加剂等情况，使得环境保护与水产品品安全成为困扰人类并亟待解决的问题。

近年来,“孔雀石绿”事件的频繁发生，日益引起社会各界的广泛关注。

水产养殖是我国国民经济的重要组成部分，但随着养殖业的迅猛发展，水区、海区污染、虾塘老化、黑臭底泥淤积、大规模灾难性病毒病的爆发和流行以及食用水产品质量等问题迅速暴露出来，水产养殖中存在水体污染与滥用各种渔药与添加剂等情况，使得环境保护与水产品品安全成为捆饶人类并亟待解决的问题。

孔雀石绿是食品安全领域里继苏丹红以后在国际上引起轰动的又一高危物品，其具有高毒素、高残留和致癌、致畸、致突变等副作用。

孔雀石绿(MG)是一类三苯甲烷类染料,最先应用在纺织工艺,后因其具有消毒性和杀菌性而广泛用于水产品的养殖过程，因其低价高效,当前还找不到特效药完全取代而在水产养殖业中广泛应用。

由于MG具有高毒、高残留和致癌、致畸、致突变等特点,当其进入生物体内,会产生具有更强危害的隐色孔雀石绿(LMG),因此,包括中国在内的许多国家都将MG列为水产养殖中的禁用药物。

然而,由于MG具有价格低廉、效果显著等优点,其在水产养殖中的使用屡禁不止,这不但对人体健康造成威胁,而且严重影响了中国水产品的出口；我国也于2002年5月将孔雀石绿列入《食品动物禁用的兽药及其化合物清单》中，禁止用于所有食品动物。

实验十一液质联用测定葛根药材中的葛根素
一、实验目的
1、熟悉液质联用技术的操作及注意事项
2、掌握用质谱对中药成分定性分析的方法
二、实验原理
样品经HPLC系统进样后，被有效分离，然后进入连接口，此时液相中的离子或分子被转变为气相中的离子，被富集于质量分析器中，根据质荷比的不同而被分离，最后离子被转化为电信号，电子倍增管检测，信号被放大后传至计算机进行数据处理。

三、实验内容
1、色谱条件：甲醇-水（70：30）为流动相，流速为0.2ml/min，色谱柱：2.1*250mm
2、测定方法：用流动相溶液葛根素制成40μg/ml的浓度，由液相色谱自动进样器进样，检测器为二极管阵列检测器，利用保留时间确定色谱图中葛根素的色谱峰，通到质谱的质量分析器中可得到葛根素的一级质谱图，二级质谱图
四、实验结果
由葛根素的一级质谱图可判断其分子离子峰，得到其分子量，再由二级图谱，得到碎片离子质荷比，从而测定其结构信息。

五、实验讨论
1、液质联用仪器使用注意事项是什么
2、液质联用的用途是什么？。