化学与材料工程学院
环境监测分析实验报告
实验名称：高效液相色谱分析苯-甲苯混合物
专业班级：应化13
学号： ********* *名：***
指导教师：**
实验地点：敬行楼A210
实验日期： 2016年 11月 28日
高效液相色谱实验
一、实验目的
1．了解HPLC仪器的基本构造和工作原理，掌握HPLC的基本操作；
2．学习苯-甲苯混合物的定性分析方法；
3．评价色谱柱柱效；
4．了解色谱定量操作的主要方法以及各自特点；
5．学习未知样品的定量分析方法。
二、实验原理
不同组分因在互不相溶的流动相与固定相中的分配比不同，当两相做相对运动时，组分在两相之间反复进行多次分配，最终实现不同组分的分离。
色谱仪器的构成：包括高压输液系统、进样系统、分离系统，检测系统等
1．色谱定性分析方法
a保留时间定性 b 峰高增量定性
2．色谱定量分析方法
a 归一化法,要求所有组分必须全部出峰。
b 标准曲线法（外标法）。简单、方便, 结果受到操作技术因素以及具体色谱条件影响较大。
三、仪器与试剂
LC-1602A型高效液相色谱仪、甲醇(色谱纯) 、苯、甲苯、苯－甲苯
四、高效液相色谱仪操作步骤
1. 流动相的预处理
甲醇溶液，用0.45μm 有机滤膜过滤，超声波清洗器脱气10～20 min，装入流动相贮液瓶。
2. 准备苯-甲苯混合试样和苯、甲苯标样
3. 高效液相色谱仪操作
a 依次高压输液泵和检测器电源开关；
b 打开色谱工作站，在仪器控制面板中，设置波长，并开灯；
c打开三通阀，在仪器控制面板中，设置流速为5ml/min, 启动高压泵，排除流路中的气泡。排气结束后，点击停止按钮，停止高压泵。
d 关闭三通阀，设置最小压力(0.1)和最大压力(20)，并设置实验需要的流速
(0.5ml/min)，启动高压泵。
e用平头微量注射器洗涤进样口后，取试液30 μL，将进样阀柄置于“Load”位置时
注入样品，转动阀柄至“Inject ”位置，此时软件自动进入“采集数据”模式。
注意！平头微量注射器用甲醇清洗3次后，再用试液清洗3次，避免气泡。 f 待所有色谱峰流出完毕后，按“停止采集”键，保存数据。
g 点击谱图处理中的定量结果，记录组分的保留时间以及峰面积、峰高等色谱信息。 注意！注射器进不同样品前，使用专用清洗注射器在进样阀的“Load ”和“Inject ”
位置，用流动相清洗几次。
注意！注射器进不同样品前，使用专用清洗注射器在进样阀的“Load ”和“Inject ”
位置，用流动相清洗几次。
4．结束工作
所有样品分析完毕后，流动相继续流动10～20 min ，至基线稳定。关闭检测器，按“Stop ”停泵。关闭泵电源。
五、 实验内容
1. 分别进样苯、甲苯标样和苯-甲苯混合试样，保留时间定性，记录苯-甲苯混合试样色谱谱，计算分离度。
2. a. 分别采集系列甲苯溶液以及未知试样的色谱图，根据保留时间定性，确定甲苯组分峰的位置，并测定各自的峰面积。
b. 根据实验数据，利用外标法绘制标准工作曲线，并计算待测溶液中甲苯的含量。
六、实验图谱与数据处理
1、0.001%
图1：含量0.001%的液相色谱图
信号值（
mAu
）
时
间（
min
）
2、0.01%
图2：含量0.01%的液相色谱图
3、0.1%
图3：含量0. 1%的液相色谱图
1
2
3
4
5
6
-2
024681012
14
信号值（
mAu
）
时
间（
min
）
3.948
3.798
3.415
2.391
1
2
3
456
-20
020406080100120140
信号值（
mAu
）
时
间（
min
）
3.968
3.820
3.437
4、苯增0.1%
图4：苯增0.1%的液相色谱图
5、1%
图5：含量0.001%的液相色谱图
1
2
345
6
050
100
150
200
250
300
信号值（
mAU
）
时
间（
min
）
3.428
3.813
3.962
2.402
1
2
3
4
5
6
-200
0200
40060080010001200140016001800
信号值（
mAU
）
时
间（
min
）
3.438
3.800
3.967
