食品中苏丹红残留量检测方法研究

分析与检测高效液相色谱仪测定食品中苏丹红□王晓琴广东省惠州市食品药品检验所摘要：苏丹红属于工业的氮质燃料，对人的身体具有一定的侵害，相关研究表明苏丹红在很大程度上具有致癌性，尤其是在辣味食品中添加苏丹红的问题比较严重，已经有许多媒体对其进行了披露。

这种问题的严重性就在于商家牟取暴 利的行为给消费者的身体健康带来极大的损害，因而该种类型的食品安全问题受到了国内外舆论界关注。

关键词：高效液相色谱仪；苏丹红；测定高效液相色谱法优点显著，有着非 常广泛的用途，在环境监测领域、临 床化学领域、药物研究领域、食品检 验领域、石油化学领域以及生命科学 领域等都有_定的应用。

而当前国内 外对于苏丹红的测定基本上采用的是 高效液相色谱仪，笔者在本文中选用 LC5500高效液相色谱仪对于食品中的 苏丹红进行测定研究，该种液相色谱 仪具有灵敏度高、稳定性能好的特点，其最低检测浓度可以达到O.OlUg/kg，测定苏丹红的保留时间的标准偏差为 0.85%~2.95%，峰面积相对标准差为 0.95%~1.65%;梯度洗脱基线平直，无漂移，噪声低，样品回收率能够达 到 80%~95%。

1材料与方法1.1试剂正己烷A.R.、丙酮色谱纯、甲酸 A.R.、乙腈色谱纯、三氧化二铝、纯水 重蒸馏水、苏丹红丨、丨丨、丨丨丨、IV。

苏丹红丨为指示剂，苏丹红丨丨、丨丨丨、IV为A.R.，苏丹红丨、丨丨、丨丨丨、IV标 准储备液。

1.2仪器LC5500高效液相色谱仪、254nm 紫外检测器、多孔硅胶型键合相YW G _(：叱颗粒度1〇11、微量注射器、？-101高压泵（双泵)、恒温柱箱、超声 波清洗器。

1.3色谱条件检测器：紫外-可见光检测器、色谱柱M18柱、5.6mm X480mm，l〇Hm，流动相A液（B泵），0.1%甲酸- 乙腈+丙酮，B液(A泵）0.1%甲酸- 水+乙腈。

梯度洗脱程序如下。

开始Om in时，B液85%,A液 35%;15min时，B液 85%,A 液35%;33min时，B 液 150%, A 液0%; 40min时，B液 150%，A液 0%;45min时，B 液 85%,A 液 35%;50min 时，B液 85%，A液 35%。

食品中苏丹红检测方法探讨中国质量新闻网 2008-11-26 15:17:25摘要本文介绍了食品中苏丹红检测方法的研究进展，主要包括高效液相色谱(HPLC)、液相色谱-质谱(LC-MS)、气相色谱-质谱联用法(GC-MS)、薄层层析法等。

关键词苏丹红高效液相色谱液相色谱-质谱气相色谱-质谱联用薄层层析近年来，一些国家和地区不断发生食品污染等恶性事件。

特别是随着科技的发展，一些原来认为无害的食品添加剂，发现存在慢性或致癌作用,原来检测不出的有害物质被查出等。

苏丹红是偶氮苯类人工色素，属于工业染料，主要用于油、蜡、鞋等的增光着色。

由于苏丹红I、II、III、IV及其代谢产物具有致癌性，国家禁止作为色素添加剂在食品中使用。

苏丹红I、II、III、IV的检测方法有高效液相色谱法[1]、液相色谱-质谱法[2]、气相色谱-质谱联用法[3]、薄层层析法[4]等。

1. 高效液相色谱法对食品中苏丹红的检测高效液相色谱法是一种以液体为流动相的现代色谱柱分离分析方法，它是在经典液相色谱的基础上，引入气相色谱的理论和技术发展起来的[5]。

原则上讲，只要能溶解在流动相中的物质都可以用高效液相色谱法分析。

在目前已知的有机化合物中，有80%的有机化合物能用高效液相色谱法分析[6]。

高效液相色谱法主要有以下几种：1.1 欧洲委员会推荐的液相色谱法[7]该方法是将样品经匀浆化或粉碎后，加入乙睛(苏丹红III、IV加入氯仿)提取，过滤，滤液用反相高效液相色谱仪进行色谱分析。

苏丹红I、苏丹红II的检测波长为478nm，苏丹红III、苏丹红IV则为520nm。

苏丹I的检测限是0.013μg/ml、最低浓度为0.106μg/ml、在辣椒粉样品中的添加回收率高于90%。

1.2 国家质量监督检验检疫总局、国家标准化管理委员会发布的高效液相色谱法该方法在欧洲委员会公布的检验方法的基础上作了改进。

苏丹红检测方法国家标准采用了简单的正相吸附固相萃取原理，一次性去除了样品中红辣椒和番茄中的干扰成分，使用目前国内已广泛应用的高效液相色谱仪就可准确完成4种苏丹红染料的检测。

辣椒制品中苏丹红检测方法分析作者：李萍来源：《环球市场》2019年第12期摘要：本文对辣椒制品中苏丹红检测方法进行了详细分析，以期实现良好的检测效果，提高辣椒制品的质量，保障人们的生命健康。

关键词：辣椒制品;苏丹红;检测方法为了增强食品的安全性，需要采取相应措施进行检测，避免出现苏丹红，结合以往的国内外技术，使用较多的有以下几种方法，分别是：HPLC法、极谱法、GC-MS/SIM分析方法、固相萃取一气质联用法、薄层色谱法、分子印记固相萃取法等。

这些检测方法各有优劣，在实际使用的过程中，时间长、回收率差、费用高、适应性差，在日常食品安全监管检测中，并不适用，需要研究出一项新的检测方法。

在实际研究的过程中，将薄层色谱分析法和扫描法相互结合，对展开剂的存在条件进行改进，使辣椒色素和苏丹红色素的分离度能够得到相应提高，对苏丹红中的四种色素半点的分离度进行分析，借助普通扫描仪，定量定期测定并扫描薄层，这一方法比较方便快捷，具有明显的经济性和实用性，成为新的检测苏丹红色素的方法。

一、材料与方法（一）试验材料、仪器和试剂（1）材料：辣椒粉、辣椒酱、辣制泡菜，自制辣椒油。

（2）仪器：微量进样器、高效硅胶板、旋转蒸发仪、扫描仪。

（3）试剂：苏丹红1，苏丹红2，苏丹红3，苏丹红4，丙酮、乙酸乙酯、乙醇、石油醚等，这些需要使用国产分析纯。

（二）试验方法1.辣椒制品中苏丹红色素的提取方法（1）高油制品：吸取辣椒油样品，使用的仪器为内径为0.5mm的定量毛细管和微量进样器。

（2）干状粉制品：研钵中放置1g的辣椒粉样品，采取研磨的方式，在石油醚与丙酮混合提取液中进行提取，一般进行2-3次即可。

提取液的总含量为30mL，石油醚与丙酮的比例為1：2，经过10min的提取，得出相应的成分液体。

之后进行离心步骤，将旋转蒸发仪的温度控制在40C，上清液移入到其中，溶解过程中使用石油醚和丙酮混合剂，此时两者的比例为3：1，对容量进行定量，到达10mL后停止，留作后期备用。

薄层色谱- 紫外可见分光光度法测定食品中的苏丹红Ⅲ庞艳玲王怀友(菏泽学院化学与化工系,菏泽274015 ) (山东师范大学化学化工与材料科学学院,济南250014 )摘要建立了测定食品中苏丹红Ⅲ号的新方法薄层色谱- 紫外可见分光光度法。

用薄层色谱分离杂质,优化了分析条件,讨论了影响测定的因素。

方法的线性回归方程为A = 0. 090 96 c- 0. 003 54, 在0. 50 ～15. 0 μg /mL 之间苏丹红Ⅲ号的浓度与吸光度成线性关系,相关系数r = 0. 999 2 ,检出限为0. 05 μg /mL。

关键词苏丹红Ⅲ 薄层色谱紫外可见分光光度法分离苏丹红Ⅲ号是一种人工合成的化工染料,化学名称是1 2[ 4 2(苯基偶氮) 苯基]偶氮22 2萘酚。

苏丹红Ⅲ号为致癌物质[ 1 , 2 ] , 被禁止作为食品添加剂使用。

我国和欧盟标准检测方法为液相色谱法[ 3 , 4 ] , 许多分析化学工作者对苏丹红染料的测定开展了研究, 建立了一些有价值的测定方法, 如H P LC 法[ 5～7 ] 、分子印迹固相萃取法[ 8 ] 、毛细管液相色谱- 质谱法[ 9 ] 、电离质谱同位素稀释法[ 10 ]已应用于苏丹红染料的测定。

但是上述方法由于仪器和试剂昂贵而难以普及。

笔者研究了样品的处理方法,样品提取液用薄层展开后以分光光光度法测定,所用设备简单,分析结果与国家标准H P LC法准确度相当。

1 实验部分1. 1 主要仪器与试剂双光束紫外可见分光光度计: T U - 1901 型,北京普析通用仪器有限责任公司;旋转浓缩器: R - 250型,上海亚荣分析仪器厂;高效液相色谱议: W a t e r s 2695 型, 美国W a t e r s 公司;超声波萃取仪: FS - 300 型, 上海超声有限公司;硅胶板: H S G型,烟台化工研究所;苏丹红Ⅲ号标准品: 中国医药集团上海化学试剂公司;苏丹红Ⅲ号标准溶液: 100 μg /mL。

苏丹红检测方法一、高效液相色谱法1.高效液相色谱法目前国内已普及应用的高效液相色谱仪就可准确完成4种苏丹红染料的检测。

它采用了简单的正相吸附固相萃取原理，一次性去除了样品中红辣椒和番茄中的干扰成分，制定这项标准时确定了科学的方法流程，这一流程也是实际检测时应遵循的检测流程，即样品制备－称样－分散－提取－离心－分出上清－蒸干－正己烷溶解－固相萃取－洗脱－定容－上机。

据介绍，这种检测易于操作，只要配备了相应的仪器，关键是高效液相色谱仪，我国县级以上技术结构的检测人员均可以依据标准对食品中的苏丹红含量进行有效的检测。

它具有如下特点适用范围宽。

由于本方法具有高提取率、高纯化性能、高浓缩倍数，既可以用于检测含苏丹红量相对较多的食品，也可以检测含苏丹红量极少的食品。

无论何种基质的样品，都可以应用本标准对食品中的苏丹红进行检测。

高提取率。

对于纯油基的样品（像辣椒油）采用正己烷直接溶解，可保证提取率达95%。

对于水基的食品（像番茄沙司），经水和丙酮分散后采用正己烷提取，也可保证提取率在85%以上。

高纯化性能。

标准确定了中性氧化铝粉作固相萃取，利用了氧化铝对苏丹红的强吸附能力，并对油脂进行饱和性吸附。

在前处理时借助极性固相萃取填料一次性将干扰和污染物最大可能除掉，有助于将油性样品中的大量油脂在随后的清洗步骤中脱除。

实验表明，氧化铝可以有效脱除样品中的干扰成分，使液相谱图干净清晰。

高浓缩倍数。

实际检测中可以根据需要，任意地对目标化合物进行浓缩，目标化合物不因为被浓缩而影响其纯净度，可大大降低检出限，即不会对检测结果的准确性产生影响。

2.反相高效液相色谱法3.凝胶柱净化-高效液相色谱法4.固相萃取高效液相色谱法二、液相色谱发1.凝胶渗透——液相色谱法2.液相色谱-质谱/质谱检测方法3.LC-ESI/MS分析食品中4种苏丹红色素的方法。

三、气相色谱法气相色谱-质谱(GC-MS)选择离子检测法(SIM)四、电化学分析方法极谱法下面是“十个小故事大道理”不需要的朋友可以下载后编辑删除！！！谢谢！！！小故事1、《扁鹊的医术》魏文王问名医扁鹊说：“你们家兄弟三人，都精于医术，到底哪一位最好呢?扁鹊答：“长兄最好，中兄次之，我最差。

徐 志 祥 ， 硕 方 国臻 王 ，
（． １ 天津 市食 品营养 与安 全重点 实验室 ， 天津科 技 大学 天津 （． 山学 院科研 处 ， ２泰 山东 泰 安 ２ １２ ） ７ ０ １ ３０ ５） ０ ４ ７
摘 要 ： 苏丹红 Ｉ 对 号的属性 、 类 、 害及其 国 内外检 测 方法的研 究进 展进行 了详 细介 绍 ， 而促进 种 危 从 对其有 效检 测和监 管 。
ＸＵ ｈ — ｘ ａ ｇ ，Ｗ ＡＮＧ ｈ ｏ Ｚ ｉ ｉｎ Ｓ ｕ ，ＦＡＮＧ ｏ ｚ ｅ Ｏｕ — ｈ ｎ
（． ａｊ ｙＬ ｂ ｒｔｒ ｆ ｏ ｄＮ ｔ ｔ ｎａｄＳ ｆ ｙ Ｆ ｃｌ ｏ ｏ ｄＥ ｇｎｅ ｎ ｄ １Ｔｉ Ｋｅ ａ ｏａｏｙｏ ｏ ｕｒｉ ａ ｔ ， ａｕ ｙ ｆ ｏ ｎ ｉｅｒ ｇａ ｎｉ ｎ Ｆ ｉｏ ｎ ｅ ｔ Ｆ ｉ ｎ Ｂｏｅｈ ｏ ｇ ， ｉ ｊ ｉｅｓ ｙｏ ｃ ｎ ｅ ｄＴ ｃｎ ｌ ｙ， ｉ ｊ ０ ４ ７Ｃ ｎ ） ｉ ｃｎ ｌ ｙ Ｔａ Ｕｎ ｒｉ ｆ ｉ ｃ ｅｈ ｏｏ ｔ ｏ ｎｉ ｎ ｖ ｔ Ｓｅ ａ ｎ ｇ Ｔ ａ ３０ ５ ， ｈ ａ ｎｉ ｎ （． ｃ ｎ ｅ ｄＲ ｓａｃ ｕｅｕ ｓａ ｉ ｒｉ ， ａ ７０ １ Ｃ ｎ ） ２Ｓ ｉ ｃ ｅｅｒｈＢ ｒ ， ｅ ａ ｎ ａ ｈｎ Ｕｎ ｅｓ ｙ Ｔ ｉ ２ １ ２ ， Ｋ ａ ｖ ｔ ｎ ａ
维普资讯
５ ０
中 国 调 味 品
总 第 ３ １期 ３
色 蜡 、 油 和鞋 油 等 工 业 和 化 学 领 域 的 增 色 汽
收 稿 日期 ： ０ ６ ４ ｌ ２ ０ 一Ｏ 一 ７
脂 及 有 机溶 剂 ， 由于 苏丹 红成 本 低 廉 ， 色 鲜 颜
艳 夺 目， 易 褪 色 ， 大量 用 于溶 剂 、 油 、 不 被 机 彩

超高效液相-串联质谱法筛查食品中的苏丹红陈 英（周至县食品药品检验检测中心，陕西西安 710400）摘 要：运用超高效液相-串联质谱法（UPLC-MS/MS）同时测定辣椒面、火锅料、辣条、鸭蛋、鸭血中的苏丹红Ⅰ～Ⅳ。

通过优化萃取试剂、样品基质效应的消除、色谱及质谱条件等参数，检测方法的灵敏度和适用性。

在电喷雾离子源正离子模式下，多反应监测（MRM）方式检测，外标法定量。

苏丹红Ⅰ～Ⅳ线性关系良好，相关系数（r2）均大于0.999，苏丹红Ⅰ～Ⅳ在3个添加水平下，回收率范围为85.1%～104.9%，标准偏差（RSD）均小于6.2%，检出限和定量限为1.0～6.0μg/kg。

本方法处理过程简单、分析时间短、准确度高，适用于辣椒面、火锅料、辣条、鸭蛋和鸭血中的苏丹红Ⅰ～Ⅳ检测，可用于食品中非法添加苏丹红Ⅰ～Ⅳ的筛查。

关键词：超高效液相-串联质谱法；苏丹红；非法添加苏丹红共有4个组分，为苏丹红Ⅰ～Ⅳ，是一种红色颗粒或粉末状的红色染料常用于工业上色如鞋、地板等的增光，因为有致癌作用危害人体健康，我国和欧盟都禁止其用于食品生产[1]。

市面上有一些不法分子为了产品成色漂亮好出售，依然违法添加工业染料。

目前，苏丹红Ⅰ～Ⅳ检测方法主要有薄层色谱法[2]、紫外可见分光光度法[3]、近红外显微成像光谱法[4]、液相色谱法[5-6]、液相色谱-质谱联用法[7-8]和化学发光分析法[9]，这些方法前处理复杂、试剂用量大、检测周期长、准确度不高，不适应实际工作中遇到的多种复杂基质中苏丹红的筛查测定。

本试验通过对色谱条件和质谱参数的研究、优化，建立了高效液相色谱-串联质谱同时分析苏丹红Ⅰ～Ⅳ的方法。

本方法前处理简单，7 min即可同时测出苏丹红Ⅰ～Ⅳ的含量，方法快速简单，结果准确，可以用于食品中非法添加苏丹红Ⅰ～Ⅳ的筛查。

1 材料与方法1.1 仪器与试药液相色谱-串联质谱联用仪：Qtrap 5500三重四极杆串联质谱仪（美国AB SCIEX公司）；配有电喷雾离子源（ESI）；LC20A超高效液相色谱仪（日本Shimadzu公司）；MS1003S电子天平（瑞士Mettler Toledo公司）；Milli-Q超纯水仪（美国Millipore公司）；MFV-24智能氮吹仪（广州德泰仪器科技有限公司）。

号
加标量 / g 5. 4 5. 05 5. 0 5. 2
测得量 / g 4. 9680 4. 5450 4. 6511 4. 7345
回收率 /% 92 90 93 91
3 结论 对国标检测方法 (高 效液相色谱法 ) 测定苏丹
红的检测方法进行了改进, 改进后的方法具有简便、
丁轶聪, 等: 对苏丹红 G B /T 19681 - 2005检测方法的探讨与改进
高效液相色谱仪: L- 7100型, 配有二极管阵列 检测器 ( 195~ 900 nm ) , 日本日立公司;
旋转蒸发器 : R- 205型, 上海申胜生物科技有 限公司;
丙酮、乙腈、正己烷: 色谱纯; 甲酸: 分析纯; 30% 丙酮的正己烷溶液; 中性氧化铝固相萃取柱: 2 g / ( 6 mL ) , A lum ina - N( 批号 20090815) , 上海安谱科学仪器有限公司; 苏丹红 ( ∋ 90. 0% )、苏丹 红 ! ( ∋ 95. 0% ) 、 苏丹红 ∀ ( ∋ 96. 0% )、苏丹红 ( ∋94. 0% ) 标准物 质: 德国 Dr. Ehrenstorfer公司。 1. 2 色谱分析条件 色谱柱: C18 色谱 柱 ( 迪 马 钻石 250 mm ( 4. 6 mm, 5 m ); 流动相: 0. 5% 甲酸的乙腈溶液 - 0. 1% 甲酸的丙 酮溶液 ( 体积比 80)20) ; 流速: 1. 0 mL /
相法 [ S ]. [ 4] 沈兵, 奚奇 辉, 于 天祥, 等. 对 食品中 苏丹 红检 测标 准的 改进
[ J] . 理化检验: 化学分册, 2008, 44: 535- 537
D ISCUSSION AND IM PROVEM ENT OF GB /T 19681- 2005 EXAM INATION METHOD FOR SUDAN RED

苏丹红最新检测方法下载苏丹红检测套装：固相萃取柱：HiCapt Sudan苏丹红专用柱(500mg/3mL，订货号：22-05003)液相色谱柱：HiSep C18-T 150 mm×4.6 mm i.d., 5 μm（订货号：0246150）苏丹红是偶氮苯类人工色素,由于苏丹红具有潜在的致癌性, 中国和欧盟等多数国家都禁止其作为色素添加剂在食品中使用。

然而, 仍有不少食品生产企业为了改善食品色泽、降低成本将其作为食用色素。

我国质量监督部门检出了包括几家知名企业生产的众多含有苏丹红的食品, 引起了整个社会的关注。

因此，建立快速可靠的检测方法至关重要。

目前报道的苏丹红的检测方法主要是采用液相色谱法。

由于辣椒油、辣椒粉等食品成分复杂,液相色谱分离困难,易导致假阳性结果。

国家标准的方法是采用正已烷作为萃取溶剂，用氧化铝固相萃取柱净化样品。

但该方法样品处理过程复杂，而且氧化铝的活性不易控制，方法回收率难以得到保证。

因此我们开发了HiCapt Sudan苏丹红专用固相萃取柱，建立了同时检测食品中四种苏丹红的高效液相色谱分析方法，较好地解决了这一问题。

方法的优势：∙专利创新的苏丹红专用萃取填料，有效去除食品中的天然色素和植物油等杂质干扰∙回收率稳定、重现，克服了传统方法中氧化铝活性不稳定的缺陷∙方法简单、快速、节省溶剂∙优化的色谱分离条件，有效去除杂质干扰1. 样品处理：1.1 样品提取：（参考国标GB/T 19681—2005）1.1.1辣椒粉等粉状样品称取0.5 g（准确至0.001g）样品于三角瓶中，加入5mL正己烷，超声10min，5000 r/min离心5 min 后取上清液3 mL，待净化。

1.1.2辣椒油等油状样品称取0.5 g（准确至0.001g）样品于小烧杯中，加入3mL正己烷溶解，涡旋1分钟混匀，待净化。

1.1.3腊肠样品将腊肠切成小丁，称取3.0 g, 放入10 mL离心管中，加入5 mL正己烷，超声10分钟，然后步骤同辣椒粉样品。

高效液相色谱法（HPLC）
我国国家质量监督检验检疫总局、国家标准化管 理委员会发布的高效液相色谱法在欧洲委员会公 布的检测方法基础上做了改进。 国标法的提取液由乙腈改为正己烷，将液体、浆 状样品混合均匀，固体样品磨细后用正己烷提取、 过滤，必要时加入无水硫酸钠脱水后稍加温溶解， 用旋转蒸发仪蒸发浓缩，然后慢慢加入氧化铝层 析柱中萃取净化后用丙酮转移定容待测。
苏丹红的分析技术

高效液相色谱法（HPLC）
迄今为止，国际上食品中苏丹染料的常用检测方 法是高效液相色谱法，而高效液相-质谱联用法和 前面所述的电喷雾解析电离质谱法等用于检测结 果的确证。 欧洲委员会推荐的液相色谱法是由样品经匀桨化 或粉碎后，加入乙腈（Sudan Ⅲ、Sudan Ⅳ加入 氯仿）提取，过滤，滤液用反相高效液相色谱仪 进行色谱分析。以波长可变的紫外-可见检测器定 性和定量。
苏丹红的结构，合成与危害

合成方法 苏丹红属偶氮染料，可用芳胺做为前体通过重氮 化反应生成重氮离子再通过亲电取代反应和萘酚 偶联体还原酶的作用下在体内生成相应的 胺类物质。在多项化学与生物实验中发现，苏丹 红的致毒性与代谢生成的胺类及萘酚类物质有关。 Sudan I在体内的代谢如下图所示。
苏丹红的结构，合成与危害

分类及结构 苏丹红为亲脂性偶氮化合物，外观呈暗红 色或深黄色片状晶体，难溶于水，主要包 括Ⅰ、Ⅱ、III 和Ⅳ4 种类型。其中II、III 和IV 均为I 的化学衍生物。结构和IUPAC命 名如下所示
苏丹红的结构，合成与危害
Sudan Sudan Sudan Sudan
苏丹红的分析技术

高效液相色谱法（HPLC）
检测波长：Sudan Ⅰ、Sudan Ⅱ在478nm 波长有 最大吸收，Sudan Ⅲ、Sudan Ⅳ在520nm波长有 最大吸收。 Sudan Ⅰ的检测限是13微克/升，定量的最低浓 度为106微克/升，在辣椒粉样品中的添加回收率 高于90％。

实验十、食品中苏丹红染料的测定标准依据：GB/T19681-2005食品中苏丹红染料的测定（高效液相色谱法）一、目的要求学习食品中苏丹红染料测定的原理和方法。

二、实验原理苏丹红色素是应用于油彩蜡、地板蜡和香皂等化工产品中的一种非生物合成的着色剂，非食用色素，长期食用具有致癌致畸作用。

苏丹红色素一般不溶于水易溶于有机溶剂，待测样品经有机溶剂提取，经浓缩及氧化铝柱层析萃取净化，用反相高效液相色谱—紫外可见光检测器进行色谱分析，采用外标法定量。

三、仪器与试剂（一）试剂1、乙腈色谱纯2、丙酮色谱纯、分析纯3、甲酸分析纯4、乙醚分析纯5、正己烷分析纯6、无水硫酸钠分析纯7、层析柱管：1cm (内径) 5cm (高)的注射器管。

8、层析用氧化铝（中性100目~200目）：105℃干燥2h，于干燥器中冷至室温，每100g中加入2mL 水降活，均匀后密封，放置12h 后使用。

9、氧化铝层析柱：在层析柱管底部塞入一薄层脱脂棉，干法装入处理过的氧化铝至3cm高，经敲实后加一薄层脱脂棉，用10mL 正己烷预淋洗，洗净柱杂质后，备用。

10、5%丙酮的正己烷溶液：吸取50mL 丙酮用正己烷定容至1L。

11、标准物质：苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ；纯度≥95%。

12、标准贮备液：分别称取苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ及苏丹红Ⅳ各10.0mg （按实际含量折算），用乙醚溶解后用正己烷定容至250m L。

（二）仪器1、高效液相色谱仪（配有紫外可见光检测器）2、分析天平：感量0.1mg3、旋转蒸发仪4、均质机或匀浆机5、粉碎机6、离心机7、0.45μm有机滤膜四、实验步骤（一）样品制备：将液体、浆状样品混合均匀，固体样品需粉碎磨细。

（二）样品处理：1、红辣椒粉等粉状样品称取1g ~ 2 g（准确至0.001 g）样品于三角瓶中，加入10mL ~20mL 正己烷，超声处理5min，过滤，用10 mL 正己烷洗涤残渣数次，至洗出液无色，合并正己烷液，用旋转蒸发仪浓缩至5 mL 以下，慢慢加入氧化铝层析柱中，为保证层析效果，在柱中保持正己烷液面为2mm左右时上样，在全程的层析过程中不应使柱干涸，用正己烷少量多次淋洗浓缩瓶，一并注入层析柱。

苏丹红检测方法检测方法 (中文)欧洲委员会健康与消费者保护综合委员会第四分委员会―生产与流通过环节的食品安全第三部―物理化学危害物监督新方法声明:03/99主题:苏丹红检测方法的更正以前的3/92新方法声明在此更正(原方法4.12.1存在错误:正确的数字是100ml而不是50ml)代办处已收到来自法国的方法声明内容如下:辣椒粉及以辣椒为主要成分的产品中苏丹红和胭脂树橙的含量分析O.Veretout,L.Demesse,L.Szymanski1 应用范围本方法涉及以辣椒为主要成分的产品中苏丹红1号、苏丹红2号、苏丹红3号、苏丹红4号、苏丹橙B、苏丹红7B和胭脂树橙的检测。

2 定义苏丹红是应用于诸如油彩、蜡、地板蜡和香皂等化工产品中的一种非生物合成着色剂，一般不溶于水易溶于有机溶剂，胭脂树橙是一种食品着色剂但不允许在辣椒粉和调味品中使用。

3 方法要点上述着色剂经乙腈提取后，过滤，滤液用反相高效液相色谱仪进行色谱分析。

以波长可变的紫外―可见检测器定性与定量。

4 试剂与标准品除有特殊指明外，本方法中涉及试剂均为分析纯，实验用水均为蒸馏水、去离子水或相同质量的分析用水。

4.1 乙腈色谱纯4.2 水色谱级4.3 冰醋酸4.4 氯仿4.5 苏丹红1号(Aldrich Chemical Company)4.6 苏丹红2号(Acros organics 化工合成有机物)4.7苏丹红3号(Acros organics 化工合成有机物)4.8苏丹红4号(Acros organics 化工合成有机物)4.9苏丹橙B(Acros organics 化工合成有机物)4.10 苏丹红7B(Acros organics 化工合成有机物)4.11 胭脂树橙(特殊合成产品)4.12 标准溶液4.12.1 标准贮备液称取50.0mg着色剂(按产品标明的纯度折算成纯着色剂)并按以下方式移入100ml容量瓶定容。

着色剂溶解和转移溶剂定容溶剂苏丹红1号乙腈乙腈苏丹红2号乙腈乙腈苏丹红3号氯仿乙腈苏丹红4号氯仿乙腈苏丹橙B 乙腈乙腈苏丹红7B 乙腈乙腈胭脂树橙氯仿氯仿 4.12.1 标准工作液取上述标准贮备液各5ml移入50ml容量瓶中以乙腈定容，再分别从以上容量瓶中吸取0.5ml、1ml、2.5ml、4ml和5ml溶液移入50ml容量瓶中以乙腈定容，此时溶液中各种着色剂的浓度分别为0.5,1,2.5,4和5μg/ml。

分别取五个市售鸭蛋，按实验方法 进行预处理，测试其苏丹红Ⅳ的含量， 结果显示均不含苏丹红Ⅳ，对样品进 行加标回收实验。对每个样品加标平 行测定五次，计算其标准偏差。通过 测定所得加标回收率在 97%~105%， 相对标准偏差小于 3.5%，具体见表 1。 此法准确性和精密度均较高，可应用 于蛋黄中苏丹红 IV 的定量检测。
Technology 科技 分析与检测
紫外可见分光光度法检测蛋黄中微量苏丹红 IV
□ 李锦城 深圳市测达农产品检测有限公司
摘 要：本实验建立了紫外可见分光光度法检测蛋黄中微量苏丹红Ⅳ的新方法，蛋黄样品经过预处理后利用紫外 - 可 见光检测器测定吸光度，并用外标法分析定量。当苏丹红 IV 在 1~12 μg/mL 时，其特征峰的吸光值与苏丹红Ⅳ含量呈良 好线性性关系。运用于蛋黄实际样品检测，其加标回收率为 97%~105%，检出限低至 0.05 μg/mL，测定结果与其他方法 比对无显著差异。该方法具有简单、快速、准确度高等特点，能运用于蛋黄中微量苏丹红Ⅳ的快速测定。
3 结论
本文以紫外可见分光光度法实现 了蛋黄中微量苏丹红Ⅳ的快速测定。 此法设备简单、成本低、耗时短、精 密度和准确度高，可应用于蛋黄中微 量苏丹红Ⅳ的快速测定。
参考文献 [1]Stiborova M,Martinek V,
Rydlora H,et al.Sudan Ⅰ is a potentialcarcinogen for humans: Evidence for its metabolic activation and detoxication by human
图 1 吸收光谱曲线
注：1. 加标蛋黄提取液；2. 纯蛋黄提取液；3. 苏丹红Ⅳ标准液
表 1 苏丹红 IV 的加标回收率测定

①苏丹红Ⅰ～Ⅳ混合溶液的配制： 分别称取 10.00mg 苏丹红Ⅰ标准品、苏丹红 II 标准品、苏丹 红 III 标准品、苏丹红Ⅳ标准品，丙酮溶解后用乙 腈 定 容 至 250 mL， 配 制 成 质 量 浓 度 为 40.0 mg/L 的标准溶液，备用。
②对位红单标溶液的配制： 称取 10.00 mg 对 位红标准品， 丙酮溶解后用乙腈定容至 250 mL， 配制成质量浓度为 40.0 mg/L 的标准溶液，备用。
在色谱-质谱条件下苏丹红Ⅰ～Ⅳ及对位红标 准品用 GC-MS/Scan 模式扫描测定， 得到目标化 合物完全分离的总离子流色谱图。 根据色谱图上 各组分的保留时间和分子离子峰初步确定检测对 象。 将获得的苏丹红Ⅰ～Ⅳ及对位红标准物质质谱 图与 NIST02 标准谱库的标准质谱图进行对比。 1.4 定量分析
2 温州出入境检验检疫局 浙江温州 325027）
摘要 目的：建立同时测定食品中苏丹红Ⅰ~Ⅳ及对位红的新方法。 方法：采用气相色谱-质谱选择离子检测法， 样 品 处 理 采 用 超 声 波 直 接 提 取 和 过 中 性 氧 化 铝 柱 净 化 的 方 法 ， 色 谱 柱 为 J＆W DB-5HT 30.0 m×250 μm× 0.10 μm 石英毛细管柱，柱温的调节采用程序升温法。 进样方式：脉冲不分流，进样量 1 μL；EI 离子源，选择 m/z 248、143、115、276、247、105、293、171、352、380、261、225，利用选择离子法，以菲-氘 10 为内标进行研究。 结果：苏 丹红Ⅰ～Ⅳ及对位红的线性范围为 0.1~4.0 mg/L；方法检出限为 0.002~0.01 μg/g。 RSD 为 3.7%~8.1%，回收率为 82.2%~89.3%。 结论：本试验结果准确可靠，选择性和重复性好。

【检测步骤】 1.样品处理：取约2g样品（辣椒取1g）于研钵中, 加入一瓶提取剂研 磨约3至5分钟，用滤纸过滤后挤干残渣, 收集滤液5mL于100mL量筒 中，用蒸馏水定容至15mL。 2.过层析柱：将50mL注射器与层析柱（层析柱使用前依次用5ml洗 脱液、5ml水激活）连接，将步骤1中收集到的样液倒入注射筒里， 用注射塞加压，加快流速，建议15mL样本通过柱子的时间为3～ 5min。待样液完全流干后加2mL洗涤剂、2ml水洗涤层析柱。 3.观察结果：观察层析柱中吸附剂颜色变化，若吸附剂逐渐形成红色 环带，可初步判断样本中含有苏丹红；向层析柱中加1mL洗脱液； 将其洗脱下来的液体用5mL离心管收集,看液体颜色来判断。 萃取：取步骤3中的5mL离心管，加入1mL萃取剂，加入0.2ml水， 振荡，离心管上层若有明显的红色则可判断样品中含有苏丹红。 4.检测：用1ml注射器取步骤4中离心管中的上层液(注意不要吸到下 层的液体), 加到白色点滴板的一个孔上，样液渐渐ห้องสมุดไป่ตู้干，若在孔上形 成红色斑环则说明样品中含有待检物质。加0.2ml提取剂溶解，滴加 2~3滴定性试剂,试剂红色加深为苏丹红1、2，试剂变蓝色为苏丹红3、 4。（注意及时观察）
实验原理：
分子印迹聚合物是一类新的分子识别物质, 它将待 测物质作为模板分子, 首先, 使功能单体与模板分 子间相互作用形成单体- 模板分子复合物; 然后, 功 能单体与交联剂交联聚合形成聚合物, 将模板分子 固定; 最后再通过一定的物理或化学方法把模板分 子提取出来。从而在聚合物中留下一个与模板分子 特异性结合的功能基的三维空穴, 对模板分子具有 专一性识别作用。这种分子印迹聚合物具有构效预 定性、特异识别性和广泛实用性。其识别能力可以 和生物分子抗原- 抗体、酶- 底物、受体-激素间的 特异性识别相媲美, 同时还具备对恶劣环境(高温、 高压、强酸、强碱)的耐受性。

m 安全与检测2 壬 =SAFETY AND TESTING高效j 夜相色谱法检测食品中的苏丹红郑佳玉:尤继明范明红宝应』摘 要：试验目的是用高效液相色谱法检测食品中的苏丹红。

试验釆用凝胶柱净化-高效液相色谱法同步测定食品内苏丹红I 、II 、III 与IV,用乙醇提取试验样品，Bio-Beads SX3凝胶柱净化处理提取液，经洗脱处理后，Symmetry ShieldRP18柱进行分离，二极管阵列检测器检测苏丹红。

结果表明，苏丹红I 、II 、III 与IV 质量浓度为0.1~10mg/L 时呈现出较好的线性相关性,加标回收率均值为80.6 -96.2%,相对标准偏差是2.4 ~ 5.8%。

关键词：食品；苏丹红检测；凝胶柱_高效液相色谱I. 检测试验仪器和试剂Agilent 1100高效液相色谱仪自带二极管阵列检测器（HPLC-DAD ） o甲醇（色的）、乙酸乙酯、环己烷、无水硫酸钠（分析纯）,苏丹红 1（ 97.51%）、H （90.0%）、皿（97.0%）、IV （91.0% ）标 准品。

层析柱 1.6 cm X 50 cm,填充 Bio-Beads S-X3 凝胶。

配制标准液：准确量取苏丹红I 、II 、III 与IV 标准品，均 为10 mg 。

仅用甲醇溶解苏丹红I, ImL 乙酸乙酯溶解苏丹红II 、 III 与IV 后，再用甲醇将其定容到10 mL,均被配制成l.OOg/ L 标准储备液。

分别量取2.5ml 储备液并将其放置在50mL 容量瓶内，甲醇做定容处理，以上获得的溶液实质上便是4种苏丹 红制备的50mg/L 混合储备液。

而后再使用甲醇配备质量浓度为 0.10、0.5、1.0、5.0、10mg/L 的标准液叫辣酱、香肠样品均采购于农贸市场。

1.2提取与净化样品精确称量4g 均质化的试验样品，兑入8g 无水硫酸钠，充 分震荡摇匀，待观察到样品成疏松样后，加入30 mL 无水乙醇，置于75P 水浴内加热8min,取样后用超声波清洗，静置lOmin,取用上层清液并放置于烧杯内，用35mL 乙醇提取残渣，与提取液混合。