稀释涂布平板法计数例题

涂布平板法实验器材牛肉膏蛋白胨琼脂培养基配制牛肉膏 0.3g蛋白胨 1g氯化钠 0.5g琼脂 2g自来水 100mLpH 7.0～7.2灭菌 1.05kg/cm2，22min配制具体步骤1．称量按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。

牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯。

也可放在称量纸上，称量后直接放入水中，这时如稍微加热，牛肉膏便会与称量纸分离，然后立即取出纸片。

蛋白胨很易吸潮，在称取时动作要迅速。

另外，称药品时严防药品混杂，一把牛角匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净、擦干，再称取另一药品，瓶盖也不要盖错。

2．溶化在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解。

待药品完全溶解后，补充水分到所需的总体积。

如果配制固体培养基，将称好的琼脂放入已溶化的药品中，再加热溶化，在琼脂溶化的过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底使烧杯破裂。

最后补足所失的水分。

3．调pH在未调pH前，先用精密pH试纸测量培养基的原始pH值，如果pH偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入1mol/L NaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸测其pH 值，直至pH达7．6。

反之，则用1mol/L HCl进行调节。

注意pH值不要调过头，以避免回调，否则，将会影响培养基内各离子的浓度。

对于有些要求pH值较精确的微生物，其pH的调节可用酸度计进行（使用方法，可参考有关说明书）。

4．过滤趁热用滤纸或多层纱布过滤，以利结果的观察。

一般无特殊要求的情况下，这一步可以省去（本实验无需过滤）。

很多都是不需要过滤的。

5．分装按实验要求，可将配制的培养基分装入试管内或三角烧瓶内。

分装装置见图Ⅴ-1。

分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。

(1)液体分装分装高度以试管高度的1/4左右为宜。

(2)固体分装分装试管，其装量不超过管高的1/5，灭菌后制成斜面，如图Ⅴ-2。

显微镜计数法即血球计数法，事先把菌液稀释到一定的倍数，然后通过血球计数板在显微镜下计数。

此法计数比较精准。

活菌计数法是将待测样品经一系列10倍稀释，然后选择三个稀释度的菌液，分别取0.2ml放入无菌平皿，再倒入适量的已熔化并冷至45℃左右的培养基，与菌液混匀，冷却、待凝固后，放入适宜温度的培养箱或温室培养，长出菌落后，计数，按下面公式计算出原菌液的含菌数：每毫升原菌液活菌数=同一稀释度三个以上重复平皿菌落平均数×稀释倍数×5稀释涂布平板法是一种粗略的活菌计数法，即通过一定的稀释倍数，涂布到平板上，在适宜的条件下培养后，观察活菌数。

平板划线法是用来分离单菌落的一种方法，不是计数的方法。

如果只有一个稀释度的平均菌落数符合30~300这个范围
则以该稀释度平均菌落数除以涂布平板所用稀释液体积(0.1mL)，乘以稀释倍数作为该样品的细菌总数
如果有两个稀释度的平均菌落数符合要求
则按照两者菌落总数之比来决定
如果小于2，取两者的平均值
如果大于2，取较小的菌落总数
本题的46*10^3与295*10^2的比之为1.6
应取两者的平均值
（46*10^3+295*10^2)/0.1/2=3.775*10^5
相当于统计学里面的比较差异，
如果多比少大于2倍，则梯度浓度差异是10倍的情况下，其菌落是有很多重叠或者链接在一起的，这样就无法计算清楚是否为单菌落了，所以只有选择较小的菌落数。

来保证以上要求。

平板菌落计数法计算公式例题平板菌落计数法计算公式例题一、引言平板菌落计数法是微生物学实验室中常用的一种微生物计数方法，通过在琼脂平板上培养微生物，并根据菌落的形成情况来进行微生物数量的估算。

在本文中，我将介绍平板菌落计数法的计算公式，并通过一个具体的例题来加深理解。

二、平板菌落计数法的计算公式在进行平板菌落计数法时，通常使用以下计算公式来计算微生物的数量：N = n/d * 1/V其中，N 代表菌落总数（CFU/g或CFU/mL）n 代表在某一平板中被计数的菌落数d 代表对数稀释倍数V 代表每次接种的体积（mL）这个计算公式是通过对每个平板上的菌落数进行统计，并根据稀释倍数和接种体积来进行微生物数量的推算。

三、例题分析假设我们在实验室中进行了一次细菌计数实验，以确定某一食品样品中的细菌数量。

我们首先进行了系列的稀释，并将不同稀释倍数的样品接种在琼脂平板上。

在我们观察到的一张平板上，我们发现了以下菌落数：- 在1:10稀释倍数下，菌落数为30- 在1:100稀释倍数下，菌落数为18- 在1:1000稀释倍数下，菌落数为5假设每次接种的体积为1mL，则根据上述数据，我们可以进行如下的计算：N = (30/10) * 1/1 + (18/100) * 1/1 + (5/1000) * 1/1= 3 + 0.18 + 0.005= 3.185根据计算，我们可以认为在此食品样品中的细菌数量为3.185 CFU/mL。

四、总结与回顾通过这个例题的分析，我们加深了对平板菌落计数法的理解。

通过对不同稀释倍数下的菌落数进行计数，并根据计算公式进行推算，我们可以较为准确地确定样品中微生物的数量。

在实际操作中，我们需要注意稀释倍数和接种体积的准确控制，以避免出现较大误差。

五、个人观点和理解平板菌落计数法作为一种常用的微生物计数方法，在实验室中具有重要的应用价值。

通过对菌落的形态和数量进行观察，我们可以快速、准确地了解样品中微生物的数量，为食品安全、药品生产等领域提供了有力的数据支持。

高一生物测定微生物的数量试题1.下列关于测定土壤中微生物数量的叙述，正确的是( )。

A．一般选用103～107倍的稀释液分别涂布B．测定放线菌的数量，一般选用103、104和105倍稀释C．测定真菌的数量，一般选用103、104和105倍稀释D．若第一次测定某种细菌的数量，可以将101～107倍的稀释液分别涂布到平板上培养【答案】B【解析】由于土壤中各类微生物的数量不同，在进行分离与计数时，就需要按照不同的稀释度分别进行涂布；测定细菌一般选择104、105、106倍稀释；测定放线菌一般选择103、104、105倍稀释；测定真菌一般选择102、103、104倍稀释。

而首次做实验时，可将范围放宽点，将103～107倍的稀释液分别涂布到平板上培养。

2.(15分)苯酚是工业生产排放的有毒污染物质，自然界中存在着降解苯酚的微生物。

某工厂产生的废水中含有苯酚，为了降解废水中的苯酚，研究人员从土壤中筛选获得了只能降解利用苯酚的细菌菌株，筛选的主要步骤如下图所示，①为土壤样品。

请回答下列问题。

(1)②中培养目的菌株的选择培养基中应加入________作为碳源，②中不同浓度碳源的培养基________(A.影响；B.不影响)细菌的数量，如果要测定②中活细菌数量，常采用________法。

(2)④为对照，微生物在④中不生长，在⑤中生长，④与⑤培养基的主要区别在于________；使用________法可以在⑥上获得单菌落。

采用固体平板培养细菌时为什么进行倒置培养？ ______________________。

(3)如何比较不同菌株降解苯酚能力的大小？__________________________。

(4)实验过程中如何防止其他微生物的污染？__________________________。

【答案】(1)苯酚 A 稀释平板计数(或活菌计数或菌落计数)(2)④含除苯酚外的其他碳源，⑤以苯酚为唯一碳源平板分离(或稀释涂布平板或平板划线分离) 避免培养过程产生的水分影响微生物的生长(3)用同样苯酚浓度的培养液培养不同菌株，一定时间后，通过测定接种了不同菌株的培养液中的pH来测定培养液中苯酚含量(4)培养基灭菌，接种环境灭菌，接种过程无菌操作【解析】考查微生物的分离、培养、数量测定、无菌操作等基本技术。