1) 双微电极钳位法只适用于巨大的神经轴突、肌肉纤维和卵母细胞等较大 的细胞, 对于直径小于10 微米的细胞, 胞内插入两根电极就很困难, 虽然此时可 用单根吸附电极进行电压钳位, 但是对细胞膜的损伤也不可避免;
2) 只能采用全细胞记录模式, 记录到的是整个细胞膜上所有开放通道的电 流总和, 无法了解单通道电流的情况;
膜片钳实验
(1)玻璃微电极使用硬质有芯玻璃毛细管在拉制仪 (PC-10,Narishige)上拉制,实验前用抛光仪(MF900,Narishige)进行抛光。
全细 胞钾 离子 通道 电流
单通 道记 录钙 离子 通道 电流
抛光仪
拉制仪
显微镜操作系统及可见光源
冷 光 源
膜片钳放大器、操作系统
低 温 水 浴 摇 床
材料的 好坏直 接影响 膜片钳 实验的 成败!
要根据不同的实验目的来栽培材料。 根细胞:通常根长度在2厘米左右,但突变体要 根据该基因起作用的发育阶段来确定; 保卫细胞:通常在土壤中生长4-6周,但绝不能 抽苔;叶肉细胞对光照要求较高,因为光照直 接影响叶绿体的活动。
( 3) 第二信使激活的离子通道, 包括由细胞内Ca2+、 IP3、G 蛋白及蛋白激酶激活的离子通道。
质膜上的离子通道
植
阴离子通道
物
细
胞
液泡膜上的离子通道
离
子
通 道
阳离子通道
其他细胞器膜上的离子通道
自从在蚕豆保卫细胞膜上发现植物离子通道以来,人们对植物细 胞乃至作为细胞器的液泡膜上离子通道的认识迅速深入,到目前为 止,已经发现植物细胞及其内膜上存在多种离子通道。
( 3) 机械敏感性: 由细胞膜表面的应力变化控制通道的开放与关闭 状态。 其中以电压依赖性通道最常见