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幽门螺杆菌尿素酶A基因克隆表达及动物抗血清免疫保护作用研究刘文;汤艳超;黄睿;崔海燕;袁金山;胡巍【期刊名称】《生物技术通报》【年(卷),期】2013(000)008【摘要】旨在研究动物抗血清在抗幽门螺杆菌感染方面的免疫交叉保护作用.以幽门螺杆菌标准株基因组为模板,PCR特异性扩增尿素酶A亚基基因,构建表达载体pBVIL1-ureA并转化大肠杆菌,诱导转化菌表达,用纯化的表达蛋白免疫家兔得到家兔抗血清,用抗血清和病人血清进行ELISA试验.结果显示,原核表达的抗原蛋白IL1-UreA既能与兔抗血清反应也能与幽门螺杆菌感染的病人血清反应,且两种血清与抗原蛋白存在竞争性结合反应.动物抗血清具有免疫保护作用,可以利用动物特异性抗体进行幽门螺杆菌感染的免疫预防和免疫治疗.【总页数】4页(P135-138)【作者】刘文;汤艳超;黄睿;崔海燕;袁金山;胡巍【作者单位】山东理工大学生命科学学院,淄博255049;山东理工大学生命科学学院,淄博255049;河南中医学院基础医学院,郑州450008;山东理工大学生命科学学院,淄博255049;山东理工大学生命科学学院,淄博255049;山东理工大学生命科学学院,淄博255049【正文语种】中文【相关文献】1.淡紫拟青霉丝氨酸蛋白酶基因克隆表达及抗血清的制备 [J], 蒋桂芳;宋力;黄俊生2.以白细胞介素-2为免疫佐剂的幽门螺杆菌尿素酶B亚单位核酸疫苗的构建及其免疫保护作用 [J], 徐灿;李兆申;杜奕奇;屠振兴;龚燕芳;许国铭3.幽门螺杆菌尿素酶B基因的克隆、表达及免疫原性研究 [J], 李明峰;凌贞;马爱英;赵建华;孙建新;于声芝;吴祥甫4.中国人幽门螺杆菌尿素酶B亚单位的基因克隆及序列分析 [J], 吴超;邹全明;张卫军;郭学青5.金黄色葡萄球菌肠毒素B基因克隆、表达及其抗血清在食物中毒快速检测上的应用 [J], 季永峰;张仁利;耿艺介;高世同;黄达娜;胡章立因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
幽门螺杆菌双基因多表位重组原核表达工程菌的构建及其表达特性的研究杨靖;潘兴;欧琴;周法庭;李建春;祝捷;周永君;李明远;王保宁【期刊名称】《成都医学院学报》【年(卷),期】2013(8)4【摘要】目的构建含幽门螺杆菌尿素酶保守基因序列ureI和ureB的双基因(简称IB)多表位原核表达质粒以及原核表达工程菌,并研究其微生物学特性.方法通过生物信息学方法从ureI 和 ureB 基因中筛选T细胞和B细胞优势表位基因序列,人工合成所选择的表位基因序列并构建原核重组表达质粒pET28a(+)/IB.经限制性内切酶(EcoR I,Xho I)鉴定及DNA测序鉴定后,将重组质粒导入大肠杆菌 BL21(DE3).该工程菌经IPTG诱导后,用SDS-PAGE检测重组蛋白(rIB)的表达情况,用Western blot检测rIB的免疫反应性.结果构建的双基因多表位基因序列与所设计的一致;工程菌经 IPTG 诱导后做 SDS-PAGE 电泳显示,在28 kD左右有一条明显蛋白条带,Western blot结果显示在28 kD左右出现特异反应条带.结论成功构建含ureI 和ureB 双基因序列的原核表达质粒 pET28a(+)/IB 及工程菌,该工程菌表达的重组蛋白rIB能被抗幽门螺杆菌悉尼株(H.pylori SS1)的特异抗体所识别,表明该新重组蛋白与幽门螺杆菌有高度相关性.【总页数】5页(P410-414)【作者】杨靖;潘兴;欧琴;周法庭;李建春;祝捷;周永君;李明远;王保宁【作者单位】四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室,成都,610041;湖北医药学院微生物学教研室,十堰,442000;四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室,成都,610041;四川万可泰生物技术有限责任公司,成都,610041;湖北医药学院微生物学教研室,十堰,442000;四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室,成都,610041;四川万可泰生物技术有限责任公司,成都,610041;四川万可泰生物技术有限责任公司,成都,610041;四川万可泰生物技术有限责任公司,成都,610041;四川万可泰生物技术有限责任公司,成都,610041;四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室,成都,610041;四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室,成都,610041【正文语种】中文【中图分类】R378;R392【相关文献】1.重组海参溶菌酶基因工程菌的构建及原核表达 [J], 常艺海;丛丽娜;卢冬2.幽门螺杆菌双亚单位表位疫苗的构建及免疫原性研究 [J], 周维英;吴超;石云;邹全明3.几丁质酶基因与抗真菌蛋白基因、葡聚糖酶基因双价表达载体的构建及农杆菌工程菌株的重组 [J], 王华;周鹏;郭安平4.一株新的重组人源过氧化氢酶基因工程菌的构建和遗传稳定性研究 [J], 史训龙;施志慧;周伟;叶丽;朱海燕;冯美卿;周珮5.EPEC O_2、O_(78)及融合双价弱毒菌株O_(2,78)(Chl^r Nor^r)ompA基因原核表达载体重组构建 [J], 向雅倩;向会耀;谭玉梅因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
幽门螺杆菌临床菌株尿素酶B亚单位原核表达系统的构建及其重组蛋白免疫性的鉴定陈喆;严杰;毛亚飞;钊守凤【期刊名称】《浙江大学学报（医学版）》【年(卷),期】2003(032)001【摘要】目的:克隆幽门螺杆菌(Hp)ureB基因并构建其原核表达系统.方法:采用高保真PCR从幽门螺杆菌临床分离菌株Y06中扩增ureB基因,T-A克隆后测定核苷酸序列,构建pET32a的ureB表达载体,在E.coli BL21DE3宿主菌中用不同浓度的IPTG诱导表达,采用Hp全菌抗体的Western blot和兔抗融合蛋白血清的免疫扩散试验鉴定其免疫性.结果:所克隆的ureB基因与报道的相应核苷酸序列同源性为96.88%～97.82%,氨基酸序列同源性高达99.65%～99.82%.pET32a-ureB-BL21DE3系统的UreB融合蛋白表达量高达细菌总蛋白的40%左右.UreB融合蛋白能与Hp全菌抗体发生结合反应,免疫家兔能获得高效价抗体.结论:本研究成功地构建了Hp ureB高效表达系统,所表达的UreB融合蛋白有良好的免疫原性和免疫反应性,可作为Hp疫苗的抗原.【总页数】5页(P4-8)【作者】陈喆;严杰;毛亚飞;钊守凤【作者单位】浙江大学医学院病原生物学教研室,浙江,杭州,310031;浙江大学医学院病原生物学教研室,浙江,杭州,310031;浙江大学医学院病原生物学教研室,浙江,杭州,310031;浙江大学医学院病原生物学教研室,浙江,杭州,310031【正文语种】中文【中图分类】R377;R392.2【相关文献】1.幽门螺杆菌尿素酶B亚单位C末端26kDa片段在大肠杆菌中表达及免疫性 [J], 顾青;姚蕾;励建荣;朱睦元2.幽门螺杆菌尿素酶B亚单位核酸疫苗的发酵、纯化及鉴定 [J], 曾韦锟;邹全明;朱永红3.ltB-ureB融合基因原核表达系统的构建及其产物免疫性和佐剂活性的鉴定 [J], 王媛;严杰4.幽门螺杆菌鞭毛蛋白B亚单位原核表达系统的构建及其产物的免疫性 [J], 孙爱华;邵浙新;严杰5.表达幽门螺杆菌尿素酶B亚单位的减毒沙门氏菌工程菌株的构建 [J], 毛旭虎;邹全明;鲁东水;张卫军;吴超;罗萍;王宁因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
幽门螺旋杆菌细胞毒素相关蛋白A真核表达载体的构建与表达万小勇;杨登元【期刊名称】《成都医学院学报》【年(卷),期】2013(8)5【摘要】目的构建幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori,Hp)细胞毒素相关蛋白A(cytotoxin-associated protein,CagA)基因表达载体并表达其编码蛋白.方法从胃黏膜活检标本中分离Hp,提取核酸,采用RT-PCR技术扩增CagA基因,将其克隆至pEGFP真核表达载体中,构建Hp CagA基因真核表达载体并转染293-T细胞表达其编码蛋白.结果通过PCR、双酶切、测序鉴定证实CagA基因的真核表达载体构建成功,免疫印迹法证实CagA蛋白的表达.结论成功构建了Hp CagA基因真核表达载体并表达其编码蛋白,为后期功能研究提供了材料和基础.【总页数】4页(P604-607)【作者】万小勇;杨登元【作者单位】南京市市级机关医院消化内科,南京210018;南京市市级机关医院普外科,南京,210018【正文语种】中文【中图分类】R573【相关文献】1.人精子顶体膜相关蛋白32真核表达载体的构建及其在NIH3T3细胞中的表达[J], 臧卫东;陈雪梅;任秀花;赵青赞;曹静;郝莉2.白细胞相关免疫球蛋白样受体2(CD306)真核表达载体构建及蛋白的纯化与鉴定[J], 王春艳;康振华;谢鑫;李妍;金伯泉3.单纯疱疹病毒2型潜伏相关转录子蛋白读码框2真核表达载体的构建及其在Vero细胞中的表达 [J], 杨慧兰;赵举峰;樊建勇;周翠;黄小晏;齐维4.汉滩病毒糖蛋白与人溶酶体相关膜蛋白重组真核表达载体的构建表达鉴定及作为基因疫苗的免疫安全性评价 [J], 张锦鹏;张冠文;宣国云;孟强;谢文宇;高宏;姜东伯;杨琨5.努比亚山羊脂肪和肥胖相关蛋白基因克隆分析及真核表达载体构建 [J], 邹菊红;申玉建;高小童;黄艳娜;蒋钦杨因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
幽门螺杆菌尿素酶B亚单位基因的克隆及其高效表达朱卫华;李生迪;宣俊文;陈翠萍【期刊名称】《中国生物制品学杂志》【年(卷),期】2008(21)9【摘要】目的克隆幽门螺杆菌尿素酶B亚单位(UreB)基因,构建原核表达载体,并进行高效表达。
方法以幽门螺杆菌基因组DNA为模板,PCR扩增UreB基因,双酶切后,与质粒pET-22b(+)连接,构建表达载体pET-22b(+)/UreB,分别转化E.coliBL21(DE3)、Origam(iDE3)和Rossetta(DE3),经IPTG诱导后,进行SDS-PAGE和Western blot分析。
结果经酶切及测序,证明幽门螺杆菌UreB基因的原核表达载体构建正确。
3种重组菌的诱导表达产物经SDS-PAGE分析,均可见相对分子质量为64000的目的蛋白条带,Rossetta(DE3)重组菌目的蛋白表达量最高,约占菌体蛋白的35%。
Western blot结果表明,表达的目的蛋白具有良好的反应原性。
结论已成功克隆了幽门螺杆菌UreB基因,并在大肠杆菌Rossetta(DE3)中获得了高效表达。
【总页数】3页(P771-773)【关键词】幽门螺杆菌;尿素酶B亚单位;克隆;原核表达【作者】朱卫华;李生迪;宣俊文;陈翠萍【作者单位】兰州生物制品研究所第一研究室;中国药品生物制品检定所诊断室【正文语种】中文【中图分类】R378;Q785【相关文献】1.幽门螺杆菌尿素酶B亚单位基因克隆表达及临床应用 [J], 吴超;王宁;袁小澎;鲁东水;邹全明2.表达幽门螺杆菌尿素酶B亚单位基因减毒鼠伤寒沙门疫苗菌的构建和鉴定 [J], 朱森林;廖文俊;等3.幽门螺杆菌尿素酶B亚单位编码基因的克隆与序列分析 [J], 代丽萍;段广才;郗园林;范清堂4.幽门螺杆菌尿素酶B亚单位的克隆表达及纯化 [J], 闫锦锦;闫东明;邹雪;刘丹;彭超;苏亚南5.中国人幽门螺杆菌尿素酶B亚单位的基因克隆及序列分析 [J], 吴超;邹全明;张卫军;郭学青因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
幽门螺杆菌双亚单位表位融合蛋白的构建、表达及鉴定周维英;吴超;石云;张卫军;邹全明【期刊名称】《免疫学杂志》【年(卷),期】2007(23)2【摘要】目的构建和表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)黏附素(HpaA)和尿素酶B亚单位(UreB)表位串联体(HUepi)与大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)融合蛋白(HUepi-LTB),并对其进行纯化和鉴定。
方法采用PCR技术分别扩增HpaA-UreB表位多肽编码基因HUepi和LTB的编码基因LtB,重叠延伸PCR将2段基因拼接起来,T-A克隆后构建融合基因表达质粒pET-22b(+)-HUepi-LtB,经酶切鉴定后转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达,采用阳离子和阴离子交换层析进行纯化,PAGE检测、N端测序和westernblotting、ELISA检测、GM1活性检测。
结果成功构建表位串联体(HUepi)与LTB融合蛋白的高效表达质粒pET-22b(+)-HUepi-LtB,重组工程菌pET-22b(+)-HUepi-LtB/BL21经IPTG诱导目的蛋白表达率约28%,PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量(Mr)约20.7×103,破菌后电泳证实目的蛋白以包涵体形式表达,纯化后蛋白纯度达97%,免疫学鉴定该融合蛋白与兔抗LTB抗血清可以发生特异性的结合。
结论HpHpaA-UreB表位串联体(HUepi)与LTB融合蛋白(HUepi-LTB)经基因克隆获得了较高的表达量,并初步显示了较好的免疫活性。
为新一代Hp疫苗的研制奠定基础。
【总页数】6页(P121-125)【关键词】幽门螺杆菌;黏附素;尿素酶B亚单位;大肠杆菌不耐热毒素B亚单位【作者】周维英;吴超;石云;张卫军;邹全明【作者单位】第三军医大学临床微生物学及免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心【正文语种】中文【中图分类】R378;R392.1【相关文献】1.幽门螺杆菌临床菌株尿素酶B亚单位原核表达系统的构建及其重组蛋白免疫性的鉴定 [J], 陈喆;严杰;毛亚飞;钊守凤2.霍乱毒素B亚单位与谷氨酸脱羧酶抗原表位肽融合蛋白的表达及鉴定 [J], 刘利成;方宏清;彭远义;李彦英;张艳红;刘传喧;陈惠鹏3.含幽门螺杆菌CagA、UreB蛋白与霍乱肠毒素B亚单位(CTB)融合基因的植物表达载体的构建及遗传转化 [J], 程畅;陈珍;朱诚4.幽门螺杆菌热休克蛋白A亚单位与大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位融合蛋白表达的研究 [J], 冉向阳;邹全明;毛旭虎;王缚鲲因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
幽门螺杆菌UreB基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达徐旭东;阮期平;吴梧桐【期刊名称】《中国药科大学学报》【年(卷),期】2004(35)2【摘要】目的 :为了研制口服幽门螺杆菌疫苗 ,构建表达幽门螺杆菌的保护性抗原成分UreB蛋白的基因工程菌株。
方法 :用PCR方法扩增UreB基因片段 ,将其克隆至pET2 8a质粒上 ,转化E .coliBL2 1(DE3) ,经IPIG诱导表达 ,得到rUreB蛋白。
结果 :经测序 ,UreB基因片段由 1710bp组成 ,编码 5 6 9个氨基酸残基。
与GenBank报道的脲酶核苷酸序列同源性最高为 97% ,氨基酸同源性为 99%。
经SDS PAGE检测表明 ,rUreB基因表达的蛋白质相对分子质量约为 6 4kDa ,含量占细菌总蛋白的 2 9 5 %。
经Ni2 +柱亲和层析、GSH复性后 ,rUreB表现了脲酶活性 ,活性为 32 5U/mg。
结论 :表达产物确为幽门螺杆菌脲酶B亚基 ,这为研制幽门螺杆菌口服疫苗打下了基础。
【总页数】4页(P183-186)【关键词】幽门螺杆菌;UreB基因;克隆表达【作者】徐旭东;阮期平;吴梧桐【作者单位】中国药科大学生命科学与技术学院【正文语种】中文【中图分类】Q785;Q786【相关文献】1.幽门螺杆菌ureB及ureB-hspA融合基因在减毒鼠伤寒沙门菌中的表达及小鼠的免疫应答 [J], 李勣;刘纯杰;李淑琴;陶好霞;刘秀丽;张兆山2.幽门螺杆菌UreB与大肠杆菌LTB基因融合及表达的研究 [J], 吴超;邹全明;郭红;张卫军;袁小澎;毛旭虎3.幽门螺杆菌抗原基因ureB在乳酸菌中的克隆表达与免疫反应性研究 [J], 张小娟;张荣光;段广才;范青堂4.幽门螺杆菌融合蛋白UreB-Omp11在大肠杆菌中的表达与纯化 [J], 赵玉霞;章涵;段广才;郗园林5.幽门螺杆菌ureA、ureB基因克隆、序列分析及在E.coli中表达 [J], 翁康生;周名权;吕小枫;陆晔;刘国星因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
幽门螺杆菌尿素酶基因的克隆及表达张如华;徐双兵;胡开顺;康铁邦【摘要】目的构建幽门螺杆菌尿素酶基因B亚单位(ureB)的原核表达质粒,诱导重组蛋白表达.方法以幽门螺杆菌基因组DNA为模板,PCR扩增尿素酶基因B亚单位,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳分离后连接克隆载体并测序,构建重组原核表达载体.结果成功扩增出1 710 bp的目的基因,测序结果证实与预期一致,该基因在大肠杆菌表达系统中得到表达.结论在大肠杆菌中成功表达幽门螺杆菌尿素酶基因B亚单位蛋白,为幽门螺杆菌疫苗的研发奠定了基础.【期刊名称】《分子诊断与治疗杂志》【年(卷),期】2010(002)006【总页数】3页(P387-389)【关键词】幽门螺杆菌;尿素酶;基因克隆【作者】张如华;徐双兵;胡开顺;康铁邦【作者单位】中山大学肿瘤防治中心实验研究部,广东,广州,510060;中山大学肿瘤防治中心实验研究部,广东,广州,510060;中山大学肿瘤防治中心实验研究部,广东,广州,510060;中山大学肿瘤防治中心实验研究部,广东,广州,510060【正文语种】中文【中图分类】R3幽门螺杆菌（Helicobacter pylori, HP）是一种寄生于人体胃黏膜的致病微生物，属革兰氏阴性菌。
幽门螺杆菌的感染范围遍布世界各地，是慢性消化道疾病（胃癌、胃溃疡和慢性胃炎）的重要致病源[1]，对人类健康构成严重威胁，目前世界卫生组织已将其列为一级致癌物质。
但迄今为止，针对幽门螺杆菌的治疗方法极其有限，临床上常采用抗生素抑制疗法，但存在反复感染和耐药性等一系列问题[2]。
因此，幽门螺杆菌疫苗的开发迫在眉睫。
本研究以幽门螺杆菌最为保守的尿素酶基因为研究对象，针对其免疫原性更强的B亚单位（ureB），通过分子生物学技术克隆其全长基因片段，并连接克隆载体（pMD19-T载体）后测序，为幽门螺杆菌疫苗的研发奠定了基础。
1.1 实验材料菌株：幽门螺杆菌菌株来源于临床标本分离，DH5α（大肠埃希菌）本实验室保存。
幽门螺杆菌活载体疫苗的研究进展罗夙医;吴利先【摘要】@@ 幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,HP)被公认为是慢性活动性胃炎、消化性溃疡等疾病发生的主要病因,并与胃腺癌、胃淋巴瘤的发生密切相关,是一级致癌因子[1].虽然HP确切的致病机制尚未完全阐明,但HP必须首先定植于胃粘膜,然后再进一步侵入宿主防御系统,由其毒素的直接作用和诱导的炎症反应等间接作用损伤组织而致病.流行病学调查研究显示,我国幽门螺旋杆菌感染率约为40%～60%,儿童也有相当高的感染率.【期刊名称】《中国人兽共患病学报》【年(卷),期】2011(027)005【总页数】3页(P447-449)【作者】罗夙医;吴利先【作者单位】大理学院基础医学院微生物学及免疫学教研室,大理,671000;大理学院基础医学院微生物学及免疫学教研室,大理,671000【正文语种】中文【中图分类】R379.9幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H P)被公认为是慢性活动性胃炎、消化性溃疡等疾病发生的主要病因,并与胃腺癌、胃淋巴瘤的发生密切相关,是一级致癌因子[1]。
虽然 H P确切的致病机制尚未完全阐明,但 H P必须首先定植于胃粘膜,然后再进一步侵入宿主防御系统,由其毒素的直接作用和诱导的炎症反应等间接作用损伤组织而致病。
流行病学调查研究显示,我国幽门螺旋杆菌感染率约为40%～60%,儿童也有相当高的感染率。
虽然联合化学药物治疗对 H P感染可取得较好的根除率,但也存在菌株耐药、药物副反应、价格昂贵等问题,难以推广。
因此,人们期待 H P疫苗的早日问世。
很多实验证明,减毒菌株能有效激发机体产生免疫应答。
将限制性突变引入减毒菌,可使其变得更安全,所以减毒胞内菌已被许多科研工作者用作载体携带外源抗原,即活载体疫苗[2]。
接种这种重组活疫苗后,能同时获得对病原体本身的防御作用和异源抗原的特异性免疫应答。
因此,在使用多种疫苗载体携带抗原激起黏膜免疫途径的方法中,活菌作为疫苗载体具有相当好的应用和开发前景。
