黄蜀葵花黄酮抗氧化性及对DNA氧化损伤的保护作用_黎望
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收稿日期:2017-07-10基金项目:中国检验检疫科学研究院基本科研项目(2017JK001)第一作者:杨悦(1988-),女,博士研究生,从事食品安全与营养研究,E-mail:100403yang@通信作者:吴亚君(1975-),女,博士,研究员,从事农产品真伪及质量评价研究,E-mail:wuyajuncaiq@ 油菜蜂花粉总黄酮对体外TBHP 诱导细胞氧化损伤的保护作用杨悦1,刘鸣畅1,王凯2,吴黎明2,杨艳歌1,吴亚君1(1.中国检验检疫科学研究院,北京100176;2.中国农业科学院蜜蜂研究所,北京100093)摘要:为研究油菜蜂花粉总黄酮(rape bee pollen flavonoids,RBPF)抗心血管疾病的作用机制,以RBPF 为研究对象,利用人工建立的血管内皮细胞氧化损伤模型,对RBPF 的抗氧化活性进行初步研究,在体外水平探索RBPF 对血管内皮细胞氧化损伤的保护作用。
采用超声醇提及大孔树脂纯化的方法提取富集RBPF,同时采用过氧化氢叔丁醇(tert-Butyl hydroperoxide,TBHP)诱导细胞氧化损伤,建立人脐静脉内皮融合细胞系EA.hy926的氧化损伤模型,并利用此模型研究RBPF 在细胞水平的抗氧化作用,以公认抗氧化性质良好的黄酮类化合物槲皮素作为阳性对照,CCK8法检测细胞活力。
首先,用梯度稀释的RBPF 及槲皮素作用于正常培养细胞,分析其细胞毒性,确定毒性阈值;然后,在毒性阈值范围内设置梯度浓度的槲皮素溶液作用于细胞损伤模型,确定槲皮素最佳抗氧化浓度剂量,并以此剂量组作为阳性对照组,与毒性阈值范围内梯度浓度的RBPF 同时作用于细胞损伤模型,研究RBPF 对血管内皮细胞氧化损伤的保护情况。
结果表明:其一,体外血管内皮细胞EA.hy926氧化损伤模型的最佳建模条件确定为500μmol ·L -1TBHP 作用3h;其二,细胞毒性试验结果表明,对于血管内皮细胞EA.hy926,RBPF 的毒性阈值为24mg ·L -1,阳性对照品槲皮素的毒性阈值为50mg ·L -1;其三,CCK8法测定RBPF 对细胞氧化损伤模型的保护作用,结果显示在6~18mg ·L -1剂量范围内,RBPF 预处理对EA.hy926细胞氧化损伤模型具有明显的保护作用(p ≤0.05),其抗氧化作用在低浓度(≤10mg ·L -1)范围内呈上升趋势,在高浓度(≥14mg ·L -1)范围内呈下降趋势,在10,12,14mg ·L -13个剂量组其抗氧化性优于槲皮素(25mg ·L -1),RBPF 浓度为10mg ·L -1时效果最佳。
中药单体及有效部位的神经保护作用机制研究进展摘要:从清除自由基、对抗谷氨酸毒性、抑制胞内Ca^2+超载和NO生成、干预细胞凋亡、拟雌激素作用等诸方面,综述中药单体和有效部位的神经保护作用机制研究进展.关键词:中药单体有效部位神经保护作用机制Advances in the Mechanistic Study on Neuroprotective Actions of the Monomers and Active Components from Chinese Traditional MedicinesAbstract:Advances in the mechanistic study on neuroprotective actions of monomers and active components from Chinese traditional medicines were reviewed, which included free radical scavenging, resistance against glutamate-induced excitotoxicity, inhibition of cellular Ca^2+ overload and NO production, intervention in cell apoptosis and estrogen-like activity.Key words:Chinese traditional medicine; Monomer; Active component; Neuroprotective; Mechanism of action在缺血、缺氧条件下,大脑神经组织会发生一系列的缺血瀑布级联反应,如自由基的大量释放、细胞内钙超载、兴奋性氨基酸损伤、炎性过程及凋亡等,它们发生在不同的时段,彼此交叉,相互联系。
缺血性脑卒中的神经保护则是对级联反应的各个环节加以影响和控制,对受到损伤的神经组织予以积极保护或修复,避免相邻正常的神经组织进一步受到损伤,挽救损伤的神经组织,并使之恢复或部分恢复原有功能。
黄蜀葵花、茎、叶多糖与黄酮含量比较陈云香;刘国钢;陈敏;时维静;王茜;窦金凤【摘要】目的:比较黄蜀葵花、茎、叶多糖和黄酮的含量.方法:采用UV法测定黄蜀葵花、茎、叶中的多糖和黄酮,采用HPLC法测定黄蜀葵黄酮中金丝桃苷的含量.结果:黄蜀葵花多糖浸膏得率26.0%,多糖含量17.0%;黄蜀葵茎多糖浸膏得率12.3%,多糖含量11.6%;黄蜀葵叶多糖浸膏得率19.0%,多糖含量14.8%.黄蜀葵花黄酮浸膏得率30.5%,总黄酮含量3.45%;黄蜀葵茎黄酮浸膏得率10.0%,总黄酮含量0.68%;黄蜀葵叶黄酮浸膏得率16.5%,总黄酮含量1.05%.黄蜀葵茎和叶未检测到金丝桃苷,黄蜀葵花中金丝桃苷含量为1.86%,符合2015版《中国药典》规定.结论:黄蜀葵不同部位的多糖和黄酮含量存在较大差异,黄蜀葵茎和叶不可替代黄蜀葵花,但可以用于提取多糖.本试验为黄蜀葵的开发利用提供参考数据.【期刊名称】《安徽科技学院学报》【年(卷),期】2016(030)006【总页数】4页(P50-53)【关键词】黄蜀葵;不同部位;多糖;黄酮【作者】陈云香;刘国钢;陈敏;时维静;王茜;窦金凤【作者单位】安徽科技学院食品药品学院,安徽凤阳233100;杭州艺福堂茶业有限公司,浙江杭州310051;安徽科技学院食品药品学院,安徽凤阳233100;安徽科技学院食品药品学院,安徽凤阳233100;安徽科技学院食品药品学院,安徽凤阳233100;安徽科技学院食品药品学院,安徽凤阳233100【正文语种】中文【中图分类】R927.2黄蜀葵Abelmoschus manihot ( L.) Medic.为锦葵科秋葵属多年生草本植物,始载于宋代掌禹锡所著《嘉佑本草》[1]。
黄蜀葵在我国大部分地区均有分布或栽培[2]。
历代本草多用其花入药,其次是种子、根,茎和叶少用。
现代化学研究表明,黄蜀葵花主要含黄酮类成分,种子主要含氨基酸和不饱和脂肪酸,根中主要为多糖类物质[3]。
黄葵花及其制剂(胶囊)对慢性肾炎治疗作用的研究进展樊映轩【摘要】该文通过查阅国内相关文献20余篇,综述了黄葵花及其制剂方面在抑制免疫反应,减轻炎症反应,改善肾纤维化,保护肾小管上皮细胞等方面的研究进展。
在临床上黄葵花及其制剂可以治疗肾病综合征、膜性肾病等常见慢性肾脏病( CKD)。
黄葵胶囊可改善CKD患者临床症状,减少蛋白尿,提高肾功能等方面具有临床疗效。
【期刊名称】《安徽医药》【年(卷),期】2014(000)012【总页数】3页(P2393-2394,2395)【关键词】黄葵花;药理作用;临床疗效;慢性肾脏病(CKD)【作者】樊映轩【作者单位】安徽太和县人民医院,安徽太和 236600【正文语种】中文慢性肾小球肾炎是一种常见的肾脏疾病。
其临床表现归属于中医的“水肿”、“血尿”范畴。
临床常见神疲乏力、腰脊酸痛、面色无华、面浮肢肿,为正虚邪实证。
近年来,湿热为病被认为是本病重要病理之一。
黄蜀葵花,为锦葵科狄葵属植物黄蜀葵的干燥花冠,具有抗炎、利湿、抗血小板聚集的作用。
由于其清热利湿、消炎和络的功效与湿热型慢性肾炎的临床病理相吻合。
因此,主治慢性肾炎湿热证取得了良好疗效。
我院运用黄葵花及其制剂治疗肾炎收到良好效果,为了进一步开发其制剂,对其药理作用及其临床疗效进行综述,为制剂开发与临床用药提供参考。
1 药理研究1.1 抑制免疫反应现代药理研究表明:黄蜀葵花总黄酮对湿热型慢性肾炎的作用及其对红细胞免疫黏附功能的影响。
胡翠云等[1]采用葡萄球菌肠毒素B皮下注射复制大鼠慢性肾炎湿热证模型。
黄蜀葵花总黄酮(TFA)各剂量组尿蛋白(UP)、血肌酐(Cr)、血清循环免疫复合物(CIC)、红细胞免疫复合物(RBC-IC)显著降低,白蛋白(Alb)、红细胞补体(RBC-C3b)显著升高;系膜细胞增殖和基质增生被显著抑制;TFA中剂量组尿素氮(BUN)显著降低。
与黄葵胶囊组比较,TFA高、中剂量组血Cr显著降低,其余各项指标均无显著性变化。
黄蜀葵花不同开放程度对药材中总黄酮及其糖苷类成分含量及
其提取率的影响
郭小藤;刘燕;张清华;尚立霞
【期刊名称】《药学研究》
【年(卷),期】2022(41)1
【摘要】目的研究黄蜀葵花不同开放程度对黄蜀葵花药材中总黄酮、金丝桃苷、异槲皮苷含量及其醇提取物的影响。
方法采用紫外-可见分光光度法测定黄蜀葵花药材中总黄酮含量,采用高效液相色谱法测定黄蜀葵花药材中金丝桃苷和异槲皮苷的含量,并比较黄蜀葵花药材醇提转移率,评价不同开放程度样品之间的差异。
结果完全开放的黄色黄蜀葵花中各成分含量均较高,醇提转移率高、油层较少,半开放及未开放黄绿色的黄蜀葵花中各成分均偏低,醇提转移率较低、油层较多。
结论黄蜀葵花药材宜在花期内完全开放后采收,颜色以亮黄色为最佳,本研究为各地黄蜀葵花药材的进一步开发利用提供了质量控制依据。
【总页数】5页(P26-30)
【作者】郭小藤;刘燕;张清华;尚立霞
【作者单位】山东省药学科学院泰山学者重点实验室;山东省药学科学院山东省生物药物重点实验室
【正文语种】中文
【中图分类】R927.2
【相关文献】
1.紫外分光光度法测定黄蜀葵花药材的总黄酮含量
2.不同采收时间及干燥方法对黄蜀葵花总黄酮含量的影响
3.黄蜀葵花总黄酮提取物中鞣质的含量测定
4.黄瑞香叶提取物中总黄酮与香豆素类成分的含量测定
5.添加乳酸菌对苜蓿青贮过程中总黄酮提取率、β-葡萄糖苷酶活性及主要黄酮苷元含量的影响
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黄蜀葵花总黄酮对人脐静脉血管内皮细胞形成新生血管的影响潘武; 蒋萌
【期刊名称】《《徐州医学院学报》》
【年(卷),期】2011(031)006
【摘要】目的观察黄蜀葵花总黄酮(TFA)对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)形成新生血管的影响。
方法以体外培养HUVEC为模型,MTT法检测不同浓度TFA 对细胞增殖的影响;Transwell小室细胞进行迁移实验检测药物对细胞迁移能力的影响;管形形成实验观察药物对细胞分化的影响。
结果5.0~20.0 mg/L TFA作用72 h,不仅对HUVEC增殖有明显促进作用;而且能促进HUVEC迁移;10.0~20.0 mg/L TFA能够促进HUVEC管样结构形成。
结论一定浓度的TFA具有明显促进HUVEC 形成新生血管的作用。
【总页数】3页(P359-361)
【作者】潘武; 蒋萌
【作者单位】
【正文语种】中文
【中图分类】R285.5
【相关文献】
1.枸杞多糖对人脐静脉血管内皮细胞的增殖、迁移及血管形成的影响 [J], 尹逊天;王巍;朱玉峰;白光
2.肿瘤抑素Tum5对人脐静脉血管内皮细胞血管生成活性以及碱烧伤诱导大鼠角
膜新生血管的抑制作用 [J], 郑嘉琳;贾育蓉;郭星艺;张琰;漆晨;孙靖;张红
3.黄蜀葵花总黄酮对人脐静脉血管内皮细胞形成新生血管的影响 [J], 潘武;蒋萌
4.6-磷酸果糖激酶-2/果糖-2,6-二磷酸酶(PFKFB3)抑制剂3PO对高糖环境下人脐静脉血管内皮细胞新生血管形成的影响 [J], 胡萍;韦芳;顾青;曹阳;田敏;吕红彬
5.黄蜀葵花总黄酮对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响 [J], 潘武;蒋萌
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黄蜀葵花总黄酮对大鼠佐剂性关节炎的防治作用刘必全;胡勇;张建华;陈志武【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2006(010)035【摘要】目的:观察从黄蜀葵花中提取的有效成分-黄蜀葵花总黄酮对大鼠佐剂性关节炎的防治作用,并分析其作用途径.方法:实验于2004-03/07在安徽医科大学基础医学院药理教研室完成.选择SD雄性大鼠60只,按随机数字表法分为6组,即正常对照组、佐剂性关节炎模型组、黄蜀葵花总黄酮25,50,100 mg/kg组(黄蜀葵花总黄酮由安徽省医学研究所提供,为棕黄色粉末)和雷公藤多苷40 mg/kg组,每组10只.除正常对照组外,各组大鼠均于左后足趾皮内注射0.1 mL弗氏完全佐剂诱发大鼠佐剂性关节炎模型,足容积法测原发侧及继发侧足肿胀度(致炎后容积-致炎前容积),并进行多发性关节炎评分(5级评分:0分无红肿;4分包括踝关节在内的全部足爪红肿.根据未注射佐剂的其余3个肢体的病变程度累计积分,最高为12分).应用苏木精-伊红染色检测非致炎侧踝关节的病理改变;MTT法检测脾淋巴细胞增殖反应以及大鼠腹腔巨噬细胞产生白细胞介素1水平,放射免疫法测定腹腔巨噬细胞产生肿瘤坏死因子α和前列腺素E2含量,硝酸还原酶法测定血清中一氧化氮含量.结果:60只大鼠全部进入结果分析,无脱失.①各组大鼠原发性足肿胀度的比较:佐剂性关节炎模型组大鼠致炎后不同时段足肿胀度均显著高于正常对照组(P<0.01),黄蜀葵花总黄酮25,50,100mg/kg组大鼠的在不同时段的原发性足肿胀度均显著低于模型组(P<0.05~0.01).②各组大鼠继发性足肿胀度及多发性关节炎指数比较:黄蜀葵花总黄酮25,50,100 mg/kg组大鼠的继发性足肿胀度和多发性关节炎评分均显著低于佐剂性关节炎模型组(P<0.05~0.01),以黄蜀葵花总黄酮100mg/kg组作用最为显著.③各组大鼠非致炎侧踝关节病理改变比较:不同剂量的黄蜀葵花总黄酮对佐剂性关节炎大鼠关节组织的上述病理改变有不同程度的改善作用,黄蜀葵花总黄酮100mg/kg组作用最明显.④各组大鼠的脾细胞增殖情况比较:黄蜀葵花总黄酮50,100 mg/kg组可明显促进佐剂性关节炎大鼠低下的脾淋巴细胞增殖反应(P<0.05).⑤各组大鼠腹腔巨噬细胞产生的白细胞介素1、前列腺素E2、肿瘤坏死因子α和血清一氧化氮含量比较:佐剂性关节炎模型组大鼠腹腔巨噬细胞产生的白细胞介素1、前列腺素E2、肿瘤坏死因子α及血清一氧化氮含量均显著高于正常对照组(P<0.01);黄蜀葵花总黄酮各剂量组均显著低于模型组(P<0.05~0.01).结论:黄蜀葵花总黄酮各剂量组能减轻佐剂性关节炎大鼠的原发性、继发性关节肿胀和多发性关节炎程度,以黄蜀葵花总黄酮100 mh/kg组作用最为显著,其作用途径可能与其调节机体的异常免疫有关.【总页数】4页(P34-37)【作者】刘必全;胡勇;张建华;陈志武【作者单位】安徽医科大学,第一附属医院骨科二病区,安徽省合肥市,230032;安徽医科大学,第一附属医院骨科二病区,安徽省合肥市,230032;安徽医科大学,药理学教研室,安徽省合肥市,230032;安徽医科大学,药理学教研室,安徽省合肥市,230032【正文语种】中文【中图分类】R2【相关文献】1.黄蜀葵花总黄酮联合格列吡嗪对糖尿病肾病模型大鼠的治疗作用 [J], 李萌;宋春泉;王帅;薛云;马玉奎2.黄蜀葵花总黄酮对大鼠湿热型慢性肾炎的作用及其对红细胞免疫黏附功能的影响[J], 胡翠云;戴敏;陈君君;宣自华3.黄蜀葵花总黄酮预处理对大鼠脑缺血再灌注性损伤的保护作用 [J], 文继月;陈志武4.新疆圆柏总黄酮对大鼠佐剂性关节炎的防治作用 [J], 刘涛;许芳;赵军;由淑萍;徐芳5.黄蜀葵花总黄酮对实验性高血糖大鼠的作用及机制初探 [J], 周晓隆;陈志武因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
油菜花粉总黄酮体外抗氧化及其对溃疡性结肠炎小鼠的保护作用黄小强;贾安;刘顺和;黄涛;史启蒙;胡香玉;程沛璇;潘佳茵【期刊名称】《中成药》【年(卷),期】2024(46)5【摘要】目的探讨油菜花粉总黄酮体外抗氧化活性及其对DSS诱导的溃疡性结肠炎(UC)小鼠的保护作用。
方法通过DPPH·、OH·、ABST·、Fe^(3+)还原能力检测油菜花粉总黄酮体外抗氧化活性。
将40只昆明雄性小鼠分为正常组、模型组以及油菜花粉总黄酮低、高剂量组(50、100 mg/kg),每组10只,除正常组外,其余各组小鼠连续7 d给予3%DSS构建UC模型,同时灌胃给予相应药物,正常组和模型组灌胃给予蒸馏水。
期间观察小鼠一般体征、DAI评分、结肠长度,ELISA法检测小鼠血清TNF-α、IL-6水平,同时检测结肠组织中SOD活性和MDA水平,HE染色观察结肠组织病理学情况及评分。
结果油菜花粉总黄酮具有较强的抗氧化活性。
与模型组比较,油菜花粉总黄酮各剂量组小鼠结肠长度均较长,DAI评分均降低(P<0.05),TNF-α、IL-6、MDA水平降低(P<0.05),SOD活性升高(P<0.05),油菜花粉总黄酮能够缓解结肠组织损伤,降低病理组织学评分。
结论油菜花粉总黄酮对DSS诱导的UC小鼠具有一定的保护作用,其机制可能与抑制炎症因子分泌和调节机体氧化应激有关。
【总页数】5页(P1688-1692)【作者】黄小强;贾安;刘顺和;黄涛;史启蒙;胡香玉;程沛璇;潘佳茵【作者单位】黄河科技学院医学院【正文语种】中文【中图分类】R285.5【相关文献】1.油菜蜂花粉总黄酮对体外TBHP诱导细胞氧化损伤的保护作用2.车前子总黄酮和总多糖粗提物的体外抗氧化性能及其对脑神经细胞的保护作用3.楮果总黄酮体外抗氧化及对CCl4致脑损伤小鼠的保护作用4.破壁油菜花粉总黄酮含量的测定及体外抗氧化作用的研究5.川芎总黄酮提取优化及小鼠体外抗氧化作用因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
黄蜀葵花不同开放程度对药材中总黄酮及其糖苷类成分含量及其提取率的影响郭小藤1ꎬ刘燕2ꎬ张清华1ꎬ尚立霞1(1.山东省药学科学院泰山学者重点实验室ꎬ山东济南250101ꎻ2.山东省药学科学院山东省生物药物重点实验室ꎬ山东济南250101)摘要:目的㊀研究黄蜀葵花不同开放程度对黄蜀葵花药材中总黄酮㊁金丝桃苷㊁异槲皮苷含量及其醇提取物的影响ꎮ方法㊀采用紫外-可见分光光度法测定黄蜀葵花药材中总黄酮含量ꎬ采用高效液相色谱法测定黄蜀葵花药材中金丝桃苷和异槲皮苷的含量ꎬ并比较黄蜀葵花药材醇提转移率ꎬ评价不同开放程度样品之间的差异ꎮ结果㊀完全开放的黄色黄蜀葵花中各成分含量均较高ꎬ醇提转移率高㊁油层较少ꎬ半开放及未开放黄绿色的黄蜀葵花中各成分均偏低ꎬ醇提转移率较低㊁油层较多ꎮ结论㊀黄蜀葵花药材宜在花期内完全开放后采收ꎬ颜色以亮黄色为最佳ꎬ本研究为各地黄蜀葵花药材的进一步开发利用提供了质量控制依据ꎮ关键词:黄蜀葵花ꎻ不同开放程度ꎻ总黄酮ꎻ金丝桃苷ꎻ异槲皮苷ꎻ提取率中图分类号:R927.2㊀文献标识码:A㊀文章编号:2095-5375(2022)01-0026-005doi:10.13506/j.cnki.jpr.2022.01.005EffectsofdifferentfloweringdegreesofAbelmoschusmanihotonflavonoidsandextractionrateGUOXiaoteng1ꎬLIUYan2ꎬZHANGQinghua1ꎬSHANGLixia1(1.KeyLaboratoryofTaishanScholarꎬShandongAcademyofPharmaceuticalScienceꎬJinan250101ꎬChinaꎻ2.ShandongProvincialKeyLaboratoryofBiopharmaceuticalsꎬShandongAcademyofPharmaceuticalScienceꎬJinan250101ꎬChina)Abstract:Objective㊀ToresearchtheeffectsofdifferentfloweringdegreesofAbelmoschusmanihot(L.)Mediconthecontentsoftotalflavonoidsꎬhyperosideꎬisoquercitrinandtheethanolextracts.Methods㊀ThecontentoftotalflavonoidsinA.manihot(L.)MedicwasdeterminedbyUV-VisspectrophotometryꎬandthecontentsofhyperosideandisoquercitrinweredeterminedbyHPLC.TheethanolextractiontransferratesofA.manihot(L.)Medicwerecomparedtoevaluatethediffer ̄encesamongsampleswithdifferentflowingdegrees.Results㊀Thecontentofeachcomponentinfully-opened-yellowflowerwashigherꎬthealcoholextractiontransferratewashigherandtheoillayerwasless.Thecontentofeachcomponentinsemi-openedandunopenedyellow-greenflowerwaslowerꎬthealcoholextractiontransferratewaslowerandtheoillayerwasmorethanothers.Conclusion㊀TheA.manihotshouldbeharvestedafterfullopeningduringthefloweringperiodꎬandbrightyellowisthebestcolor.ThisstudyprovidedqualitycontrolbasisforthefurtherdevelopmentandutilizationofA.manihotinvariousregions.Keywords:AbelmoschusmanihotL.MedicꎻDifferentfloweringdegreeꎻTotalflavonoidsꎻHyperosideꎻIsoquercitrinꎻEx ̄tractionrate㊀㊀黄蜀葵花为锦葵科秋葵属植物黄蜀葵[Abelmoschusmanihot(L.)Medic.]的干燥花冠(带雄蕊及花柱)ꎬ味甘性寒ꎬ归肾及膀胱经ꎻ具有清利湿热㊁消肿解毒的功效ꎻ内服用于湿热壅遏和淋浊水肿ꎻ外治痈疽肿毒ꎬ水火烫伤[1]ꎮ它作为药用始于宋代[2]ꎬ其后历代本草均有记载ꎬ民间应用历史悠久ꎬ并收载于各版«中国药典»以及江苏㊁山东等一些地方药材标准中ꎮ黄蜀葵花原产于我国南方ꎬ喜温暖湿润ꎬ现㊀基金项目:药物分析与质量控制中心创新能力建设项目(山东省企业重大技术创新及产业化项目)㊀作者简介:郭小藤ꎬ女ꎬ主管药师ꎬ研究方向:中药新药研究与开发ꎬE-mail:ghaut@126.com除西北地区外ꎬ全国各地均有栽培ꎬ主要产区有江苏㊁浙江以及安徽等[3-4]ꎮ黄蜀葵花含有上千种化合物ꎬ主要包括黄酮类㊁还原糖类㊁鞣质㊁甾醇类㊁多糖类化合物以及其他成分ꎬ其中黄酮类化合物为黄蜀葵花的主要活性成分ꎬ黄酮类成分中又以金丝桃苷和异槲皮苷含量最高[5-8]ꎮ药理学研究表明ꎬ黄蜀葵花的黄酮类成分具有保护心㊁脑缺血ꎬ改善肝㊁肾功能以及修复口腔黏膜溃疡等作用[9-10]ꎮ临床应用黄蜀葵花及其总黄酮治疗多种口腔炎症㊁慢性支气管炎ꎬ止痛效果显著ꎬ对慢性肾小球肾炎有明显疗效[11]ꎮ中药材的采收㊁加工是其生产和品质形成的重要环节ꎬ对确保中药材质量和临床疗效有着十分重要的意义ꎮ历版«中国药典»仅规定黄蜀葵花于夏㊁秋二季花开时采摘ꎬ及时干燥ꎮ但目前关于黄蜀葵花开放程度对药材质量影响的相关报道尚少ꎮ因此ꎬ为了保证黄蜀葵花药材质量的优质和均一ꎬ本研究以金丝桃苷和异槲皮苷为对照品ꎬ采用紫外-可见分光光度法和高效液相色谱法对黄属葵花药材中总黄酮㊁金丝桃苷和异槲皮苷成分进行含量测定ꎬ同时采用正交试验确定的总黄酮提取最佳工艺ꎬ考察药材的提取率ꎬ评价黄蜀葵花不同开放程度时药材的质量ꎬ为黄蜀葵花的合理开发及利用提供了科学依据ꎮ1㊀仪器与试药1.1㊀仪器设备㊀Waterse2695高效液相色谱仪(2998PDA二极管阵列检测器ꎬWatersEmpower工作站ꎬ均为美国Waters公司)ꎻAgilent8454UV-Vis分光光度计(美国安捷伦)ꎻMettlerXS-205电子分析天平(瑞士梅特勒-托利多)ꎻDNT-0.1/00多功能提取浓缩机组(浙江温兄机械阀业有限公司)ꎻEYELAN-1100旋转蒸发仪(上海爱朗仪器有限公司)ꎻKQ2200DA型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)ꎮ1.2㊀试药㊀金丝桃苷对照品(批号:111521-201809ꎬ含量:94.9%ꎬ中国食品药品检定研究院)ꎻ异槲皮苷对照品(批号:111809-201804ꎬ含量:97.2%ꎬ中国食品药品检定研究院)ꎻ黄蜀葵花药材产地均为江苏ꎬ经山东省药学科学院泰山学者重点实验室鉴定为锦葵科植物黄蜀葵[Abelmoschusmanihot(L.)Medic.]的干燥花ꎻ乙腈为色谱纯ꎬ磷酸为优级纯ꎬ其他试剂均为分析纯ꎬ超纯水为自制ꎮ2㊀方法与结果2.1㊀性状㊀黄蜀葵花药材的外观性状是其质量评价的重要部分ꎬ由于黄蜀葵花不属于大宗药材ꎬ市售黄蜀葵花药材外观性状差异较大ꎬ因此本研究对黄蜀葵花药材的花形及开放程度㊁花色进行了观察ꎬ并考察了外观性状与含量之间的相关性ꎮ江苏是黄蜀葵花药材种植规模较大的省份ꎬ花期为8 10月ꎬ本试验选用的药材均为江苏种植且在花期内不同开放程度的药材ꎮ经过对6批药材样品外观性状的观察ꎬ发现其花形基本分为全开放形或半开放形㊁未开放螺旋卷状形等开放程度ꎻ花色分为亮黄色或黄色㊁黄色偏绿等颜色ꎮ其中全开放的花ꎬ花瓣大而舒展ꎬ花色为亮黄色ꎻ半开放的花ꎬ花瓣没有完全展开ꎬ花色多为黄色ꎻ未开放的花ꎬ花形为卷曲螺旋状ꎬ外层花瓣呈浅绿色ꎬ结果见表1㊁图1~2ꎮ表1㊀黄蜀葵花药材来源及外观性状药材编号产地开放程度花色S1江苏盐城未开放螺旋卷形黄色偏绿S2江苏盐城未开放螺旋卷形黄色偏绿S3江苏淮安未开放螺旋卷形黄色偏绿S4江苏泰州未开放螺旋卷形黄色偏绿S5江苏无锡未开放螺旋卷形黄色偏绿S6江苏东台半开放形黄色S7江苏宜兴半开放形黄色S8江苏徐州半开放形黄色S9江苏宿迁半开放形黄色S10江苏盐城半开放形黄色S11江苏苏州全开放形亮黄色S12江苏宿迁全开放形亮黄色S13江苏盐城全开放形亮黄色S14江苏盐城全开放形亮黄色S15江苏淮安全开放形亮黄色A.全开放形ꎻB.半开放形ꎻC.未开放螺旋卷形图1㊀黄蜀葵花药材不同花形样品A.亮黄色ꎻB.黄色ꎻC.黄色偏绿图2㊀黄蜀葵花药材不同花色样品2.2㊀黄蜀葵花药材的提取㊀分别取不同开放程度的黄蜀葵花药材各4kgꎬ加85%乙醇回流提取两次ꎬ第一次12倍量ꎬ第二次10倍量ꎬ每次提取1hꎬ提取液滤过ꎬ滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.18~1.20(60ħ)ꎮ将醇提浓缩液静置16~20hꎬ撇去上层油ꎬ即得醇提浸膏ꎮ分别称定醇提浸膏和油层的重量ꎬ计算本品醇提浸膏得率ꎬ结果见表2ꎮ㊀㊀全开放的黄蜀葵花提醇提出膏率最高ꎬ油层最少ꎻ半开放的黄蜀葵花出膏率略低于全开放的花ꎬ去油率偏高ꎻ未开放的黄蜀葵花醇提浸膏出膏率最低ꎬ去油率高且油层结实ꎮ表2㊀黄蜀葵花药材提取结果药材编号醇提浸膏重量/kg醇提出膏率(%)去油率(%)油层状态S11.8446.008.18结实S21.9649.008.37结实S32.0250.508.01结实S41.8646.507.65结实S51.9448.507.97结实S62.3157.755.41较松散S72.2756.755.69较松散S82.1253.005.27较松散S92.0852.005.88较松散S102.1954.755.48较松散S112.3358.253.96薄而松散S122.3659.004.65薄而松散S132.4360.753.49薄而松散S142.3759.254.13薄而松散S152.4561.253.73薄而松散S1~S5平均1.9248.108.04S6~S10平均2.1954.855.55S11~S15平均2.3959.703.992.3㊀总黄酮含量测定2.3.1㊀供试品溶液的制备㊀取不同开放程度的黄蜀葵花药材样品粉末(过四号筛)0.5gꎬ每个样品各2份ꎬ精密称定ꎬ置圆底烧瓶中ꎬ精密加入甲醇100mLꎬ称定重量ꎬ加热回流2hꎬ放冷ꎬ再称定重量ꎬ用甲醇补足减失的重量ꎬ摇匀ꎬ滤过ꎬ取续滤液备用ꎮ取不同批次的醇提取样品0.15gꎬ置25mL量瓶中ꎬ精密称定ꎬ加甲醇20mLꎬ超声处理20minꎬ放冷ꎬ加甲醇至刻度ꎬ摇匀ꎬ离心10minꎬ取上清液备用ꎮ2.3.2㊀对照品溶液的制备㊀取金丝桃苷对照品适量ꎬ精密称定ꎬ加甲醇制成每1mL含金丝桃苷80μg的溶液ꎬ即得ꎮ2.3.3㊀测定波长的选择㊀精密量取对照品溶液3mLꎬ置25mL量瓶中ꎬ加50%甲醇稀释至刻度ꎬ摇匀ꎻ精密量取供试品溶液1mLꎬ置25mL量瓶中ꎬ加50%甲醇稀释至刻度ꎬ摇匀ꎻ以50%甲醇为空白ꎬ在200~800nm范围内扫描吸收曲线ꎮ结果表明ꎬ金丝桃苷对照品与供试品溶液在256nm波长处均有相同的最大吸收ꎮ2.3.4㊀标准曲线的绘制㊀精密量取对照品溶液1㊁2㊁3㊁4㊁5㊁6mLꎬ分别置25mL量瓶中ꎬ加50%甲醇稀释至刻度ꎬ摇匀ꎮ以50%甲醇为空白ꎬ照紫外-可见分光光度法在256nm波长处测定吸光度ꎬ以吸光度为纵坐标ꎬ浓度为横坐标ꎬ绘制标准曲线ꎮ得回归方程:C=0.0521A-0.0011(R2=0.99999)ꎬ线性范围为3.0368~18.2210μg mL-1ꎮ2.3.5㊀含量测定㊀精密量取药材供试品溶液1.0mLꎬ置25mL量瓶中ꎬ精密量取醇提浸膏供试品溶液1.0mLꎬ置50mL量瓶中ꎬ分别加50%甲醇稀释至刻度ꎬ摇匀ꎬ在256nm处测定吸光度ꎬ从标准曲线上读出供试品溶液中金丝桃苷的量ꎬ计算总黄酮含量ꎮ结果见表3ꎮ㊀㊀全开放的黄蜀葵花样品中总黄酮含量及醇提转移率最高ꎬ半开放的黄蜀葵花总黄酮含量及醇提转移率略低于全开放的花ꎬ未开放的黄蜀葵花总黄酮含量和醇提转移率均最低ꎬ醇提浸膏中总黄酮含量趋势与药材基本一致ꎮ表3㊀不同开放程度黄蜀葵花及醇提浸膏总黄酮含量测定结果(%ꎬn=2)样品编号黄蜀葵花(%)醇提浸膏/mg g-1总黄酮转移率(%)S13.6763.0879.07S23.7662.2981.17S33.9262.1180.01S44.0366.5976.83S53.8964.1279.94S64.5566.3984.26S75.1173.1681.25S84.2866.1381.89S94.3169.5583.91S104.6270.0483.00S115.0475.4187.15S124.4666.5788.07S134.7468.2187.42S144.6166.1485.01S155.5078.5587.48S1~S5平均3.8563.6479.41S6~S10平均4.5769.0582.86S11~S15平均4.8770.9887.022.4㊀金丝桃苷㊁异槲皮苷含量测定2.4.1㊀色谱条件㊀ZorbaxSB-C18(4.6mmˑ250mmꎬ5μm)ꎻ流动相:乙腈-0.1%磷酸溶液(15ʒ85)ꎬ流速1.0mL min-1ꎬ检测波长:360nmꎬ进样量:10μLꎬ柱温:35ħꎮ2.4.2㊀混合对照品溶液的制备㊀取金丝桃苷和异槲皮苷对照品适量ꎬ精密称定ꎬ加甲醇制成每1mL含金丝桃苷100μg㊁异槲皮苷60μg的混合溶液ꎬ即得ꎮ2.4.3㊀供试品溶液的制备㊀取样品粉末(过四号筛)0.2gꎬ精密称定ꎬ置25mL容量瓶中ꎬ加入甲醇15mL超声处理(功率100Wꎬ频率40kHz)30minꎬ放冷ꎬ加甲醇稀释至刻度ꎬ摇匀ꎬ滤过ꎬ取续滤液作为供试品溶液ꎮ取不同批次的醇提取样品0.15gꎬ置25mL量瓶中ꎬ精密称定ꎬ加甲醇20mLꎬ超声处理30minꎬ放冷ꎬ加甲醇至刻度ꎬ摇匀ꎬ离心10minꎬ取上清液作为供试品溶液ꎮ2.4.4㊀专属性试验㊀分别精密吸取混合对照品溶液㊁供试品溶液各10μLꎬ注入液相色谱仪ꎬ记录色谱图(见图3)ꎮ供试品溶液的色谱图中ꎬ在与对照品溶液的色谱图相应的位置上ꎬ有相同保留时间的色谱峰ꎬ且金丝桃苷峰㊁异槲皮苷峰与相邻峰之间的分离度均符合要求ꎮA.混合对照品溶液ꎻB.供试品溶液㊀1.金丝桃苷2.异槲皮苷图3㊀黄蜀葵花高效液相色谱图2.4.5㊀样品含量测定㊀分别取黄蜀葵花不同部位药材粉末及不同批次的醇提取样品ꎬ按 2.4.3 项下方法制备供试品溶液ꎬ按 2.4.1 项下色谱条件测定ꎬ按外标法以峰面积计算金丝桃苷㊁异槲皮苷含量ꎬ结果见表4ꎮ表4㊀不同开放程度黄蜀葵花及醇提浸膏金丝桃苷㊁异槲皮苷含量测定结果(%ꎬn=2)样品编号黄蜀葵花(%)醇提浸膏/mg g-1金丝桃苷异槲皮苷金丝桃苷异槲皮苷S10.6460.4319.9867.376S20.6340.3058.3636.675S30.7020.41210.8516.452S40.6670.3879.1845.134S50.6380.39910.5426.845S60.7530.4109.5387.318S70.8930.43210.5799.237S80.7210.4579.7448.465S90.7610.41810.0467.466S100.7480.43010.7537.430S110.8700.44113.5878.426S120.6980.46811.4257.167S130.9120.50712.0458.128S140.8950.48310.4588.385S150.8630.49112.8569.450S1~S5平均0.6570.3879.7856.496S6~S10平均0.7750.42910.1327.983S11~S15平均0.8480.47812.0748.311㊀㊀全开放的黄蜀葵花样品中金丝桃苷㊁异槲皮苷平均含量最高ꎬ半开放的黄蜀葵花中两成分平均含量略低于全开放的花ꎬ未开放的黄蜀葵花中两成分平均含量均最低ꎬ醇提浸膏中两成分含量趋势与药材基本一致ꎮ3 讨论与结论3.1㊀提取溶剂及方法考察㊀黄酮类成分是黄蜀葵花的有效部位ꎬ由于黄酮类成分在水中溶解度不高ꎬ多采用适当浓度的甲醇或乙醇作为溶剂ꎬ采用加热回流㊁超声或索氏等方法进行提取[12-13]ꎮ由于索氏和超声提取仅适合少量药材的提取ꎬ且甲醇的毒性较大ꎬ而乙醇具有价格低㊁易回收㊁污染小等优点ꎬ因此本研究采用的乙醇回流提取的方法最适合放大生产ꎮ在醇提取工艺研究中ꎬ以总黄酮的含量为指标ꎬ设计乙醇浓度㊁乙醇用量㊁提取时间㊁提取次数4个因素进行正交试验ꎬ考察对总黄酮提取率的影响ꎬ最终选定了最佳的提取工艺条件ꎮ3.2㊀药材性状的选择㊀黄蜀葵花药材醇提液浓缩静置后ꎬ提取浸膏上层有一层油状物ꎬ分析是由花托中的叶绿素及花蕊中的多糖㊁果胶等成分组成[14]ꎮ本研究通过试验对比发现未开放及半开放的黄蜀葵花药材醇提去油率较高ꎬ分析是由于未完全开放的花瓣将花蕊包裹ꎬ保留了较多的多糖及果胶成分ꎬ不利于有效部位的分离纯化ꎮ因此在对黄蜀葵花总黄酮有效部位分离纯化时ꎬ应优选完全开放的花进行提取ꎬ同时对药材的花托比例进行限定ꎮ3.3㊀含量测定指标的选择㊀目前对黄蜀葵花药材含量测定的文献报道多为单独测定总黄酮有效部位或单独测定金丝桃苷㊁异槲皮苷等单成分含量[15-16]ꎮ本研究不仅对黄蜀葵花药材不同部位的总黄酮总量进行了测定ꎬ同时对总黄酮中含量及活性最高的指标成分金丝桃苷㊁异槲皮苷进行了定量分析ꎬ结果表明黄蜀葵花中总黄酮含量较高时ꎬ金丝桃苷和异槲皮苷含量也较高ꎬ二者呈一定相关性ꎬ更全面的评价了黄蜀葵花药材的质量ꎬ为进一步研究有效部位与单成分之间的相关性和药理药效的机理提供了数据支持ꎮ3.4㊀不同开放程度药材含量分析㊀黄蜀葵花中总黄酮㊁金丝桃苷及异槲皮苷含量趋势为:黄色全开放花>黄色半开放花>偏绿色未开放花ꎮ全开放的黄蜀葵花ꎬ颜色为亮黄色ꎬ花瓣大而舒展ꎬ有效成分含量高ꎬ提取转移率高ꎬ去油率低ꎻ未开放的黄蜀葵花ꎬ花瓣卷曲呈螺旋状ꎬ由于其尚未开放即进行采摘ꎬ花朵接收的阳光光照不足ꎬ其外层花瓣呈浅绿色ꎬ有效成分含量偏低ꎬ提取转移率低ꎻ半开放的黄蜀葵花ꎬ其颜色为黄色ꎬ花瓣没有完全展开ꎬ有效成分的含量居于前两者之间ꎮ从上述结果可以看出ꎬ黄蜀葵花药材的质量与其开放程度密切相关ꎬ由于该花只有一天开放时间ꎬ因此采收时间宜在晴天的白天花朵完全开放后当天采摘ꎬ过早采摘未开放的花将影响药材的质量ꎮ在黄蜀葵花15个样品中ꎬS1~S5样品颜色较其他样品偏绿ꎬ同时各成分含量较其他样品偏低ꎬ说明黄蜀葵花中黄酮类成分的含量可能与其颜色有一定的相关性ꎬ有待进一步研究ꎮ3.5㊀结论㊀总黄酮㊁金丝桃苷和异槲皮苷作为黄蜀葵花中主要活性成分ꎬ其含量高低直接影响黄蜀葵花的内在质量及临床疗效ꎮ本研究以总黄酮有效部位㊁金丝桃苷及异槲皮苷和醇提转移率为检测指标ꎬ对不同开放程度的黄蜀葵花药材进行分析研究ꎬ结果表明ꎬ黄蜀葵花药材不同的开放程度对总黄酮㊁金丝桃苷和异槲皮苷的含量均有影响ꎬ亮黄色全开放花中总黄酮㊁金丝桃苷及异槲皮苷的含量最高ꎮ参考文献:[1]㊀国家药典委员会.中华人民共和国药典2015年版(一部)[S].北京:中国医药科技出版社ꎬ2015.[2]李时珍.本草纲目[M].北京:人民卫生出版社ꎬ1982:1046.[3]陈刚.黄蜀葵花的化学成分和降糖活性研究[D].北京:中国人民解放军军事医学科学院ꎬ2006.[4]梁文波ꎬ谭柳燕ꎬ严方明.中药材黄蜀葵的研究现状及存在问题[J].农业研究与应用ꎬ2012(5):48-52. 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作者简介:黎望,女,江南大学在读硕士研究生。通信作者:孙培冬(1967-),女,江南大学副教授,硕士。
E-mail:sunpeidong2004@126.com收稿日期:2016—12—22
第33卷第2期2 0 1 7年2月食品与机械OOD&MACHINERYVol.33,No.2Feb.2 0 1 7
黄蜀葵花黄酮抗氧化性及对DNA氧化损伤的保护作用The antioxidant activities and protection on DNA oxidative damageof flavonoid from the flowers of
Abelmoschusmanihot
黎 望1,2LI Wang1,2 孙培冬1,2SUN Pei-dong1,2 季晓彤1,2JI Xiao-tong1,2 路 帅1,2
LU Shuai1,2(1.江南大学食品胶体与生物技术教育部重点实验室,江苏无锡 214122;2.江南大学化学与材料工程学院,江苏无锡 214122)(1.Ministry of Education,School of Chemical and Material Engineering,Jiangnan University,Wuxi,Jiangsu214122,China;2.The Key Laboratory of Food Colloids and Biotechnology,Jiangnan University,Wuxi,Jiangsu 214122,China)
摘要:采用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇对黄蜀葵花乙醇提取物进行分级萃取,得到石油醚相、乙酸乙酯相、正丁醇相和水相4个不同极性成分。采用DPPH·清除、·OH清除和H2O2
清除试验考察了其抗氧化活性,研究了正丁醇相对
·OH和H2O2诱导DNA氧化损伤的保护作用,并利用
HPLC—MS对正丁醇中黄酮类物质进行了鉴定。结果表明:黄蜀葵花黄酮主要富集于乙酸乙酯相和正丁醇相;乙酸乙酯相对DPPH·的清除能力最好,IC50值为0.038 6mg/mL
,
而正丁醇相对·OH和H2O2的清除能力较好,IC50值分别为0.225 0,0.575 7mg/mL;正丁醇相对·OH和H2O2诱导的DNA氧化损伤都有保护作用;正丁醇相中含有11种黄酮类化合物。关键词:黄蜀葵花;黄酮;萃取相;抗氧化活性;DNA氧化
损伤Abstract:The ethanol extracts of flowers fromAbelmoschus manihotwas extracted by petroleum ether、ethyl acetate and n-butyl alcohol,and four different polar portions were obtained.The scavenging effectof different phases on DPPH·,·OH and H2O2were studied to re-
search the antioxidant activities of each phase.Moreover,the protec-
tion of n-butyl alcohol phase on DNA oxidative damage was alsostudied,and the flavonoids component was identified by HPLC-MS.The results showed that the ethyl acetate phase had the best scaven-
ging effect on DPPH·,with IC50value 0.038 6mg/mL.However,
the n-butyl alcohol phase had scavenge·OH and H2O2best,andthe IC50values were 0.225 0and 0.575 7mg/mL,respectively.The
n-butyl alcohol phase was proved to show protective effect in somedegree on DNA oxidative damage.,and totally 11kinds of flavonoidswere found in the n-butyl alcohol phase.Keywords:Abelmoschus manihot flower;flavonoids;extracts;an-
tioxidant activity;DNA oxidative damage
自由基是人体生物反应中产生的一类代谢产物,正常情况下处于动态平衡,但由于大气污染、紫外线照射以及不良生活习惯等因素,常使人体内自由基过剩,从而引发DNA氧化损伤,导致衰老和各种疾病。大量研究[1-3]表明,黄酮类化合物具有较强的抗氧化作用,能够通过多种方式有效地清除自由基,从而预防、治疗疾病,减缓人体衰老等。而天然抗氧化剂的应用在食品、医药和化妆品行业日益凸显其优势。黄蜀葵花为锦葵科秋葵属植物黄蜀葵的干燥花。黄蜀葵花含有黄酮类、还原糖类、鞣质、长链烃类化合物、多糖类化合物以及其他化学成分[4],
其中黄酮类化合物为黄蜀葵花
主要活性成分。研究表明黄蜀葵花黄酮具有降血糖[5]、
改善
肾纤维化[6]、保护心肌损伤[7]和促进血管新生[8]等生物活性,但有关黄蜀葵花黄酮对DNA氧化损伤的保护作用尚未见报道。本研究拟利用不同极性溶剂对黄蜀葵花乙醇提取物进行分级萃取,得到不同极性部位,并通过清除DPPH
·、
·OH和H2O
2
试验进行抗氧化活性筛选,对活性较好的部
位进行·OH和H2O2诱导的DNA氧化损伤的研究,并对该组分的黄酮类物质进行鉴定,为黄蜀葵花黄酮的药用机理研究提供理论依据。
1
材料与方法
1.1
材料与试剂
黄蜀葵花:产地河南,购自亳州市芝春堂药材采购站;531芦丁标准品:纯度≥98%,上海源叶生物科技有限公司;质粒pBR322DNA:宝生物工程有限公司;Goldview染料:上海宝曼生物科技有限公司;DPPH(1,1-二苯基苦酰基苯肼):美国Sigma公司;其他试剂:分析纯,国药集团化学试剂有限公司。1.2 仪器与设备电子天平:ME203E型,美国Mettler-Toledo公司;超声波清洗仪:KH-100B型,昆山禾创超声仪器有限公司;恒温水浴锅:HH-S2型,上海亚荣生化仪器厂;旋转蒸发仪:RE-5203型,上海亚荣生化仪器厂;循环水式真空泵:SHB-Ⅲ型,郑州长城科工贸有限公司;双光束紫外可见分光光度计:U-1901型,北京普析通用仪器有限公司;荧光分光光度计:Cary Esclipse型,美国Varian公司。1.3 试验方法1.3.1 黄蜀葵花黄酮样品的制备 称取黄蜀葵花粉末,用60%乙醇以120(g/mL)的料液比在50℃下超声提取30min,抽滤,将滤液减压浓缩得浸膏。将浸膏冷冻干燥得黄蜀葵花粗提物(ACF),再将其用适量水分散,依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行少量多次的萃取,直至萃取相颜色较浅,将各相浓缩除尽溶剂后,干燥得到石油醚相(AFP)、乙酸乙酯相(AFE)、正丁醇相(AFB)和水相(AFW)4部分萃取相固体,测各相得率及黄酮含量。将各萃取相均用水超声溶解,并配制成不同浓度样品备用。Y=M1M0×100%,(1)式中:Y———得率,%;M1———各萃取相质量,g;M0———粗提取物质量,g。1.3.2 黄酮含量的测定 以芦丁为标准品,采用NaNO2—Al(NO3)3—NaOH法[9]得到标准曲线A=11.645 71C-0.003 04(R2=0.999 7)。将各萃取相配制成相应浓度,分别测定其吸光度,根据式(2)计算黄酮含量。X=C×N×VM,(2)式中:X———黄酮含量,mg/g;C———稀释后样品溶液黄酮浓度,mg/mL;N———稀释倍数;V———体积,mL;M———样品质量,g。1.3.3 黄蜀葵花各萃取相对DPPH·清除能力测定 参考文献[10],在10mL离心管中加入1mL不同浓度的萃取相溶液和4mL 0.04mg/mL的DPPH溶液,混合均匀,室温下避光反应30min,在520nm处测定吸光度,以Vc为阳性对照。S1=1-A1-A2A0()×100%,(3)式中:S1
———DPPH清除率,%;
A1
———1mL萃取相溶液+4mL DPPH溶液的吸光度;
A2
———1mL萃取相溶液+4mL乙醇的吸光度;
A0———1mL H2O+4mL DPPH
溶液的吸光度。
1.3.4 黄蜀葵花各萃取相对·OH清除能力测定 参考文献[11],在10mL离心管中依次加入1mL 0.75mmol/L邻
二氮菲溶液、2mL磷酸缓冲溶液(pH=7.4)、1mL
0.75mmol/L的FeSO4溶液、1mL不同浓度萃取相溶液,最后加入1mL 0.01%H2O2,振荡摇匀,在37℃下水浴1h
,于
510nm处测吸光度,以Vc
为阳性对照。
S2=A2-A1A3-A1×100%,(4
)
式中:S2
———·OH清除率,%;
A1
———1mL邻二氮菲+2mL磷酸缓冲溶液+1mL
FeSO4+1mL H2O+1mL H2O2
的吸光度;
A2
———1mL邻二氮菲+2mL磷酸缓冲溶液+1mL
FeSO4+1mL萃取相溶液+1mL H2O2
的吸光度;
A3
———1mL邻二氮菲+2mL磷酸缓冲溶液+1mL
FeSO4+2mL H2O的吸光度。1.3.5 黄蜀葵花各萃取相对H2O2
清除能力测定 参考文
献[12],在10mL离心管中加入40mmol/L H2O2磷酸缓冲溶液(pH=7.4)0.5mL,萃取相溶液0.5mL,用PBS(pH=
7.4)稀释到8mL,混匀,静置反应15min,在230nm处测其吸光度。
S3=(1-A1-A2A0)×100%,(5
)
式中:S3———H2O2清除率,%;
A1———0.5mL H2O2+0.5mL萃取相溶液+7mL PBS
的吸光度;A2
———0.5mL萃取相溶液+7.5mL PBS的吸光度;
A0———0.5mL H2O2+7.5mL PBS
的吸光度。
1.3.6 黄蜀葵花正丁醇相对·OH诱导DNA氧化损伤的保护作用 参考文献[13],在微量荧光比色皿中依次加入1μL
100ng/μL DNA、10μL 0.1mol/L(NH4)2Fe(SO4)2
溶液、
10μL 0.17mol/L的EDTA-2Na溶液、10μL 0.015%H2O2
溶液、10μL 10mg/mL VC溶液、10μL AFB溶液、40μL 1×