藻种培养：

小球藻的培养一、小球藻小球藻是单细胞植物，种类较多，多数生活在淡水中，少数生活在海洋里。

按植物学分类，小球藻属于小球藻纲绿藻目原球藻科生物，其体型小，直径一般为3～5μm，在显微镜下，需要放大400～600倍才能看到，我们肉眼看到的只不过是含有小球藻的绿色的水。

小球藻所含的营养成分很高，其蛋白质含量达到50%～60%（相当于花生米的2倍、鸡蛋的5倍），含脂肪10%～30%，还含有多种维生素。

小球藻的生物活性物质糖蛋白和多糖体的含量也相当高，这些生物活性物质具有增强人体免疫力、抗癌、降血压、抑制血糖上升、排除体内毒素和迅速恢复机体损伤等功能。

因此，小球藻的培养前景广阔。

作为培养原料的小球藻，可以到较清洁的池塘、水坑中采集绿色的水，在显微镜下鉴定，然后再用。

也可以向培养它的人索取。

1 容器的准备小规模的培养可用瓶、缸等，大规模的培养可用水泥池。

首先，要对所使用的容器进行消毒，一般用100mg/L的漂白粉水溶液浸泡，再用水冲刷数次。

(100mg/L的漂白粉水溶液的配制：①天平称量5g2%漂白粉澄清液；②定量转移至容量瓶中；③加水至1L；④混匀。

2％漂白粉上清液的配制法：取漂白粉2克，加少量水搅匀，再加水至100毫升，充分调匀后，待澄清后取上清液使用。

）2 培养液的准备（1）BG11液体培养基配方：Stock1 定容100mL 柠檬酸0.3g 柠檬酸铁胺0.3g EDTANa2 0.05gStock2 定容1000mL NaNO3 30g K2HPO4 0.78g MgSO4·7H2O 1.5gStock3 定容100mL CaCl2·2H2O 1.9g Stock4 定容100mL Na2CO3 2gStock5 定容1000mL H3BO3 2.86g MnCl2·4H2O 1.81g ZnSO4·7H2O 0.222gNa2MnO4·2H2O 0.391g CuSO4·5H2O 0.079g Co(NO3)2·6H2O 0.049gStock1 取用2mL Stock2 取用20mL Stock3 取用2mL Stock4 取用1mL Stock5 取用1mL 总定容1000mL（2）购买2000元/套，九种原液各200ml（稀释1000倍），10瓶。

一．编号
铜绿微囊藻（FACHB-912）、水华微囊藻（FACHB-1028）、螺旋藻（FACHB-901）
小球藻（FACHB-1028）
二．培养基及培养条件
（1）螺旋藻采用Zarrouk培养基，
藻种纯化：在Zarrouk 培养基中加入 1.5%琼脂粉，制成固体培养基平板，再将待分离纯化的藻液通过划线方法接种在平板上，置于培养箱中，29℃、光照强度2000 Lux下培养7 d。

从平板上挑取单藻落接入250 mL三角瓶中(含100 mL Z氏培养基)，于光照培养箱中静置培养，每天摇3 次，7 d 后作为实验备用藻种.
培养条件：温度30℃，光照4000 Lux，光暗比12:12。

（2）铜绿微囊藻、水华微囊藻、小球藻(绿藻)培养采用BG11培养基
培养条件：温度25℃，光照2000 Lux，光暗比12:12。

藻类的培养及认识海洋学院海洋本＊＊班：＊＊学号：＊＊指导老师：＊＊目录1.小球藻 (1)2.扁藻 (2)3.螺旋藻 (3)4.中肋骨条藻 (4)5.角毛藻 (5)6.海链藻 (5)7.金藻 (5)8.光合细菌 (6)1.小球藻培养基配方（1000ml）：Na2CO3 0.02 g、NaNO3 2.0 g、KH2 PO4 0.02 g、MgSO4 0.1 g、尿素量为0.8 g养殖条件：pH值6.0，光照强度4500lx，通气量1.5L/min营养成分（每100g）：水分6-7g、蛋白质50-65g、脂肪5-10g、碳水化合物10-20g、纤维素2-5g、叶绿素2-5g、矿物质5-7g、β-胡萝卜素100-200mg、小球藻生长因子2000-5000mg、维生素B1 1-3g、维生素B2 3-6mg、维生素B6 1-3mg、维生素B12 0.2-0.4mg、维生素C20-50mg、维生素E12-30mg、泛酸0.8-2mg、生物素3-20mg、叶酸3-10mg、烟酸10-30mg、胆碱60-160mg、肌醇6-20mg用途：1.只要提供单细胞小球藻种源，进入水体后可迅速繁殖，形成以单细胞小球藻为优势种群的绿色水体。

2.蛋白核小球藻具有较高的营养价值，可作为鱼苗，花白鲢，虾蟹，海参，大菱鲆，甲鱼等的开口饵料，减少饲料成本，提高水产动物的成活率。

3.可以更好的进行光合作用，增加水体溶氧，大大减少缺氧浮头。

4.消耗水体中的氨氮，亚硝酸盐等有害物质，改善水体环境。

2.扁藻培养基配方（1000ml）：硝酸钠100mg、磷酸二氢钾45mg、碳酸氢钠800mg、柠檬酸铁0.2mg、人尿2ml、改良f/2维生素溶液1ml、消毒海水1000ml养殖条件（亚心形扁藻）：1、盐度：亚心形扁藻对盐度的适应范围很广，在盐度为8-80的水中均能生长繁殖。

最适应的盐度范围在30-40之间。

2、温度：亚心形扁藻对温度的适应范围也较广，在7-30℃范围内均能生长繁殖，最适范围为20-28℃之间。

盐藻藻种培养：1．藻种培养设施：藻种的培养要在保种室中进行，保种室要求通风条件好，光线条件好，温度可控性好，保种室要配有空调、冰箱、具有人工光源的培养架等。

培养中常用培养仪器有显微镜、解剖镜等，容器有三角烧瓶、广口玻璃瓶等。

保种室要严格消毒，防止病菌的侵入。

2．容器、工具的消毒：进行单细胞藻类的纯培养，容器、工具、培养基都要进行严格灭菌，但一般生产性的单种培养，则只须达到消毒目的就可以了。

常用的消毒方法有高温消毒法和化学药品消毒法。

高温消毒法是利用高温杀死微生物的方法。

不耐高温的容器如塑料和橡胶制品等不能利用高温法消毒。

a、直接灼烧消毒接种环、镊子等金属小工具，试管口、瓶口等可以直接在酒精灯火焰上短暂灼烧消毒。

载玻片、小刀等则最好先蘸酒精，然后在酒精灯火焰上点燃，等器具上的酒精烧完，也就完成了灭菌操作。

b、煮沸消毒把容器、工具放入锅中，加水煮沸消毒，一般煮沸10-20分钟。

大型锥形瓶消毒，可在瓶口上放一普通的玻璃漏斗，再在漏斗上放一称量瓶盖，在锥形瓶内加少量淡水，置电炉上加热煮沸5-10分钟，可使整个瓶壁消毒。

消毒完毕即用消毒的纸或消毒的纱布包扎瓶口。

此法适合消毒小型的容器工具。

c、烘箱干燥消毒将玻璃容器、金属工具用清水洗干净后，放入烘箱。

关闭烘箱门，打开通气孔，接通电源加热。

当温度上升到120℃时，关闭通气孔，停止加热。

如果进行纯培养，容器必须灭菌，当温度上升到105℃时，关闭通气孔，继续加热至160℃，保持温度，恒温2小时，然后停止加热。

必须要等到温度下降到60℃以下，才能打开烘箱门。

有棉塞和纸包扎的容器、工具灭菌，不能超过180℃，以免烘焦。

化学药品消毒主要用于生产性大量培养中，大型容器、工具、水泥池等常用化学药剂消毒。

a、漂白粉消毒工业用漂白粉一般含有效氯25%~35%，消毒时按万分之1-3的含量配成水溶液，把容器、工具在溶液中浸泡半小时，再用消毒水冲洗3~4次即可。

b、酒精消毒酒精消毒常用于中小形容器和工具，方法是用纱布蘸70%酒精在容器、工具的表面涂抹即可。

小球藻的培养一、小球藻小球藻是单细胞植物，种类较多，多数生活在淡水中，少数生活在海洋里。

按植物学分类，小球藻属于小球藻纲绿藻目原球藻科生物，其体型小，直径一般为3～5μm，在显微镜下，需要放大400～600倍才能看到，我们肉眼看到的只不过是含有小球藻的绿色的水。

小球藻所含的营养成分很高，其蛋白质含量达到50%～60%（相当于花生米的2倍、鸡蛋的5倍），含脂肪10%～30%，还含有多种维生素。

小球藻的生物活性物质糖蛋白和多糖体的含量也相当高，这些生物活性物质具有增强人体免疫力、抗癌、降血压、抑制血糖上升、排除体内毒素和迅速恢复机体损伤等功能。

因此，小球藻的培养前景广阔。

作为培养原料的小球藻，可以到较清洁的池塘、水坑中采集绿色的水，在显微镜下鉴定，然后再用。

也可以向培养它的人索取。

1 容器的准备小规模的培养可用瓶、缸等，大规模的培养可用水泥池。

首先，要对所使用的容器进行消毒，一般用100mg/L的漂白粉水溶液浸泡，再用水冲刷数次。

(100mg/L的漂白粉水溶液的配制：①天平称量5g2%漂白粉澄清液；②定量转移至容量瓶中；③加水至1L；④混匀。

2％漂白粉上清液的配制法：取漂白粉2克，加少量水搅匀，再加水至100毫升，充分调匀后，待澄清后取上清液使用。

）2 培养液的准备（1）BG11液体培养基配方：Stock1 定容100mL 柠檬酸0.3g 柠檬酸铁胺0.3g EDTANa2 0.05gStock2 定容1000mL NaNO3 30g K2HPO4 0.78g MgSO4·7H2O 1.5gStock3 定容100mL CaCl2·2H2O 1.9g Stock4 定容100mL Na2CO3 2gStock5 定容1000mL H3BO3 2.86g MnCl2·4H2O 1.81g ZnSO4·7H2O 0.222gNa2MnO4·2H2O 0.391g CuSO4·5H2O 0.079g Co(NO3)2·6H2O 0.049gStock1 取用2mL Stock2 取用20mL Stock3 取用2mL Stock4 取用1mL Stock5 取用1mL 总定容1000mL（2）购买2000元/套，九种原液各200ml（稀释1000倍），10瓶。

微藻的实验室培养学生：林晓生学号：2120180414导师：杨缜教授一、藻类的概述藻类是原生生物界一类真核生物(有些也为原核生物，如蓝藻门的藻类）。

主要水生，无维管束，能进行光合作用。

藻类植物共约为2100属,27000种。

根据所含色素、细胞构造、生殖方法和生殖器官构造的不同，分为绿藻门、裸藻门、轮藻门、金藻门、黄藻门、硅藻门、甲藻门、蓝藻门、褐藻门和红藻门。

色素的颜色划分，藻可分为3类：绿藻、褐藻和红藻。

由于单胞藻具有利用太阳光能效率高、营养丰富、生长繁殖迅速、对环境的适应性强和容易培养等重要特性，因而受到重视。

微藻是一类在陆地、海洋分布广泛，营养丰富、光合利用度高的自养植物，细胞代谢产生的多糖、蛋白质、色素等，使其在食品、医药、基因工程、液体燃料等领域具有很好的开发前景。

二、微藻的营养模式和生长模式（二）、微藻的生长模式藻类在培养过程中，生长繁殖的速度，出现一定的起伏，这种生长模式可划分为五个时期（延缓期、指数生长期、相对生长下降期、静止期、死亡期）。

三、培养按培养的场所分室内培养和室外培养1）按培养基的形态分固体培养和液体培养 2）按培养的纯度分纯种培养和单种培养3）按藻液的流动情况分静止培养和循环流动水培养 4）按气体交换情况分充气培养和不充气培养 5）按藻液与外界接触程度分封闭式培养和开放式培养6）按培养规模和目的分小型培养、中继培养和大量培养方式简单介绍其中的四种方式：（1）纯培养和单种培养纯培养（axenic culture）：是无菌培养，指排除了包括细菌在内的一切生物的条件下进行的培养。

纯培养操作要求十分严格，要求有无菌室、超净台等设备，容器、工具、培养液等均须彻底灭菌。

培养成功率很高，是进行科学研究不可缺少的技术。

单种培养（single-species culture）：指区别于纯培养的不排除细菌存在的培养（可以是生产性的，也可以是非生产性的）（2）封闭式培养和开放式培养封闭式培养（closed culture）：指把培养液密封在透明的容器中，与外界空气隔离，暴露在阳光中，CO2完全采用人工供给的方法。

第1篇一、实验目的1. 掌握蓝藻的生物学特性及其培养方法。

2. 熟悉实验室无菌操作技术。

3. 观察蓝藻在不同培养条件下的生长情况，分析其生长规律。

二、实验原理蓝藻是一类原核生物，具有光合作用能力。

在适宜的培养条件下，蓝藻能够迅速繁殖。

本实验通过调整培养条件，观察蓝藻的生长情况，了解其生长规律。

三、实验材料1. 蓝藻藻种：集胞藻PCC68032. 培养基：BG11培养基3. 培养设备：恒温培养箱、光照培养箱、移液器、显微镜等4. 试剂：无菌水、葡萄糖、硝酸钠、磷酸二氢钾等四、实验方法1. 蓝藻藻种活化将蓝藻藻种接种于BG11培养基中，置于光照培养箱中培养，温度设置为25℃，光照强度为1000 lx，光照时间为12小时。

待藻种生长至适宜密度后，进行下一步实验。

2. 培养基配制根据BG11培养基配方，准确称取葡萄糖、硝酸钠、磷酸二氢钾等试剂，加入无菌水溶解，定容至1000 mL。

3. 培养条件设置（1）不同光照强度：设置光照强度分别为500 lx、1000 lx、1500 lx，其他培养条件相同。

（2）不同温度：设置温度分别为20℃、25℃、30℃，其他培养条件相同。

（3）不同营养盐浓度：设置硝酸钠浓度为0.5 g/L、1.0 g/L、1.5 g/L，其他培养条件相同。

4. 蓝藻生长观察在培养过程中，定期取样，观察蓝藻的生长情况，记录细胞密度、颜色、形态等特征。

5. 数据处理与分析对实验数据进行统计分析，绘制生长曲线，分析蓝藻在不同培养条件下的生长规律。

五、实验结果1. 不同光照强度对蓝藻生长的影响在不同光照强度下，蓝藻的生长情况如下：- 500 lx：蓝藻生长缓慢，细胞密度较低，颜色较淡。

- 1000 lx：蓝藻生长良好，细胞密度较高，颜色较深。

- 1500 lx：蓝藻生长速度较快，但部分细胞出现损伤，细胞密度较高，颜色较深。

2. 不同温度对蓝藻生长的影响在不同温度下，蓝藻的生长情况如下：- 20℃：蓝藻生长缓慢，细胞密度较低，颜色较淡。

小球藻的生产过程①藻种培养将优良的小球藻藻种接种到活性培养基，通过适量控制的人工光照，并在最适宜的温度条件下繁殖母种。

②无菌室内培养从活性培养基里取出繁殖后的小球藻母种转移到烧瓶里，给予它人工光照，并用含二氧化碳的空气进行培养。

小球藻在进行光合作用的同时会进一步分裂繁殖。

每当液体培养基中的小球藻达到一定浓度的时候，就转移到更大的烧瓶中继续培养。

③半露天母种培养经过在无菌室成长后的小球藻，此时还有如小宝宝一般经不起直接阳光照射，因此将其移至半露天户外培养池，以训练幼少的小球藻开始接受室外阳光，给予新的营养素，并且持续进行光合作用生长分裂。

从半露天培养直至收成的每个培养阶段，技术人员不分日夜，每60分钟会采取每个培养池的小球藻样本作分析，以控制各种细微的变化，也确保品质的稳定性。

④自然阳光培养池母种的培养结束，小球藻被转移至更大的主培养池。

主培养池从直径18公尺至46公尺共计数十个。

搅拌器在培养基不断的搅动，确保所有小球藻都能接受到阳光的照射以前达到小球藻该有的运动量。

主培养池的培养需要根据每天的气候变化来调整小球藻所需要的营养素等条件。

小球藻培养池是选在适度接近赤道，空气以及水质优良的地区，以保证小球藻各方面皆达到健康卫生的品质。

⑤过滤，脱水，洗涤和浓缩主培养池里生长的小球藻达到预定的浓度后就可以收获了。

首先，用筛检程式分离出培养过程中进入培养池里的杂质，然后反复进行洗涤和离心机脱水过程。

接着，小球藻再次被过滤，经过技术分析小球藻达到高纯净度以及营养素达到标准后，便将小球藻浓缩。

⑥细胞破壁处理虽然小球藻强壮的生命活力促使小球藻生成了人体所需的各种丰富营养素，但其强壮的生命活力也时同造成了其细胞壁坚韧而难以消化。

因此，小球藻的细胞壁需要经过破壁处理，利用压力的原理，不透过任何化学药剂也不破坏小球藻成分，成功确保破壁率达到95%以上。

⑦杀菌和叶绿素酶的去活化小球藻含有一种叶绿素酶，此类酶会产生一种导致光过的物质：脱镁叶绿钾酯-酸。

微藻的培养方式，有多种类型，现介绍一些主要的培养方式。

（一）纯培养与单种培养纯培养与单种培养是按培养的纯度来划分的。

纯培养：是指排除了细菌在内的一切生物的条件下进行的培养。

纯培养要求有无菌室、超净工作台等设备条件，容器、工具、培养液等必须严格灭菌。

纯培养是科研工作中不可缺少的技术。

单种培养：生产性的培养中，是不排除细菌存在的，为了区别于纯培养而称之为单种培养。

（二）一次培养、连续培养和半连续培养该类培养是按采收方式划分的。

一次培养：又称有限培养，是在一定的容器中，根据藻类需要加入无机和有机营养，配成培养液，把少量的藻种接种进去，然后在适宜于藻类生长的环境条件（温度、盐度、光照、PH值等）下培养，待藻液达到一定的密度后，便一次性采收或作进一步扩大培养。

连续培养：一般在室内进行，采用自动控温、人工光源、封闭式通气培养。

在培养容器内，新的培养液不断流入，达到一定密度的培养液不断流出。

培养液的流入量和流出量可根据微藻的生长情况及需要进行人不控制，并保持平衡。

在培养过程中，营养物质浓度和藻类细胞相对稳定，产量高，在国外应用较多，我国目前生产上很少采用。

半连续培养：是指在一次培养的基础上，当藻类细胞达到一定密度后，每天收获一部分浓藻液，并加入新的营养液继续培养。

半连续培养是生产中常用的方法，每天的收获量根据育苗的需要及藻液的生长情况确定。

（三）藻种培养、中继培养和生产性培养该类培养是按培养的规模和目的来划分的。

藻种培养：在室内进行，一般采用一次性培养法。

培养容器为100-3000毫升的三角烧瓶，瓶口用消毒的纸或纱布包扎。

目的是培养和供应藻种。

中继培养：目的在于培养较大量的高密度纯种藻液，供应生产性培养接种使用。

中继培养一般在室内用大的玻璃容器或塑料大袋中进行。

根据需要可分为一级中继培养和二级中继培养。

一级中继培养的容器为10升的大口玻璃缸（南方各省多用）、10-20升的细口瓶或鱼苗袋，以封闭式不通气培养为主。