动物细胞培养.PPT

2.原因: 细胞分化程度低，增殖能力强，容易培养。
➢制成细胞悬液
1.将组织分散成单个细胞 ①方法: 机械法或用胰蛋白酶、胶原蛋白酶等处理。 ②原因: 从动物体取出的成块组织中，细胞与细胞靠在一起，彼此限制了 生长和增殖；能使细胞与培养液充分接触，更易进行物质交换。
进行动物细胞培养地常用胰蛋白酶分散细胞，这说明细胞间的物质主要是 什么成分？用胃蛋白酶行吗？
这一阶段的细胞称为细胞株
增殖缓慢，甚至完全停止。
这一阶段的细胞称为细胞系
继续培养 （50代以后）
大部分细胞 衰老死亡
少数细胞会克服细胞寿命的自然极限，获得不死性， 这些细胞已经发生了突变，正朝癌细胞发展。
遗传物质一定改变了
二、动物细胞培养的过程
➢流程图解
取动物组织
制成细胞悬液
用机械的方法，或用胰 蛋白酶、胶原蛋白酶等 处理的方法，将组织分 散成单个细胞
放入CO2培养箱中培养 转入培养液进行原代培养
传代培养
放入CO2 培养箱中培养
有关动物细胞培养的问题
➢酶解法较温和，一定不会对动物细胞造成损伤，对吗？ 不对；使用胰蛋白酶时，要控制好作用时间，因为胰蛋白酶不仅能
分解细胞间的蛋白质，长时间作用还会分解细胞膜蛋白等，对细胞造成 损伤。
1.幼龄动物的细胞与老龄动物的细胞相比，分化程度低的与分化程度高的 细胞相比，哪些细胞更易于培养？为什么？
包括胚胎干细胞和成体干细胞等。
➢胚胎干细胞（简称ES细胞）
分布: 存在于早期胚胎中 举例: ES细胞在体外分化成心肌细胞、神经元细胞
和造血干细胞等 特点: 具有分化为成年动物体内的任何一种类型的
细胞，并进一步形成机体的所有组织和器官 甚至个体的潜能。

法规实施时间： 2021年4月15日
07 动物细胞培养未来发展
动物细胞培养技术发展趋势
细胞培养技术 将更加成熟， 提高细胞存活 率和生长速度
细胞培养技术 将更加智能化， 实现自动化和
智能化操作
细胞培养技术 将更加环保， 减少对环境的
污染和破坏
细胞培养技术 将更加精准， 实现对细胞生 长和分化的精
动物细胞培养课件
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汇报人：PPT
目录 /目录
01
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04
动物细胞培养 基
02
动物细胞培养 概述
05
动物细胞培养 设备
03
动物细胞培养 技术
06
动物细胞培养 安全性
01 添加章节标题
02 动物细胞培养概述
动物细胞培养环境保护
生物安全：确保细胞培养过程中无 病原体污染
化学试剂：使用环保型化学试剂， 减少对环境的影响
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废物处理：妥善处理培养过程中产 生的废物，避免环境污染
生物伦理：遵守生物伦理原则，保 护实验动物的权益
动物细胞培养伦理问题
动物权益：动物细胞培养 是否侵犯动物权益
动物细胞培养基选择与使用
培养基类型：选择适合细胞生长的培养基类型，如DMEM、RPMI等 培养基成分：根据细胞类型和实验需求，选择合适的培养基成分，如血清、抗生素等 培养基配制：按照说明书进行培养基配制，注意无菌操作和温度控制 培养基更换：定期更换培养基，保持细胞活力和生长状态
05 动物细胞培养设备
完全培养基：含有细胞生长所需的所有 营养物质

培养细胞的分化
❖不适应（Deadaption）
细胞在体内时所拥有的分化特性减 弱或不显。
❖脱分化（Dedifferentiation）
由于基因变异而使细胞失去分化能 力。如肝细胞失掉产生精氨酸酶及氨基 酸转移酶的特性后，储存肝糖元的能力
烧伤病人的治疗通常是取烧伤病人的 健康皮 肤进行 自体移 植，但 对于大 面积烧 伤病人 来讲， 健康皮 肤很有 限，请 同学们 想一想 如何来 治疗该 病人
组织培养的分类及基本概念
分类:
1.组织培养(Tissue Culture) 2.细胞培养(Cell Culture) 3.器官培养（Organ Culture）
组织培养的细胞生物学特点:
1.体内外细胞的差异：当人工条件和体内实际情况不
完全相同时，细胞在体外培养后，一旦失去神经体液调节 和细胞间相互影响，生活在缺乏动态平衡的环境中，发生 变化则是必然。细胞最多见的表现是：返祖（Atavism） 现象，即失去原有组织结构和细胞形态、分化减弱或不显、 细胞趋单一化、不死性、恶性状。
烧伤病人的治疗通常是取烧伤病人的 健康皮 肤进行 自体移 植，但 对于大 面积烧 伤病人 来讲， 健康皮 肤很有 限，请 同学们 想一想 如何来 治疗该 病人
2) 指 数 生 长 期 （ Logarthmic growth phase）：
细胞增殖最旺盛时期，一般用细胞分裂指 数（Mitotic index，MI）表示，即细胞群中每 1000个细胞中的分裂相数。体外培养细胞分裂 指数介于0.1~0.5%，且受细胞种类培养液成分、 pH、温度等影响。
培养细胞的生长和增殖
1.原代培养（Primary Culture）阶段：或称 初代培养。从体内取出组织接种培养到第一次 传代，随不同的组织时间长短不一，一般为 1~4w 2.传代培养（Subculture）阶段：或称继代培 养。也就是细胞系（Cell line）阶段，细胞增 殖旺盛，一般细胞可传代10-50代）。

细胞是
（ A）
A．获得不死性的细胞 B．10代以内细胞
C．原代细胞
D．传代细胞
3、在动物细胞培养的有关叙述中正确的是： （B）
A、动物细胞培养的目的只是为了获得大量的细胞 分泌蛋白
2、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？
成块组织使细胞靠在一起限制了细胞的生长和 增殖，且细胞不能与培养液充分接触，不利于 培养。
3、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可说明细胞间 的物质是什么成份？
催化蛋白质水解。细胞间的物质主要是蛋 白质(胶原蛋白等)。
4、细Hale Waihona Puke 膜的主要成份是什么？ 蛋白质和磷脂
（五）、体细胞核移植技术存在的问题
1、克隆动物基因组重新编程的机制尚不清楚。 2、克隆技术效率低，畸形率高、死亡率高、易出
现早衰等问题。 3、生产克隆动物费用昂贵。
课堂反馈练习
1、动物细胞工程技术的基础是
（D ）
A.动物细胞融合 B.单克隆抗体
C.胚胎移植
D.动物细胞培养
2、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的
单个细胞 加入 培养 液
细胞悬浮液
接触抑制
贴满瓶壁的细胞
原代 培养(分装前)
1-10代细胞
遗传物质
原代细胞
未 改变 胰蛋白 酶
传代培养
加 培养 液
40—50代细胞(细胞株)
遗传物质 已 改变
无限传代（细胞系）
有关概念
细胞株：原代细胞一般传至10代左右细胞 生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存 活到40~50代，这种传代细胞为细胞株。
比较项目 植物组织培养 动物细胞培养
原理 细胞的 全能性 细胞 增殖
培养基特有 成分

不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多。
动物细胞培养的目的是获pp得t课件细胞或细胞产品。
6
一、动物细胞培养
1.概念：动物细胞培养就是从动
物机体内取出相关的组织，将它 分散成单个细胞，然后，放在适 宜的培养基中，让这些细胞生长 和增殖。
原理：细胞增殖
目的：获得细胞或细胞产品。
2.过程：
ppt课件
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动物胚胎或 幼龄动物的 组织、器官
剪碎组织
胰蛋白酶或 胶原蛋白酶
分散成单 个细胞
培养液
10~50 代细胞
继 续 传 代 培 养
不死性 细胞
传代培养 到第10代细胞）
发生癌变
无限p传pt课代件
8
细胞的生长特性
●细胞贴壁：悬液中分散的细胞很快就贴附 在瓶壁上，称为细胞贴壁。
要求：培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易 于贴附。
ppt课件
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植物细胞和动物细胞培养的比较
比较项目 原理
培养基性质
植物组织培养 细胞的全能性 固体培养基
培养基特有成分 蔗糖、植物激素
动物细胞培养 细胞增殖
液体培养基 葡萄糖、动物血清
培养结果 培养目的
植物体或组织
快速繁殖、培育 无病毒ppt课植件株等
细胞株、细胞系
获得细胞 或细胞产物
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学后巩固
细胞膜成分：磷脂和蛋白质 长时间的作用也会消化细胞膜蛋白，对细胞有损伤作用。 因此必须控制好胰蛋白酶的消化时间。
3.目前使用的或冷冻保存的正常细胞为几代以内的？
10代以内，以保持细胞正常ppt课的件二倍体核型。
13
思考
4、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动 物细胞培养材料？

B
练习
3.有研究表明“渐冻症”是由突变的基因导致运动神经元合成了某种毒蛋白，从而阻碍了轴突内营养物质的流动。也有最新研究结果表明，利用诱移功能干细胞(iPS细胞) 制作前驱细胞，然后移植给渐冻症实验鼠，能延长其寿命。下列相关描述错误的是( )iPS细胞分化成的多种细胞中所有核酸相同，蛋白质却不完全相同B. iPS细胞分化的实质是基因的选择性表达，细胞种类增多C.若控制运动神经元合成毒蛋白的基因替换,则可以起到良好的治疗作用D.植入神经干细胞，恢复受损的运动功能，也许会在一定程度上使渐冻症病情改善
ES细胞
成体干细胞
成体组织或器官内
造血干细胞（骨髓、外周血和脐带血中）神经干细胞（神经系统中）精原干细胞（睾丸中）
具有组织特异性，只能分化成特定的细胞或组织，不具有发育成完整个体的能力
治疗神经组织损伤和神经系统退行性疾病（如帕金森病、阿尔茨海默病等）
治疗白血病及一些恶性肿瘤放疗或化疗后引起的造血系统、免疫系统功能障碍等疾病
A.使用合成培养基时，通常需要加入血清等一些天然成分B.通常置于含有 和 的混合气体的 培养箱中进行培养C.渗透压也是动物细胞培养过程中需要考虑的一个重要环境参数D.需要对培养液和所有培养用具进行灭菌处理以及在无菌环境下进行操作
B
练习
例2 下列关于动物细胞培养过程的叙述，正确的是( )。
动物细胞培养的条件
保证无菌、无毒的环境
无菌
①对培养液和所有培养用具进行灭菌处理
②在无菌环境下进行操作
定期更换培养液。
无毒
③添加一定量的抗生素
目的：方便清除代谢物，防止细胞代谢物积累对细胞自身造成伤害。
动物细胞培养的条件
温度、PH和渗透压
(1)适宜的温度：哺乳动物多以__________ ℃为宜。(2)适宜的pH：多数细胞生存的适宜pH为_________。(3)适宜的渗透压。