抗生素筛选方法

牛奶中抗生素残留的危害及检测方法牛奶中抗生素残留是指生产牛奶过程中使用的抗生素残留在牛奶中的现象。

这可能是因为奶牛在患有疾病时，农民会给奶牛注射抗生素来治疗疾病，或者是在奶牛饲养过程中，农民使用抗生素来预防疾病的发生。

尽管抗生素在奶牛饲养和产奶过程中的使用是为了保证牛奶的质量和奶牛的健康，但过多的抗生素残留可能会对人类健康产生潜在的危害。

牛奶中抗生素残留可能导致人类对抗生素的耐药性增加。

长期摄入含有抗生素残留的牛奶，人体会逐渐产生对这些抗生素的耐药性，从而减弱对治疗感染性疾病的效果。

当人类患病时，需要使用抗生素进行治疗，但由于耐药性的增加，常规剂量的抗生素可能无法起到应有的疗效，导致病情加重或难以治愈。

抗生素残留可能对消费牛奶的人群产生过敏反应。

某些抗生素成分对某些人来说是过敏原，摄入含有抗生素残留的牛奶后，可能会引发过敏反应，如皮肤瘙痒、呼吸困难、恶心等症状。

对于某些敏感人群来说，抗生素残留应尽量避免。

抗生素残留可能对人体的内分泌系统产生干扰。

抗生素残留中的一些化学物质可能对人体的内分泌系统产生干扰，导致内分泌紊乱，影响人体的正常发育和生理功能。

特别是对于婴儿和幼儿来说，抗生素残留可能对其生长发育产生不良影响。

为了保证牛奶的质量和人类的健康，对牛奶中的抗生素残留进行检测是非常重要的。

常用的检测方法包括免疫学方法、生物学方法和化学方法。

免疫学方法主要利用抗生素与特异性抗体之间的免疫反应进行检测，如酶联免疫吸附测定法（ELISA）。

生物学方法主要是利用生物学试剂对抗生素进行筛选或检测，如生物传感器技术和细菌抑制试验。

化学方法则是通过色谱法、质谱法等对抗生素进行定量分析。

牛奶中抗生素残留的危害包括耐药性增加、过敏反应和内分泌干扰，为了保护人类健康，对牛奶中的抗生素残留进行检测是必要的。

不仅要加强牛奶生产过程中对抗生素的使用和管理，还要建立健全的抗生素残留检测制度，确保牛奶的安全和质量。

质粒抗生素的选择原理质粒抗生素是一种广泛应用于分子生物学实验中的工具，可以将目的基因转移到宿主细胞中，实现基因克隆、表达和筛选等目的。

然而，在选择质粒抗生素时，需要考虑多种因素，以确保实验结果的准确性和可靠性。

本文将从质粒抗生素的类型、浓度、毒性等方面探讨其选择原理。

1. 质粒抗生素的类型常用的质粒抗生素主要包括氨苄青霉素（Ampicillin, Amp）、卡那霉素（Kanamycin, Kan）、克拉霉素（Chloramphenicol, Cm）、四环素（Tetracycline, Tet）等。

每种抗生素具有不同的抗菌谱和作用机理，应根据实验需要选择合适的抗生素。

例如，Amp主要用于筛选质粒，抑制未转化的细胞生长；Kan可用于筛选质粒和选择带有抗性基因的细胞；Cm可用于选择带有抗性基因的细胞，但其毒性较大；Tet则可用于选择带有抗性基因的细胞，但对某些细胞有毒性。

因此，在选择质粒抗生素时，应根据实验需要和细胞对不同抗生素的敏感性进行综合考虑。

2. 质粒抗生素的浓度质粒抗生素的浓度直接影响着细胞的生长和质粒的复制。

一般来说，抗生素浓度越高，对细胞的选择性越强，但也会增加毒性和细胞死亡率。

因此，在选择抗生素浓度时，应根据实验需要和细胞的生长情况进行综合考虑。

例如，对于Amp，一般浓度为50-100 μg/mL；对于Kan，一般浓度为50-100 μg/mL；对于Cm，一般浓度为10-25 μg/mL；对于Tet，一般浓度为5-20 μg/mL。

但具体浓度还需要根据实验情况进行优化和调整，以保证实验结果的准确性和可靠性。

3. 质粒抗生素的毒性质粒抗生素除了具有选择性的作用外，还会对细胞产生毒性影响。

毒性包括细胞死亡率、生长受损、基因表达受影响等方面。

因此，在选择质粒抗生素时，应尽可能选择毒性较小的抗生素，以保证实验结果的准确性和可靠性。

例如，对于Amp，可能会对细胞的膜结构和细胞壁合成产生影响，导致细胞死亡率增加；对于Kan，可能会造成细胞膜的电荷失衡和蛋白质合成受到抑制，导致细胞死亡率增加；对于Cm，可能会对细胞的蛋白质合成产生影响，导致生长受损；对于Tet，可能会对细胞的核酸合成和蛋白质合成产生影响，导致基因表达受影响。

药敏试验实验原理
药敏试验是一种用于评估细菌对抗生素的敏感性或耐药性的测试方法。

在实验中，细菌被暴露于不同类型的抗生素，以确定哪种药物可以有效地抑制或杀死它们。

药敏试验通常用于指导医生选择治疗细菌感染的最佳抗生素。

药敏试验的原理是通过测量细菌在不同抗生素浓度下的生长程度来判断其敏感性或耐药性。

一般来说，实验分为两种类型：定量法和定性法。

定量法是一种测量细菌在不同抗生素浓度下的最小抑菌浓度（MIC）的方法。

MIC是指能够有效地抑制细菌生长的最低抗生素浓度。

在这种方法中，细菌被分配到一系列含有不同抗生素浓度的培养基上。

然后，通过观察细菌在不同浓度下的生长情况，确定最低抑菌浓度。

定性法则是在含有不同抗生素的培养基上观察细菌的生长情况，以确定其是否对该抗生素敏感。

这种方法通常用于筛选抗生素是否对细菌有抑制作用。

药敏试验是一种非常重要的实验方法，可以帮助医生确定最佳的抗生素治疗方案。

然而，需要注意的是，药敏试验只能指导医生选择最合适的抗生素，而不能代替正确的临床治疗方案和用药方法。

稳定细胞株筛选药物浓度确定方法
在使用G418、潮霉素B或嘌呤霉素筛选稳定细胞系细胞之前，需要先通过梯度实验确定适合该类细胞的最佳药物浓度。

对于一些常见的细胞系，通常可以在资料中找到推荐的药物浓度。

例如Hela细胞用400 μg/ml的G41或1 μg/ml的嘌呤霉素进行稳定细胞株筛选。

用G418或潮霉素B，选用在5天左右出现细胞大批死亡，2周全部死亡的浓度作为筛选浓度。

对于嘌呤霉素,通常采用在3-4天杀死全部细胞的浓度。

不同批次的药物活性有一定差异。

因此在使用新批次药物时，需要重新测定最佳浓度。

筛选抗生素的推荐使用浓度（μg/ml）
抗生素工作范围筛选浓度维持用量
G418 50-800 400-500 100
Hygromycin 50-800 200 100
Puromycin 0.25-2 0.5-10 0.25
1、在加入筛选药物前一天将细胞以50%密度接种到6孔板。

第二天在培养基中按G418(0,50,1000,200,400,800μg/ml)或者嘌呤霉素（0,1,2.5,5,7.5,10μg/ml）加入。

2、用G418筛选处理5-10天。

每2天观察细胞一次。

每4天跟换新的有抗生素的培养基（如果有必要可以更换得更勤）。

直到得到最佳浓度。

3、用嘌呤霉素处理4-7天。

每2天跟换新的有抗生素的培养基。

抗生素筛选方法马寅姣;宋沁馨;顾觉奋【摘要】细菌耐药性发生率的升高,激励着人们去寻找更多的筛选抗生素的策略,进而发现了更多的抗生素作用机制.靶向策略、高通量筛选等方法已经被用于检测有潜力的抗生素.细菌的DNA复制、细胞分裂和蛋白合成的中间步骤已经成为了筛选的新靶点,双组分信号传递系统也成为了较为重要的药物新筛选靶点.微生物基因组学的发展,给新抗生素的发现带来了更大的希望,使人们可以发现更多的新作用靶点.【期刊名称】《中国抗生素杂志》【年(卷),期】2010(035)009【总页数】5页(P654-658)【关键词】抗生素;抗生素筛选;基因组;靶向抗生素筛选【作者】马寅姣;宋沁馨;顾觉奋【作者单位】中国药科大学生命科学与技术学院,南京,210009;中国药科大学药学院,南京,210009;中国药科大学生命科学与技术学院,南京,210009【正文语种】中文【中图分类】R978.1目前，已经有许多结构各异、抗菌活性很好的抗生素被发现、发展及使用，但是这并非意味着人类已经在对抗细菌感染的战斗中取得了胜利。

伴随着抗生素的广泛使用，细菌的耐药性日益严重。

各类耐药菌，尤其是一些多重耐药菌，如耐甲氧西林金葡菌(MRSA)和耐万古霉素肠球菌(VRE)不断产生，引发严重的院内感染，危及患者的生命。

筛选新抗生素是对抗耐药菌的有效途径之一，但在近30年里，仅有很少几类新抗生素[如噁唑烷酮类的利奈唑胺(linezolid)；脂肽类的达托霉素(daptomycin)[1]]被应用于抗多重耐药菌。

因此，继续筛选抗菌活性好又具有应用前景的新的抗生素十分必要。

经典的抗生素筛选，被称为是抗生素产生菌与活性物质的双重筛选，其初筛样品为发酵液或粗提品，成分复杂，活性组分少，筛选过程耗时长，且效率较低。

因此，急需建立一些抗生素筛选的新方法来更有效地筛选新抗生素。

近年来已经出现了一些抗生素筛选新方法，如以细菌细胞分裂成为靶标，得到了很多非常有潜力的新活性物质。

菌的筛选方法有哪些
菌的筛选方法有以下几种：
1. 形态学筛选：根据菌落的形态特征（如大小、形状、颜色等）来进行初步筛选。

2. 生理生化特性筛选：通过对菌株的生理生化特性进行分析，如对不同营养源的利用能力、产酶能力、耐受性等进行测试来筛选。

3. 抗生素敏感性筛选：利用不同抗生素的敏感性测试，通过测定菌株对抗生素的敏感性来筛选。

4. 基因组学筛选：通过对菌株的基因组进行测序和分析，筛选出具有特定基因特征的菌株。

5. 代谢产物筛选：通过检测菌株产生的次生代谢产物，如抗生素、酶、激素等来筛选。

6. 生物活性筛选：通过对菌株的抗菌、抗肿瘤、抗炎、抗氧化等生物活性进行测试来筛选。

7. 分子生物学筛选：利用PCR、RT-PCR等技术，对菌株进行特定基因的检测
和表达分析，筛选出特定基因表达水平高的菌株。

8. 一般筛选方法：菌落刺激、利用各类介质进行培养筛选、蓝白斑筛选等方法。

乳品中抗生素的检测方法乳品中抗生素的检测方法王庆忠蒲彪（四川农业大学信息与工程技术学院，四川省雅安市）摘要：本文对检测抗生素的种主要方法：微生物法、酶法和色谱法的设计原理和筛选策略进行了分析。

论述了、、、、、、等检测方法的研究历史。

比较和分析了多种方法的检测敏感性、特异性和影响检测的可能因素。

最后就如何提高我国乳品的抗生素检测水平，提出了建议措施。

关键词：抗生素检测原理筛选试剂盒经多年的实践，人们认识到抗生素可以增强牲畜抗病能力、提高养殖业产投比。

但过量使用，将降低畜牧产品品质，影响乳品发酵。

而含有抗生素残留的动物性产品，进入人类食物链，会使体内菌株产生抗生素抗性，扰乱机体内环境平衡，菌群失调而不利于健康；也会对易感人群产生过敏反应、激素障碍变态反应。

因此，及早在年就提出应规定各种动物性食品中的抗生素残留允许标准，于年规定原料奶及消毒牛奶中不得有抗生素。

近年来，国内对奶制品中的抗生素残留也非常关注，无抗奶（）的生产和消费已成为大势所趋。

但我们对奶制品中抗生素的检测缺乏必要的研究，检测技术还十分落后。

本文旨在对抗生素的检测方法进行总结，为在我国开展相关工作奠定基础。

检测原理传统检验方法是基于抗生素残留对微生物生长的抑制，以扩散过程或浑浊度为基础。

抗生素浓度越高，微生物的生长受抑制程度越大，菌落越小。

法（当场棉拭检验）以枯草芽孢杆菌（）℃下培养小时测定抗生素；法（兽崽抗生素和磺胺制剂实验）则是接种巨大芽孢杆菌（）在℃下培养；而法（，嗜热脂肪芽孢杆菌圆盘检验法）则采用嗜热脂肪芽孢杆菌。

免疫检验法是对抗抗生素抗体的检验。

基于抗生素刺激动物产生相应的应急反应，从而形成抗体。

通过抗原抗体的特异性结合，确定抗生素含量。

该方法的引申是通过细胞质表皮因子（，）对抗生素的特异结合，测定相应的酶活性或基质的电流变化，从而推算抗生素浓度，以实现自动化检测。

使用高效液相色谱（）和质谱（）对抗生素进行定量、定性的测定，主要是基于它们测定痕量物质的优越性。

几种测定抗菌药物最低抑菌浓度(MIC)方法近年来，随着抗生素的广泛使用以及细菌耐药性的增加，抗菌药物的最低抑菌浓度（MIC）的测定变得日益重要。

MIC是指抗菌药物能够抑制细菌生长的最低浓度，是评估抗菌药物对细菌耐药性的一种重要方法。

下面介绍几种测定抗菌药物MIC的方法。

1. 琼脂扩散法琼脂扩散法是一种经典的MIC测定方法。

该方法基于抗生素与菌株相互作用抑制菌株生长的原理。

实验中将不同浓度的抗生素溶液加入琼脂平板中，并在琼脂表面均匀涂布细菌悬液。

待菌株在琼脂表面生长形成克隆后，观察克隆周围清晰的无菌区域大小，根据无菌区域所对应的抗生素浓度计算MIC值。

该方法简单易行，但由于该方法目测判断，因此存在主观性差异和读片误差的问题。

2. 荧光素二磷酸盐3-（4,5-二苯基噻唑）（Alamar blue）法荧光素二磷酸盐3-（4,5-二苯基噻唑）法是一种高通量及准确性较高的MIC测定方法。

该方法基于菌株呼吸代谢消耗的荧光素二磷酸盐3-（4,5-二苯基噻唑）的发光信号变化来评估抗生素的MIC值。

实验中将不同浓度的抗生素溶液加入微孔板中，并添加细菌悬液及荧光素二磷酸盐3-（4,5-二苯基噻唑），经过一定时间后读取板上的荧光信号，测算MIC 值。

该方法准确性高，可用于筛选大量样本的抗菌药物敏感性，但需要特殊设备和耗费较多经费。

3. 壳聚糖纳米粒子微滴法壳聚糖纳米粒子微滴法是一种新兴的MIC测定方法。

该方法基于壳聚糖纳米粒子本身具有抑菌作用及微滴原理，实验中将不同浓度的抗生素与含菌液的溶液制成微滴，并添加壳聚糖纳米粒子，待微滴凝胶后进行观察，根据微滴内的细菌生长情况评估折射率值，进而计算MIC值。

这种方法具有较高的准确性和可靠性，但需要特殊仪器和技术支持。

4. 测序MIC法随着测序技术的发展，现已出现测序MIC法。

该方法基于高通量测序技术，对菌株进行全基因组测序，确定细菌株中抗生素耐药基因的编码序列，并进行序列比对和分析，确定抗生素的MIC值。

牛奶中抗生素的检测方法(总4页)-CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1-CAL-本页仅作为文档封面，使用请直接删除牛奶中几种抗生素检测方法热[ 作者：云月英,王文龙|转贴自：本站原创|点击数：725|更新时间：2009-8-10|文章录入：imste2009年第2期 ](内蒙古科技大学生物与化学工程学院，内蒙古包头 014010)摘要：文章就牛奶中抗生素残留的几种检测方法做了一个系统综述，介绍了普通方法、色谱法、免疫法、牛乳发酵活性实验法、Benedict试剂法、DELVOTEST检测法、Deivoteur p试剂等方法。

提出，其中色谱法、免疫法及其联用技术在残留分析方面的研究与应用取得了长足进展，在抗生素残留快速检测中效果明显。

关键词：牛奶；抗生素；检测中图分类号：TS207 文献标识码：A 文章编号：1007—6921(2009)02—0077—03牛奶中抗生素残留问题在世界范围内一直没有被彻底攻克，已成为行业发展以及食品安全的隐患之一。

抗生素主要指能抑制或杀死其他微生物的一类化学物质，如青霉素、四环素、金霉素、链霉素、氯霉素、磺胺类药物等。

在医学上，抗生素被广泛的应用于预防和治疗多种微生物感染性疾病以及某些癌症。

在奶业的源头中，抗生素使用频率很高，特别是治疗牛乳房炎，常常大剂量反复使用。

据统计，约有十多种抗生素以一种或多种联合的形式采用粉剂、涂擦剂、注射剂，以及乳导管注入等方式加以应用，导致抗生素残留相当严重，在奶牛饲料中，也含有抗生素添加剂。

目前，国内外用于检测奶及奶制品中抗生素残留的方法很多，而为满足奶及奶制品生产需要和遵守新法规，人们对快速检测开始感兴趣，而高效液相色谱法、酶联免疫吸附测定法等方法具有最低检出限量低、准确性好、灵敏性强、重现性好的特点，成为残留分析的主流。

1 牛奶中抗生素的弊处牛奶中不允许残留抗生素，主要有两个原因：第一，占人口一定比例的人对抗菌素尤其是青霉素过敏，人们长期饮用或食用抗生素残留的牛奶或奶制品，也就相当于长期低剂量的摄取抗生素，其危害性主要有：①使人体产生耐药性，给今后患病使用抗生素治疗带来不良影响；②抗生素对过敏体质的人会出现过敏反应，危及健康；③破坏人体内正常菌群的平衡状态，使菌群失调，甚至造成二重感染，使重症患者病情难以控制。

G418筛选G418、新霉素与neoG418是新霉素的类似物，两者都是通过抑制核糖体的功能和蛋白质的合成而杀死细胞的。

但是新霉素对真核细胞无作用而G418对细菌和真核细胞都起作用。

neo 就是编码3‘磷酸转移酶的基因，它表达的蛋白能够分解新霉素和G418。

在进行转染时细胞膜受到影响，抗生素可能对细胞产生较大影响，加上G418有杀菌作用，所以有人主张转让时不加其它抗生素。

筛选之前由于每种细胞对G418的敏感性不同，而且不同的厂家生产的相同浓度的G418的活性不尽相同，所以在筛选之前，一定要确定G418的最佳筛选浓度。

具体如下:将细胞稀释到1000个细胞/ml，在100ug/ml~1mg/ml的G418浓度范围内进行筛选，选择出在10~14天内使细胞全部死亡的最低G418浓度来进行下一步的筛选试验。

看下面的一个试验:3*106个细胞电转后，分别接种1/4000，1/1000，1/300细胞到24孔板中，48h后加药筛选，此时1/300细胞孔内大约50%汇合度。

理论上1/4000孔内应有4%的汇合度。

筛选9天后，观察1/4000孔内有两三个克隆，按比例1/300孔内应该有几十个克隆，事实上，它们几乎全死光了，只有几个克隆。

所以汇合度对G418筛选结果的影响很大，一般筛选时汇合度不宜超过50% ～加药时间由于基因转染到细胞内之后要一段时间才能表达出蛋白质。

所以筛选不能太早;但是也不能太晚，因为转染了外源基因的细胞代谢负荷较大，增值较慢，时间长了就会被没有外源基因转入的细胞所淹没，最终导致筛选不出阳性克隆，一般要在转染24小时之后才开始加G418筛选。

随着细胞的代谢G418的浓度和活性都回下降，所以每3~5天都要更换一次含有G418的筛选液。

这时药物浓度可以降至200ug/ml。

培养液加药筛选约6天左右，细胞会大量死亡，孔中只剩下的细胞寥寥无几。

这时会出现两个问题:1.死亡的细胞会裂解释放出有害物质，导致那些有neo表达的阳性细胞死亡，即非选择性死亡。

puromycin筛选原理puromycin 使用使用步骤：（哺乳动物细胞筛选）?嘌呤霉素杀灭曲线的确定（shRNA稳定转染细胞株，仅作参考）为了筛选到稳定表达待研究shRNA的细胞株，确定杀死未转染/转导细胞的最低浓度嘌呤霉素至关重要。

所以初次做实验的客户一定要建立适合自己体系的杀死曲线（kill curve）。

（1）24孔板内以5~8 x 104 cells/孔的密度铺板，铺足够量的孔以进行后续的梯度实验。

细胞孵育过夜；（2）准备筛选培养基-含不同浓度嘌呤霉素的新鲜培养基（如0-15μg/mL，至少5个梯度）；（3）细胞孵育过夜后加入筛选培养基，孵育细胞；（4）约2-3天更换新鲜的筛选培养基；（5）每日监测细胞观察存活细胞比例。

嘌呤霉素的最佳作用时间一般在1-4天之间。

（6）最小的抗生素使用浓度就是指从抗生素筛选开始1-4天内杀死所用细胞的最低筛选浓度。

?嘌呤霉素筛选稳定转染细胞（1）day 0：24孔板内以5~8 x 104 cells/孔的密度铺板，孵育过夜；（2）制备筛选培养基：含有最佳筛选浓度嘌呤霉素（由杀灭曲线确定）的新鲜培养基；（3）day 1：筛选第一天，去除旧的培养基，加入一定量MOI的病毒颗粒；（加入无血清培养基的总量必须充分覆盖住细胞。

）（4）病毒转导后约6-8h，再添加1ml完全培养基（血清和双抗，如果已经使用双抗。

）到细胞内，然后孵育过夜；（5）病毒转导后48h，使用嘌呤霉素筛选培养基替换旧的完全培养基。

孵育。

（6）约每2-3天替换新鲜配制的筛选培养基；（7）每天检测细胞并观察活细胞生长比例，以及turboGFP 表达的水平及所占比例。

在某一个时间点几乎所用存活细胞都可以表达TurboGFP。

嘌呤霉素最佳的作用时间在3-10天之间。

注：病毒的MOI越高，每个细胞含有的shRNA拷贝和嘌呤霉素耐性基因越多。

在做嘌呤霉素筛选时，需记住越高MOI,含越多pac拷贝的细胞能耐受更高的嘌呤霉素浓度。

药物筛选的新方法——高通量筛选技术在医学领域，药物研发是一个十分复杂的过程。

其中，药物筛选是决定一种新药能否被研发成功的关键环节。

传统的药物筛选方法是通过单一或少量的生物学指标来测试药物的效果，但是这种方法效果不佳，筛选出的新药种类较少，筛选周期较长，费用较高。

为了克服这些弊端，科学家们提出了高通量筛选技术，这是一种用于快速筛选新药的新方法。

高通量筛选技术（HTS）是一项涉及多个领域的高科技技术，它将微量液体处理技术、光学成像技术、生物学、计算机和自动化技术等融合在一起，可以快速地对大量药物进行筛选。

HTS技术使得药物筛选的效率得到极大提升，同时也降低了研发成本。

高通量筛选技术的原理基于生物测定技术，可以对药物在大规模测试中的毒性、药理活性、代谢和药物相互作用进行评估。

HTS使用微型板和高通量分析仪器，可以同时检测成百上千种药物。

系统可以自动化测试过程，为化合物库中的药物快速、高效地获得耐受性和特定活性。

高通量筛选技术通常通过高速液体分配技术将药物样品分配到微孔板中。

目前，高通量筛选技术在药物研发领域极为广泛地应用。

例如，在发现潜在的抗癌化合物方面，HTS是非常成功的工具。

科学家可以使用此技术，对数百种化合物进行评估，找出那些对肿瘤细胞有显著影响的化合物。

通过HTS技术的应用，研究者可以发现许多具有潜力的抗癌化合物，这些化合物现在正在进一步的研究和开发中。

此外，在人类疾病治疗中，HTS越来越被认为是一种重要的筛选工具。

例如，HTS可用于开发抗生素、抗病毒药物和抗肿瘤药物。

它可以用于检测各种药物的药效，检测药物的性质以及检测药物的代谢。

HTS技术也可以用于了解大规模化合物库中化合物的相互作用。

高通量筛选技术相对传统的药物筛选方法，有许多优势。

首先，HTS技术是非常迅速的，可以处理大量样品和复合物。

其次，由于其自动化和微量药物评估程序，HTS还可以快速确定对生命的作用机制。

第三，HTS还可以自动识别具有生物活性的化合物，可以加快新药发现的速度。

超广谱内酰胺酶（ESBLs）筛选试验方法
双纸片协同法（初筛试验）：
将0.5麦氏单位的待检菌液用无菌棉签涂抹于MH琼脂平板上，稍干后，把含10μg/片克拉维酸纸片（Clavulanic Acid，CLA）贴于MH平板中央，于克拉维酸纸片周围分别贴上头孢他啶、头孢噻肟、头孢曲松、氨曲南、头孢泊肟纸片（纸片中心距离为20~24mm），置35℃过夜培养，观察有无协同现象，CLA与任何一种ESC（超广谱β-内酰胺类抗生素）有协同现象（即ESC在CLA这边的抑菌圈变大）者可疑为产ESBL菌株。

纸片定位后，不能更换位置。

单纸片扩散法（初筛试验）：
将0.5麦氏单位的待检菌液用无菌棉签涂抹于MH琼脂平板上，稍干后，在琼脂培养基上贴头孢他啶(Ceftazidime,CAZ)、头孢噻肟(Cefotaxime,CTX)、头孢曲松(Ceftriaxone,CRO)、氨曲南(Aztreonam,ATM)、头孢泊肟(Cefprozil,CPD)纸片，置35℃过夜培养，若抑菌环直径CAZ≤22mm、CTX≤27mm、CRO≤25mm、ATM≤27mm、CPD≤22mm时可疑为产ESBLs菌株。

双纸片增效法（确认试验）
将0.5麦氏单位的待检菌液用无菌棉签涂抹于MH琼脂平板上，稍干后，在琼脂培养基上分别贴头孢他啶/克拉维酸、头孢噻肟/克拉维酸、头孢曲松/克拉维酸、氨曲南/克拉维酸、头孢泊肟/克拉维酸纸片，置35℃过夜培养后量取抑菌环直径，与单纸片平皿对照，若加克拉维酸纸片较未加克拉维酸纸片抑菌环直径≥5mm，即ESBLs阳性。

重组体的筛选方法重组体是指通过基因工程技术将不同的DNA片段重新组合形成的新的DNA分子。

重组体的筛选方法是指通过一系列的实验步骤，筛选出具有所需特性的重组体，以便进一步应用于基因工程、生物技术等领域。

下面将介绍几种常见的重组体筛选方法。

首先，常用的重组体筛选方法之一是抗生素筛选法。

在进行重组体构建时，通常会将目标基因与抗生素抗性基因连接在一起，形成重组质粒。

然后将重组质粒导入宿主细胞中，通过培养含有相应抗生素的培养基，只有携带了重组质粒的细胞才能在含有抗生素的培养基中存活下来，从而实现对重组体的筛选。

其次，还有一种常见的重组体筛选方法是色素筛选法。

这种方法通常用于真核细胞中重组体的筛选。

通过将目标基因与荧光蛋白等标记基因连接在一起，形成重组质粒。

然后将重组质粒导入宿主细胞中，通过观察细胞的荧光表达情况，来筛选出携带了重组质粒的细胞，从而实现对重组体的筛选。

另外，还有一种常见的重组体筛选方法是筛选标记法。

这种方法通常用于原核细胞中重组体的筛选。

通过在重组质粒中引入特定的筛选标记基因，例如β-半乳糖苷酶等，在含有相应底物的培养基中，只有携带了重组质粒的细胞才能表达出特定的酶活性，从而实现对重组体的筛选。

最后，还有一种常见的重组体筛选方法是PCR筛选法。

通过设计特定的引物，可以在PCR扩增反应中筛选出含有目标基因的重组体。

这种方法通常用于对大量重组体进行快速筛选，可以高效地筛选出所需的重组体。

总之，重组体的筛选方法多种多样，可以根据具体的实验要求选择合适的筛选方法。

通过合理地设计实验方案，可以高效地筛选出具有所需特性的重组体，为基因工程技术的应用提供有力支持。

菌种筛选方法 The manuscript was revised on the evening of 2021菌种筛选方法在实际工作中，为了提高筛选效率，往往将筛选工作分为初筛和复筛两步进行。

初筛的目的是删去明确不符合要求的大部分菌株，把生产性状类似的菌株尽量保留下来，使优良菌种不致于漏网。

因此，初筛工作以量为主，测定的精确性还在其次。

初筛的手段应尽可能快速、简单。

复筛的目的是确认符合生产要求的菌株，所以，复筛步骤以质为主，应精确测定每个菌株的生产指标,测得的数据要能够反映将来的生产水平。

1 从菌体形态变异分析有时，有些菌体的形态变异与产量的变异存在着一定的相关性，这就能很容易地将变异菌株筛选出来。

尽管相当多的突变菌株并不存在这种相关性，但是在筛选工作中应尽可能捕捉、利用这些直接的形态特征性变化。

当然，这种鉴别方法只能用于初筛。

有人曾统计过3,484个产维生素B2的阿舒假囊酵母(Eremothecium ashbyii)的变异菌落，发现高产菌株的菌落形态有以下特点：菌落直径呈中等大小（8-10毫米），凡过大或过小者均为低产菌株；色泽深黄色，凡浅黄或白色者皆属低产菌株。

又如，在灰黄霉素产生菌荨麻青霉(Penicillium urticae)的育种中，曾发现菌落的棕红色变深者往往产量有所提高，而在赤霉素生产菌藤仓赤霉（Gibberella fujikuroi）中，却发现菌落的紫色加深者产量反而下降。

2 平皿快速检测法平皿快速检测法是利用菌体在特定固体培养基平板上的生理生化反应，将肉眼观察不到的产量性状转化成可见的"形态"变化。

具体的有纸片培养显色法、变色圈法、透明圈法、生长圈法和抑制圈法等，见图。

这些方法较粗放，一般只能定性或半定量用，常只用于初筛，但它们可以大大提高筛选的效率。

它的缺点是由于培养平皿上种种条件与摇瓶培养，尤其是发酵罐深层液体培养时的条件有很大的差别，有时会造成两者的结果不一致。

试验常规抗微生物药选择标准：分A、B、C、U四组A组所列的抗生素为常规首选药敏试验药物B组为临床使用主要抗生素，尤其在医院感染时使用的抗生素，该类抗生素可在下列情况下使用：1对A组同类抗生素耐药，2标本来源不同时，如三代头孢菌素使用于脑脊液中的肠杆菌，甲氧苄恶/磺胺甲恶唑使用于尿道分离的细菌3多种微生物感染4多部位感染5感染流行的控制6对A组同类抗生素过敏，耐受或无反应。

C组药物用于对A组药物耐药的流行菌株或对A药物过敏的病人和某些不常见的细菌（如肠外分离的沙门菌属或耐万古霉素肠球菌）U组仅用于尿道分离的细菌，不作为尿道外分离菌的常规药敏试验。

头孢类的分代第一代：头孢噻吩（先锋霉素1号）头孢噻啶（先锋2号）头孢氨苄（先锋4号）头孢唑啉（先锋5号）头孢拉定（先锋6号）头孢羟氨苄作用于特点临床应用。

1.肾毒性较第二、三代大。

2.对B-内先胺酶较稳定，不及第二、三代。

3.主要用于耐药金葡菌感染及敏感菌引起的呼吸道、泌尿道感染等。

第二代：头孢孟多（头孢羟唑）头孢呋辛（西力欣、头孢呋肟）头孢克洛（头孢氯氨苄）。

头孢尼西钠作用特点应用。

1.对革阳菌较弟一代略差，对革阴菌做用明显增强，，部分厌氧菌高效。

2.对B-内先胺酶较稳定。

3.对肾毒素较第一代小。

4.主要用于敏感菌所致的呼吸道，胆道及泌尿感染等。

西丁钠效果类似于二代头孢头孢丙烯也是二代头孢第三代：头孢克肟头孢噻肟头孢曲松（菌必治）头孢他定（复达欣）头孢哌酮（先锋必素）头孢他美酯头孢米诺钠作用特点应用、1.对厌氧菌及革兰阴性菌较强，（包括酮绿假单胞菌）对革阳菌作用不及一、二代。

2.对B-内先胺酶更稳定。

3.对肾基本无毒性4.主要用于敏感菌引起的严重感染如泌尿系，肺炎，脑膜炎，败血症及铜绿假单胞菌感染等。

其中“头胞他定”目前作用于抗铜绿假单胞菌最强的抗生素。

第四代：头孢匹罗头孢吡肟1.广谱、高效、对某些革兰阴和阳性菌均有较强大的抗菌作用。

2.对B-内先胺酶稳定性最高。

抗生素对细菌的选择作用实验原理抗生素是一类能杀死或抑制细菌生长的物质。

能够产生抗生素的生物如真菌和细菌在自然界广泛存在。

抗生素的发现和应用，使得医疗领域能够有效治疗细菌感染。

然而，由于细菌在进化过程中的变异和适应能力，它们可能对抗生素产生耐药性。

为了了解抗生素对细菌的选择作用，科学家们进行了一系列实验。

1.制备含有抗生素的培养基：科学家根据对细菌的作用机制，选择合适的抗生素，并将其加入培养基中。

抗生素的浓度需要在细菌能够生长的范围内，且能够引发一定的反应。

2.分离细菌群体：科学家从自然样本中分离出一组细菌群体，如从环境中采集土壤或从人体样本中提取细菌。

因为细菌群体中的每个细菌都可能有不同的特性和耐药性，所以重要的是在实验中使用尽可能多样的细菌。

3.培养细菌：将分离的细菌接种到含有抗生素的培养基中。

培养条件包括温度、pH值和氧气浓度等。

细菌将在此条件下进行生长，并展现出各种反应。

4.观察抗生素对细菌的作用：科学家观察细菌在含有抗生素的培养基中的生长和死亡状况。

在此过程中，科学家部分细菌可能已经染色或标记，以便于追踪和分析。

如果细菌对抗生素敏感，它们将停止生长并最终死亡。

如果细菌耐药，它们将继续生长并繁殖。

5.分析结果：科学家将观察到的结果记录下来，并进行进一步的分析。

他们可以观察到细菌在不同抗生素浓度下的生长曲线，并计算出最小抑菌浓度（MIC），即能够抑制细菌生长的最低抗生素浓度。

此外，科学家可以分离和筛选出对抗生素具有高度耐药性的细菌，以便进一步研究耐药机制。

通过这种实验方法，科学家能够了解到细菌对抗生素的反应和进化，以及抗生素对细菌的选择作用。

这些实验结果对于了解抗生素耐药性的发展、制定更有效的抗生素治疗方案以及开发新的抗生素具有重要意义。