液相色谱-串联质谱法测定动物源性产品中大环内酯和林可胺类药物残留

液相色谱-串联质谱法测定水产品中酰胺醇类药物及其代谢物残留目的：基于标准GB31658.20-2022，优化液质测定水产品中酰胺醇类药物的前处理步骤，补充该标准的适用范围。

方法：搅碎混匀的鱼肉试样，经过不同提取液、净化液以及定容液，得到18组实验结果，内标法定量，确定最佳组合，进行方法验证。

结果：在优化前处理条件后氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺的线性范围为0.10～100ng/mL，相关系数均大于0.998，方法的回收率为83.1%～103.6%，相对标准偏差在0.66%～4.89%。

结论：本方法可为标准GB31658.20-2022的适用范围补充提供参考依据，适用于水产品中酰胺醇类药物及其代谢物残留量的测定。

关键词：酰胺醇类药物；液相色谱串联质谱；水产品；前处理优化酰胺醇类药物又称氯霉素类抗生素，是一类在兽医临床上用于治疗畜禽以及水产动物细菌性疾病的广谱抗生素，主要包括氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考。

氯霉素和甲砜霉素在兽医临床抗感染的治疗中发挥了重要作用，但近年来，随着公众对其潜在毒性，残留和耐药性的广泛关注，许多国家陆续禁止了它们在兽医临床上的使用，以及禁用于食源性动物，氟苯尼考逐渐成为氯霉素和甲砜霉素的替代品[1,2]。

酰胺醇类药物常见的检验方法有ELISA，HPLC，GC，GC-MS[3]，LC-MS/MS等等，ELISA具有半定量，假阳性概率，LC，GC无法提供结构确证，干扰物质较多，定性不够准确，GC-MS，GC-MS/MS需衍生，前处理较繁琐，进样时间长，定量不够准确，LC-MS/MS快速，简便，定性定量准确，灵敏度高。

氟苯尼考在动物体内有多种代谢产物，但大部分以氟苯尼考和氟苯尼考胺的形式存在，因此部分国家规定氟苯尼考的标志残留物为氟苯尼考和氟苯尼考胺之和[4,5]。

氟苯尼考胺是氟苯尼考在动物体内的代谢物，农业部235号公告将氟苯尼考胺作为标志残留物计算氟苯尼考残留量，氟苯尼考残留量是以氟苯尼考胺和氟苯尼考残留总量计在欧盟(EU)No37/2010号法规中也有规定，另外，氟苯尼考残留标志物在GB31650中规定为氟苯尼考和氟苯尼考胺之和。

冯丽凤，黄芊，叶梦薇，等. QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法测定动物源性食品中30种抗寄生虫类药物残留[J]. 食品工业科技，2024，45（6）：280−288. doi: 10.13386/j.issn1002-0306.2023050175FENG Lifeng, HUANG Qian, YE Mengwei, et al. Determination of 30 Kinds of Antiparasitic Drugs in Animal-derived Foods by QuEChERS-UPLC-MS/MS[J]. Science and Technology of Food Industry, 2024, 45(6): 280−288. (in Chinese with English abstract).doi: 10.13386/j.issn1002-0306.2023050175· 分析检测 ·QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法测定动物源性食品中30种抗寄生虫类药物残留冯丽凤，黄　芊，叶梦薇，黄永辉*，黄　燕，林浩学，梁　敏，许　晖（福建省产品质量检验研究院 国家加工食品质量监督检验中心，福建福州 350002）摘　要：目的：采用超高效液相色谱-串联质谱法，建立测定动物源性食品中30种抗寄生虫类药物残留的方法。

方法：样品经乙腈、1%氨水乙酸乙酯提取，经QuEChERS 净化。

净化后采用Waters ACQUITY UPLC TM BEH C 18色谱柱分离，10 mmol/L 甲酸铵（含0.1%甲酸）水溶液-乙腈:甲醇（50:50，v :v ）为流动相进行梯度洗脱，电喷雾离子源正负离子切换多反应监测（Multiple Reaction Monitoring ，MRM ）模式下进行检测，基质匹配外标法定量。

结果：在优化的条件下，30种抗寄生虫类药物在各自的线性范围内线性良好，决定系数（r 2）均大于0.99；回收率为70.1%~111%；相对标准偏差在0.10%~9.1%之间（n=6）；方法检出限为0.001~0.3 μg/kg 之间，方法定量限在0.004~1 μg/kg 。

液相色谱- 质谱联用法测定乳制品中兽药残留作者：宋琪，黄婷，张镡丹，张盼来源：《现代食品》 2019年第13期◎ 宋?琪，黄?婷，张镡丹，张?盼（湖北省阿克瑞德检验检测有限公司检验部，湖北?武汉?430077）Song?Qi, Huang?Ting, Zhang Xindan, Zhang?Pan(Inspection Department of Hubei Akeruide Inspection and Testing Co., Ltd., Wuhan?430077, China)摘?要：目的：研究液相色谱-质谱联用法测定乳制品中的兽药残留。

方法：用乙腈提取，并用饱和乙腈-正己烷脱脂，最后以甲醇-水为流动相，选高效液相色谱及负离子模式进行重复检测，其中氯霉素使用同位素法进行内标定量，而氟甲砜霉素、甲砜霉素使用外标法定量。

结果：标注溶液浓度为0.25、0.5、1.0、2.5、5.0、10.0 μg·L-1及20.0 μg·L-1，通过色谱检测获得线性方程，而氯霉素、氟甲砜霉素、甲砜霉素在0.25～20.0 μg·L-1浓度内存在良好的线性关系。

对所有乳制品进行氯霉素、氟甲砜霉素、甲砜霉素加标重复实验，当加标浓度为0.25 μg·L-1时，信噪比超出3；另外当添加量位0.5 μg·kg-1时，信噪比远超过3，因此结果显示氯霉素、氟甲砜霉素、甲砜霉素的检出限为0.01 μg·kg-1，定量限为0.1 μg·kg-1。

100份样品中并未检测出氟甲砜霉素、甲砜霉素，而检出氯霉素的有12份，其含量水平约为0.1～605.4 μg·kg-1。

结论：液相色谱-质谱联用法在乳制品中兽药残留检测中具有重要意义，灵敏度及准确性较高，值得临床推广使用。

关键词：乳制品；兽药残留；液相色谱-质谱联用法；氯霉素Abstract：Objective: To study the determination of veterinary drug residues in dairy products by liquid chromatography-mass spectrometry. Methods: The dairy samples were extracted with acetonitrile and degreased with saturated acetonitrile and n-hexane. Finally, methanol water was prepared into mobile phase. High performance liquid chromatography and negative ion mode were used for repeated detection. Chloramphenicol was quantified by isotope internal standard and fluorine was used. Thiamphenicol and thiamphenicol were quantified using an externalstandard method. Results: Different blank matrix extracts were used to dilute the concentration of the mixed standard solution, including 0.25, 0.5, 1.0, 2.5, 5.0, 10.0, 20.0 μg·L-1. The linear equation was obtained by chromatography and mass spectrometry conditions, while chloramphenicol and fluorosis were obtained. Thereis a good linear relationship between sulfonemycin and thiamphenicol between 0.25～20.0 μg·L-1. All dairy products were subjected to repeated experiments with chloramphenicol, florfenicol, and thiamphenicol. When the concentration of the standard solution was 0.25 μg·L-1, the signal-to-noise ratio exceeded 3; in addition, when the added amount reached 0.5 μg·kg-1. The signal-to-noise ratio is far more than 3, so the results showed that the detection limit of chloramphenicol, florfenicol and thiamphenicol was 0.01 μg·kg-1,and the limit of quantification was 0.1 μg·kg-1. No florfenicol or thiamphenicol was detected in 100 samples, and 12 parts of chloramphenicol were detected, and the content level was about 0.1～605.4 μg·kg-1. Conclusion: Liquid chromatography-mass spectrometry is of great significance in the detection of veterinary drug residues in dairy products. It has high sensitivity and accuracyand is worthy of clinical promotion.Key words：Dairy products; Veterinary drug residues; Liquid chromatography-mass spectrometry; Chloramphenicol中图分类号：O657.63动物源性食品指的是动物本身及其生长过程中产生的可食用组织、蛋奶或者肉类制品等，而兽药能在动物产品内残存，从而影响动物源性食品的安全。

中华人民共和国国家标准GB/T×××××-202×饲料中泰乐菌素、泰万菌素、替米考星的测定液相色谱-串联质谱法Determination of tylosin,tylvalosin and tilmicosin in feeds—Liquid chromatography-tandem mass spectrometry编制说明（征求意见稿）主要完成单位：四川省饲料工作总站《饲料中泰乐菌素、泰万菌素、替米考星的测定液相色谱-串联质谱法》国家标准制订编制说明（征求意见稿）一、工作简况（一）任务来源本标准的制定任务来源于国家标准化管理委员会，计划号合同编号为T-NY-2021-101-03，计划号为20203789-T-469，任务名称为《饲料中泰乐菌素、泰万菌素、替米考星的测定液相色谱-串联质谱法》。

本标准的技术归口单位是全国饲料工业标准化技术委员会，主要起草单位是四川省饲料工作总站和西南民族大学。

参考国内外相关检测方法，结合试验结果起草本标准。

（二）制定背景大环内酯类药物（MALs）是多由链霉菌产生的弱碱性抗生素，对革兰氏阳性菌和支原体具有良好的抗菌活性，临床上广泛用于治疗畜禽动物敏感菌引起的呼吸道、消化道和泌尿生殖系统感染[1-3]。

MALs 为无色弱碱性化合物，多呈负的旋光性由其整体结构决定，MALs易溶于有一定极性的有机溶剂，如甲醇、乙腈、乙酸乙酯、氯仿、乙醚等，在水和弱极性溶剂中微溶。

MALs在干燥状态下相当稳定，但其水溶液稳定性差。

在酸性条件(pH＜4)下，苷键易发生水解，氨基糖苷结构较中性糖苷稳定的多，正常水解碱性糖苷的条件往往导致大环结构分解；在pH6.8的水溶液中相对较稳定，此时水溶性下降，抗菌活性最高。

MALs的盐或酯较游离形式稳定。

大环内酯类药物达100多种，发展到现在共有3代，第一代有红霉素、泰乐菌素、北里霉素(吉他霉素)等；第二代有替米考星、阿齐霉素等；第三代有乙酰异戊酰基泰乐菌素（泰万菌素）、泰拉霉素（瑞可新）等。